 
РЕФЕРАТ
Отчет на 9 стр., 2 табл.
«САБИСЕПТ М», E. COLI, ST. AUREUS, ВИРУС АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ, БАКТЕРИЦИДНОЕ ДЕЙСТВИЕ, ДЕЗИНФИЦИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ, ЛАБОРАТОРНЫЕ ИСПЫТАНИЯ, БИОПРОБА
Объект исследований: дезинфицирующее средство «Сабисепт М» производства ЗАО «Клин-косметика».
Цель работы: изучение дезинфицирующего действия средства «Сабисепт М» в отношении вируса АЧС.
В лабораторных условиях исследованы бактериостатическая и минимальная бактерицидная концентрации средства «Сабисепт М» с использованием тест-микроорганизмов 1, 2 групп устойчивости, снижение активности дезинфицирующего средства в присутствии высокомолекулярного белка и испытана эффективность его дезинфицирующего действия при обеззараживании контаминированных вирусом АЧС поверхностей, имитирующих объекты животноводческих помещений, с подтверждением полноты инактивации вируса постановкой биопробы на восприимчивых животных.
ВВЕДЕНИЕ
В системе санитарных, противоэпидемических и противоэпизоотических мероприятий, обеспечивающих благополучие страны по инфекционным болезням, повышение продуктивности животных и санитарное качество продуктов, сырья и кормов животного происхождения, дезинфекция занимает одно из важных мест. Под дезинфекцией понимают уничтожение на объектах внешней среды или удаление из них патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Основное назначение дезинфекции – разорвать эпизоотическую цепь путем воздействия на ее важнейшее звено - фактор передачи возбудителя болезни от источника инфекции к восприимчивому организму.
В последние годы на рынке дезинфи цирующих средств представлен весьма большой ассортимент препаратов как отечественного, так и зарубежного про изводства, но при всем многообразии дезинфицирующих средств, количество компонентов, входящих в их состав, весьма ограничено, причем целый ряд соединений обладает высокой бактерио- и вирусстатической активностями и низким бактерицидным и вирулицидным действием, что не позволяет им эффективно обеззараживать контаминированные поверхности, особенно загрязненные органическими веществами. Особую актуальность проблема внедрения новых высокоэффективных дезинфектантов приобрела в последние 3 года, в связи с продолжающимся распространением по территории РФ занесенной в 2007 году африканской чумы свиней, представляющей реальную угрозу свиноводству страны. Так как при АЧС отсутствуют средства специфической профилактики, а, как показал анализ эпизоотических вспышек болезни, ведущую роль в их возникновении играет человек – зараженное мясо перевозится различными видами транспорта из одного региона в другой, очевидно, что в предотвращении дальнейшего распространения болезни одним из важнейших мероприятий является проведение дезинфекции. Учитывая биологические особенности вируса и то, что для большинства дезинфектантов не изучена их вирулицидная активность в отношении вируса АЧС, целесообразно проведение работ по обеспечению ветеринарной дезинфекционной практики новыми высокоэффективными дезсредствами.
1. Объект исследований
Образцы дезинфицирующего средства «Сабисепт М» производства ЗАО «Клин-косметика».
2. Цель исследований
Определить спектр антимикробного действия средства «Сабисепт М» в отношении тест-микроорганизмов 1, 2 групп устойчивости.
Определить дезинфицирующую активность средства «Сабисепт М» в отношении вирулентного штамма вируса африканской чумы свиней (АЧС) на контаминированных вирусом поверхностях, имитирующих объекты животноводческих помещений.
3. Общие положения
Испытания проводили в период с 24 августа 2012 г по 24 сентября 2012 года согласно руководству «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности», Р 4.2.2643-10 утвержденному Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 01.06.2010 г., «Методическим указаниям о порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики», утвержденным ГУВ Госагропрома СССР в 1987 г, с использованием биопробы и методическим указаниям «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам», МУК 4.2.1890-04, утвержденным Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г.Онищенко 04.03.2004 г.
4. Оцениваемые показатели
Инфекционная активность вируса АЧС изолят Ставрополь в первичной культуре клеток костного мозга свиней.
Минимальные бактериостатическая и бактерицидная концентрации средства «Сабисепт М».
Дезинфицирующее действие средства «Сабисепт М» на вирус АЧС с использованием тест-объектов (бетон) и постановкой биопробы на подсвинках массой 18-25 кг.
5. Методы проведения испытаний
5.1. Получение культур тест-микроорганизмов
В пробирки со скошенным триптон-соевым агаром засевали предварительно проверенные на отсутствие посторонней контаминации бактериальной и грибной микрофлорой культуры тест-микроорганизмов (Escherichia coli и Staphylococcus aureus) в посевной дозе 103-106/мл. Посевы инкубировали при температуре (36±1)°С в течение 18-20 ч. Суточные культуры контролировали на отсутствие контаминантов. Для этой цели из полученных культур готовили мазки, окрашивали по Граму и подвергали световой микроскопии. Затем агаровые культуры смывали физиологическим раствором.
5.2. Определение бактериостатической, бактерицидной активности средства и влияния на их уровень высокомолекулярного белка.
Предварительную оценку бактерицидного и бактериостатического действия средства «Сабисепт М» проводили методом серийных разведений согласно методическим указаниям «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам», МУК 4.2.1890-04 в нашей модификации. Для определения минимальной бактерицидной концентрации средства «Сабисепт М» готовили его серийные двукратные разведения на мясо-пептонном бульоне (МПБ) от 0,5 % до 0,0009% в объеме 2,0 мл.
При приготовлении заражающих суспензий микроорганизмов определяли исходную концентрацию бактериальных клеток в смывах с агаровых культур тест-микроорганизмов (E. coli штамм К 12 и S. aureus штамм 209-P) с использованием стандарта мутности, после чего готовили рабочее разведение инокулюма в концентрации 1х107 м.к./мл.
В приготовленные разведения средства вносили инокулюм одной из культур в объеме 0,2 мл и инкубировали при температуре 370С.
Результаты учитывали визуально через 18-20 часов инкубации при 37°С по появлению роста культуры в пробирках (бактериостатическое действие). Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) определяли по наименьшей концентрации средства, которая подавляла видимый рост тест-микро организма.
Контролем служили бульонные культуры микроорганизмов, в которые препарат не вносился.
Бактерицидное действие средства изучали по окончании исследований по определению бактериостатического действия. Для этого из пробирок, в которых видимый рост отсутствовал, по 0,2 мл высевали на МПА. Посевы инкубировали при 370С. Учет результатов проводили через 18-24 часа инкубирования и затем через 5 суток.
Минимальную бактерицидную дозу определяли по наименьшей концентрации средства, при которой отсутствовал рост микроорганизма на МПА.
Для изучения влияния высокомолекулярного белка на антимикробную активность проводили аналогичные испытания с добавлением в МПБ нормальной сыворотки крови лошади в конечной концентрации 40 %.
5.3. Определение инфекционной активности вируса АЧС в культуре клеток.
Для определения инфекционной активности вируса АЧС готовили его десятикратные разведения, которые вносили в культуральные матрасы с ККМС. Продолжительность инкубации 7 дней. В контрольные культуральные матрасы с ККМС вируссодержащая жидкость не вносилась.
5.4. Оценка дезинфицирующего действия средства «Сабисепт М» in vivo.
При исследованиях с вирусом, использовали вирулентный вирус АЧС. На стерильные тест-объекты, имитирующие объекты животноводческих помещений из бетона наносили по 1,5 мл вируссодержащей жидкости на 100 см2. В качестве механической защиты вируса использовали стерильный свиной навоз в количестве 0,3 г. сухого вещества на 100 см2 поверхности. Перед нанесением на поверхность вируссодержащую суспензию тщательно перемешивали с соответствующим количеством навоза. Смесь равномерно распределяли на поверхности тестов, после чего их подсушивали 1-2 часа. Испытуемые 2,0 – 6,0 %-ные растворы средства «Сабисепт М» равномерно наносили методом орошения на тест-объекты, из расчета 0,3 л/м2 площади.
На контрольные тест-объекты, вместо растворов средства «Сабисепт М» наносили такое же количество воды, которая использовалась для приготовления растворов средств.
С обработанных растворами дезинфектанта тест-объектов, испытуемые материалы отбирали через 1,0-3,0 часа. Вирусный материал соскабливали, добавляли по 4,5 мл среды Хенкса, экстрагировали при комнатной температуре в течение 30 минут, затем центрифугировали 15 минут при 3000 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость использовали для заражения подсвинков. Биопробу проводили на 11 животных: 10 – опыт и 1 – контроль.
Наблюдение за заражёнными подсвинками вели в течение 21 суток.
Опыты сопровождались контролем определения инфекционного титра в вируссодержащем материале.
6. РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЙ
Антимикробную активность средства «Сабисепт М» изучали в жидких и на твердых питательных средах с возбудителями колибактериоза и стафилококкоза с использованием белковой нагрузки и без нее.
Минимальную бактерицидную концентрацию (МБК) определяли методом серийных разведений в МПБ с последующим высевом на МПА на чашках Петри.
В таблице 1 представлены результаты изучения бактериостатического и бактерицидного действия средства «Сабисепт М».
Таблица 1. Антимикробная активность средства «Сабисепт М» в отношении E. coli и S. aureus.
Тест-микроорг.
|
Вид
действия
|
Белковая защита
|
Концентрация препарата, % от исходного
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
9
|
10
|
E. coli
|
Бактерио
статич.
|
нет
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
+
|
есть
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
±
|
+
|
+
|
+
|
Бактери
цидн.
|
нет
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
+
|
+
|
+
|
есть
|
-
|
-
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
S. aureus
|
Бактерио
статич.
|
нет
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
+
|
+
|
есть
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
Бактери
цидн.
|
нет
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
+
|
+
|
+
|
+
|
есть
|
-
|
-
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
Примечание: 1 – 0,5 %; 2 – 0,25 %; 3 – 0,125; 4 – 0,0625; 5 – 0,0312; 6 – 0,0156; 7 – 0,0078; 8 – 0,0039; 9 – 0,0019; 10 – 0,0009;
- - рост микроорганизма отсутствует;
+ - наличие роста микроорганизма.
В результате проведенных испытаний установлено, что средство «Сабисепт М» обладает антимикробной активностью в отношении тест-культур грамотрицательных (E. coli) и грамположительных (S. aureus) микроорганизмов обеспечивая их инактивацию при концентрациях 0,0078 и 0,0156 % от исходной, соответственно. При добавлении высокомолекулярного белка происходит снижение бактерицидной активности в 4-16 раз.
При определении инфекционной активности вируса АЧС изолят Ставрополь в виде вирус-крови установлено, что титр вируса в культуре ККМС составляет 7,00 lg ГАЕ50/мл (гемадсорбирующих единиц).
Результаты испытаний дезинфицирующего действия средства «Сабисепт М» в отношении вируса АЧС с использованием биопробы представлены в таблице 2.
Таблица 2 Определение в биопробе дезинфицирующего действия средства «Сабисепт М» при обеззараживании тест-объектов из бетона, контаминированных вирусом АЧС, методом орошения с нормой расхода 0,3 л/м2.
№ п/п
|
Концентрация раствора по препарату, %
|
Экспозиция, час
|
Тест-поверхности
|
|
|
Бетон
|
|
|
пало/всего
|
1
|
2,0
|
3,0
|
3/3
|
2
|
4,0
|
1,0
|
0/3
|
3
|
3,0
|
0/2
|
4
|
6,0
|
3,0
|
0/2
|
|
Контроль
|
|
1/1
|
Примечание: н.и. – не исследовали
Из данных таблицы 2 видно, что при орошении средством «Сабисепт М» тест-объектов, контаминированных вирусом АЧС с белковой защитой в виде свиного навоза, поверхности из бетона были обеззаражены 4,0 %-ным и выше растворами при экспозиции 1,0 час и выше с нормой расхода 0,3 л/м2. Контрольное животное заболело на 5 сутки и пало на 7 сутки после заражения.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
Средство «Сабисепт М» по результатам лабораторных исследований обладает бактерицидной и бактериостатической активностями в отношении тест-культур грамотрицательных (E. coli) и грамположительных (S. aureus) микроорганизмов обеспечивая их инактивацию при концентрациях 0,0078 и 0,0156 % от исходной, соответственно. |
