Скачать 0.6 Mb.
|
Методы иммунологического и иммуноморфологического анализа.Определяли концентрацию IgM и IgG в сыворотке крови по Манчини (G. Mancini, 1970). Оценивали общую комплементарную активность – гемолитическим методом (100% гемолиз). С помощью реагентов (R) – определяли содержание пяти ранних фракций компонентов комплемента: С1 – С5 в соответствии с Инструкцией по применению реагентов для определения активности компонентов комплемента (регистрационный номер: №: Р№ 001453/01 – 2002, Москва, 2002). В целях выявления фиксации IgM и IgG и комплемента (С) в мембранах эритроцитов ребенка на высушенных и фиксированных в холодном ацетоне (4,0°С) в течение 15 мин. мазках крови ставили реакции иммунофлюоресценции по A. Coons (1956) и R. Goldwasser, C. Shepard (1958). Препараты изучали в люминесцентном микроскопе «ЛЮМАМ – И». В качестве индикатора интенсивности свечения использовали цифровой вольтметр. Статистическую обработку результатов исследования проводили при помощи ПЭВМ IBM – 486 SX/33 MHz использовали стандартный пакет программ «Stistica for Windows Release 6,0». Полученные данные обрабатывались вариационно-статистическим методом с применением критерия Стьюдента-Фишера. Связи между показателями выявлялись корреляционным анализом. Методики лечения.
Результаты исследования и их обсуждение. Комплексный анализ полученных данных, отражающих кинетику формирования ГБН по АВО-несовместимости и Rh-конфликту, протекающей на фоне первичного гипоксического поражения ЦНС позволил установить общие патогенетические закономерности становления изучаемой патологии, в основе которых реакции «антиген-антитело-комплемент» – иммунный конфликт как единый базисный механизм. Вместе с тем выявлены и определенные различия в конкретике элементов иммунной системы матери и ребенка, а также последовательность их участия в реализации иммунопатологических реакций при ГБН по АВО и Rh (+). Динамика изменения патоиммунных показателей свидетельствует о том, что начало формирования патологического процесса у новорожденных двух клинических вариантов ГБН связана с антителами фиксированными на мембранах эритроцитов (Эр) ребенка, что клинически проявляется в обоих случаях гемолизом и гиперретикулоцитозом. Так методом иммунофлюоресцентной микроскопии обнаружено, что при ГБН по АВО-несовместимости на территории мембран Эр регистрируется интенсивное свечение IgG. При этом их концентрация в крови новорожденных сохраняется на уровне нормальных значений (табл. 1) Таблица 1 Иммунологические и иммуноморфологические показатели у детей при ГБН по АВО-несовместимости (стадия до лечения – 1-е сут.).
Примечание: К – контроль (норма); П – патология (ГБН – АВО); *) - р<0,05 Иные характеристики показателей выявлены при иммунологических и иммуноморфологических исследованиях у детей с ГБН связанной с Rh-конфликтом. Если также как при ГБН по АВО-несовместимости уровень IgG в крови детей с этой формой гемолитической болезни соответствует параметрам нормы, то концентрация IgM возрастает на 28%, а на территории мембран Эр выявляется интенсивное свечение IgM. И при АВО-несовместимости, и при Rh-конфликте единственный класс антител способный проникать трансплацентарно в организм плода и фиксироваться на его эритроцитах – IgG имеющие М.М. 100000 (Федорова М.В., Калашникова Е.П., 1986; Торубарова Н.А. и соавт., 1993). Учитывая данное положение и принимая во внимание то обстоятельство, что антиэритроцитарные антитела в период новорожденности образуются редко (Ludvigsen C. et al., 1987) можно с наибольшей вероятностью полагать, что обнаруженные нами у детей с ГБН по АВО-несовместимости на территории мембран эритроцитов флюоресцеинмеченный материал IgG имеет материнское происхождение, тогда как при ГБН связанной с Rh-конфликтом, аналогичной локализации материал IgM является антителами ребенка. Установлено, что прогрессирование клинической симптоматики ГБН (АВО) не сопровождается сколь-либо значимыми отклонениями от нормальных показателей IgM и IgG. Вместе с тем в мембранах Эр обнаруживается увеличение на 4,5% количества люминесцирующего материала IgG, что подтверждает суждение об участии в патоиммунном конфликте при групповой несовместимости IgG матери. Формирование патоиммунных механизмов при ГБН (АВО) осуществляется через материнские IgG1 и IgG3. Являясь комплементсвязывающими антителами они в состоянии напрямую привлекать компоненты комплементарной системы, повышающей активность к раннему неонатальному периоду (Стефани Д.В., Вельтищев Ю.Е., 1977; Пол У., 1987). Убедительные доказательства определяющей роли IgM ребенка как изначального, а затем и инициирующего активацию иммунопатогенетических механизмов эритроцитолизиса при резус-конфликте, получены нами при изучении кинетики изменения величин его содержания в жидкой и клеточной (эритроцитарной) части крови (табл. 2). Таблица 2 Иммунологические и иммуноморфологические показатели у детей с ГБН при Rh-конфликте (стадия до лечения – 1-е сут.).
Примечание: К – контроль (норма); П – патология (ГБН – Rh(+)); *) - р<0,05 Так по мере прогрессирования клиники ГБН Rh (+) наблюдается увеличение на 11% концентрации IgM в плазме и параллельное повышение на 13% интенсивности свечения IgM в мембранах Эр по сравнению с исходными значениями, что в свою очередь свидетельствует о повышении возможностей иммунной системы новорожденных в раннем неонатальном периоде продуцировать полноценные иммунопротеины и на этой основе обеспечивать аутоиммунные реакции. Процесс инкорпорации IgM в структуры Эр сопровождается существенным ростом их разрушения и уменьшением их количества в циркуляции на 42%. Одним из важнейших свойств IgM и IgG связанных со структурой Fc-фрагмента – способность фиксировать комплемент (Пол У., 1987). Комплементсвязывающие реакции играют исключительную роль как в защите организма от инфекций, так и при аутоиммунных процессах (Stanworth D.K., Pardoe G., 1977). Прогрессирование патологического процесса у новорожденных обеих форм ГБН, сопровождается последовательным падением уровней общей комплементарной активности сыворотки крови с 6,5% в дебюте заболевания до 25% в его разгаре. При этом на территории мембран Эр, в участках фиксации IgG (при ГБН по АВО) и IgM (при ГБН Rh(+)) определяется свечение комплемента. По мере прогрессирования патологического процесса увеличение флюоресцеинмеченного материала IgG и IgM сопровождается параллельным ростом интенсивности свечения комплемента, что свидетельствует об активном формировании иммунных комплексов способных, как известно, проявить альтеративное действие на ткани-мишени (Серов В.В. и соавт., 1970; Gurevich H. et al., 1997). Участие комплемента в качестве составляющей иммунных комплексов опосредуется путем связывания с эффекторными центрами Fc-фрагмента молекул IgM и IgG и последующей активацией комплементарной системы по классическому пути с образованием цитолитических комплексов (Кульберг А.Я., 1986) повреждающих Эр. Процесс эритроцитолитических реакций сопровождается активным потреблением комплемента и его компонентов и приводит к уменьшению их концентрации в центральном русле крови. Причем если при групповой несовместимости дефицит составляет 11,5% в дебюте заболевания и 20% в его разгаре, то при резус-конфликте – 6,4% и 26,4% соответственно. Таким образом, для формирования и завершения иммунопатогенетических механизмов ГБН по АВО-несовместимости и Rh-конфликту необходим адекватный уровень реагирования иммунной системы ребенка. По мере взросления иммунной системы плода, способности продуцировать полноценные иммуноглобулины, обладающие комплементсвязывающей активностью (IgM и IgG), повышением концентрации комплемента в крови, возможна клиническая реализация ГБН, что наиболее часто и происходит при физиологическом течении беременности к моменту родов и первые сутки жизни новорожденного. Иммунопатогенетическое разрушение Эр при ГБН приводит к высвобождению в кровеносное русло гемоглобина (Hb), который в свою очередь являясь основным продуцентом билирубина (Бн) опосредует накопление его токсичной свободной фракции (СБн). Подтверждением этому факту служат результаты корреляционного анализа установившего прочную обратную зависимость между показателями Hb и Бн (r= -0,74) при обеих формах гемолитической болезни. Три сеанса плазмафереза обеспечивают последовательное снижение излишка токсичного свободного билирубина (СБн) на 19,5% при ГБН (АВО) и 9,5% ГБН (Rh (+)) – (табл. 3). Таблица 3 Динамика показателей билирубинового обмена (M±m)
Примечание: *) ** – р<0,01; *** – р<0,001 по отношению к норме. Доказано, что детоксикационный эффект при поазмаферезе определяется количеством удаленной плазмы, содержащей токсические вещества, как правило крупно- и среднемолекулярные соединения. СБн – низкомолекулярное соединение, но, являясь главным лигандом для человеческого сывороточного альбумина (ЧСА), фиксируется гидрофобными связями его молекулы и образует глобулу, которая по своей молекулярной массе может быть выведен из крови путем ПФ (Чегер С.И., 1975). Таким образом, наряду с позитивным действием, ПФ имеет и негативные последствия – удаления из циркуляции с каждым его сеансом некоторого количества плазменных белков. Убедительным подтверждением этому служат показатели ЧСА и его составляющих (рис.1). Так уже после первого сеанса ПФ ОКА снизилась (при АВО – на 11%, при Rh (+) – на 14,5%). Параллельно с этим уменьшилась и ЭКА, причем величина и последовательность убыли и при групповой несовместимости, и при резус-конфликте были аналогичными, что свидетельствует об идентичности элиминирующих свойств ПФ и их независимости от формы ГБН. Известно, что ЧСА синтезируется в печени и является универсальным транспортным средством для многочисленных лигандов. По мере их присоединения, связывающая способность Al уменьшается. В условиях патологии эти функции могут быть существенно угнетены, что в значительной мере лимитирует элиминационные возможности ПФ в отношении билирубина. Считается, что Al утрачивает связывающую для лигандов способность при РСА менее 10 г/л (Н.М.Федоровский и др., 1998). Данное положение находит подтверждение в результатах наших исследований, согласно которым в сроки завершения 3-х ПФ у всех новорожденных с ГБН резерв связывания альбумина падал до 7,7±0,61 г/л и сохранялся на этом уровне на протяжении 4-го и 5-го сеансов ПФ. Таким образом, проводя сеансы ПФ при ГБН и определяя РСА можно установить объем этого резерва, а следовательно и решить вопрос о целесообразности применения очередной процедуры плазмообмена. Особенностью клинического течения изучаемых форм ГБН является реализация эритроцитолитических реакций на фоне первичного гипоксического поражения ЦНС. |
Реферат Тема: «Легионеллёз» Легионеллёз – это группа заболеваний бактериальной этиологии, клинически проявляющаяся литоксикацией, респираторным синдромом, поражением... | Методические указания для обучающихся для специальности Педиатрия... Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский... | ||
Полигиповитаминоз (А,С,Е) новорожденных телят: этиология, гематологические... Работа выполнена на кафедре диагностики болезней, терапии, акушерства и хирургии фгоу впо «Белгородская государственная сельскохозяйственная... | Положение об организации деятельности отделения реанимации и интенсивной... Показатели внутриглазного давления новорождённого ребёнка, обусловленные морфологическими особенностями дренажной системы глаза в... | ||
Программа вступительных испытаний в аспирантуру по специальности... Орит. Особенности ведения истории болезни в орит. Приоритеты в интенсивной терапии критического больного или травмированного. Принципы... | Рабочая учебная программа по дисциплине Хирургия новорожденных Задачи изучения хирургии новорожденных на педиатрическом факультете заключаются в выработке у обучающихся умения | ||
Внутренние болезни Преподаваемой на кафедре факультетской терапии с курсами эндокринологии и гематологии | Примерная программа наименование дисциплины «Внутренние незаразные болезни» Внутренние незаразные болезни состоит в том, чтобы дать студентам теоретические и практические знания по общей профилактике и терапии,... | ||
«Внутренние болезни, общая физиотерапия, эндокринология» Авторы-составители: Миролюбова О. А., профессор, д м н., зав кафедрой факультетской терапии | Эффективность слезозаместительной терапии при нарушении базальной секреции слезы Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования | ||
Методическая разработка к практическому занятию для студентов по... Тема №2 «Экзантемы у новорожденных, детей грудного, младшего и старшего возраста. Дифференциальная диагностика аллергических и инфекционных... | Внутрибольничная инфекция в родильных домах Проблема инфекций у новорожденных включает такие аспекты, как иммунитет у новорожденных, особенности эпидемиологии инфекционных болезней... | ||
«Неотложная и отдаленная эффективность комбинированной терапии среднетяжелой... Работа выполнена в гбоу впо первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова | 430005, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68,... Подсеваткин в. Г. и др. Опыт применения мексидолав комплексной терапии конверсионного расстройства. // Журнал Неврологии и Психиатрии,... | ||
«Реваскуляризация миокарда при ишемической болезни сердца: методы,... Цикл общего усовершенствования «Новые технологии диагностики и лечения терапевтических больных» | Кандидозный стоматит у новорожденных. Новые подходы к лечению Г. А. Самсыгина, 1996г.). Наиболее часто у детей раннего возраста, в том числе и новорожденных диагностируется поверхностный кандидоз... |