Глава 3 Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы
Жизнь микроорганизмов находится в тесной зависимости от условий окружающей среды. Как на растения, макроорганизмы, так и на микромир существенное влияние оказывают различные факторы внешней среды. Их можно разделить на три группы: химические, физические и биологические.
§ 1. Физические факторы
Из физических факторов наибольшее влияние на микроорганизмы оказывают: температура, высушивание, лучистая энергия, ультразвук, давление.
Температура: жизнедеятельность каждого микроорганизма ограничена определенными температурными границами. Эту температурную зависимость обычно выражают тремя точками: минимальная (min) температура — ниже которой размножение прекращается, оптимальная (opt) температура — наилучшая температура для роста и развития микроорганизмов и максимальная (max) температура — температура, при которой рост клеток или замедляется, или прекращается совсем. Впервые в истории науки Пастером были разработаны методы уничтожения микроорганизмов при воздействии на них высоких температур.
Оптимальная температура обычно приравнивается к температуре окружающей среды.
Все микроорганизмы по отношению к температуре условно можно разделить на 3 группы:
Первая группа: психрофилы — это холодолюбивые микроорганизмы, растут при низких температурах: min t — 0°С, opt t — от 10—20°С, max t — до 40°С. К таким микроорганизмам относятся обитатели северных морей и водоемов. К действию низких температур многие микроорганизмы очень устойчивы. Например, холерный вибрион долго может храниться во льду, не утратив при этом своей жизнеспособности. Некоторые микроорганизмы выдерживают температуру до -190°С, а споры бактерий могут выдерживать до -250°С. Действие низких температур приостанавливает гнилостные и бродильные процессы, поэтому в быту мы пользуемся холодильниками. При низких температурах микроорганизмы впадают в состояние анабиоза, при котором замедляются все процессы жизнедеятельности, протекающие в клетке.
Ко второй группе относятся мезофилы — это наиболее обширная группа бактерий, в которую входят сапрофиты и почти все патогенные микроорганизмы, так как opt температура для них 37°С (температура тела), min t = 10°С, maxt = 45°C.
К третьей группе относятся термофилы — теплолюбивые бактерии, развиваются при t выше 55°С, min t для них = 30°С, max t = 70—76°С. Эти микроорганизмы обитают в горячих источниках. Среди термофилов встречается много споровых форм. Споры бактерий гораздо устойчивей к высоким температурам, чем вегетативные формы бактерий. Например, споры бацилл сибирской язвы выдерживают кипячение в течение 10—20 с. Все микроорганизмы, включая и споровые, погибают при температуре 165—170°С в течение часа. Действие высоких температур на микроорганизмы положено в основу стерилизации. ,
Высушивание. Для нормальной жизнедеятельности микроорганизмов нужна вода. Высушивание приводит к обезвоживанию цитоплазмы, нарушается целостность цитоплазмагической мембраны, что ведет к гибели клетки. Некоторые микроорганизмы под влиянием высушивания погибают уже через несколько минут: это менингококки, гонококки. Более устойчивыми к высушиванию являются возбудители туберкулеза, которые могут сохранять свою жизнеспособность до 9 месяцев, а также капсульные формы бактерий. Особенно устойчивыми к высушиванию являются споры. Например, споры плесневых грибов могут сохранять способность к прорастанию в течение 20 лет, а споры сибирской язвы могут сохраняться в почве до 100 лет.
Для хранения микроорганизмов и изготовления лекарственных препаратов из бактерий применяется метод лио-фильной сушки. Сущность метода состоит в том, что микроорганизмы сначала замораживают при -273 °С, а потом высушивают в условиях вакуума. При этом микробные клетки переходят в состояние анабиоза и сохраняют свои биологические свойства в течение нескольких лет. Таким способом, например, изготавливают биопрепарат «колибактерин», содержащий штаммы Е. coli.
Лучистая энергия. В природе бактериальные клетки постоянно подвергаются воздействию солнечной радиации. Прямые солнечные лучи губительно действуют на микроорганизмы. Это относится к ультрафиолетовому спектру солнечного света (УФ-лучи), они инактивируют ферменты клетки и разрушают ДНК. Патогенные бактерии более чувствительны к действию УФ-лучей, чем сапрофиты. Поэтому в бактериологической лаборатории микроорганизмы выращивают и хранят в темноте.
Опыт Бухнера показывает, насколько УФ-лучи губительно действуют на клетки: чашку Петри с плотной средой засевают сплошным газоном. Часть посева накрывают бумагой, и ставят чашку Петри на солнце, а затем через некоторое время ее ставят в термостат. Прорастают только те микроорганизмы, которые находились под бумагой. Поэтому значение солнечного света для оздоровления окружающей среды очень велико.
Бактерицидное действие УФ-лучей используют для стерилизации закрытых помещений: операционных, родильных отделений, перевязочных, в детских садах и т. д. Для этого используются бактерицидные лампы ультрафиолетового излучения с длиной волны 200—400 нм.
На микроорганизмы оказывают влияние и другие виды лучистой энергии — это рентгеновское излучение, а-, р- и у-лучи оказывают губительное действие на микроорганизмы только в больших дозах. Эти лучи разрушают ядерную структуру клетки. В последние годы радиационным методом стерилизуют изделия для одноразового использования — шприцы, шовный материал, чашки Петри.
Малые дозы излучений, наоборот, могут стимулировать рост микроорганизмов.
Ультразвук вызывает поражение клетки. Под действием ультразвука внутри клетки возникает очень высокое давление. Это приводит к разрыву клеточной стенки и гибели клетки. Ультразвук используют для стерилизации продуктов: молока, фруктовых соков.
Высокое давление. К атмосферному давлению бактерии, а особенно споры, очень устойчивы. В природе встречаются бактерии, которые живут в морях и океанах на глубине 1000— 10 000 м под давлением от 100 до 900 атм. Сочетанное действие повышенных температур и повышенного давления используется в паровых стерилизаторах для стерилизации паром под давлением.
§ 2. Химические факторы
Влияние химических веществ на микроорганизмы различно. Оно зависит от химического соединения, его концентрации, продолжительности воздействия.
В малых концентрациях химическое вещество может являться питанием для бактерий, а в больших — оказывать на них губительное действие. Например, соль NaCl в малых количествах добавляют в питательные среды. Так же существуют галофильные микроорганизмы, которые предпочитают соленую среду. В больших концентрациях NaCl задерживает размножение микроорганизмов. Для примера можно привести консервирование в быту: при недостаточном количестве соли баллоны с овощами могут «взрываться».
Многие химические вещества изспользуются в медицине в качестве дезинфицирующих средств. К ним относятся фенолы, соли тяжелых металлов, кислоты, щелочи. К наиболее распространенным дезрастворам относят хлоросодер-жащие соединения: хлорная известь, хлорамин Б, дихлор-1, сульфохлорантин, хлорцин и др. Активность дезинфицирующих веществ не одинакова и зависит от времени экспозиции, концентрации, температуры. В качестве контрольных микроорганизмов для изучения действия дезрастворов используют S. typhi и S. aureus. Для дезинфекции могут использоваться кислоты: 40% раствор уксусной кислоты для обеззараживания обуви. Виды дезинфекций: профилактическая— для предупреждения и распространения инфекций; текущая — при возникновении эпидемического очага и заключительная — после окончания эпидемической вспышки, (см. схему «Характеристика показаний для дезинфекции»)
Некоторые химические вещества используются в качестве антисептиков. Антисептики — это противомикробные вещества, которые используются для обработки биологических поверхностей. Антисептика — это комплекс мероприятий, направленных на уничтожение микробов в ране или организме в целом, на предупреждение и ликвидацию воспалительного процесса. К антисептикам относятся:
препараты йода (спиртовый раствор йода, йодинол, йодоформ, раствор Люголя);
* соединения тяжелых металлов (соли ртути, серебра, цинка);
* химические вещества нитрофуранового ряда (фуразо-лидон, фурациллин); окислители (перекись водорода, калия перманганат);
* кислоты и их соли (салициловая, борная);
* красители (метиленовый синий, бриллиантовый зеленый).
Характеристика показаний для дезинфекции
Виды дезинфекции
Профилактическая
При возможности или угрозе распространения инфекционных болезней при невыявленном источнике инфекции
-- Места скопления люден:
Вокзалы
Гостиницы
Общежития
Общественные туалеты
Парикмахерские
Детские дошкольные учреждения
Бассейны
—^- Лечебные учреждения:
Родильные дома Операционные блоки и др.
Предприятия по изготовлению пищевых продуктов —- Водопроводные станции и сооружения
" Исполнители:
персонал учреждений работники дезинфекционных учреждений
" Время проведения:
периодически
Очаговая
- При наличии источника возбудителя инфекции (больного или бактериовыделителя) дома, в стационаре к Исполнители:
мед. персонал больницы члены семьи больного больные и бактериовыделители
- Время проведения:
постоянно Заключительная
После удаления источника из очага госпитализация больного смерть больного выздоровление перепрофилирование инфекционного отделения
Исполнители:
мед. персонал отделений члены семьи больного работники дез. службы
Время проведения:
немедленно трибольничных инфекций примелекс мероприятий, направленных организмов. В медицинской практике антибиотики используются для лечения многих инфекционных заболеваний. Антагонизм может развиваться в форме конкуренции за источники питания. Если один микроорганизм использует другой организм как источник питания, то такой вид антагонизма называется паразитизмом. Примером паразитизма является отношение вирус — хозяин, бактериофаг — бактерии.
§ 4. Уничтожение микроорганизмов в окружающей среде
Для уничтожения микроорганизмов в окружающей среде применяются стерилизация и дезинфекция.
Стерилизация — это полное освобождение объектов окружающей среды от микроорганизмов и их спор. Существуют физические, химические и механические способы стерилизации.
К наиболее распространенным способам физической стерилизации относятся автоклавирование и сухожаровая стерилизация.
Автоклавирование — это обработка паром под давлением, которая проводится в специальных приборах — автоклавах. Автоклав представляет собой металлический цилиндр с прочными стенками, состоящий из двух камер: парообразующей и стерилизующей. В автоклаве создается повышенное давление, что приводит к увеличению температуры кипения воды. Паром под давлением стерилизуют питательные среды, патологический материал, инструментарий, белье и т.д.
Наиболее распространенный режим работы автоклава — 2 атм., 120°С, 15—20 мин. Началом стерилизации считают момент закипания воды.
К работе с автоклавом допускаются подготовленные специалисты, которые точно и строго выполняют все правила работы с этим прибором.
Сухожаровая стерилизация — проводится в печах Пас-тера. Это шкаф с двойными стенками, изготовленный из металла и асбеста, нагревающийся с помощью электричества и снабженный термометром. Сухим жаром стерилизуют, в основном, лабораторную посуду. Обеззараживание материала в нем происходит при 160°С в течение 1 часа.
В бактериологических лабораториях используется такой вид стерилизации, как прокаливание над огнем. Этот способ применяют для обеззараживания бактериологических петель, шпателей, пипеток. Для прокаливания над огнем используют спиртовки или газовые горелки.
К физическим способам стерилизации относятся также УФ-лучи и рентгеновское излучение. Такую стерилизацию проводят в тех случаях, когда стерилизуемые предметы не выдерживают высокой температуры.
Механическая стерилизация — проводится при помощи фильтров (керамических, стеклянных, асбестовых) и особенно мембранных ультрафильтров из коллоидных растворов нитроцеллюлозы. Такая стерилизация позволяет освобождать жидкости (биопрепараты, сыворотку крови, лекарства) от бактерий, грибов, простейших и вирусов, в зависимости от размеров пор фильтра. Для ускорения фильтрации создают повышенное давление в емкости с фильтруемой жидкостью или пониженное давление в емкости с фильтратом.
В микробиологической практике часто используют асбестовые фильтры Зейтца, Шамберлана. Такие фильтры рас-читаны на одноразовое применение.
Химическая стерилизация — этот вид стерилизации применяется ограниченно. Чаще всего используют химические вещества для предупреждения бактериального загрязнения питательных сред и иммунобиологических препаратов.
При химической стерилизации возможно использование двух токсичных газов: окиси этилена и формальдегида. Эти вещества в присутствии воды могут инактивировать ферменты, ДНК и РНК, что приводит бактериальные клетки к гибели. Стерилизация газами осуществляется в присутствии пара при 50—80°С в специальных камерах. Этот вид стерилизации опасен для окружающих, однако существуют объекты, которые могут быть повреждены при нагревании и по-
3* 67 этому их можно стерилизовать только газом. Например, оптические приборы, некоторые питательные среды.
Для проведения стерилизации тех или иных объектов необходимо строго соблюдать установленный режим стерилизации (например, для питательных сред он указан в рецепте приготовления).
При проведении стерилизации в автоклаве необходимо осуществлять контроль стерилизации.
Существует 3 вида контроля:
* химический — в автоклав при каждой загрузке кладут бензойную кислоту, мочевину, запаянные в ампулы, или индикаторы стерилизации ТВИ — 120°С — 1 атм, ТВИ - 132°С - 2 атм.
При достижении заданного режима стерилизации указанные вещества меняют свой цвет, а термовременные индикаторы темнеют; термический — 2 раза в месяц максимальным термометром во время стерилизации проводят замер температуры в контрольных точках, которая должна достичь заданных параметров;
* биологический — проводится 2 раза в год. В контрольных точках помещают пробирки со споровой культурой Bacillus stearothermophilies, погибающей при 120°С в течение 15 мин. После стерилизации пробирки помещают в термостат при t = 55 °С на 48 часов. При достижении заданного режима рост тесткульту-ры отсутствует: фиолетовой цвет среды в пробирках не меняется.
Для сохранения стерильности стерилизуемые предметы должны иметь упаковку, не допускающую микробного загрязнения.
§ 5. Бактериофаги
Бактериофаги — это вирусы, обладающие способностью проникать в бактериальные клетки, репродуктироваться в них и вызывать их лизис.
Фаги широко распространены в природе — в воде, почве, сточных водах, в кишечнике животных, человека, птиц, в раковых опухолях растений. Фаг был выделен из молока, овощей. Источником фагов патогенных микробов являются больные люди и животные, бактерионосители, реконвалес-центы. Выделяются с содержимым кишечника, мочой, его обнаруживали в мокроте, слюне, гное, носовом секрете. Особенно большое количество фагов выделяется в период выздоровления.
Фаг получают путем добавления в котлы с бульонными культурами специального производственного фага, который выдерживают сутки при 37°С, затем фильтруют. Проверяют на чистоту, стерильность, безвредность и активность (силу действия).
Структура и морфология фагов: большинство фагов состоит из головки, воротничка и хвостового отростка, заканчивающегося базальной пластинкой, к которой прикреплены фибриллы.
Содержание головки — это ДНК (иногда РНК). Хвостовой отросток имеет цилиндрический стержень, окруженный сократительным чехлом. В оболочку фаговой частицы и отросток входит белок, состоящий из полиаминов: спермин, путресцин, кислоторастворимый пептид.
Фаги более устойчивы во внешней среде, чем бактерии. Выдерживают давление до 6000 атм., устойчивы к действию радиации. До 13 лет не теряют своих литических свойств, находясь в запаянных ампулах.
Некоторые вещества, например, хлороформ и ферментативные яды (цианид, флорид), не оказывают влияния на фаги, но вызывают гибель бактерий.
Однако фаги быстро погибают при кипячении, действии кислот, УФ-лучей.
Фаги обладают строгой специфичностью, т. е. способны паразитировать только в определенном виде микроорганизмов: стрептококках, стафилококках и т. д. Фаги с более строгой специфичностью, которые паразитируют только на определенных представителях данного вида, называются типовыми. Фаги, которые лизируют микроорганизмы близких видов, например, видов, входящих в род возбудителей дизентерии (шигелл), называются поливалентными.
По механизму взаимодействия с клетками фаги подразделяются на вирулентные и умеренные.
Феномен бактериофагии, вызываемый вирулентными фагами, проходит в 5 фаз:
1) адсорбция — с помощью нитей хвостового отростка;
2) проникновение в клетку;
3) репродукция белка и нуклеиновой кислоты внутри клетки;
4) сборка и формирование зрелых фагов;
5) лизис клетки, выход фага из нее.
Умеренные фаги не лизируют все клетки, а с некоторыми вступают в симбиоз. Клетка выживает. Умеренный фаг превращается в профаг, который не обладает литическим действием.
Лизогенезация бактерий сопровождается изменением их морфологических, культуральных, ферментативных, антигенных и биологических свойств. Так, например, нетокси-генные штаммы коринебактерий дифтерии в результате ли-зогенизации превращаются в токсигенные. Практическое использование фагов: * назначают с профилактической и лечебной целью при дизентерии, брюшном тифе, паратифах, холере, чуме, стафилококковой инфекции; в диагностике инфекционных заболеваний; метод фаготипирования дает возможность устанавливать вид бактерий и тем самым выявлять источники инфекции.
§ 6. Генетика бактерий
Генетика (от греч. genos — рождение) — это наука, изучающая наследственность и изменчивость. Микроорганизмы обладают способностью изменять свои основные признаки:
морфологические (строение); культуральные (рост на питательных средах); биохимические или ферментативные признаки (добавление определенных веществ в питательную среду может вызвать активацию фермента, который до этого находится в латентном состоянии); биологические свойства — может меняться степень па-тогенности, на этом основаны способы приготовления живых вакцин.
Например, при 12—14-дневном культивировании возбудителя сибирской язвы при t° — 42—43°С микробы потеряли способность вызывать заболевание у животных, но сохранили свои иммуногенные свойства.
БЦЖ (бацилла Кальмета-Герена) снизила болезнетвор-ность бычьего вида микобактерий туберкулеза путем длительных пассажей на картофельной среде с желчью и глицерином при t° 38°C. Пересевы через каждые 14 дней получили ослабленный штамм микобактерий туберкулеза, который назван «вакциной» БЦЖ, используемой для профилактики туберкулеза.
Наследственность — это способность организмов сохранять определенные признаки на протяжении многих поколений.
Изменчивость — это приобретение признаков под влиянием различных факторов, отличающих их от предыдущих поколений.
Генетическая информация в клетках бактерий заключена в ДНК (у некоторых вирусов РНК). Молекула ДНК состоит из двух нитей, каждая из которых спирально закручена относительно другой. При делении клетки спираль удваивается. И вновь образуется двунитчатая молекула ДНК. В состав молекулы ДНК входят 4 азотистых основания — одекаин, гуанин, цитозин, тимин. Порядок расположения в цепи у разных организмов определяет их наследственную информацию, закодированную в ДНК.
Формы проявления изменчивости
Ненаследственная, фенотипическая изменчивость, или модификация, микроорганизмов возникает как ответ клетки на неблагоприятные условия ее существования. Эта адаптивная реакция на внешние раздражители не сопровождается изменением генотипа и поэтому не передается по наследству. Могут измениться морфология (удлиняется), культуральные свойства (стафилококки без пигмента при недостатке кислорода) биохимические или ферментативные свойства, вырабатываются адаптивные ферменты Е. coli, фермент лактаза на среде — с лактозой.
2. Наследуемая генетическая изменчивость возникает в результате мутаций и генетических рекомбинаций. Изменчивость микроорганизмов
Фенотипическая изменчивость (ненаследуемая модификация)
Генотипическая изменчивость наследуемая
Мутации (от лат. mutatio — изменять) — это передаваемые по наследству структурные изменения генов. При мутациях изменяются участки геномов (т. е. наследственного аппарата).
Бактериальные мутации могут быть спонтанными (самопроизвольными) и индуцированными (направленными), т. е. появляются в результате обработки микроорганизмов специальными мутагенами (хим. веществами, температурой, излучением и т.д.).
В результате бактериальных мутаций могут отмечаться:
* изменение морфологических свойств; изменение культуральных свойств; возникновение у микроорганизмов устойчивости к лекарственным препаратам;
* ослабление болезнетворных свойств и др.
К генетическим рекомбинациям относятся рекомбинации генов, которые происходят вследствие трансформации, от донора трансдукции и конъюгации.
Трансформация — передача генетического материала реципиенту при помощи изолированной ДНК другой клетки. Клетки, способные воспринимать ДНК другой клетки, называются компетентными.
Состояние компетентности часто совпадает с логарифмической фазой роста. Для трансформации необходимо создавать особые условия, например, добавляя неорганические фосфаты, повышается частота трансформации.
Трансдукция — это перенос наследственного материала от бактерии-донора к бактерии-реципиенту, который осуществляет фаг. Например, с помощью фага можно воспроизвести трансдукцию жгутиков, ферментативные свойства, ре-зистентность к антибиотикам, токсигенность и другие признаки.
Конъюгация бактерий — передача генетического материала от одной клетки другой путем непосредственного контакта. Причем происходит односторонний перенос генетического материала — от донора реципиенту. Необходимым условием для конъюгации является наличие у донора специфического фактора плодовитости F. У граммотрицательных бактерий обнаружены половые F-волоски, через них происходит перенос генетического материала. Клетки, играющие роль донора, обозначают F+, а реципиенты — F.
F-фактор находится в цитоплазме клеток, причем он не один. При конъюгации происходит перенос только ДНК без РНК и белка.
Практическое значение изменчивости: с помощью генетических методов получены специальные культуры дрожжей и других микробов, используемые в технологии изготовления пищевых продуктов, производстве анатоксинов, вакцин, антибиотиков, витаминов;
* большое научное и практическое значение имеет генная инженерия, методы которой позволяют изменять структуру генов и включать в хромосому бактерий гены других организмов, ответственных за синтез важных и нужных веществ, которые получить химическим путем очень трудно, — инсулин, интерферон и др.;
* при использовании мутагенных факторов (УФ-лучей, рентгеновские лучи, у-лучи, диэтилсульфат и др.) были получены мутанты — продуценты антибиотиков, которые в 100—1000 раз активнее исходных.
§ 7. Практическая часть
Подготовка к стерилизации лабораторной посуды
1. Перед стерилизацией лабораторную посуду тщательно моют и сушат.
2. Пробирки, флаконы, бутыли, матрацы, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробки на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажный колпачок.
3. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1— 5 штук или в пеналах.
4. Пастеровские пипетки по 3—5—10—15 штук заворачивают в плотную оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.
Лабораторную посуду стерилизуют:
а) сухим жаром при температуре 150, 160 и 180°С соответственно 2 часа, 1 час и 30 минут.
б) в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 20—30 минут.
Стерилизация металлических инструментов
Ножницы, скальпели, пинцеты и пр. стерилизуют в 2% содовом растворе (сода предупреждает появление ржавчины и потерю остроты). Лезвия скальпелей и ножниц перед погружением в воду рекомендуется обертывать ватой.
Стерилизация перчаток и других резиновых изделий
Перчатки, шланги, трубки и другие, загрязненные вегетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2% растворе соды или текучим паром 30 минут; при загрязнении спороносной патогенной микрофлорой — в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 30 минут.
Приготовление дезрастворов группы хлора
1. Хлорная известь обладает высоким бактериальным действием. Ее используют в микробиологической практике в виде порошка, 10—20% хлорно-известкового молока и 0,2—10% осветленного раствора.
2. Схема приготовления хлорно-известкового молока.
Концентрация хлорно-нзвсстко-вого молока (в %)
Количество хлорной извести в граммах на 10 л воды при содержании в ней активного хлора (в %)
В таблице показана взаимосвязь между содержанием активного хлора в хлорной извести и ее количеством, необходимым для приготовления 10 л хлорно-известкового молока 10—20% концентрации.
3. Хлорамин — содержит 25—26,5% активного хлора.
В микробиологических лабораториях пользуются 0,2— 10% растворами хлорамина.
Концентрация раствора (в%)
Количество хлорамина в 1 г на:
Приготовление маточного раствора хлорной извести
1. Взять емкость (стеклянные бутыли темного стекла с притертой пробкой, эмалированная или стеклянная посуда) и поместить в нее 1 кг сухой хлорной извести, после чего, продолжая помешивать, добавить постепенно небольшое количество воды до получения кашицеобразной массы. И затем, перемешивая, добавить воду до объема 10 литров, т. е. для приготовления 10% р-ра хлорной извести необходимо взять: 1 кг сухой хлорной извести + 9 литров воды = = 10 литрам раствора.
2. Свежеприготовленные растворы оставляют на 24 часа в прохладном темном помещении в закрытой посуде. Через 24 часа осторожно, не взбалтывая осадка, сливают осветленный раствор в другую емкость (стеклянные емкости темного цвета, эмалированная или пластмассовая посуда) для хранения до 10 дней.
3. При приготовлении маточного раствора на емкости (на этикетке, которая крепится на ней) указывается дата приготовления, концентрация раствора, должность, фамилия лица, приготовившего раствор.
Внимание! Использование оцинкованной посуды запрещено. Дезрастворы группы фенола
1. Карболовая кислота. Жидкая карболовая кислота содержит 90% кристаллического фенола и 10% воды. В микробиологических лабораториях используют 3—5 % растворы карболовой кислоты.
Схема приготовления растворов карболовой кислоты
2. Хромовая смесь. Пропись приготовления:
В колбу наливают 150 мл концентрированной серной кислоты, туда же всыпают 25 г двухромовокислого калия. Полученную смесь оставляют стоять до растворения. Через сутки раствор темно-оранжевого цвета может быть применен для мытья посуды. Перед употреблением смесь надо подогреть до 45—50°С. Если цвет смеси меняется на темно-зеленый, это говорит о ее непригодности.
Выделение бактериофага из патологического материала
Исследуемую жидкость фильтруют от микробов.
Твердый исследуемый материал (почва, пищевые продукты, оформленные испражнения) измельчают в ступке, эмульгируют, фильтруют. Наличие фага в полученном фильтрате определяют в жидких питательных средах или на плотных средах по методу Отто или Грациа.
Обнаружение бактериофага на плотных питательных средах по методу Отто
1,5% МПА разливают в чашки Петри (более высокая концентрация агара угнетает развитие колоний бактериофага). После застудневания МПА засевают 16—18-часовой бульонной культурой бактерий, гомологичных искомому фагу. Для получения сплошного роста посев растирают шпателем. Спустя 5—10 мин после посева на подсушенную поверхность каплями наносят исследуемый фильтрат. Чашки ставят в термостат на 18—24 часа при температуре 37°С.
Нет результатов: доказательством наличия бактериофага служит полное отсутствие роста культуры в месте попадания капли фильтрата (активный бактериофаг) или появление в этом месте мелких стерильных пятен-колоний бактериофага (бактериофаг слабой активности).
Техника фаготшшрования микробов по методу Креджи и Иенсена
В основу фаготипирования положен принцип совместного выращивания типируемой культуры с типовым бактериофагом. Наступление лизиса определяет типовую принадлежность бактерий. Для фаготипирования бактерий применяют 1,5% МПА с 5% глицерина. Пророщенную бульонную культуру каплями наносят на поверхность питательной среды. Капли не должны растекаться. Они должны впитаться в течение 3—10 мин.
Затем на поверхность каждой капли наносят по 1 капле типового фага с таким расчетом, чтобы часть культуры оставалась свободной от воздействия бактериофага (для контроля роста культуры). Чашки помещают в термостат при температуре 37°С: через 6—8 часов производят учет результатов фаготипирования.
Наличие хорошо выраженного лизиса исследуемой культуры с одним из типовых фагов указывает на принадлежность культуры к данному фаготипу.
Приложение 7.4 (справочное)
СП 1.2.731—99
Средства и методы дезинфекции, используемые при работе с микроорганизмами III—IV групп патогенности
I. Бактерии, не образующие спор
1. Хлорамин Б или ХБ (содержание активного хлора — АХ не менее 26%):
0,5%, 1%, 2%, 3%-е (по препарату) растворы.
2. Хлорная известь (содержание АХ не менее 25%):
сухое вещество;
0,5%, 1%, 2%-е (по препарату) осветленные растворы;
10%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы;
20%-и (по препарату) хлорно-известковое молоко.
3. Известь белильная термостойкая (содержание АХ не менее 25%):
сухое вещество;
0,5%, 1%, 2%-е (по препарату) осветленные растворы;
10%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.
4. Нейтральный гипохлорит кальция — НГК (содержание АХ не менее 52% для марки А и не менее 24% для марки Б):
сухое вещество;
0,15%-й (по АХ) раствор;
0,25%, 0,5%, 1 %-е (по АХ) осветленные растворы;
5%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.
5. Гипохлорит кальция технический — ГКТ (содержание АХ не менее 35%):
сухое вещество;
1%, 1,5%-е (по препарату) осветленные растворы;
5%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.
6. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция — ДТС ГК (содержание АХ не менее 47%):
сухое вещество;
0,25 %, 0,5 %, 1 %-е (по препарату) осветленные растворы;
5%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.
7. Двуосновная соль гипохлорита кальция — ДСГК (содержание АХ не менее 30%):
сухое вещество;
1 %-й (по препарату) осветленный раствор;
5%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.
8. Гипохлорит натрия (содержание АХ не менее 14%):
1%-й (по АХ) раствор.
9. Гипохлорит натрия, получаемый методом электролиза поваренной соли на установках, разрешенных к производству и применению 0,125%, 0,25%-е (по АХ) растворы.
10. Анолиты, получаемые на установках, разрешенных к производству и применению:
с содержанием 0,03%, 0,05%, 0,06% АХ.
11. Спорокс (содержание АХ не менее 2,5%):
2%, 5%-е (по препарату) растворы.
12. ДП-2 (содержание АХ не менее 40%)
0,1%, 0,2%-е (по препарату) растворы. 13.Дезоксон-1 или дезоксон-4 (содержание надуксусной кислоты — НУ К не менее 5%):
1%, 2%-е (по препарату) растворы.
14. Пергидроль (содержание перекиси водорода 30—35%):
3%-й (по ДВ) раствор перекиси водорода;
3%-й (по ДВ) раствор перекиси водорода с 0,5% моющего средства («Прогресс», «Новость», «Астра», «Лотос»);
6%-й (по ДВ) раствор перекиси водорода.
15. ПВК (содержание перекиси водорода не менее 30%):
0,5%, 0,75%, 2%-е (по перекиси водорода) растворы.
16. Пероксимед (содержание перекиси водорода 30% и ПАВ):
3%-й (по перекиси водорода) раствор.
17. Пероксогидрат фторида калия — ПФК-1 (содержание перекиси водорода не менее 30%):
3%, 6%, 7%, 9%-е (по препарату) растворы.
18. Полисепт (содержание полигексаметиленгуанидина хлорида 25%):
1 %-й (по препарату) раствор.
19. Демос (содержащий комплекс катионных и др. ПАВ):
5%, 10%-е (по препарату) растворы.
20. Велтолен (содержание клатрата мочевины с дидецилди-метиламмоний бромида 20%):
1 %-й (по препарату) раствор.
21. Фогуцид (содержание пол игексаметиленгуанидина фосфата 19-25%):
0,5—1 %-е (по ДВ) растворы.
22. Ника-экстра М (содержание алкилдиметил бензил аммоний хлорида 3,5—4,5%):
0,5%, 2%-е (по препарату) растворы.
23. Лизол А (содержание фенолов 50%):
5%-й (по препарату) раствор.
24. 1-хлор-р-нафтол:
0,5%, 2%-е (по препарату) растворы.
25. Едкий натр:
10%-и (по препарату) раствор.
26. Аламинол (содержит катамин АБ, глиоксаль и др.):
1%-й (по препарату) раствор.
27. Бианол (содержит глутаровый альдегид, глиоксаль и ка-тамин АБ):
1,5%-й (по препарату) раствор.
28. Глутарал или Глутарал Н (содержание глутарового альдегида 2%):
готовое к применению средство.
29. Формалин:
3%, 10%, 20%, 40%-е (по формальдегиду) водные растворы.
30. Аммиак 25% (по ДВ) водный раствор.
Для нейтрализации формальдегида применяется соотношение 1:1.
31.Дихлор-1, Белка, Блеск, Блеск-2, Санита, Дезус и др. бытовые чистяще-дезинфицирующие средства: пасты, порошки и др. формы.
32. Кипячение:
2%-й раствор пищевой соды;
2%-й раствор кальцинированной соды.
33. Обработка водяным насыщенным паром под давлением (автоклавирование).
34. Этиловый спирт 70%, 96%-е, смесь Никифорова.
35. Обработка горячим воздухом — 180°С.
36. Сжигание.
37. Прокаливание.
38. Обработка в дезинфекционных камерах: паровоздушный, пароформалиновый методы.
39. Аэрозольный метод обеззараживания.
40. Газовый метод (дезинфекция парами формальдегида).
41. Ультрафиолетовое облучение.
II. Микобактерии
1. Хлорамин Б или ХБ (содержание АХ не менее 26%):
5%-й (по препарату) раствор;
0,5% и 1%-е (по АХ) активированные растворы.
2. Хлорная известь (содержание АХ не менее 25%):
сухое вещество;
2—10%-е (по препарату) растворы;
20%-й (по препарату) хлорно-известковое молоко;
0,25 0,5%-е (по АХ) активированные растворы.
3. Известь белильная термостойкая (содержание АХ не менее 25%):
сухое вещество;
2—10%-е (по препарату) растворы;
0,25—0,5%-е (по АХ) активированные растворы.
4. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция — ДТС ГК (содержание АХ не менее 47%):
сухое вещество;
20%-ное хлорно-известковое молоко;
1 %-й (по препарату) раствор.
5. Двуосновная соль гипохлорита кальция — ДСГК (содержание АХ не менее 30%):
сухое вещество.
6. Нейтральный гипохлорит кальция — НГК (содержание АХ не менее 52% для марки А и не менее 24% для марки Б):
сухое вещество;
1 %, 5%-и (по АХ) раствор.
7. Гипохлорит кальция технический — ГКТ (содержание АХ не менее 35%):
сухое вещество;
2%-й (по препарату) раствор.
8. Гипохлорит натрия, получаемый методом электролиза на установках, разрешенных к производству и применению:
0,25%, 0,5%-е (по АХ) растворы.
9. Анолиты, получаемые на установках, разрешенных к производству и применению с содержанием 0,05,0,09% АХ.
10. Спорокс (содержание АХ не менее 2,5%):
10%-и (по препарату) раствор.
11. ДП-2 (содержание АХ не менее 35%):
сухое вещество;
0,5%-и (по препарату) раствор.
12. Дезоксон-1 или Дезоксон-4 (содержание надуксусной кислоты — НУК не менее 5%):
0,25%, 0,5%, 1%-е (по НУК) растворы.
13. Пергидроль (содержание перекиси водорода — ПВ — не менее 30%):
3%-и раствор.
14. Пероксимед (содержание ПВ не менее 30% и моющие компоненты):
3 и 4%-е (по ПВ) растворы.
15. ПВК (содержание ПВ не менее 30%):
2,5%-и (по ПВ) раствор.
16. Лизол марки А (содержание фенолов 50%):
5%-и раствор.
17. 1-хлор-р-нафтол:
0,5%-й (по препарату) раствор.
18. Глутарал или Глутарал Н (содержание глутарового альдегида 2%):
готовое к применению средство.
19. Аламинол (содержит катамин АБ, глиоксаль и др.):
1 %-й (по препарату) раствор.
20. Бианол (содержит глутаровый альдегид, глиоксаль и катамин АБ):
1,5%-и (по препарату) раствор.
21. Кипячение:
2%-й раствор пищевой соды;
2%-й раствор кальцинированной соды.
22. Обработка водяным насыщенным паром.
23. Обработка горячим воздухом — 180°С.
24. Сжигание.
25. Прокаливание.
26. Обработка в дезинфекционных камерах: паровоздушный, пароформалиновый методы.
27. Ультрафиолетовое облучение.
Ш. Бактерии, образующие споры
1. Хлорамин Б или ХБ (содержание АХ не менее 26%):
1—4%-е активированные растворы, содержащие 0,25— 1% АХ.
2. Хлорная известь или белильная термостойкая известь (содержание АХ не менее 25%):
сухое вещество;
20%-и осветленный и неосветленный раствор, содержащий не менее 5% АХ;
4%-й осветленный активированный раствор, содержащий не менее 1 % АХ.
3. Нейтральный гипохлорит кальция — НГК (содержание АХ не менее 52%):
сухое вещество;
15%-й осветленный раствор, содержащий не менее 5% АХ;
2%-й осветленный активированный раствор, содержащий не менее 1 % АХ.
4. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция — ДТС, ГК (содержание АХ не менее 47%):
сухое вещество;
15%-й осветленный раствор, содержащий не менее 5% АХ;
2%-й осветленный активированный раствор, содержащий не менее 1 % АХ.
5. Двуосновная соль гипохлорита кальция — ДСГК (содержание АХ не менее 30%):
сухое вещество;
4%-й активированный раствор, содержащий не менее 1,2% АХ.
6. Едкий натр:
10%-й раствор (70°С).
7. Пергидроль, содержащий 30—35% перекиси водорода (ПВ):
6%-й раствор ПВ с 0,5% моющего средства («Прогресс», «Новость», «Астра», «Лотос»);
3 %-й раствор ПВ с 0,5 % моющего средства при температуре раствора 50°С.
8. ПВК (содержание ПВ не менее 30%):
раствор, содержащий 4% ПВ при температуре 20°С; раствор, содержащий 3% ПВ при температуре 50°С.
9. Пероксимед (содержание ПВ 30% и ПАВ):
3%-й (по ПВ) раствор при температуре 20 и 50°С;
6%-й (по ПВ) раствор.
10. Дезоксон-1 или дезоксон-4 (содержание ПУК не менее раствор, содержащий 1 % надуксусной кислоты (НУ К).
11. Формалин:
20%, 40% -е (по формальдегиду) водные растворы;
0, 2% -и раствор формальдегида с 0,2% мыла или ОП-10 при температуре 60° С.
12. Кипячение.
13. Прокаливание.
14. Сжигание.
15. Сухой горячий воздух.
16. Обработка паром под давлением.
17. Все емкости, в которых проводится обеззараживание, должны быть закрыты крышкой.
18. Обработка в камерах: паровоздушный и пароформали-1 новый методы.
19. Аэрозольный метод обеззараживания.
ВОПРОСЫ для самоконтроля
Какие физические факторы влияют на клетку? Что такое «антисептика» и «асептика» ? Какие вы знаете «антисептики» ? Что такое «симбиоз», «метабиоз» и «антагонизм» ? Что такое «стерилизация»? Назовите физические способы «стерилизации». Где применяется химическая и механическая стерилизация?
Что такое «бактериофаг» ? Структура и морфология фагов. Как используются фаги в медицине?
|
