19 октября 2000 года Дата введения





Название19 октября 2000 года Дата введения
страница2/5
Дата публикации25.05.2015
Размер0.61 Mb.
ТипДокументы
100-bal.ru > Право > Документы
1   2   3   4   5

3. Емкость с краской помещают в термостат при температуре 37° на 3 - 5 дней для созревания краски с ежедневным встряхиванием этой емкости вручную не менее 10 мин. При наличии магнитной мешалки встряхивание можно продолжать несколько часов. При наличии подогревателя в мешалке взвесь можно подогревать, при этом подогрев не должен превышать 40 - 50°, периодически подогреватель следует выключать с тем, чтобы температура не повышалась выше указанного уровня. Встряхивание и подогрев улучшают качество краски.

После каждого встряхивания раствор снова помещают в термостат.

4. Через 3 - 5 дней готовый раствор краски фильтруют через бумажный фильтр.

6.2.2. Буферный раствор

Необходимые реактивы:

1. Дистиллированная вода - 1 л.

2. Фосфат калия однозамещенный безводный - KH2PO4 - 0,27 г.

3. Фосфат натрия двузамещенный безводный - Na2HPO4 - 0,67 г.

Техника приготовления:

1. Соли растворить в дистиллированной воде (1/3 объема) комнатной температуры, после полного растворения довести до метки 1000 мл и размешать.

2. Приготовленный раствор должен иметь pH 7,0 +/- 0,2. Точное соблюдение требуемой реакции буфера важно для правильной окраски. Если pH < 6,8, то следует добавить Na2HPO4, если pH > 7,2, то добавляется KH2PO4. Количество реактивов, необходимых для доведения pH, подбирается опытным путем.

Буферный раствор следует хранить в хорошо закупоренной посуде в холодильнике (до 1 месяца). Для приготовления краски используется буферный раствор комнатной температуры. Нельзя использовать буферный раствор с осадком, который после окраски затрудняет просмотр препарата и даже может привести к диагностическим ошибкам. Периодически следует проверять pH буферного раствора, особенно при искажении цвета окрашенных элементов крови.
6.3. Взятие проб крови для исследования на малярию
1. Кровь для паразитологического исследования берут из пальца руки (у взрослых - обычно безымянного, у детей - из большого), у новорожденных детей - из большого пальца ноги (но не мочки уха).

2. Периферическую кровь для исследования берут вне зависимости от температуры тела и клинических проявлений.

3. Для прокола кожи пальца используют стерильные одноразовые скарификаторы или специальные стерильные разового использования иглы.

4. В целях безопасности пациента взятие крови на малярию производят на стерильные предметные стекла, т.к. во время взятия крови возможно их касание к месту прокола.

5. Перед проколом кожу пальца тщательно протирают ватным тампоном, смоченным в 70-процентном спирте, чем достигается не только предупреждение инфицирования места прокола, но и попадание с кожи пальца бактерий, различных посторонних частиц на препарат крови, которые могут затруднить диагностику при микроскопии.

6. Первую каплю крови, выступившую после прокола, вытирают сухим стерильным ватным тампоном, чтобы избежать фиксации эритроцитов остатками спирта, которым дезинфицировали кожу.

7. Последующие капли (выступающие самостоятельно или при надавливании на палец массирующими движениями) используются для приготовления препаратов крови. При этом кровь забирают в стерильный сухой гематологический капилляр, из которого быстро переносят на предметное стекло, либо выступившую кровь непосредственно из прокола пальца наносят на предметные стекла. Если кровь набирают в капилляр, то можно использовать не стерильные стекла, но подготовленные так же, как описано в п. 6.1.

8. От одного пациента готовят не менее 2 - 3 стекол с "толстыми каплями" и 2 - 3 "тонких мазка" крови. Рекомендуется первоначально окрасить по одному стеклу, с тем чтобы иметь возможность исправить дефекты окраски.
┌────────────────────────────────────────────────────────────────┐

│ При косвенных показаниях (анамнестических,│

│эпидемиологических, клинических) о наличии малярии у│

│обследуемого, но отрицательном первичном результате, кровь│

│исследуют повторно через каждые 6 - 12 часов в течение 2-х│

│суток. │

└────────────────────────────────────────────────────────────────┘
6.4. Приготовление препаратов крови,

их маркировка и фиксация
6.4.1. Препарат "толстая капля"

1. Препарат "толстая капля" на предметном стекле без мазка (рис. 1) <*>:

- на предметное стекло наносят каплю крови диаметром около 5 мм, кровь распределяют в равномерный диск или прямоугольник размером 1 - 1,5 см;

- на краю стекла делается мазок в виде полоски крови для маркировки препарата, при массовых обследованиях делаются две полоски, где наносят маркировку.

--------------------------------

<*> Здесь и далее рисунки не приводятся.
2. Препарат "толстая капля" на мазке (рис. 2):

- на предметном стекле готовят мазок крови более толстый, чем требуемый для исследования на малярию;

- сразу после приготовления мазка, пока мазок не высох, его влажной поверхностью прикасаются к выступившей капле крови или наносят кровь из капилляра;

- кровь на влажном мазке распределится в равномерный диск при осторожных наклонах предметного стекла под небольшим углом в разные стороны; чем больше взятая капля крови, тем больше площадь, по которой она распределится.

Капля крови, нанесенная на мазок, более прочно прикрепляется, чем нанесенная непосредственно на предметное стекло. Толщина "толстой капли" должна быть такой, чтобы через нее просматривался печатный текст. Слишком толстая капля может оторваться от стекла при высушивании; такой препарат не пригоден для исследования.

Независимо от методики приготовления показателем достаточного содержания крови в "толстой капле" является обнаружение в 1 поле зрения микроскопа в среднем 10 - 15 лейкоцитов (увеличение: объектив x90 - 100, окуляр x7).

3. Комбинированные препараты (рис. 3).

В целях экономии стекол, особенно при массовых обследованиях, на предметном стекле одновременно готовят "тонкий мазок" и "толстую каплю".

Этот метод, однако, требует ряда предосторожностей. Для того чтобы оба препарата были пригодны для исследования, необходима четкая последовательность их обработки. Необходимо начинать с окраски "толстой капли" погружением соответствующего участка предметного стекла в раствор краски. Затем фиксируют "тонкий мазок" и окрашивают его. Нельзя начинать с фиксации "тонкого мазка", т.к. даже при очень аккуратном погружении в фиксирующую жидкость участка предметного стекла, на который нанесен "тонкий мазок", в "толстой капле" эритроциты могут подвергнуться фиксации парами фиксатора. При последующей окраске такая капля станет непригодной для исследования, даже если фиксация была неполной.

Все препараты высушивают на воздухе. Для ускорения высыхания "толстых капель" можно использовать обычный комнатный вентилятор.
┌────────────────────────────────────────────────────────────────┐

│ Высушивание на солнце, огне или любом другом источнике тепла│

│исключается, так как препарат становится непригодным для│

│исследования. │

└────────────────────────────────────────────────────────────────┘
Особенно это относится к "толстой капле", которая под действием тепла подвергается аутофиксации и необходимый гемолиз при окраске не наступает. "Толстые капли" (особенно в процессе высыхания) и фиксированные "тонкие мазки" следует беречь от тараканов, мух и муравьев, съедающих кровь.

6.4.2. Препарат "тонкий мазок" (рис. 4)

1. На край предметного стекла, отступив 0,5 - 1 см, наносят небольшую каплю крови (объемом меньше в 5 - 10 раз, чем для препарата "толстая капля").

2. Предметное стекло с нанесенной каплей кладут на горизонтальную поверхность стола, при этом край стекла с каплей крови должен быть справа <*>.

3. Двумя пальцами левой <*> руки предметное стекло за боковые поверхности фиксируется на столе.

4. Край шлифованного стекла (фиксированного в правой <*> руке) ставится под углом 45° к предметному стеклу, прикасаясь к левому <*> краю капли крови.

5. После того как капля растекается по касательной линии в месте соприкосновения обоих стекол, шлифованное стекло быстрым движением продвигают справа налево <*> к противоположному краю предметного стекла, постепенно ослабляя давление на предметное стекло, что позволяет закончить "тонкий мазок" бахромчатой частью, где наиболее четко видны специфические особенности морфологии паразитов и изменения пораженных эритроцитов. Мазок крови должен быть тонким, равномерным, не доходить до конца и краев предметного стекла, заканчиваться бахромчатым краем (рис. 4).

--------------------------------

<*> Для лаборанта - левши читать вместо левого положения - правое, вместо правого - левое.
Если угол наклона шлифованного стекла увеличить, то мазок получится короткий и толстый, с расположением эритроцитов в несколько слоев (это маскирует некоторых паразитов, а также приводит к их деформации); если уменьшить угол наклона, то трудно создать бахромчатую часть мазка. Качество "тонкого мазка" зависит также от правильной подготовки предметного стекла и равномерности края шлифованного стекла.

На плохо вымытом жирном стекле и при дефектах на краю шлифованного стекла "тонкий мазок" получается неравномерным и с просветами. Возможные дефекты тонких мазков показаны на рис. 5.

6.4.3. Маркировка препаратов крови

1. Высохшие препараты крови маркируют простым карандашом (он не смывается во время фиксации и окрашивания).

2. Маркировка включает фамилию и инициалы, или номер истории болезни (можно номер страхового полиса), или порядковый номер по списку обследуемого и, обязательно, дату взятия крови.

3. Препарат "толстая капля", приготовленный непосредственно на предметном стекле, маркируют на полоске крови.

4. Препарат "толстая капля" на подкладке маркируют по мазку, не задевая каплю.

5. "Тонкий мазок" маркируют в толстой части (не следует делать надпись вдоль всего мазка).

6.4.4. Фиксация "тонких мазков"

1. Фиксацию мазков проводят в этиловом спирте 96% - 10 мин. или в смеси Никифорова - 20 мин.

2. Мазки погружают и извлекают из фиксирующей жидкости пинцетом.

Препараты по окончании фиксации высушивают на воздухе.
┌──────────────────────────────────────┐

│Препарат "толстая капля" не фиксируют!│

└──────────────────────────────────────┘
При длительном хранении (особенно в жарком климате) неокрашенных "толстых капель" может произойти их аутофиксация. При необходимости хранения "толстых капель" для предотвращения аутофиксации препараты до окраски следует обработать забуференным раствором метиленового синего (1 г метиленового синего + 3 г Na2HPO4 + 1 г KH2PO4 + 300 мл дистиллированной воды). "Толстую каплю" после высыхания погружают в этот раствор на 1 секунду, промывают водой и высушивают. В таком виде каплю можно хранить длительное время. Перед исследованием окрашивают по Романовскому меньше, чем обычное время - в течение 6 - 10 минут.
6.5. Окраска препаратов крови
Одним из основных условий правильной паразитологической диагностики малярии является качественная окраска препаратов крови.

6.5.1. Приготовление рабочего раствора краски Романовского - Гимза

Для окрашивания препаратов крови используется 5% или 10% водный рабочий раствор краски Романовского - Гимза.

1. Маточный раствор краски Романовского - Гимза (промышленного изготовления или приготовленный из сухой краски) перемешать и обязательно профильтровать.

2. Приготовить 5-процентный (10-процентный) рабочий раствор краски: к 95 (90) мл буферного раствора добавить 5 (10) мл маточного раствора краски, что соответствует 1 - 2 каплям краски на 1 мл раствора.

3. Готовый рабочий раствор перемешать.

4. При необходимости ускорения получения ответа можно использовать 20-процентный раствор, сократив время окраски до 15 - 20 мин.
┌────────────────────────────────────────────────────────────────┐

│ Рабочий раствор для окраски препаратов крови использовать│

│только свежеприготовленный! │

└────────────────────────────────────────────────────────────────┘
Качество каждой новой серии краски необходимо оценить. С этой целью производят пробную окраску препаратов "тонкого мазка" и "толстой капли" крови от здорового человека (если нет крови с малярийными паразитами). Концентрацию рабочего раствора и время окрашивания можно подобрать самостоятельно, т.к. они зависят от качества исходного раствора краски и от температуры окружающей среды.

Показатели качественного окрашивания. Правильно окрашенный препарат макроскопически имеет синий цвет с сиреневым оттенком, а при его микроскопии:

- ядра лейкоцитов фиолетово - красного цвета с различимой структурой;

- зернистость базофилов фиолетового цвета;

- зернистость эозинофилов красного цвета;

- у моноцитов на фоне серо - голубой цитоплазмы может быть розовая зернистость;

- зрелые эритроциты - розового цвета с сероватым оттенком;

- ретикулоциты - сиренево - голубые;

- тромбоциты - сиренево - розового цвета с различимой сетчатостью.

Иногда в промышленных сериях маточного раствора краски Романовского недостаточно азура, что обусловливает слабое окрашивание азурофильных элементов (ядер малярийных паразитов и лейкоцитов, зернистости пораженных эритроцитов и лейкоцитов). Результаты окрашивания мазков и капель могут быть значительно улучшены при добавлении к рабочему раствору краски Романовского так называемой синьки Мансона, которую готовят впрок следующим образом: 1,5 г метиленового синего и 2,5 г буры растирают в ступке и добавляют к 100 мл дистиллированной воды. Для созревания флакон с краской оставляют на 10 - 12 дней при комнатной температуре. Процесс созревания можно ускорить, поместив флакон на водяную баню на 40 - 60 мин. при 60 - 80°.
┌────────────────────┐

│Раствор не кипятить!│

└────────────────────┘
Синька Мансона при хранении в темном сухом месте пригодна к использованию в течение многих лет. Количество краски Мансона, добавляемое к рабочему раствору краски Романовского, устанавливают опытным путем: нередко достаточно добавить к 1 л рабочего раствора несколько капель краски.

6.5.2. Способы окрашивания и промывки "тонкого мазка" и "толстой капли" по Романовскому - Гимза

Окрашивание препаратов крови можно проводить двумя способами.

1. Препараты крови вертикально помещают в специальные ванночки или контейнеры, без соприкосновения друг с другом. Затем наливают рабочий раствор краски. Данный способ наиболее приемлем, когда есть необходимость окраски большого количества препаратов крови. В стандартном контейнере можно окрасить 20 препаратов при вместимости 90 мл краски. Повторно использовать краску не следует.

2. Препараты располагают горизонтально (мазками вверх) на стеклянных рельсах, лежащих на кюветах. Осторожно пипеткой, так чтобы краска полностью покрывала мазок или толстую каплю, наносят краску. Этот способ чаще применяют при окрашивании небольшого количества препаратов крови. Расход краски составляет примерно 4 мл на 1 препарат.

Данный способ окраски требует тщательной фильтрации маточного раствора краски, т.к. есть вероятность выпадения осадка на препарат крови, что приведет к трудности в диагностике кровепаразитов при микроскопии.

Время окрашивания зависит от температуры окружающей среды. При температуре 20 - 23° "тонкий мазок" окрашивают 40 - 50 мин., "толстую каплю" - 20 - 25 мин. При более низкой температуре время окрашивания увеличивают. При очень высокой температуре (около 30°) время окрашивания капель, но не мазков, может быть сокращено до 15 мин. "Толстые капли", предварительно обработанные забуференным раствором метиленового синего, окрашивают 6 - 10 мин.
┌────────────────────────────────────────────────────────────────┐

│ При подозрении на малярию препараты крови помечаются "CITO!".│

│Окрашиваются и исследуются немедленно. │
1   2   3   4   5

Похожие:

19 октября 2000 года Дата введения iconОтчет категории сми: Газеты, Журналы, Информагентства, Интернет,...
Всего упоминаний: 129, экспортировано 38 сообщений без перепечаток на основные темы
19 октября 2000 года Дата введения iconОтчет о результатах самообследования тольяттинского филиала
Гоу впо «Самарский государственный университет» проводилось в соответствии с решением Ученого Совета филиала от 20 сентября 2006...
19 октября 2000 года Дата введения iconКультурология
Рекомендованы к печати кафедрой культурологии Петрозаводского государственного университета 15 октября 1998 года, утверждены с изменениями...
19 октября 2000 года Дата введения iconВласть и Русская Православная Церковь на Дону
Охватывают период с февраля 1917 года по декабрь 1923 года. Начальная дата исследования увязывается с началом Февральской революции...
19 октября 2000 года Дата введения iconПрограмма по формированию навыков безопасного поведения на дорогах...
Каникулы осенние с 9 октября по 13 октября 2013 года (5 дней), начало занятий 14 октября 2013 года; с 20 ноября по 24 ноября 2013...
19 октября 2000 года Дата введения iconО ходе введения фгос в мобу сош №31 г. Якутска
Организация образовательной деятельности первоклассников в условиях введения фгос с 1 сентября 2012 года
19 октября 2000 года Дата введения iconПлан мероприятий поэтапного введения Всероссийского физкультурно-спортивного комплекса
Организационно-экспериментальный этап введения Всероссийского физкультурно-спортивного комплекса "Готов к труду и обороне" (гто)...
19 октября 2000 года Дата введения iconВведен Постановлением Госстандарта России от 4 сентября 2001 г. N...
Разработан Всероссийским институтом научной и технической информации, Всероссийским научно-техническим информационным центром и Межгосударственным...
19 октября 2000 года Дата введения iconВведен Постановлением Госстандарта России от 4 сентября 2001 г. N...
Разработан Всероссийским институтом научной и технической информации, Всероссийским научно-техническим информационным центром и Межгосударственным...
19 октября 2000 года Дата введения icon29 марта 2012 года Дата введения
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор"; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Противочумный...
19 октября 2000 года Дата введения iconИзбирательной комиссии Ивановской области
Ивановской области от 16 октября 2007 года №17/99-4 был объявлен одиннадцатый областной конкурс рефератов учащихся средних общеобразовательных...
19 октября 2000 года Дата введения iconНа коллегии министерства по итогам 2000 года и основным задачам на 2001 год
Сегодня мы должны подвести основные итоги 2000 года и обсудить перспективные задачи развития транспортного комплекса
19 октября 2000 года Дата введения iconПрограмма по формированию навыков безопасного поведения на дорогах...
На основании приказа управления образования администрации г. Белгорода от 21 октября 2008 года №1699 и в соответствии с планом работы...
19 октября 2000 года Дата введения iconУчебный словарь стилистических терминов
Печатается по решению кафедры общего и русского языкознания от 3 октября 1998 года и по решению ученого совета гуманитарного факультета...
19 октября 2000 года Дата введения iconПрограмма областной конференции, посвященной Дню работников автомобильного...
Главы администрации муниципального образования «Чердаклинский район на заседании региональной конференции «Стратегия социально-экономического...
19 октября 2000 года Дата введения icon28 марта 2012 года Дата введения
Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический...


Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
100-bal.ru
Поиск