19 октября 2000 года Дата введения





Название19 октября 2000 года Дата введения
страница3/5
Дата публикации25.05.2015
Размер0.61 Mb.
ТипДокументы
100-bal.ru > Право > Документы
1   2   3   4   5

└────────────────────────────────────────────────────────────────┘
Ошибки при окраске препаратов крови и способы их устранения приведены в табл. 1 Прилож. 1.

Способ промывки "тонких мазков", фиксированных до окраски, - под струей проточной воды, из пипетки или погружением в емкость - не имеет значения, важно только не обесцветить препарат.

При промывке "толстых капель", особенно свежеприготовленных, необходима осторожность, т.к. капли могут оторваться от стекла. Препарат медленным движением погружают в емкость с дистиллированной водой 1 - 2 раза.
6.6. Микроскопия окрашенных препаратов крови
Препараты крови исследуют под микроскопом с применением масляной иммерсии: объектив x90 или x100, окуляр x7.

Сначала микроскопируют "толстую каплю", затем для уточнения вида возбудителя - "тонкий мазок".
┌────────────────────────────────────────────────────────────────┐

│ При низкой паразитемии исследование только "тонкого мазка"│

│может привести к гиподиагностике малярии. │

└────────────────────────────────────────────────────────────────┘
В "толстой капле" паразиты распределены неравномерно. Поэтому проводят перекрестный просмотр 200 - 300 полей зрения препарата. Целесообразно также обратить внимание на краевую зону, более тонкую часть "толстой капли", где эритроциты могут располагаться в 1 слой и может выявляться не только относительно неизмененная морфология паразита, но и пораженного эритроцита. Если вероятность малярии у пациента велика, а паразиты не выявляются, рекомендуется не увеличивать время просмотра той же самой капли, а просмотреть вторую каплю.

Препарат считается отрицательным, если паразиты не обнаружены после просмотра 200 - 300 полей зрения "толстой капли".

После первого обнаружения паразитов исследование продолжают, чтобы:

- определить видовую принадлежность паразитов;

- не пропустить смешанную инфекцию;

- указать, какие стадии паразитов найдены;

- указать наличие или отсутствие гаметоцитов, что имеет важное прогностическое значение в случае тропической малярии;

- указать количество паразитов, руководствуясь одним из предлагаемых в п. 8 методов.

В "тонком мазке" для обнаружения малярийных паразитов исследуют участок, где эритроциты расположены в один слой - бахромчатую и прилегающую к ней зону, - так называемый хвост препарата. Паразиты имеют тенденцию сосредоточиваться также на краях препарата.

При просмотре "тонкого мазка" используется метод "зубчатая стена": просмотр края мазка последовательными вертикально - горизонтальными передвижениями препарата.
┌────────────────────────────────────────────────────────────────┐

│ Отрицательный диагноз, поставленный только по "тонкому│

│мазку", считается недостоверным. │

└────────────────────────────────────────────────────────────────┘
7. КРИТЕРИИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДА ПАРАЗИТА
Определение вида основано на совокупности ряда признаков как самого паразита, так и пораженного эритроцита.
7.1. Классические морфологические признаки

малярийных паразитов и пораженных эритроцитов
Для установления видовой принадлежности малярийных паразитов имеет значение следующее: наличие полиморфизма возрастных стадий или одной ведущей, их сочетание с гаметоцитами; морфология разных возрастных стадий, их размеры по отношению к пораженному эритроциту; характер, размер ядра и цитоплазмы; интенсивность пигмента, его форма, размеры зерен / гранул; количество мерозоитов в зрелых шизонтах, их размеры и расположение по отношению к скоплению пигмента; склонность паразита к поражению эритроцитов определенного возраста (тропизм); склонность к множественному поражению отдельных эритроцитов несколькими особями паразитов и его интенсивность; размеры пораженных эритроцитов по отношению к непораженным, форма пораженных эритроцитов, наличие азурофильной зернистости в пораженных эритроцитах; форма гаметоцитов.

Основные дифференциально - диагностические признаки возбудителей малярии указаны в Прилож. 1 (табл. 2 - 7) и прилож 2 <*> (рис. 1 - 4).

--------------------------------

<*> Не приводится.
7.2. Непостоянство некоторых морфологических признаков
В периферической крови у паразитоносителей P.falciparum и при рецидивах этой инфекции, связанных с лекарственной устойчивостью, встречаются более крупные кольца, что обусловлено определенной степенью иммунитета.

У эритроцитов, пораженных P.ovale, может отсутствовать характерная форма. В то же время, при инфекции P.vivax часть эритроцитов может иногда принимать форму, характерную для P.ovale. В некоторых случаях зрелый шизонт P.ovale имеет сходство с соответствующей стадией P.malariae не только по характеру и количеству мерозоитов в зрелом шизонте, но и по их расположению по отношению к скоплению пигмента. Неполный гемолиз эритроцитов, пораженных P.ovale, в "толстой капле", часто описываемый как характерный признак, не является постоянным и встречается также в каплях с P.vivax.
7.3. Изменения морфологии паразита и пораженных

эритроцитов, возникающие в процессе приготовления

и окраски препаратов крови
При медленном высыхании препарата в условиях повышенной температуры и влажности гаметоциты P.falciparum могут принимать округлую форму и быть ошибочно идентифицированы как гаметоциты других видов плазмодиев, для которых характерна округлая форма. В "тонких мазках" крови, преимущественно у паразитоносителей, могут встречаться крупные кольца P.falciparum, напоминающие лентовидные формы соответствующих стадий P.malariae, что, по-видимому, связано с их изменением в процессе приготовления мазка. Несоблюдение правил приготовления рабочего раствора краски Романовского - Гимза, окрашивания препаратов крови, подготовки предметных стекол может дать ряд отклонений от классической картины (см. табл. 1 Прилож. 1). При приготовлении краски на воде кислой реакции в "тонком мазке" не выявляется зернистость Шюффнера, в "толстой капле" это препятствует полному гемолизу не только пораженных, но и непораженных эритроцитов.
7.4. Изменения морфологии паразита, связанные

с воздействием химиотерапевтических препаратов
Нередко больные обращаются за медицинской помощью не при первых проявлениях малярии, а после приема химиотерапевтических препаратов, обладающих в разной степени противомалярийным действием. К их числу относятся препараты, обычно применяемые при малярийной инфекции и зачастую используемые больными для самолечения, а также сульфаниламидные препараты, антибиотики тетрациклинового ряда, которые применяют для самолечения, предполагая ОРЗ или тому подобные болезни, либо по назначению врачей в связи с неправильно поставленным диагнозом. Применение химиотерапевтических препаратов приводит к специфическим изменениям морфологии паразита. Эти изменения на начальных этапах воздействия лекарственного препарата могут затруднить идентификацию вида возбудителя, на более поздних этапах ввиду морфологической деградации паразита вовсе препятствовать установлению паразитологического диагноза малярии. Возникающие разнотипные повреждения ядра, цитоплазмы и их тинкториальных свойств, изменения состояния пигмента и т.д. при воздействии разных препаратов выявляются при окраске по Романовскому - Гимза. Они хорошо различимы, в первую очередь у P.vivax, P.ovale и P.malariae.

При воздействии хлорохина (делагила) у бесполых форм начальные различимые изменения возникают спустя 1 - 2 ч после начала лечения, прогрессивно нарастая. В первую очередь меняется характер пигмента: зерна пигмента собираются в отдельные скопления и затем исчезают из цитоплазмы. Ядро на всех возрастных стадиях подвергается пикнозу (уплотнению), наиболее выраженному у кольцевидных (юных) трофозоитов. Цитоплазма кольцевидных трофозоитов уплотняется вокруг ядра и затем постепенно исчезает, начиная с периферии. После исчезновения цитоплазмы у юного трофозоита исчезает его ядро. Цитоплазма у развивающихся и зрелых трофозоитов вакуолизируется, истончается, в ней появляются множественные просветления; так же, как у кольцевидных трофозоитов, цитоплазма постепенно исчезает с периферии паразита. Половые формы, в сравнении с бесполыми формами, сохраняются после воздействия делагила еще 24 - 72 ч (кроме P.falciparum), постепенно деградируя. Женские гаметоциты P.vivax, P.ovale и P.malariae трудно отличить от зрелых трофозоитов этих видов паразита, однако в процессе их деградации после приема делагила клетка женского гаметоцита, в отличие от зрелого трофозоита, в меньшей степени подвергается деформации. Пигмент собирается в крупные гранулы, ядро становится более диффузным и приобретает более светлую окраску. Первоначально из цитоплазмы гаметоцита исчезает пигмент, затем ядро; сохраняется лишь истонченная цитоплазма с множественными просветлениями; затем исчезает и цитоплазма. Обнаружение половых форм, подвергшихся еще неполной морфологической деградации, может привести к неправильному суждению о продолжающемся развитии паразита.

При воздействии сульфаниламидов, тиндурина (пириметамин) и их комбинаций (фансидар, метакельфин), а также тетрациклинов наблюдается противоположный тип изменений морфологии паразита. Возрастает количество видимых зерен пигмента. Ядро становится диффузным, приобретает более светлую окраску, распределяется на отдельные массы хроматина и в последующие сроки исчезает из клетки паразита. Затем исчезает цитоплазма. Пигмент, лежащий на бесцветном фоне, исчезает последним. После воздействия этих препаратов из-за первоначальных изменений состояния ядра, цитоплазмы, характера и интенсивности пигмента P.vivax или P.ovale могут быть ошибочно диагностированы как P.malariae (естественно, если не будет принят во внимание характер пораженного эритроцита и возможность изменения морфологии паразитов в результате предшествовавшего воздействия указанных препаратов).

Приведенные примеры не исчерпывают всех возможных отклонений морфологии плазмодиев от классических признаков. Они лишь свидетельствуют о том, что для правильной идентификации вида возбудителя малярии необходим анализ паразитологической картины в целом, включающий оценку морфологии всех форм развития паразита в эритроцитах, выявляемых в конкретном препарате крови, а также состояние пораженных эритроцитов. При этом следует принять во внимание географический анамнез.
7.5. Источники диагностических ошибок
Иногда за малярийных паразитов ошибочно могут быть приняты нормальные и патологические элементы крови, а также различные контаминанты.

Наиболее часто симулирует паразита тромбоцит, лежащий на эритроците в "тонком мазке" либо в "толстой капле" на остатке ретикулоцита. Эритробласты или эритроциты с остатками ядра - тельца Жолли или кольца Кэбота также могут быть приняты за пораженные эритроциты.

Клетки бактерий, грибов, а также частицы краски, выпавшие в осадок и лежащие на эритроците, могут приводить неопытного исследователя к ложной диагностике малярии.

Иногда за гаметоциты P.falciparum принимают царапины на стекле - так называемый "хребет селедки", растительные клетки, жгутиковых простейших, которые могут размножиться в старом буферном растворе, особенно в жаркое время года.

Некоторые образования, симулирующие малярийных паразитов, изображены на рис. 5 прилож. 2.
8. ОЦЕНКА ИНТЕНСИВНОСТИ ПАРАЗИТЕМИИ
При оценке интенсивности паразитемии учитывают суммарно бесполые и половые формы, за исключением P.falciparum. Интенсивность паразитемии оценивают одним из следующих методов.
8.1. Оценка интенсивности паразитемии

по "толстой капле"
8.1.1. Определение числа паразитов в 1 мкл крови

Подсчитывается количество паразитов по отношению к определенному количеству лейкоцитов. При обнаружении 10 и более паразитов на 200 лейкоцитов подсчет заканчивается. При обнаружении 9 и менее паразитов на 200 лейкоцитов подсчет продолжают для определения количества паразитов на 500 лейкоцитов. При обнаружении единичных паразитов в "толстой капле" крови подсчитывают их количество на 1000 лейкоцитов.

Определение количества паразитов в 1 мкл крови проводится по следующей формуле:
B

X = A x ---,

C
где:

X - количество паразитов в 1 мкл крови;

A - подсчитанное количество паразитов;

B - количество лейкоцитов в 1 мкл крови данного больного;

C - подсчитанное количество лейкоцитов.

В тех случаях, когда нет возможности определить количество лейкоцитов у данного больного, их число в 1 мкл по рекомендации ВОЗ условно принимают равным 8000.

8.1.2. Ориентировочная оценка паразитемии "по крестам"

Этот метод не дает полного представления относительно интенсивности паразитемии и используется только в случае, когда нет возможности определить количество паразитов в 1 мкл крови.


+

1 - 10 паразитов на 100 полей зрения

++

11 - 100 паразитов на 100 полей зрения

+++

1 - 10 паразитов на 1 поле зрения

++++

более 10 паразитов на 1 поле зрения


8.1.3. Оценка паразитемии по среднему количеству паразитов по отношению к полям зрения микроскопа

Результат оценивается при просмотре не менее 200 - 300 полей зрения. Например, 20 - 30 паразитов в одном поле зрения или 2 - 3 паразита на 10 полей зрения и т.п.
8.2. Оценка интенсивности паразитемии по "тонкому мазку"

в процентах пораженных эритроцитов
Подсчитывается количество пораженных эритроцитов, приходящееся на 10000 эритроцитов. Этот метод позволяет получить представление об интенсивности паразитемии при ее относительно высоком уровне до начала лечения и на протяжении последующего периода после начала лечения, когда еще имеется возможность обнаружения паразитов по отношению к 10 тыс. эритроцитов.

Определение процента пораженных эритроцитов проводится по следующей формуле:
100

X = N x -----,

10000
где:

X - процент пораженных эритроцитов;

N - число пораженных эритроцитов на 10000 подсчитанных эритроцитов.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОФОРМЛЕНИЕ ОТВЕТА
Результаты исследований на малярию регистрируются в отдельном журнале, где обязательно должны быть предусмотрены графы: паспортные данные обследуемого, домашний адрес, дата забора крови и приготовления кровепрепаратов, дата лабораторного исследования, ход исследования, результат исследования. Если паразиты не найдены, следует указать: "Малярийные паразиты не обнаружены". При положительном ответе - указать родовое латинское название Plasmodium (допускается сокращение до буквы "P."), видовое пишется полностью: "vivax", "falciparum", "ovale", "malariae". Необходимо указывать также интенсивность паразитемии (см. п. п. 8.1, 8.2), возрастные стадии, наличие или отсутствие половых форм, что имеет особое значение при P.falciparum.

Порядок поступления препаратов на подтверждение лабораторного диагноза из лечебно - профилактических учреждений: все положительные кровепрепараты с направлением поступают в территориальный центр госсанэпиднадзора. Для окончательного подтверждения лабораторного диагноза микропрепараты из территориального центра госсанэпиднадзора поступают в областные, краевые и республиканские центры госсанэпиднадзора.
ОБРАЗЕЦ ЖУРНАЛА

(ДЛЯ КЛИНИКО - ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЙ ЛПУ)


Дата

N
п/п

Ф.И.О.
обсле-
дуемо-
го

Воз-
раст

До-
маш-
ний
ад
рес

Количество приго-
товленных препара-
тов крови

Результат
исследо-
вания (с
указанием
возраст-
ных ста-
дий, на-
личия по-
ловых
форм,
уровня
паразите-
мии при
положи-
тельном
результа-
те)

Под-
пись
вра-
ча

за-
бора
кро-
ви

ис-
сле-
до-
ва-
ния

"тол-
стых
ка-
пель"
(ок-
ра-
шен-
ных,
неок-
ра-
шен-
ных)

"тонких
мазков"
(фикси-
рован-
ных,
окра-
шенных,
неокра-
шенных)

из
них
от-
прав-
лено
на
конт-
роль
в
ЦГСЭН

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11




































































ОБРАЗЕЦ ЖУРНАЛА

(ДЛЯ ЦЕНТРОВ ГСЭН)


Дата
по-
сту-
пле-
ния
пре-
па-
ра-
тов
кро-
ви

N
п/п

Ф.И.О.
обсле-
дуемо-
го

Воз-
раст

До-
маш-
ний
ад-
рес

Сведе-
ния о
пребы-
вании
в эн-
демич-
ной
мест-
ности

Количество посту-
пивших препаратов
крови из ЛПУ и ре-
зультаты их иссле-
дования в ЛПУ

Результат
исследо-
вания (с
указанием
возраст-
ных ста-
дий, на-
личия по-
ловых
форм,
уровня
паразите-
мии при
положи-
тельном
результа-
те)

Подпись
врача и
дата
выдачи
резуль-
татов

"толстых
капель"
(окрашен-
ных, не-
окрашен-
ных)

"тонких
мазков"
(фиксиро-
ванных,
окрашен-
ных, не-
окрашен-
ных)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10






























































Препараты крови исследуются в лабораториях лечебно - профилактических учреждений в день забора крови и приготовления кровепрепаратов; ответ дается не позднее чем через два часа после поступления. При сомнительном результате исследование повторяют (см. п. 4). При положительном или сомнительном результате все препараты крови направляются в территориальный центр госсанэпиднадзора. Отрицательные препараты хранят в лаборатории в течение 3 месяцев, положительные - бессрочно и используются для пополнения внутри лабораторного музея.

Из лабораторий лечебно - профилактических учреждений в центры госсанэпиднадзора положительные препараты крови поступают с оформленным ответом (направлением) по результатам исследования (см. образец направления). Целесообразно также указать некоторые особенности периферической крови больного, обнаруживаемые в "толстой капле" (например: лейкоцитоз, эозинофилия, полихроматофилия), которые могут служить ориентирами при постановке диагноза. Десять процентов от отрицательных препаратов также отправляют на контроль в ЦГСЭН (или все, если их единичные количества).

Лаборатория ЦГСЭН оформляет ответ лабораторного подтверждения для оперативного отдела (паразитологического или эпидемиологического) центра госсанэпиднадзора. Специалисты отдела доводят результаты исследования (подтверждения) до соответствующего лечебно - профилактического учреждения и используют их для проведения ряда соответствующих противоэпидемических мероприятий. Лабораторное подтверждение положительных случаев малярии проводится в аккредитованных испытательных лабораториях районных, городских, областных, республиканских, краевых центров госсанэпиднадзора.
ОБРАЗЕЦ

ОФОРМЛЕНИЯ ОТВЕТА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

КЛИНИКО - ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ
┌────────────────────────────────────────────────────────────────┐

│┌──────────────────────────────────────────────────────────────┐│

││ ││

│└──────────────────────────────────────────────────────────────┘│

│ (наименование лечебно - профилактического учреждения, │

│ направляющего препараты крови) │

│ │

│При паразитологическом исследовании препаратов крови: │

│(в том числе "тонких мазков" ___, "толстых капель" ___) │

│Ф.И.О. больного ________________________________________________│

│Возраст ________________ Адрес места жительства ________________│

│________________________________________________________________│

│Обнаружены возбудители малярии _________________________________│

│________________________________________________________________│

│ (указать сокращенное родовое и полное │

│________________________________________________________________│

│ видовое название паразита (например: P.vivax); │

│________________________________________________________________│

│ все возрастные стадии и гаметоциты) │

│Интенсивность паразитемии ______________________________________│

│________________________________________________________________│

│ │

│Зав. клинико - диагностической лабораторией │

│(врач - лаборант) __________________ /___________/ │

│ (подпись) (Ф.И.О.) │

│Дата выдачи результата: "__" ___________ 20__ г. │

└────────────────────────────────────────────────────────────────┘
В случае спорных или сомнительных результатов лабораторных исследований, а также при подозрении на местную передачу малярии микропрепараты крови доставляются для консультации в паразитологический отдел Федерального центра госсанэпиднадзора Минздрава России или Институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова.
10. ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ

ЗА ЭФФЕКТИВНОСТЬЮ ЛЕЧЕНИЯ
В связи с возможной лекарственной устойчивостью малярийных паразитов необходимо динамическое наблюдение за изменениями интенсивности паразитемии в процессе лечения. Исследование крови проводят методом "толстой капли" с подсчетом паразитемии в 1 мкл крови. В случае тропической малярии исследование проводится ежедневно с 1 по 7 день от начала специфического лечения. При исчезновении паразитов в пределах этого срока контрольное исследование крови проводят на протяжении одного месяца с интервалом 7 - 10 дней. При неэффективности специфического лечения после смены противомалярийного препарата исследование крови вновь повторяется в сроки, указанные выше. Контрольное исследование крови при инфекции, вызванной другими видами малярийных паразитов: первое - проводят также методом "толстой капли" через день от начала лечения, второе - на следующий день после окончания лечения и далее дважды с интервалом в 7 дней.
11. ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИИ В ЗАВИСИМОСТИ

ОТ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА
У лиц, не имеющих специфического иммунитета (прибывших на эндемичную территорию из свободных от малярии зон, утративших специфический иммунитет после длительного проживания вне эндемичной зоны, лиц с пониженной общей иммунологической реактивностью, детей младшего возраста, лиц с дистрофией, с сопутствующими болезнями, беременных женщин и т.п.), первичные проявления малярии нередко симулируют другие болезни, связанные с лихорадочными состояниями. Первые приступы у них могут протекать уже при очень низкой паразитемии, иногда еще не выявляемой микроскопическими методами. Однако уже спустя несколько часов число паразитов возрастает, особенно резко и неуклонно при тропической малярии, и болезнь может быстро приобрести злокачественный характер. Это диктует необходимость, в случае предполагаемой возможности заражения малярией, проводить повторное исследование крови (см. раздел 6.3). Традиционно считается, что одним из основных паразитологических признаков злокачественного течения тропической малярии является появление в периферической крови, наряду с кольцевидными трофозоитами, зрелых трофозоитов и даже делящихся и зрелых шизонтов в результате нарушения микроциркуляции крови. Однако высокая численность только кольцевидных трофозоитов уже служит предвестником или показателем развивающегося прекоматозного или коматозного состояния или других форм злокачественного течения. При заражении тропической малярией впервые в жизни обнаружение гаметоцитов в периферической крови при отсутствии лечения - грозный прогностический признак, свидетельствующий о давности болезни не менее 7 - 10 дней, что может быть критическим сроком.

У лиц, обладающих частичным иммунитетом (взрослое коренное население эндемичных зон), инфекция может протекать как паразитоносительство с низким содержанием паразитов, периодическим повышением паразитемии и гаметоцитемией, без клинических проявлений. У паразитоносителей P.falciparum и во время рецидивов при лекарственной устойчивости P.falciparum могут быть обнаружены более крупные кольца, не характерные для острого течения инфекции, которые ошибочно могут быть приняты за кольцевидные стадии других видов плазмодиев; иногда могут встречаться более взрослые стадии трофозоитов и даже шизонты. Возможность появления таких форм P.falciparum в периферической крови, по-видимому, обусловлена тем, что развивающийся у паразитоносителей иммунитет как бы "удерживает" пораженные эритроциты, препятствуя их перераспределению в глубокие капилляры. Обострение течения инфекции у паразитоносителей, сопровождающееся клиническими проявлениями, может возникать при хирургических вмешательствах, беременности, сопутствующих инфекциях и т.п.

Характер паразитологической картины инфекции, вызванной P.vivax, позволяет предположить, связано ли обращение больного с первыми приступами при первичных проявлениях инфекции или при рецидиве. Присущий для P.vivax полиморфизм разных возрастных стадий в эритроцитах, циркулирующих в периферической крови, при первичных проявлениях выявляется после нескольких лихорадочных приступов, когда интенсивность паразитемии нарастает. При рецидиве полиморфизм обнаруживается уже при первых приступах; к моменту рецидива организм еще обладает определенной степенью иммунитета (связанного с первичными проявлениями), благодаря которому лихорадочная реакция наступает при более высоком уровне паразитемии, включающем разные возрастные стадии бесполых форм и нередко гаметоциты.

Важный признак, позволяющий заподозрить текущую малярийную инфекцию (или перенесенную недавно), особенно тропическую, - обнаружение в периферической крови лейкоцитов - пигментофагов (чаще моноцитов), т.е. лейкоцитов, в цитоплазме которых видны отдельные, относительно крупные скопления пигмента, остатки от фагоцитированных паразитов, даже уже при отсутствии самих паразитов. Обнаружение таких лейкоцитов имеет особое значение для дифференциального диагноза коматозного состояния, не связанного с малярийной инфекцией, а также острого внутрисосудистого гемолиза, особенно в условиях возможности приема противомалярийных препаратов без назначения врача.
12. РЕЖИМ И ПРАВИЛА РАБОТЫ В ЛАБОРАТОРИЯХ, ВЫПОЛНЯЮЩИХ

ИССЛЕДОВАНИЯ КРОВИ НА МАЛЯРИЮ
Возбудители малярии относятся к микроорганизмам 3 группы патогенности, что определяет режим работы лабораторий, выполняющих паразитологические исследования на малярию в соответствии с СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами 3 - 4 групп патогенности и гельминтами".

Исследования на малярию проводят специалисты лаборатории, прошедшие специализацию по диагностике малярии.
12.1. Техника безопасности при работе

с кровью и проведение дезинфекции
Персонал допускается к работе только после проведения инструктажа по соблюдению требований биологической безопасности.

Забор материала (кровь) для приготовления препаратов крови и последующая работа с кровью проводятся обязательно в резиновых перчатках.

Скарификаторы для прокола пальца, микрокапилляры для забора крови и предметные стекла должны быть стерильные.

По окончании работы: руки в резиновых перчатках моют в растворе дезинфицирующего средства (1-процентный раствор хлорамина Б или ХБ) или с мылом под проточной водой, с последующей обработкой 70-процентным этиловым спиртом. Руки моют с мылом под проточной водой, с последующей обработкой ватным тампоном, смоченным 70-процентным этиловым спиртом (можно использовать дезсредства для гигиенической и хирургической обработки рук, например: "Велтосепт", "Асептинол С" и т.п.); рабочие поверхности лабораторных столов обрабатывают дезсредствами или 70-процентным этиловым спиртом с последующим фламбированием.

В процессе работы использованные пипетки, предметные стекла и др. лабораторную посуду, перчатки помещают в дезинфицирующие растворы до полного вертикального погружения. Можно использовать растворы дезсредств: 6-процентный перекиси водорода, 3-процентный хлорамина Б или ХБ, 3-процентный пероксимеда; 0,5-процентный дексозона-1 (или -4); 3-процентный ПВК и других, указанных в СП 1.2.731-99.

По окончании работы стеклянную, эмалированную посуду кипятят с моющими средствами (30 мин. с момента закипания) с последующим промыванием; можно применить автоклавирование. Лабораторную посуду из полистерола (микропипетки, микропробирки и т.д.) многоразового использования дезинфицируют 6-процентным раствором перекиси водорода, выдерживая в термостате при температуре 50 °C в течение 3 ч, затем промывают под проточной водой и после этого промывают дистиллированной водой в течение 15 мин. и высушивают в термостате при 37 °C.

Исследуемый материал (сгустки крови, нефиксированные и неокрашенные препараты крови) обезвреживают только с использованием дезинфицирующих растворов с экспозицией перед сливом в канализацию не менее 60 мин. (перечень дезсредств см. СП 1.2.731-99).

При длительной микроскопии лаборанту для профилактики утомляемости глаз необходимо делать зарядку, попеременно прикрывая рукой (руки перед этим тщательно вымыть!) один глаз, при этом другим смотреть вдаль на деревья, дома. Прикрыть глаза, положить пальцы рук на веки и слегка надавить, преодолевая сопротивление пальцев, посмотреть вверх, вниз, направо и налево (повторить до 6 - 8 раз). Быстро - быстро поморгать, потянуть нижней губой к носу для лучшего оттока венозной крови от глаз. Очень мягко, осторожно подушечками пальцев круговыми движениями помассируйте глазные яблоки через веки, дотроньтесь до слезных косточек у переносицы и помассируйте, как будто моете. Переместите пальцы к наружным уголкам глаз и "помойте" их тоже. Посидите так около минуты, сожмите кулаки, напрягите плечи, руки, потянитесь всем телом, отряхнитесь и снова можно приступать к микроскопии.

Приложение 1
Таблица 1
ДЕФЕКТЫ МЕТОДИКИ ОКРАШИВАНИЯ ПРЕПАРАТОВ КРОВИ

ПО РОМАНОВСКОМУ - ГИМЗА И ИХ УСТРАНЕНИЕ


Характер
дефекта

Внешний вид
препарата

Вид окрашенных эле-
ментов крови и пара-
зитов при микроско-
пировании

Меры предупреждения и
исправления дефектов

Кислая
реакция
краски

Препарат
макроско-
пически
розового
цвета

"Тонкий мазок" -
эритроциты ярко -
розовые, специфиче-
ская зернистость не
выявляется, паразиты
плохо различимы, яд-
ра лейкоцитов и па-
разитов окрашены
слабо, цитоплазма
паразитов имеет ро-
зовый оттенок.
"Толстая капля" - не
достигается полный
гемолиз эритроцитов.
Интенсивно розовый
фон. Ядра паразитов
сливаются с цито-
плазмой

Проверить pH буферного
раствора.
Препараты перекрасить
после предварительного
обесцвечивания.
Для обесцвечивания:
Свежеприготовленные
препараты - погрузить
в дистиллированную во-
ду, при сильном пере-
крашивании в воду до-
бавить 1-процентный
раствор уксусной кис-
лоты (1 - 2 капли на
50 мл воды).
Ранее приготовленные
препараты - смочить
ватный тампон смесью
Никифорова, 1 - 2 раза
осторожно провести по
препарату. Сразу после
обработки результат
проконтролировать под
сухой системой микро-
скопа (окуляр x7, объ-
ектив x40), в случае
необходимости обработ-
ку повторить.
Необходимо иметь в ви-
ду, что улучшить ка-
чество окраски возмож-
но преимущественно в
случае "тонкого маз-
ка". "Толстые капли"
плохо поддаются пере-
окраске. При повторной
окраске время окраши-
вания должно быть со-
кращено

Избыточ-
но - ще-
лочная
реакция
краски

Препарат
макроско-
пически
синего
цвета без
фиолетово-
го оттенка

"Тонкий мазок" -
эритроциты голубые
или синие, зернис-
тость пораженных
эритроцитов выявля-
ется с трудом. Ядра
лейкоцитов и парази-
тов окрашены в синий
цвет и с трудом от-
личимы от цитоплаз-
мы.
"Толстая капля" -
все элементы имеют
синюю окраску. Ядро
и цитоплазма парази-
та дифференцируются
с трудом

Проверить pH буферного
раствора или качество
отмывки предметных
стекол от щелочи; за-
ведомо щелочные стекла
(синего цвета) не ис-
пользовать.
В случае необходимости
попытаться перекрасить
препарат (см. меры
предупреждения и ис-
правления дефектов)

Недоста-
ток азу-
ра в
краске
Романов-
ского

Препарат
макроско-
пически
синего
цвета

Азурофильные элемен-
ты окрашены плохо;
отсутствует харак-
терный фиолетово -
красный цвет ядер
паразитов и лейкоци-
тов, а также специ-
фической зернистости
пораженных эритроци-
тов

В рабочий раствор до-
бавить синьку Мансона.
Препараты дополнитель-
но докрасить (см. меры
предупреждения и ис-
правления дефектов)

Недокра-
шенные
препара-
ты

Препарат
макроско-
пически
бледный

Форменные элементы
крови, их структуры
и все структуры па-
разита бледные. Па-
разиты выявляются с
трудом только по
пигменту.
В "тонком мазке"
специфическая зер-
нистость эритроцитов
плохо прокрашена или
не прокрашена

Докрасить "тонкий ма-
зок" в течение 20 - 30
мин., "толстую каплю"
в течение 10 - 15 мин.

Перекра-
шенные
препара-
ты

Препарат
макроско-
пически
темно -
фиолетовый

"Тонкий мазок" - яд-
ра лейкоцитов чер-
нильного цвета,
бесструктурные, ядра
паразитов часто не-
отличимы от темно
окрашенной цитоплаз-
мы.
"Толстая капля" -
паразиты становятся
похожи на обломки
ядер лейкоцитов

В случае необходимости
перекрасить препараты
(см. меры предупрежде-
ния и исправления де-
фектов)

Ауто-
фиксиро-
ванная
"толстая
капля"

Препарат
макроско-
пически
имеет ме-
таллический
оттенок

Гемолиз в процессе
окраски не достига-
ется.
Микроскопия таких
препаратов практи-
чески невозможна.
Плотный фон состоит
из многослойно рас-
положенных эритроци-
тов

Этот дефект неустра-
ним. Для предупрежде-
ния следует:
1. Окрашивать свеже-
приготовленные "тол-
стые капли".
2. Исключить возмож-
ность аутофиксации
"толстых капель" (см.
п. 6.4.1)
1   2   3   4   5

Похожие:

19 октября 2000 года Дата введения iconОтчет категории сми: Газеты, Журналы, Информагентства, Интернет,...
Всего упоминаний: 129, экспортировано 38 сообщений без перепечаток на основные темы
19 октября 2000 года Дата введения iconОтчет о результатах самообследования тольяттинского филиала
Гоу впо «Самарский государственный университет» проводилось в соответствии с решением Ученого Совета филиала от 20 сентября 2006...
19 октября 2000 года Дата введения iconКультурология
Рекомендованы к печати кафедрой культурологии Петрозаводского государственного университета 15 октября 1998 года, утверждены с изменениями...
19 октября 2000 года Дата введения iconВласть и Русская Православная Церковь на Дону
Охватывают период с февраля 1917 года по декабрь 1923 года. Начальная дата исследования увязывается с началом Февральской революции...
19 октября 2000 года Дата введения iconПрограмма по формированию навыков безопасного поведения на дорогах...
Каникулы осенние с 9 октября по 13 октября 2013 года (5 дней), начало занятий 14 октября 2013 года; с 20 ноября по 24 ноября 2013...
19 октября 2000 года Дата введения iconО ходе введения фгос в мобу сош №31 г. Якутска
Организация образовательной деятельности первоклассников в условиях введения фгос с 1 сентября 2012 года
19 октября 2000 года Дата введения iconПлан мероприятий поэтапного введения Всероссийского физкультурно-спортивного комплекса
Организационно-экспериментальный этап введения Всероссийского физкультурно-спортивного комплекса "Готов к труду и обороне" (гто)...
19 октября 2000 года Дата введения iconВведен Постановлением Госстандарта России от 4 сентября 2001 г. N...
Разработан Всероссийским институтом научной и технической информации, Всероссийским научно-техническим информационным центром и Межгосударственным...
19 октября 2000 года Дата введения iconВведен Постановлением Госстандарта России от 4 сентября 2001 г. N...
Разработан Всероссийским институтом научной и технической информации, Всероссийским научно-техническим информационным центром и Межгосударственным...
19 октября 2000 года Дата введения icon29 марта 2012 года Дата введения
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор"; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Противочумный...
19 октября 2000 года Дата введения iconИзбирательной комиссии Ивановской области
Ивановской области от 16 октября 2007 года №17/99-4 был объявлен одиннадцатый областной конкурс рефератов учащихся средних общеобразовательных...
19 октября 2000 года Дата введения iconНа коллегии министерства по итогам 2000 года и основным задачам на 2001 год
Сегодня мы должны подвести основные итоги 2000 года и обсудить перспективные задачи развития транспортного комплекса
19 октября 2000 года Дата введения iconПрограмма по формированию навыков безопасного поведения на дорогах...
На основании приказа управления образования администрации г. Белгорода от 21 октября 2008 года №1699 и в соответствии с планом работы...
19 октября 2000 года Дата введения iconУчебный словарь стилистических терминов
Печатается по решению кафедры общего и русского языкознания от 3 октября 1998 года и по решению ученого совета гуманитарного факультета...
19 октября 2000 года Дата введения iconПрограмма областной конференции, посвященной Дню работников автомобильного...
Главы администрации муниципального образования «Чердаклинский район на заседании региональной конференции «Стратегия социально-экономического...
19 октября 2000 года Дата введения icon28 марта 2012 года Дата введения
Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический...


Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
100-bal.ru
Поиск