Изменения различных классов протеаз и ингибиторов протеаз как возможных сывороточных маркеров фиброза у больных хроническим вирусным гепатитом с (клинико-экспериментальное исследование)

Скачать 311.33 Kb.

Название	Изменения различных классов протеаз и ингибиторов протеаз как возможных сывороточных маркеров фиброза у больных хроническим вирусным гепатитом с (клинико-экспериментальное исследование)
страница	4/5
Дата публикации	25.10.2014
Размер	311.33 Kb.
Тип	Автореферат

100-bal.ru > Химия > Автореферат

1 2 3 4 5

Примечание: ^*- р<0,05 – по сравнению с донорами

На активацию макрофагов указывает и повышение активности хитотриозидазы в сыворотке крови больных циррозом печени в исходе вирусного гепатита С как по сравнению с донорами, так и по сравнению с больными ХВГ С без признаков цирроза печени (таблица 4). Тем не менее, выявлена обратная корреляционная зависимость активности хитотриозидазы и активности АЛТ (корреляционный коэффициент Спирмана r=-0,525; р=0,021), а также обратная корреляционная зависимость между активностью хитотриозидазы и концентрацией ММП-2 (корреляционный коэффициент Спирмана r=-0,531; р=0,034). Полученные результаты свидетельствуют о том, что, повышение концентрации ММП-2 и активности АЛТ в сыворотке крови сопровождалось умеренным снижением активности хитотриозидазы, несмотря на повышение активности фермента в общей группе пациентов.

В сыворотке крови больных циррозом печени в исходе вирусного гепатита С отмечено снижение активности β-D-галактозидазы по сравнению с донорами (р=0,0001; 95% CI 0,66-0,52) и повышение по сравнению с больными ХВГ С без признаков цирроза печени (р=0,002; 95% CI 0,04-0,20) (таблица 4).

Таблица 4.

Активность лизосомных ферментов и ММП-2,7 в сыворотке

крови больных циррозом печени в исходе вирусного гепатита С

Доноры	ХГВ С		Цирроз печени
N	M ± m	N	M ± m	N	M ± m
ММП-2, пкг/мл	15	453,0±184,0	36	1308,5±318,6*		2224,4±578,1*
ТИМП-1, пкг/мл	13	380,4±94,6	34	446,18 ± 142,1	16	578,1±276,5
Цистатин С, нг/мл	10	1242,0 ± 290,2	10	2969,0 ±1136,8*	10	3088,0±476,3*
α₁–ПИ, ИЕ/мл	10	21,16 ± 1,9	10	22,8 ± 2,72	9	27,60±1,3^*
α₂–МГ, ИЕ/мл	9	2,82 ± 0,41	9	2,22 ± 0,3	8	2,40 ± 0,2

Ферменты	Доноры		ХВГ С		Цирроз печени
Ферменты	N	M ± m	N	M ± m	N	M ± m
β-галактозидаза, мкмоль МУФ/л в мин	10	0,72 ± 0,04	100	0,12 ± 0,01^**	18	0,24 ± 0,07^*
Хитотриозидаза, мкмоль МУФ/л в мин	15	3,85 ± 0,35	42	3,62 ± 0,43	19	5,81 ± 1,24^
ММП-2,7,мкмоль МКА/л в час	6	258,13 ± 15,9	11	236,1 ± 29,75	3	458,35 ±15,4^*

Примечание: **- р<0,001 по сравнению с донорами;

^ - р<0,05 по сравнению с ХГВС

В сыворотке крови больных циррозом печени в исходе вирусного гепатита С по сравнению со здоровыми донорами выявлено повышение ингибиторной активности α₁-ПИ (р=0,02; 95% CI 1,43-11,46) (таблица 3). Изменений активности ингибитора по сравнению с пациентами с ХВГ С без признаков цирроза не найдено (р>0,05).

Отмечено повышение концентрации цистатина С в сыворотке крови больных циррозом печени в исходе вирусного гепатита С по сравнению с донорами, соответственно 3088,0 ± 476,25 нг/мл и 1242,0 ± 290,2 нг/мл (р=0,005; 95% CI 656,41 – 3035,59). Изменений концентрации данного ингибитора по сравнению с больными ХВГ С без признаков цирроза не обнаружено (р>0,05).

Несмотря на то, что изменений содержания цистатина С в сыворотке крови больных циррозом печени в исходе вирусного гепатита С не выявлено, отмечена прямая корреляционная зависимость концентрации цистатина С и активности α₁- протеиназного ингибитора (коэффициент корреляции Пирсона r=0,731; р=0,025). Обнаруженная взаимосвязь между ингибиторами цистеиновых и сериновых протеаз отражает их участие в протеолитическом каскаде при деградации компонентов внеклеточного матрикса, так как известно, что одной из биологических функций катепсина В и эластазы (сериновая протеаза) является расщепление белков соединительной ткани (фибронектин, ламинин и др.) (Yan and Sloane, 2003).

Результаты экспериментальных исследований.

С целью изучения влияния ИФН-α на изменения протеаз и ингибиторов не только в сыворотке крови, но и в ткани печени при развитии фиброза, проведена серия экспериментов по воспроизведению модели хронического токсического гепатита у мышей. В качестве токсического агента был выбран четыреххлористый углерод как наиболее изученный и удобный в использовании. Для изучения влияния интерферонотерапии на исследуемые показатели у больных хроническим вирусным гепатитом С, животным с ССl₄-гепатитом однократно вводили ИФН-α в дозе 10000 МЕ за 24 ч до последней затравки ССl₄.

При исследовании срезов печени мышей с CCl₄-гепатитом в световом микроскопе показано преобладание проявлений хронического токсического гепатита: воспалительная полиморфноклеточная инфильтрация (лимфоциты, моноциты, макрофаги и нейтрофилы) преимущественно в перицентральных отделах долек; лобулярные очаговые некрозы гепатоцитов с нарушением в этих зонах балочного строения и формированием фагоцитарных макрофагальных гранулем; большинство гепатоцитов в состоянии умеренно выраженной или тяжелой дистрофии; большинство центролобулярных воспалительных инфильтратов распространяется узкими тяжами в соседнюю дольковую паренхиму по типу мостовидных некрозов с формированием молодых незрелых соединительнотканных септ. Дольковое строение печени в целом сохранено, и септальный фиброз соответствует II стадии. Имеются также признаки центро-перицентрального и очагового лобулярного перисинусоидального фиброза, в основном вблизи от воспалительных инфильтратов.

Введение мышам с ССI₄-гепатитом ИФН-α сопровождалось аналогичными изменениями в печени, однако воспалительный компонент поражения был менее выражен по сравнению группой животных с ССI₄-гепатитом, что позволяет говорить о слабом защитном действии ИФН-α.

Развитие ССl₄-гепатита сопровождалось снижением активности в сыворотке крови лизосомного фермента β-D-галактозидазы по сравнению с интактными животными (р=0,024; 95% CI 0,23-2,90). Однократное введение ИФН-α мышам с ССl₄-гепатитом не сопровождалось изменением активности фермента (табл. 5)

Аналогичные изменения сывороточной активности β-D-галактозидазы отмечены и у больных ХВГ С. Для β-D-галактозидазы не обнаружено эндогенных белковых ингибиторов, фермент может подвергаться действию перекисей липидов и свободных радикалов, возникающих при метаболизме четыреххлористого углерода. Можно полагать, что резкое снижение активности β-D-галактозидазы сыворотки крови является следствием прямого действия повреждающих факторов (вируса гепатита С у больных и метаболитов CCl₄у мышей) на клетки печени. Возможно, выраженная инактивация β-D-галактозидазы свидетельствует об универсальности механизмов хронического повреждения печени при ХВГ С у больных и в эксперименте.

В сыворотке крови мышей с хроническим CCl₄-гепатитом обнаружено повышение содержания ТИМП-1 по сравнению с интактными животными, р=0,020; 95% CI – 518,91-48,65 (рис. 3, табл. 5); в тоже время, введение ИФН-α не сопровождалось изменением концентрации ТИМП-1 (р>0,05). Показано, что в гомогенате печени мышей концентрация ТИМП-1 повышена по сравнению с интактными животными (р=0,044; 95% CI -35,21-0,62 (табл. 6), а однократное введение ИФН-α снижало содержание ТИМП-1 даже ниже контрольных значений (р=0,0001; 95% CI 13,21-31,53) (табл. 6). Эти данные представляют определенный интерес и свидетельствуют о том, что даже однократное воздействие высокой дозы ИФН-α (10000 МЕ) проявляет защитный эффект при хроническом токсическом гепатите. Можно полагать, что ИФН-α оказывает благоприятное влияние на развитие фиброза печени у мышей, как и интерферонотерапия у пациентов с ХВГ С.

Рисунок 3. Содержание ТИМП-1 в сыворотке крови и гомогенате печени мышей с хроническим токсическим гепатитом и однократным введением ИФН-α.

Примечание: * - р<0,05 по сравнению с интактными; ^ - p<0,05 по сравнению с CCl₄

Таблица 5.

Активность АЛТ, ß-D-галактозидазы и ТИМП-1 в сыворотке крови мышей с хроническим токсическим гепатитом и однократным введением ИФН-α.

	Интактные	ССl₄	ССl₄+ ИФН-α
	M ± m	M ± m	M ±m
ß-D-галактозидаза, мкмоль МУФ/ л мин	3,68 ± 0,57 n=9	2,12 ± 0,32* n=10	2,93 ±0,35 n=10
ТИМП-1, пкг/мл	425,56 ± 45,65 n=9	709,33 ± 82,83 n=15	607,33 ±86,56 n=15

Примечание: * - p<0,05; ** - р<0,001.

В регуляции синтеза и деградации компонентов внеклеточного матрикса принимают участие протеазы различных классов, в том числе цистеиновые (катепсины В и L) и аспартильные (катепсин D). Учитывая тот факт, что в сыворотке крови представлены, в основном, ингибиторы, большой интерес представляет исследование активности этих лизосомных ферментов в ткани печени.

Так, в гомогенате печени мышей с CCl₄-гепатитом показано снижение активности катепсина L по сравнению с интактными животными (р=0,0001; 95% CI 0,20-0,36), а также повышение активности катепсина D (р=0,0001; 95% CI -0,46-0,26) (табл. 6). Изменений активности катепсина В не обнаружено. Тем не менее, у данной группы животных отмечена прямая корреляционная зависимость между изменениями активности катепсинов В и D (r=0,723; р=0,028). Однократное введение ИФН-α мышам с CCl₄-гепатитом сопровождалось повышением активности катепсинов В, L и D (табл. 6).

Рисунок 4. Активность катепсинов B, L и D в ткани печени мышей СВА

Таблица 6.

Активность лизосомных ферментов и концентрация ТИМП-1 в печени мышей с хроническим токсическим гепатитом и однократным введением ИФН-α.

	Интактные	ССl₄	ССl₄+ ИФН-α
	M ± m	M ± m	M ±m
Катепсин В, мкмоль МКА/мин на мг белка	0,20 ± 0,03 n=10	0,14 ± 0,02 n=9	0,32 ± 0,05^ n=10
Катепсин L, мкмоль МКА/мин на мг белка	0,43 ± 0,03 n=10	0,15 ± 0,01* n=9	0,50 ± 0,06*^ n=10
Катепсин D, Е₃₆₆х10²/ мин в расчете на мг белка	0,23 ± 0,02 n=10	0,59 ± 0,02** n=9	0,71 ± 0,1* n=9
ТИМП-1, пкг/мл	6,84 ± 0,67 n=5	24,76 ± 8,28* n=4	2,38 ±0,95* n=15

Примечание:* - р<0,05 -по сравнению с интактными; ^ - p<0,05 – по сравнению с CCl₄

ИФН-α обладает не только противовирусным, но и иммуномодулирующим эффектом. Интерфероны повышают клеточный иммунный ответ, стимулируя активность цитотоксических Т-клеток и естественных киллеров и продукцию цитокинов Т-клетками и макрофагами. Повышение активности лизосомных ферментов – катепсинов В, L и D в ткани печени мышей с CCl₄-гепатитом под воздействием ИФН-α свидетельствует об иммуноопосредованном запуске протеолитического каскада, направленного, главным образом, на деградацию компонентов внеклеточного матрикса и разрешение фиброза. Эти же механизмы, вероятно, обеспечивают терапевтический эффект ИФН-α при лечении вирусных гепатитов у человека.

Выводы

1. Повышение активности ММП-2,7 в сыворотке крови пациентов с циррозом печени в исходе вирусного гепатита С по сравнению с больными ХВГ С без признаков цирроза, не зависящее от активности АЛТ сыворотки крови, является показателем деградации компонентов внеклеточного матрикса, что позволяет включить его в ряд сывороточных маркеров фиброза печени.

2. Повышение активности хитотриозидазы в сыворотке крови больных циррозом печени в исходе вирусного гепатита С отражает стимуляцию макрофагов и развитие воспаления; снижение активности β-D-галактозидазы при ХВГ С связано с прямым цитопатическим действием вируса.

3. Модель хронического ССl4-гепатита у мышей характеризуется развитием фиброза, повышением концентрации ТИМП-1, снижением активности катепсина L и повышением активности катепсина D в ткани печени, что свидетельствует о нарушении регуляции в системе протеазы-ингибиторы протеаз.

4. Однократное введение высокой дозы ИФН-α мышам с хроническим ССl₄-гепатитом повышает содержание ТИМП-1; повышенная активность катепсина В и катепсина D отражает стимуляцию макрофагов печени.

5. Наиболее информативными сывороточными маркерами раннего выявления фиброза печени у пациентов с ХВГ С являются суммарная активность ММП и соотношение концентрации ММП-2:ТИМП-1.

1 2 3 4 5

Похожие:

	Исследование уровня эритроцитов в крови Стандарт медицинской помощи больным хроническиМ гепатитом в, ХроническиМ гепатитом с		Роль протеаз различных классов в развитии остеопороза у крыс Работа выполнена в Научно-исследовательском институте физиологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук и в Новосибирском...
	Клинико-диагностическое значение уровня провоспалительных цитокинов... Работа выполнена в гбоу впо первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова Министерства здравоохранения...		Области применения протеаз Важнейшим свойством белков является их каталитическая активность. Вещества белковой природы, способные каталитически ускорять химические...
	Клинико-экспериментальное исследование 14. 00. 35 – детская хирургия... «Средняя общеобразовательная школа №19 с углубленным изучением отдельных предметов»		20. инфекционные заболевания Все еще высок уровень заболеваемости острой дизентерией, брюшным тифом, дифтерией, вирусным гепатитом, сальмонеллезом, гриппом. Особенно...
	Совершенствование методов диагностики и эндодонтического лечения... Методические рекомендации предназначены для медицинских работников, оказывающих первичную медико-санитарную помощь: врачей стоматологического...		Клинико-организационные основы повышения эффективности ортопедической... Клинико-организационные основы повышения эффективности ортопедической стоматологической реабилитации онкологических больных с приобретенными...
	Определены параметры эффективности первого года массового комбинированного... Итаны показатели биохимического скрининга для популяции беременных женщин мо 1 триместра (11-13,6 недель): уровни медиан для сывороточных...		Клинико-лабораторное обоснование профилактики кариеса зубов и болезней... Работа выполнена в фгу «Центральный научно-исследовательский институт стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Росмедтехнологий»...
	Реферат по дисциплине «Экологические риски» на тему «Исследование... «Исследование возможных опасных и вредных факторов при эксплуатации ЭВМ и их влияния на пользователей»		Индивидуально-психологические особенности личности больных хроническим... Специальность: 19. 00. 01 – «Общая психология, психология личности, история психологии» (психологические науки)
	Клинико-экспериментальное изучение состояния сетчатки и зрительного... Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт глазных болезней» Российской...		Клинико-экспериментальное обоснование применения карофила для профилактики... Работа выполнена на кафедре физиологии, фармакологии и ветеринарно-санитарной экспертизы фгоу впо «Белгородская государственная сельскохозяйственная...
	Роль аномалий гена bcr-abl в развитии резистентности к терапии иматинибом... Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ростовский государственный...		Разработка полимерного низкочастотного виброизолятора с квазинулевой жесткостью Проведено аналитическое исследование разрабатываемого виброизолятора, его изготовление и экспериментальное исследование. Частота...

Школьные материалы

Доноры

Доноры

Похожие: