Феноменология иммунного ответа на т-независимые антигены 2-го типа
Скачать 335.85 Kb.
|
Таблица 5. Иммунный ответ мышей CBA и CBA/N на ТЗ и ТН-2 антигены in vitro
Полученные данные позволили оценить роль зрелых В лимфоцитов в иммунном ответе на ТН-2 АГ и продемонстрировали, что появление не только АОК, но и значительной части НИГОК при этом обусловлено Lyb5+ В лимфоцитами. Для подтверждения этого вывода были проведены прямые опыты по сравнению количеств АОК и НИГОК в нормальных и лишенных Lyb5+ В клеток суспензиях спленоцитов. Удаление Lyb5+ В лимфоцитов из суспензии проводили с помощью сыворотки, содержащей цитотоксические анти-Lyb5 антитела. Получение поликлональной анти-Lyb5 сыворотки. Сложность получения АТ к Lyb5 АГ состоит в том, что такие АТ не удается индуцировать иммунизацией xid-мышей CBA/N, лишенных Lyb5+ В лимфоцитов, клетками мышей СВА, обладающими такими клетками. Более эффективным подходом оказалось использование аллотипических различий по Lyb5 АГ у мышей разных линий. Известны два аллотипа Lyb5 АГ: Lyb 5.1 (его экспрессируют В клетки мышей линии DBA/2) и Lyb 5.2 (у В клеток мышей линий CBA, BALB/c, C57BL/6). Взаимная иммунизация, в принципе, позволяет индуцировать анти-Lyb5 АТ. Этот подход был применен Ahmed А. et al (1977) для получения поликлональной анти-Lyb5.1 сыворотки. Аллотип Lyb5.1 встречается у мышей значительно реже, чем аллотип Lyb5.2, поэтому получение специфичной анти-Lyb5.2 сыворотки представляет больший интерес, расширяя область исследований. Нами был разработан подход для получения анти-Lyb5.2 сыворотки [Chernishova I.N. et al, 1998]. В его основу легли данные работы Черняховской И.Ю. и др. (1988) по созданию толерантности, индуцированной с помощью циклофосфамида. Постулировалось, что иммунизация мышей DBA/2 (Lyb5.1, Н-2d) спленоцитами мышей CBA (Lyb5.2, Н-2k) вызывет образование специфичных анти-Lyb5.2 АТ, если мышей DBA/2 предварительно толерировали спленоцитами мышей CBA/N (Lyb5–, Н-2k). (Толерирование клетками мышей CBA/N необходимо для того, чтобы при последующей иммунизации мышей DBA/2 клетками мышей СВА не образовывалось АТ к Н-2k антигенам мышей СВА). Для толерирования мышей DBA/2 их тимэктомировали, через месяц внутривенно вводили по 108 спленоцитов мышей CBA/N и через 24 часа после этого – циклофосфамид (200 мг/кг веса). Толерированных мышей DBA/2 многократно иммунизировали спленоцитами мышей CBA. Сыворотку брали индидуально на 5-й день после последней иммунизации. Наличие в сыворотке АТ к Lyb5.2 АГ проверяли в цитотоксическом тесте, используя в качестве клеток-мишеней спленоциты мышей СВА (Lyb5.2, Н-2k) и CBA/N (Lyb5–, Н-2k). Подход позволил получить специфическую анти-Lyb5.2 сыворотку [Chernishova I.N. et al, 1998]. Таблица 6. Влияние удаления Lyb5+ В клеток на число АОК и НИГОК в суспензии спленоцитов мышей, иммунизированных ПВП
Различия средних значений АОК и индуцированных НИГОК в опытной и контрольной группах достоверны на уровне значимости р<0,05 (*) Обработка анти-Lyb5.2 сывороткой спленоцитов мышей BALB/c (аллотип Lyb5.2), иммунизированных ПВП, снижала число АОК на 44% (51% - 7%), а число индуцированных НИГОК – на 35% (61% - 26%), (табл. 6). (Обработка антисывороткой нормальных спленоцитов такого эффекта не вызывала)2. Это прямо подтвердило вывод о том, что при иммунном ответе на ТН-2 АГ, не только АОК, но и значительная часть НИГОК относится к Lyb5+ В клеточному пулу. В 80-х годах прошлого века было показано, что на части В лимфоцитов экспрессируется маркер Т клеток – CD5 [Herzenberg L.A. et al, 1984; Youinou P. et al, 1999; Сидорова Е.В., 2002] и установлено, что именно CD5+ В-1 клетки отвечают на ТН-2 АГ [Mond J.J. et al, 1995; Whitmore A.C. et al, 2004]. Оказалось также, что субпопуляции Lyb5+ и CD5+ В клеток «перекрываются» [Smith H.R. et al, 1985]. Поэтому было решено исследовать роль CD5+ B клеток в иммунном ответе на ТН-2 АГ. Роль CD5+ B клеток в иммунном ответе на ТН-2 антигены. Для выяснения роли CD5+ B клеток в образовании АТ и неспецифических ИГ под действием ТН-2 антигенов CD5+ В лимфоциты удаляли из суспензии спленоцитов мышей, иммунизированных ТН-2 АГ, с помощью анти-CD5 магнитных бус (Dynal) или цитотоксических анти-CD5 АТ (Cedarlane). Для удаления CD5+ B клеток с помощью магнитных бус использовали два способа: либо спленоциты мыши инкубировали с бусами, покрытыми анти-CD5 АТ, либо клетки сначала обрабатывали анти-CD5 АТ крысы, а затем инкубировали с бусами, содержащими АТ к IgG крысы. Последний способ позволил повысить выход «розеток» до 12% (вместо 0,4% при первом способе) и был использован в экспериментах в качестве основного. Поскольку около 40% CD5+ лимфоцитов селезенки относится к Т клеткам, для более полного удаления CD5+ В клеток из суспензии сначала удаляли Т клетки с помощью pan T магнитных бус. Образующиеся «Т-» и «В-розетки» удаляли на магните; суспензию, обедненную CD5+ В лимфоцитами, использовали для определения количеств АОК и ИГОК. В суспензии спленоцитов нормальных мышей после удаления Т клеток было выявлено 534±45 АОК к ПВП и 4384±604 ИГОК/млн клеток, число НИГОК при этом составило 3850±560/106 клеток (табл. 7). В суспензии спленоцитов мышей, иммунизированных ПВП, после удаления Т клеток, было выявлено 1347±78/106 АОК и 8801±875/106 ИГОК и число НИГОК составило 7454±798/106 клеток. Таким образом, введение ПВП индуцировало специфический и неспецифический ответы, о чем свидетельствовал прирост количеств АОК, ИГОК и НИГОК – 813±33, 4417±274 и 3604±240/млн спленоцитов, соответственно. Таблица 7. Влияние обработки суспензии спленоцитов нормальных и иммунизированных ПВП мышей BALB/c анти-CD5 магнитными бусами на количество АОК, ИГОК и НИГОК
Различия средних значений в группах иммунных спленоцитов с удаленными Т клетками и после удаления Т и CD5+ В клеток достоверны на уровне значимости р<0,05 (*) Удаление CD5+ В клеток из суспензии нормальных спленоцитов на фоновые количества АОК, ИГОК и НИГОК практически не повлияло. В то же время, удаление CD5+ В клеток из суспензии иммунной селезенки привело к снижению числа АОК, ИГОК и НИГОК до 965±82, 5248±605 и 4283±526/106 спленоцитов, соответственно. В результате прирост числа АОК составил 473±35/106 против 813±33/106 клеток, т.е специфический ответ уменьшился ~ на 40%. Еще сильнее снизился неспецифический ответ: прирост ИГОК составил 429±12/106 против 4417±274/10 6, а прирост НИГОК вообще отсутствовал. При использовании для удаления CD5+ В клеток цитотоксических анти-CD5 АТ (Cedarline) и комплемента получены аналогичные результаты (табл. 8). Обработка нормальных спленоцитов анти-CD5 АТ на фоновые количества АОК и НИГОК практически не влияла. Такая же обработка «иммунной суспензии» снизила числа АОК и НИГОК, приросты которых уменьшились и составили, соответственно, 286±87 и 415±166/млн спленоцитов. Таким образом, обработка спленоцитов цитотоксическими анти-CD5 АТ вызвала снижение специфического и неспецифического ответов на 40 и 48% , соответственно. Таблица 8. Влияние цитотоксических анти-CD5 антител на количество АОК, ИГОК и НИГОК в суспензиях спленоцитов нормальных и иммунизированных ПВП мышей BALB/c
Различия между средними показателями в иммунных группах до и после обработки АТ и комплементом достоверны на уровне значимости р<0,05(*) или p<0,01(**) Полученные данные позволяют заключить, что за специфический ответ и неспецифическую/ поликлональную активацию В клеток под действием ТН-2 АГ у мышей отвечает одна и та же субпопуляция В клеток, а именно CD5+ B лимфоциты3. Эти данные согласуются с результатами Whitmore А.С. et al (2004), которые обнаружили АОК к ПВП в CD5+ В-1 компартменте у трансгенных мышей, все В клетки которых экспрессировали ИГ-рецепторы, специфичные к ПВП. Таким образом, в настоящей работе показано, что основные параметры иммунного ответа на ТЗ и ТН-2 АГ (временная, дозовая зависимость, индукция образования неспецифических ИГ) принципиально сходны, хотя величина ответа различна. Подтвержден параллелизм в образовании АТ и индуцированных АГ неспецифических ИГ под действием разных ТН-2 АГ. Полученные данные подтверждают высказанное ранее предположение о том, что в специфическом и неспецифическом/ поликлональном ответах на ТЗ и ТН-2 АГ участвуют разные субпопуляции В лимфоцитов: на ТН-2 АГ отвечают, в основном, В-1 лимфоциты. Способность ТН-2 АГ индуцировать образование неспецифических ИГ в CD5+ В-1 клетках, играющих роль «первой линии» защиты организма от патогенов, часто содержащих ТН-2 АГ, позволяет предположить наличие у этих белков неизвестной нам пока функции. Очевидно, что для полного представления о роли индуцируемых АГ неспецифических ИГ и механизмах их образования В-1 клетками требуются дальнейшие исследования. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 | Феноменология иммунного ответа на т-независимые антигены 2-го типа... В этом плане явились мероприятия, проведенные в 9-11 классах «Нет – наркотикам», «Мы за здоровый образ жизни» с приглашением мед... | | Оценка гуморального иммунного ответа на вакцинацию против гепатита в и А Ведущее учреждение: гу научно-исследовательский Институт вирусологии им. Д. И. Ивановского рамн |
 | Реферат "Регуляция иммунного ответа" Введение Иммунный ответ, как... Активация т- и в-клеток происходит в результате эффективного связывания антигенного материала их антигенспецифичными рецепторами | | В урок г погост Эта часть работы содержит задания а 1- а 30 с выбором ответа. Из предложенных вариантов ответа только один верный. Внимательно прочитайте... |
| Программа дисциплины Феноменология муниципальных образований для... Программа предназначена для преподавателей, ведущих данную дисциплину, учебных ассистентов и студентов направления подготовки специалистов... | | «профессиональный лицей №91» программа государственной итоговой аттестации выпускников С выбором ответа. К каждому заданию дается 4 ответа, только один из которых правильный. При выполнении задания части 1 обведите кружком... |
| Положение об аттестационной комиссии по проведению промежуточной... С выбором ответа. К каждому заданию дается 4 ответа, только один из которых правильный. При выполнении задания части 1 обведите кружком... | | Инструкция по выполнению работы На выполнение экзаменационной работы... С выбором ответа. К каждому заданию дается 4 ответа, только один из которых правильный. При выполнении задания части 1 обведите кружком... |
| Положение о предметных комиссиях Рязанской области Заданий обязательного уровня. К первым четырем заданиям приведены 4 варианта ответа, из которых только один верный. При выполнении... | | Порядок работы муниципальной предметной комиссии Заданий обязательного уровня. К первым четырем заданиям приведены 4 варианта ответа, из которых только один верный. При выполнении... |
| Министерство образования оренбургской области прика з Заданий обязательного уровня. К первым четырем заданиям приведены 4 варианта ответа, из которых только один верный. При выполнении... | | Положение об экзаменационной комиссии Заданий обязательного уровня. К первым четырем заданиям приведены 4 варианта ответа, из которых только один верный. При выполнении... |
| Памятка родителям участников гиа-9 2013 года А26. К каждому заданию приводится 4 варианта ответа, из которых только один верный. При выполнении заданий части 1 обведите кружком... | | Памятка о порядке проведения гиа-9 в 2013 году А26. К каждому заданию приводится 4 варианта ответа, из которых только один верный. При выполнении заданий части 1 обведите кружком... |
| Министерство образования и науки российской федерации Включает 20 заданий с выбором ответа. К каждому заданию дается 4 ответа, только один из которых правильный | | Положение о письменной экзаменационной работе Заданий обязательного уровня. К первым четырем заданиям приведены 4 варианта ответа, из которых только один верный. При выполнении... |
