Бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В. Р. Филиппова» На правах рукописи удк
Скачать 2.03 Mb.
|
2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1.1 Фармакологические, иммунологические, гематологические и биохимические методы исследований Работа выполнена в лаборатории фармакологии и токсикологии Научного Исследовательского Института Ветеринарной Медицины Монгольского Государственного Сельскохозяйственного Университета, в терапевтической клинике кафедры внутренних незаразных болезней Бурятской Государственной Сельскохозяйственной Академии им. В.Р. Филиппова, и в компании “Бэлэн-Эрдэнэ” в районе Хан-Уул, Улзийт хороолол, Монголии в 2008-2013 годах. Работа выполнена в соответствии с проектным заданием 2011-2013 гг. “Технология лечебных и диагностических препаратов внутренных незаразных болезней, зависимых от биогеоценотических факторов”, являющейся разделом государственной программы развития сельскохозяйства Монголии. Фармакологические и иммунологические исследования проведены на лабораторных животных: 120 мышах, 50 крысах. Выход препарата из растительного сырья определяли весовым методом. Приготовленный препарат взвешивали на электрических весах – BEL с точностью 0.001 (Италия). Содержание дубильных веществ, флавноиды, витамина С в препаратах определяли титрационным методом (Гос.Фармакопея, XI). Острую токсичность препарата оценивали по методу Б.Б.Прозоровского и др., 2007. Опыты проведены на белых мышах линии BALB/c обоего пола с исходной массой 18,0-20,0 г. Класс токсичности определяли по классификации Сидорова К.К. Хронические отравления и кумулятивные свойства определяли по общепринятой методике. Прямая иммунотропная активность растительных препаратов у белых мышей через 5 дней после иммунизации эритроцитами барана оценивалась по количеству спленоцитов и по индексу селезенки, лимфоцитов, показателями сывороточных иммуноглобулинов М, G, А и клеточной популяции CD4+T, CD8+T с помощью анализаторов(MS-500EA). Противоязвенную активность препарата “Монгаструм” определяли на модели хронической ацетатной язвы по Окабэ (2002). В экспериментах по моделированию язвенных повреждений желудка определяли темп желудочной секреции, общую кислотность желудочного сока, содержание свободной соляной кислоты по методу Михаэлиса, исследовали ферментообразующую функцию желудка по В.Т.Туголукову(1985). Перекисное окисление липидов определяли по содержанию малоногодиальдегида в эритроцитной мембране крыс по методу Л.И.Идеолсона (1985) при ацетатной язве слизистой оболочки желудка. Всего в опытах использованы 180 лошадей, в том числе 68 больных. Методика определения изучаемых нами функций и лабораторных анализов была построена так, что в начале определяли исходные показатели у клинически здоровых лошадей, в дальнейшем именуемой нормой, а затем велись наблюдения больных во все периоды болезни до клинического выздоровления. Производственные опыты проводили по двум параллельным аналогичным группам и периодам, в равных условиях кормления, ухода и содержания. Клиническое обследование больных животных проводили по общепринятой методике. Используя при этом анамнестические данные: условия кормления и содержания, проводили тщательный осмотр, оценивали их габитус, состояние слизистых оболочек и кожи, особенности дыхательной, сердечно-сосудистой, пищеварительной, мочевыделительной, нервной систем и характер испражнений. Из клинических данных большое значение имели наиболее типичные симптомы заболевания (повышение температуры, слизистые оболочки, особенно конъюнктива, гиперемированы, цианотичны, учащение пульса, дыхание поверхностное и напряженное, потение, дрожание мышц, спастические боли сменяются дистензионными, протекающими в виде бурных припадков, животное бросается на землю, принимает позу сидячей собаки и т.д.). Правда, как показала практика, иногда клинические признаки не являются специфическими и встречаются при других заболеваниях. Больные лошади с подозрением на ОРЖ подвергались в дальнейшем лабораторной и инструментальной диагностике и только после этого формировались опытные группы и группы их аналогов здоровых животных для дальнейшего исследования по принятой нами схеме. Объектом лабораторной диагностики были исследования крови, мочи, содержимого желудка в межпищеварительный и пищеварительный периоды. а) проведено клинических обследований лошадей – 180 голов; б) патологоанатомических вскрытий трупов павших лошадей – 3 головы; в) получение проб желудочного содержимого в межпищеварительный период – 56 и после стимулированной секреции энтеральным раздражителем – 107 у здоровых и больных животных (величина рН, общая кислотность, свободная и связанная хлористоводородная кислота, кислотная продукция – всего свыше 180 исследований); г) морфологических анализов крови (гемоглобин, количество эритроцитов, лейкоцитов) – 54 исследований у 35 здоровых лошадей и 19 больных ОРЖ; д) биохимических исследований крови (общий белок, щелочной резерв в плазме, магний и неорганический фосфор в сыворотке крови, общий кальций, сулемово-осадочная реакция) – 90 проб; е) сняты и изучены биопотенциалы желудка, у клинически здоровых лошадей – 8 голов; ж) подвергнуто различным способам лечения для испытания терапевтической эффективности новых противоспазматических, обезболивающих лекарственных средств (фенилбутазон, новалгин, флуниксин, баскопан,) при ОРЖ, а также применена схема комбинированного лечения колик при нашем непосредственном участии; Кровь для получения сыворотки, плазмы и морфологических исследований получали от лошадей из яремной вены. Выведение лейкоцитарной формулы, содержание эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина проводили по общепринятым гематологическим методам, а также на анализаторе крови. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) определялась по методу Панченкова. Содержание общего белка в сыворотке крови определяли рефрактометрическим методом. Уровень щелочного резерва в плазме крови определяли диффузионным методом (с помощью сдвоенных колб по И.П. Кондрахину). Определение магния в сыворотке крови проводили по цветной реакции с титановым желтым (по Кункелю, Пирсону, Швейгерту в модификации И.В. Петрухина). Определение неорганического фосфора в сыворотке крови проводили с ванадомолибдатным реактивом (по Полсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой). Определение общего кальция в сыворотке крови проводили трилонометрическим методом ( по Вичеву, Каракашеву, 1969). Показатель осадочной реакции на белки определяли сулемовоосадочным методом. Определение глюкозы, общего билирубина, прямого билирубина, холестерина, калия, натрия и железа проводили в лаборатории фармакологии и токсикологии Научного Исследовательского Института Ветеринарной Медицины Монгольского Государственного Сельскохозяйственного Университета и в ветеринарной клинике факультета ветеринарной медицины БГСХА им. В.Р. Филиппова с использованием биохимического анализатора. Для получения результатов, характеризующих кислотовыделительную функцию желудка в межпищеварительный и пищеварительный периоды, проводили исследования желудочного содержимого с определением величины рН – ЭВ-74, АГМИ-01 и ОРИОН-501, общей кислотности, свободной и связанной хлористоводородной кислоты по методу Тепфера (1953). Кислотную продукцию по методу, описанному в трудах Григорьева П.Я. (1986), Шевченко И.А. (1986). Количественное определение индикана в свежевзятой моче проводилось по пробе Яффе с последующим колориметрическим определением его. Цифровой материал, полученный в результате проведенной работы, обрабатывался программой SPSS 21. 2.1.2 Методы исследовании желудочной секреции. Одной из главных задач, поставленных перед нами, было изучение кислотовыделительной функции желез желудка у здоровых и спонтанно больных ОРЖ лошадей в условиях Монголии. На протяжении вековой истории, начиная с введения в клиническую практику зондирования желудка, исследователи вели поиск как по линии совершенствования техники зондирования с установлением наиболее естественных условий, так и по линии разработки объективных методов физико-химического анализа самого желудочного секрета. Извлечение желудочного содержимого производится при помощи резинового носопищеводного зонда для лошадей и аппарата Камовского. Зонд представляет собой трубку толщиной 16 мм, диаметр просвета равен 12 мм. Длина зонда достигает 250 мм. На конце вводимой трубки фиксируется округлая полихлорвиниловая полированная головка, а на вводимом конце трубки имеется два боковых отверстия. Для ориентировки места нахождения зонда в желудке на нем можно сделать пометки. Первая заметка – показатель расстояния от крыла ноздри до глотки (это расстояние измеряют зондом непосредственно на голове животного), вторая – примерное расстояние от носового отверстия до желудка (15-16 ребро слева), по линии плече-лопаточного сочленения. Описанный зонд обладает рядом выгодных качеств. Титрованием желудочного содержимого 0,1%-ным раствором едкого натра в присутствии 1%-ного спиртового раствора фенолфталеина определяли общую кислотность, 0,5%-ного спиртового раствора деметиламидоазобензола – свободную хлористоводородную кислоту, а в присутствии 1%-ного водного раствора ализаринсульфоновокислого натрия – связанную хлористоводородную кислоту. Результаты титрования выражались в ммоль/л, 1 условная титрометрическая единица кислоты равна 1 ммоль/л (И.А. Шевченко, 1982). Кислотность желудочного содержимого определяли отдельно в каждой порции. На основании полученных данных судили о состоянии желудочного кислотообразования в динамике. 2.1.3 Методика регистрации биоэлектрической активности желудка монгольских лошадей. Снятие и анализ электрогастрограмм Конфигурация и амплитуда электрограмм гладких мышц пищеварительного тракта определяется такими факторами, как способ регистрации (уни- и биополярное отведение), форма электрода и способы его фиксации, длительность нахождения электрода в ткани исследуемого органа. (Bortoff A., 1955; Danial E.E., 1965; Папазова М., 1970; Климов П.К., Устинов В.Н., 1973; Климов П.К., 1976). В нашем случае использовалось униполярное отведение электродов, при котором дифферентный электрод располагается на внутреннем органе, индифферентный – на основании хвоста с внутренней стороны. Дифферентный электрод представляет собой петельку диаметром 0,1-0,2 см, изготовленную из серебряной проволоки сечением 0,3 мм. К серебряным электродам припаивались многожильные проводки с полихлорвиниловым покрытием сечением 1 мм. Место пайки электрода тщательно изолировалось 2-х кратным нанесением эпоксидного клея для предотвращения затекания тканевой жидкости, которая может стать причиной возникновения поляризационных токов, искажающих картину электрограмм. Индифферентным электродом служит стандартный пластинчатый электрод прибора ЭГС-4М. Индифферентный электрод прикладывается к основанию хвоста с внутренней стороны после предварительного обезжиривания кожи спирт-эфиром и наложения на него электродной пасты. При записи биопотенциалов с вживленных электродов, штекеры кабеля пациента с отметкой (+) соединяли непосредственно с проводами, идущими с разных участков желудочно-кишечного тракта. Исследования электрической активности желудка и кишечника проводили натощак, во время кормления и в период пищеварения. Биопотенциалы снимали с каждого отдела поочередно в течение, как минимум, 30 минут, или же вели запись с одного отдела в течение 2-3 часов. По окончании записи удаляли остатки электродной пасты и наносили на кожу синтомициновую эмульсию с целью предупреждения раздражения. Во время электрографии создавали спокойную обстановку. Для получения качественных электрограмм лошади заранее приучались к обстановке, длительному нахождению в рабочей позе и шуму работающего прибора. Продолжительность опытов составила 110 дней. Получено 170 электрогастрограмм. При анализе электрогастрограмм применяются описательная методика и количественная оценка. При описательной методике оценки электрогастрограмм мы имеем возможность отметить регулярность расположения колебаний потенциалов, увеличение или снижение биоэлектрической активности желудка по мере записи. При количественной оценке электрогастрограмм этих особенностей учесть невозможно. Наиболее простой, и вместе с тем отображающий основные данные электрогастрограммы является количественная оценка электрогастрограмм, разработанная профессором Г.М. Лисовской (1963). Методика количественного анализа электрогастрограммы по Г.М. Лисовской взята нами за основу, с одновременным внесением некоторых изменений. Вся длина электрогастрограммы измеряется при помощи курвиметра. Измерения проводятся путем передвижения ролика по измеряемым линиям, точно обводя все извилины контура. Цифровая оценка электрогастрограммы проводится за 20-минутный промежуток времени. Выражая общую длину полученной кривой в сантиметрах за 20 минут, и зная длину изоэлектрической линии, мы получали возможность выявить степень отклонения кривой электрогастрограммы от изоэлектрической линии за определенный период. За «условный ноль» принимается длина изоэлектрической линии. Учитывая, что лентопротяжный механизм протягивает бумажную ленту со скоростью 10 мм в минуту, мы проводили анализ отрезка электрогастрограммы за 20 минут. Это значит, что «условный ноль» во всех случаях равнялся 20. Общий уровень биоэлектрической активности желудка (ОУБАЖ) выражается в условных единицах. Частота импульсов (ЧИ) определяется следующим образом: подсчитывается за 20 минут записи количество импульсов, общее количество импульсов делится на 20 (время записи) – получается количество биопотенциалов в 1 минуту. Для подсчета амплитуды (СВА) биопотенциалов определяли высоту всех зубцов и затем высчитывали среднюю величину амплитуды. Таким образом, при анализе электрогастрограмм учитывались: 1. частотный спектр волнового процесса; 2. величина амплитуды зарегистрированных потенциалов; 3. общий уровень биоэлектрической активности желудка; 4. скорость нарастания и убывания потенциалов. Методика операции Перед операцией животных выдерживали на 12-24 – часовой голодной диете. Анестезию проводили внутримышечно рометаром и аминазином по 20 мл за 15 минут до операции. Животное фиксировали на операционном столе Н.К. Бережкова в правом боковом положении. Операционное поле обрабатывали обычным способом: выстригали и выбривали шерстный покров, кожу двукратно обрабатывали 5% настойкой йода. Подготовку рук хирурга проводили по способу Спасокукоцкого-Кочергина. По линии намеченного разреза проводили местную анестезию по А.В. Вишневскому 0,5% раствором новокаина. В связи с тем, что желудок лошадей расположен глубоко в куполе диафрагмы и соответственно оперативный доступ к нему через позадиреберный разрез весьма затруднителен, решено войти через грудную полость в области 13-го ребра с частичной надкостничной его резекцией. Это обстоятельство связано еще и с тем, что желудок лошадей фиксируется весьма прочно в области диафрагмы тремя связками: желудочно-диафрагмальной, желудочно-печеночной и желудочно-двенадцатиперстной, что весьма затрудняет его подтягивание для имплантации электродов. Дополнительно под местной анестезией, проводили разрез кожи, надкостницы ребра, которую отпрепарировывали и резецировали часть ребра длинной в ладонь человека (8-9 см). После чего вводили руку и проводили дополнительный разрез сбоку у крепления диафрагмы на ширину ладони и подтягивали кардиальную часть желудка к просвету раны с имплантацией в серозно-мышечный слой серебренных электродов. В дальнейшем подобную процедуру проводили с фундальной и пилорической частями желудка. К электроду заранее прикрепляли тонкую шелковую нить с двумя концами длиной 10 см, один из свободных концов нити вставляли в ушко хирургической иглы, которую вкалывали в ткани угла раны, затем выводили на поверхность серозной оболочки. Таким же образом протягивали вторую нить. После этого подтягивали за нити, электрод втягивался в глубину мышечного слоя и фиксировался хирургическим узлом, затем накладывали еще два серозно-мышечных шва посередине и в конце разреза. После вшивания электродов, желудок обмывали 0,5% раствором риванола, подогретым до температуры тела животного, осторожно вправляли в брюшную полость. Все проводки идущие от электродов, завязывали в один большой узел и оставляли под брюшиной с расчетом на то, что, прилегая вплотную к брюшине, узел задержит провода при случайном натяжении и не даст электродам сместиться. Концы проводов выводили в стороне от хирургической раны через прокол брюшной стенки. Над брюшной стенкой делали еще один узел, предотвращающий втягивание проводов в брюшную полость. На заключительном этапе накладывали непрерывные швы на диафрагму, брюшину и прерывистые петлевидные швы на кожу. Рану обильно, как внутри, так и снаружи присыпали антисептиком. Швы снимали на 14-ые сутки после операции. Заживление раны после операции шло первичным натяжением. Поскольку риск экспериментов был весьма значительный, так как был связан с нарушением целостности, как грудной, так и брюшной полостей, результаты показали положительный эффект. Регулярно проводили активную антибиотикотерапию для профилактики перитонита. Проводки, отходящие от электродов отличались разным цветом или количеством узелков. Поэтому мы всегда знали, с какого отдела желудка идет запись электрогастрограмм. Применение электрогастрографии в ветеринарной практике будет вполне оправданно при регистрации биоэлектрических потенциалов с поверхности кожи. |
Похожие:
 | «Этология» Фгоу впо «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В. Р. Филиппова» | | Коммуникационных кампаний Фгоу впо «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В. Р. Филиппова» |
| Л. Ю. Дондокова Хрестоматия по этнологии Фгоу впо «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В. Р. Филиппова» |  | Учебно-методический комплекс дисциплины «Эпизоотология и инфекционные болезни животных» Фгбоу впо «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия имени В. Р. Филиппова» |
| Методические указания к выполнению курсовых работ по дисциплине «цитология,... Фгоу впо «бурятская государственная сельскохозяйственная академия имени в. Р. Филиппова» | | Учебно-методический комплекс дисциплины «Организация государственного... Фгбоу впо «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия имени В. Р. Филиппова» |
| Методические указания к выполнению курсовых работ по дисциплине «Скотоводство» Печатается по решению методического Совета фгоу впо бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В. Р. Филиппова | | Методическое пособие подготовлено в соответствии с действующей программой... Фгбоу впо «бурятская государственная сельскохозяйственная академия имени в. Р. Филиппова» |
| Методические указания по выполнению самостоятельной работы по зоогигиене... Фгоу впо «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В. Р. Филиппова» | | Методические указания содержат сведения о квалификационных требованиях... Фгоу впо «бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В. Р. Филиппова» |
| Методическое пособие для семинарских занятий и самостоятельной работы... Фгоу впо «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В. Р. Филиппова» | | Программа подготовки специалитов среднего звена по специальности... Программа подготовки специалитов среднего звена по специальности 35. 02. 07 Механизация сельского хозяйства (базовый уровень подготовки),... |
| Кокунова Ирина Владимировна (RU), Стречень Марат Владимирович (RU),... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Великолукская государственная... | | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Настоящее Положение определяет требования к содержанию, объему и структуре выпускной квалификационной работе, выполненной в виде... |
| 182100, Псковская обл., г. Великие Луки, пл. Ленина, 1, фгоу впо вгсха Федеральное Государственное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Великолукская государственная сельскохозяйственная... | | 182100, Псковская обл., г. Великие Луки, пл. Ленина, 1, фгоу впо вгсха Федеральное Государственное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Великолукская государственная сельскохозяйственная... |
