Исследования по разработке и стандартизации растительного средства с противоязвенной активностью

На правах рукописи Старцева Людмила Викторовна ИССЛЕДОВАНИЯ ПО РАЗРАБОТКЕ И СТАНДАРТИЗАЦИИ растительнОГО средствА С ПРОТИВОЯЗВЕННОЙ АКТИВНОСТЬЮ 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Самара - 2011 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Научный руководитель: Доктор фармацевтических наук Пупыкина Кира Александровна Официальные оппоненты: Доктор фармацевтических наук Боковикова Татьяна Николаевна Доктор биологических наук, профессор Агапов Альберт Иванович Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН Защита состоится «02» июня 2011 г. в 1000 часов на заседании диссертационного совета Д 208.085.06 при ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 443079, г.Самара, пр. К. Маркса, 165 Б. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России (г. Самара, ул. Арцыбушевская, 171). Автореферат разослан «___» __________ 2011 г. Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук, доцент И.К. Петрухина ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. В последнее время отмечается неуклонный рост заболеваний органов пищеварения. Одно из ведущих мест среди них по распространенности, тяжести течения, осложнениям занимает язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (Насекина Е.Ю., 2006). Ежегодно регистрируется 35000 новых случаев заболевания, 10000 из них подвергаются хирургическому лечению, и этот показатель растет во всех странах мира (Комаров Ф.И., 2006; Насыров Х.М., 2001). Истинная картина частоты возникновения язвенной болезни не установлена. В настоящее время увеличивается число лиц с сопутствующими заболеваниями органов пищеварения, требующими одновременного назначения ряда лекарственных препаратов, в том числе нестероидных противовоспалительных средств, которые имеют противопоказания и ограничения к применению, не всегда предотвращают развитие рецидива заболевания после их отмены. От осложнений, связанных с неадекватным лекарственным лечением язвенной болезни, только в России ежегодно умирают 6000 человек в трудоспособном возрасте (Губачев Ю.М. и др., 1990; Насыров Х.М., 2001). Таким образом, вопросы профилактики и лечения язвенной болезни желудка представляют серьезную проблему. Лекарственные растения находят широкое применение при лечении заболеваний данной патологии. Однако, целесообразным является применение растительных композиций (сборов), содержащих разнообразные биологически активные вещества, которые обеспечивают комплексное воздействие, позволяют быстро устранять симптомы обострения, восстанавливать нарушенные функции желудочно-кишечного тракта, обеспечивать активное заживление язвы, за счет способности продуцировать защитную слизь, предотвращать повторные рецидивы, увеличивать продолжительность ремиссии (Бахтина С.М. и др., 2003; Буданцев А.Л. и др., 2003). Среди разрешенных к применению в РФ лекарственных растительных сборов, при язвенной болезни желудка рекомендуется «Сбор желудочно-кишечный», имеющий и другие показания к применению, что, учитывая распространенность данного заболевания, недостаточно, поэтому расширение исследований по разработке и внедрению в практическую медицину новых препаратов растительного происхождения для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка является актуальной задачей. Цель и задачи исследования. Целью настоящих исследований является разработка растительного средства с противоязвенной активностью на основе многокомпонентной растительной композиции в виде экстракта сухого и гранул. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следую­щие задачи: - обосновать состав сбора, провести его фармакогностическое изучение, установить показатели качества и нормы содержания основных групп биологически активных веществ; - провести исследования по подбору оптимальных параметров экстракции биологически активных веществ из растительной композиции для разработки рациональной технологии получения экстракта сухого и гранул; - изучить химический состав экстракта сухого и лекарственной формы на его основе, разработать показатели их качества; - разработать методики сквозной стандартизации исходной композиции, экстракта сухого и гранул; - провести валидацию методик количественного определения основных групп биологически активных веществ в сборе и гранулах; - изучить токсичность и противоязвенную активность сбора, экстракта сухого и гранул; - разработать нормативную документацию на сбор и гранулы. Научная новизна. Разработан оптимальный состав соотношения компонентов в оригинальной растительной композиции, рекомендуемой для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка, с учетом влияния на различные звенья патогенетической цепи. На основе изучения химического состава противоязвенного сбора, разработаны параметры экстракции биологически активных веществ и подобраны оптимальные условия, обеспечивающие максимальный выход суммы экстрактивных и действующих веществ, которые положены в основу технологических схем получения экстракта сухого и гранул. С использованием современных методов анализа впервые проведено сравнительное изучение химического состава разработанных растительных средств (сбора, экстракта сухого и гранул). Изучен их качественный, количественный состав на присутствие различных групп биологически активных веществ и установлено наличие полисахаридов, аминокислот, аскорбиновой кислоты, каротиноидов, макро- и микроэлементов, флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, кумаринов, дубильных веществ, сапонинов, эфирных масел. Разработаны методики количественного определения содержания в сборе суммы флавоноидов в пересчете на рутин и полисахаридов, которые положены в основу сквозной стандартизации разработанных растительных средств по принципу: растительное сырье – субстанция – лекарственная форма. Методами фармакологических исследований подтверждена рациональность состава сбора, экстракта сухого и гранул для применения в качестве противоязвен- ных средств и их безопасность применения. Приоритет и новизна проведенных исследований подтверждены патентом РФ № 2331430 «Сбор лекарственных растений для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка» и заявкой на изобретение № 2010123636 «Гранулы с растительным экстрактом для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка». Практическая значимость работы. На основании данных фитохимического, морфолого-анатомического и товароведческого анализа разработаны проекты фармакопейных статей на сбор для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка и гранулы; технические условия на «Напитки чайные» (ТУ № 9191-004-26795008-2002). Результаты исследований диссертационной работы внедрены в работу ООО «Травы Башкирии», учебный процесс кафедр фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии, фармацевтической технологии с курсом биотехнологии Башкирского государственного медицинского университета; материалы по определению подлинности разработанных средств, установлению числовых показателей качества и методик определения содержания основных групп биологически активных веществ, апробированы в ГУЗ «Республиканский центр контроля качества и сертификации лекарственных средств» Республики Башкортостан (акты внедрения). Основные положения, выносимые на защиту: - результаты теоретических и экспериментальных исследований по разработке состава и стандартизации растительной композиции; - результаты исследований по подбору оптимальных параметров экстракции биологически активных веществ из растительной композиции и разработке рациональной технологии получения экстракта сухого и гранул; - результаты исследований по изучению химического состава, установлению харак-теристик подлинности и показателей качества сбора, экстракта сухого и гранул; - результаты разработки методик количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин и полисахаридов в сборе, применения их для стандартизации экстракта сухого и гранул, валидации методик анализа; - результаты фармакологических исследований разработанных средств. Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на научно-практических конференциях (Уфа 2006, 2008, 2009, 2010; Пермь 2007,2010); научном конгрессе «Традиционная медицина» (Москва, 2007);VII Международном симпозиуме «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования» (Пущино, 2007); II Российском фитотерапевтическом съезде и международном форуме «Интегративная медицина» (Москва, 2010). Связь задач исследования с проблемным планом НИР. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Башкирского государственного медицинского университета по проблеме «Изыскание и изучение новых лекарственных средств» и является фрагментом исследований кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии (номер государственной регистрации № 01200507996). Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 печатных работ, из них в журналах, рекомендуемых ВАК – 3 статьи, 1 патент РФ на изобретение. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 152 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной материалам и методам исследований, 3 глав собственных исследований, выводов, списка литературы, включающего 211 источников, в том числе 25 иностранных, приложений. Работа содержит 35 рисунков и 45 таблиц. Во введении представлена актуальность проблемы, сформулированы цель и задачи исследования, представлены научная новизна и практическая значимость работы, а также изложены основные положения, выносимые на защиту. В первой главе на основании обзора данных литературы дана общая характеристика язвенной болезни желудка, современные методы ее лечения, номенклатура и классификация используемых лекарственных средств, анализ ассортимента растительных средств, рекомендуемых для лечения язвенной болезни желудка, а также обобщены сведения о стандартизации многокомпонентных растительных средств. Во второй главе приведены сведения об объектах исследований, используемые методы и приборы. Третья глава посвящена разработке, теоретическому и экспериментальному обоснованию компонентного состава противоязвенного сбора, его фармакогностическому изучению, определению показателей подлинности и доброкачественности, изучению химического состава, разработке методик количественного определения флавоноидов, полисахаридов и их валидации. Четвертая глава включает результаты экспериментальных исследований по подбору оптимальных условий и разработке способа получения экстракта сухого и лекарственной формы на его основе в виде гранул, исследованию их химического состава, изучению показателей подлинности и доброкачественности. В пятой главе отражены результаты фармакологических исследований по определению токсичности и противоязвенной активности разработанных растительных средств на моделях острой и хронической язвы желудка. Диссертация завершается общими выводами по работе, списком литературы и приложениями. Основное содержание работы Обоснование состава растительной композиции, ее фармакогностическое изучение и стандартизация При разработке состава сбора в основу был положен этиопатогенетический подход, учитывающий действие растительных компонентов на определенные звенья патогенетической цепи, а именно: стабилизации факторов «агрессии» и «защиты», нормализации секреторной активности ЖКТ, подавления кислотообразования, ферментативной активности и развития Helicobacter pylori, регенерации клеток слизистой оболочки, нормализации моторной функции ЖКТ, активизации переваривания пищи, снятия воспалительного процесса и спазма гладкомышечных волокон органов ЖКТ, регуляции функций ЦНС, коррекции дисбактериоза, повышения защитных свойств организма. В результате предварительного анализа литературных данных и собственных исследований были отобраны 14 лекарственных растений, наиболее часто применяемых в гастроэнтерологической практике (подорожник, ромашка, солодка, девясил, сушеница, календула, лен, крапива, кровохлебка, синюха голубая, рябина, горец птичий, фенхель, пустырник), из которых составляли различные комбинации сборов, готовили водные извлечения и проверяли их активность. Первоначально была изучена антиоксидантная активность, так как известно, что развитие ряда заболеваний человека (язвы желудка и двенадцатиперстной кишки, злокачественных образований и др.) сопровождается активацией процесса свободнорадикального перекисного окисления липидов, и обеспечение антиоксидантной защиты может предотвратить разрушение клеточных мембран и повреждение тканей, органов. Определение антиоксидантной активности позволило установить виды лекарственного растительного сырья, проявляющие более выраженную активность не только в отдельности, но и в различных вариантах сборов, в результате чего было отобрано шесть композиций, показавших более высокие результаты. Для выбранных вариантов разрабатываемого сбора была определена также противоязвенная активность на модели острой «ацетилсалициловой» язвы желудка (рис.1). Результаты исследований показали, что более выраженной противоязвенной активностью по сравнению с группой контроля и препаратами сравнения, обладает вариант сбора № 6, который и был выбран для дальнейших исследований; в его состав входят: цветки ромашки, трава сушеницы топяной, корни солодки, трава горца птичьего, корневища и корни девясила, листья подорожника большого по 2 части, трава пустырника, плоды рябины, листья крапивы, плоды фенхеля по 1 части. Рис.1. Противоязвенная активность различных комбинаций сбора Для установления подлинности сбора изучали составные компоненты и дифференцировали их по принадлежности к определенной морфологической группе. Макроскопический анализ позволил выделить характерные внешние признаки сбора: смесь неоднородных по размеру и окраске частиц зеленовато-серого цвета с желтоватыми, белыми, кремовыми, бурыми и оранжево-красными вкраплениями, проходящих сквозь сито диаметром 7 мм. Запах ароматный, своеобразный. Вкус водного извлечения сладковато-горьковатый, слегка вяжущий с ощущением слизистости. Для более достоверной идентификации сбора проводили подробное описание микродиагностических признаков составных компонентов и самого сбора. При последовательном просмотре микропрепаратов идентифицировались все его составляющие, выявлялись и подсчитывались диагностически значимые признаки, позволяющие определить подлинность сбора. Для стандартизации и определения качества нового растительного сбора необходимо было определить числовые показатели, требуемые при разработке современной нормативной документации. В результате анализа сбора установлены следующие нормы числовых показателей: влажность - не более 14%; зола общая - не более 13%; зола, нерастворимая в 10% растворе HCl, - не более 4%; частиц, не проходящих сквозь сито с d=7 мм, - не более 10%; частиц, проходящих сквозь сито с d= 0,18 мм, - не более 7%; содержание примесей: органических - не более 2%, минеральных - не более 1%. Определены показатели радиологической и микробиологической чистоты сбора в соответствии с требованиям ОФС, ГФ ХII, которые позволили отнести его к категории 4А. Лекарственное растительное сырье, входящее в состав сбора содержит биологически активные вещества (БАВ) различных химических групп, поэтому необходимо провести изучение его химического состава для разработки методов стандартизации. Качественные реакции, проведенные с водным и спиртовым извлечением из сбора позволили установить присутствие полисахаридов, аминокислот, флавоноидов, дубильных веществ, сапонинов. Для обнаружения аскорбиновой кислоты в водном извлечении использовали метод ТСХ (система этилацетат - кислота уксусная 80:20), и наблюдали появление после проявления хроматограммы белого пятна на розовом фоне (Rf~0,89). Качественное обнаружение каротиноидов и витамина К проводили после экстракции гексаном в липофильной фракции методом ТСХ: каротиноиды – α- и β-каротин (система гексан - диэтиловый эфир 80:20) обнаруживали после проявления хроматограммм в виде пятен синего цвета на желто-зеленом фоне (Rf ~0,61; Rf ~0,82), а витамин К (система бензол - эфир петролейный 1:1) при просмотре в УФ-свете обнаруживался в виде пятна с желто-зеленой флюоресценцией (Rf~0,68). Для изучения флавоноидов сбора получали очищенное спиртовое извлечение и, учитывая различную растворимость фенольных соединений, проводили избирательную экстракцию растворителями с возрастающей полярностью (рис. 2).

Похожие:

	Библиографическое описание Гост 0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и гост 2-97 "Межгосударственная система стандартизации....		5 Структура издательской аннотации Гост 0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и гост 2-97 "Межгосударственная система стандартизации....
	Оригиналы текстовые авторские и издательские Гост 0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и гост 2-97 «Межгосударственная система стандартизации,...		Рабочая программа по дисциплине В. В ресурсоведение по направлению... Цель дисциплины состоит в углублении теоретических знаний и приобретении практических умений и навыков по вопросам ресурсоведения,...
	Рабочая программа по дисциплине В. В ресурсоведение по направлению... Цель дисциплины состоит в углублении теоретических знаний и приобретении практических умений и навыков по вопросам ресурсоведения,...		Межгосударственный стандарт электрическая энергия совместимость технических... Гост 0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и гост 2-2009 "Межгосударственная система стандартизации....
	Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Флористические и фитоценотические исследования растительного покрова малых искусственных водоёмов		Какие существуют два основных способа познания мира? Оно предполагает осуществление наблюдений и экспериментальную деятельность. Поэтому средства эмпирического исследования включают...
	Какие существуют два основных способа познания мира? Оно предполагает осуществление наблюдений и экспериментальную деятельность. Поэтому средства эмпирического исследования включают...		Научные исследования в заповеднике «Кузнецкий Алатау» Знание главнейших понятий, закономерностей и законов, касающихся строения, жизни и развития растительного, животного и человеческого...
	Исследования При разработке учебно-методического комплекса учебной дисциплины в основу положены		Аннотация программы учебной дисциплины Цель – способствовать овладению студентами теоретико-методологической базой исследования, измерения и количественной оценки качества...
	«Охрана растительного и животного мира. Охраняемые территории России» Курс позволит расширить представление о силе давления деятельности человека на состояние животного и растительного мира в целом и...		Постановление От 12 февраля 1994 г n 100 об организации работ по... Закон РФ от 10. 06. 1993 n 5154-1 "О стандартизации" утратил силу в связи с принятием Федерального закона от 27. 12. 2002 n 184-фз...
	Межгосударственный совет по стандартизации Разработан российской книжной палатой Министерства Российской Федерации по делам печати, телерадиовещания и средств массовых коммуникаций,...		Задачами дисциплины являются Научные и практические исследования. Коллективные и индивидуальные исследования. Роль исследований в различных сферах развития производства....