Сравнительная характеристика мезенхимальных стромальных клеток костного мозга, жировой ткани и плаценты человека 14. 00. 36 Аллергология и иммунология

Целью завершающего этапа работы стал сравнительный анализ и изучение клеточно-молекулярных механизмов иммуносупрессорной активности МСК, а также исследование их способности к поддержанию кроветворения. В целом по группе МСК дозозависимо подавляли пролиферацию Т-клеток, активированных анти-CD3-анителами. Максимальный ингибиторный эффект наблюдался при соотношении МСК:МНК, равном 1:1 (уровень супрессии 62,1±6,2%; n=29). Тем не менее, и при меньших концентрациях МСК (1:2 и 1:4) их супрессорная активность сохранялась на достаточно высоком уровне (48,8±6,5% n=29 и 30±5,6% n=18, соответственно). В данной экспериментальной модели КМ-МСК отличались наиболее выраженным эффектом (рис. 11), и подавляли пролиферацию Т-клеток в различных соотношениях в среднем на 50-65%. Анти-пролиферативная активность П- и Ж-МСК в соотношении 1:1 была сопоставимой, однако при уменьшении числа МСК отмечалось достоверное ослабление их иммуносупрессорного потенциала в среднем до 20-30%. Рис. 11. Супрессорный эффект КМ-МСК (n=5), П-МСК (n=16) и Ж-МСК (n=8) в анти-CD3-стимулированных культурах Рис. 12. Супрессорный эффект КМ-МСК (n=13), П-МСК (n=4) и Ж-МСК (n=6) в двунаправленной СКЛ * pU <0,05 vs КМ-МСК Анти-пролиферативный эффект МСК регистрировался также в отношении Т-лимфоцитов, активированных аллоантигенами в модели двунаправленной СКЛ. Но в этом случае, Ж- и П-МСК в соотношении 1:1 и 1:2 проявляли более выраженный супрессорный эффект, чем КМ-МСК. При этом различия жировых клеток были статистически значимы, а плацентарных – из-за малого количества наблюдений имели характер отчетливой тенденции (рис. 12). Рис. 13. Влияние МСК на экспрессию CD25 и HLA-DR антигенов на активированных Т-лимфоцитах МНК доноров (106/лунку) стимулировали в течение 72 ч анти-CD3-антителами в присутствии/отсутствии МСК (МСК:МНК=1:10). По окончании культивирования определяли относительное содержание активированных CD25+ и HLA-DR+ клеток среди CD3+Т-лимфоцитов. * - pU < 0,05 и ** - pU < 0,01 – достоверность различия показателей по сравнению с контролем. Индукция анергии Т-клеток могла быть одним из возможных механизмов иммуносупрессорного эффекта МСК [Glennie S., et al. 2005]. Действительно, анализ экспрессии на Т-лимфоцитах активационных молекул показал, что среди анти-CD3-стимулированных МНК, сокультивированных с МСК в соотношении 10:1, количество CD25 и HLA-DR-позитивных Т-клеток снижается в 1,5-2 раза (рис. 13). При этом МСК различного тканевого происхождения не различались между собой по выраженности этого эффекта. Иммуносупрессорная активность МСК могла быть связана не только с индукцией анергии Т-клеток, но и с участием каких-то других молекулярных механизмов. Так, анализ продукции растворимых изоформ HLA-G, которые по данным литературы характеризуются различными иммуносупрессорными эффектами [Rouas-Freiss N., 1997], показал, что МСК продуцируют HLA-G на хорошо детектируемом уровне (рис. 14). КМ- и П-МСК были сопоставимы между собой, тогда как Ж-МСК, которые проявляли наиболее выраженную иммуносупрессию в двунаправленной СКЛ, характеризовались более чем 2-кратным увеличением уровня секреции растворимых изоформ HLA-G. Рис. 14. Концентрация sHLA-G 1/5 в супернатантах цельных культур МСК * pU<0,05 vs КМ-МСК; # pU <0,05 vs П-МСК Для того, чтобы оценить возможное участие простагландина Е2 и фермента индоламин-2,3-диоксигеназы в анти-пролиферативных эффектах МСК были использованы агенты, ингибирующие синтез этих медиаторов – индометацин и 1-метилтриптофан - конкурентный ингибитор ИДО. Из данных рис. 15 и 16 видно, что 45-минутная предобработка МСК индометацином приводила к статистически достоверному 2-3-кратному ослаблению их анти-пролиферативной активности как в анти-CD3-стимулированных культурах, так и в двунаправленной СКЛ. В то же время, аналогичная обработка МСК метилтриптофаном значимо не влияла на их супрессорный потенциал. Рис. 15. Влияние индометацина и 1-метилтриптофана на супрессорную активность МСК в анти-CD3-стимулированных культурах. Рис. 16. Влияние индометацина и 1-метилтриптофана на супрессорную активность МСК в СКЛ. Представлены средние (M ± S.E.) значения МСК-опосредованной супрессии (МНК:МСК=1:1). * рU <0,05 ** pU<0,01 - достоверность различий с контролем. В целом, наши данные показывают, что МСК различного тканевого происхождения характеризуются иммуносупрессорной активностью, которая частично опосредуется через механизмы, связанные с синтезом простагландинов, но не с экспрессией индоламин-2,3-диоксигеназы. Оценка влияния МСК на созревание и функциональную активность дендритных клеток показала, что негативный эффект МСК на аллостимуляторную активность ДК в СКЛ регистрируется в 1 из 4 случаев для тестированных образцов П-МСК (в 25%), в 2 из 5 (в 40%) случаев для КМ-МСК и в 5 из 6 (83%) случаев для Ж-МСК. В остальных случаях (в 60% - КМ-МСК; в 75% - П-МСК и в 17% - ЖМСК) МСК повышали аллостимуляторную активность ДК. Таким образом, МСК, выделенные из различных тканей могут разнонаправлено (позитивно и негативно) влиять на функциональную активность ДК. Ж-МСК чаще проявляли негативный эффект на ДК, что согласуется с нашими данными об их наиболее выраженной супрессорной активности в СКЛ. Не исключено, что одним из механизмов снижения Т-клеточного пролиферативного ответа в этих условиях может являться МСК-опосредованное нарушение функции антиген-презентирующих клеток. Рис. 17. Влияние МСК на образование эритроидных колоний. Рис. 18. Влияние МСК на образование гранулоцитарно-макрофагальных колоний. * p < 0,05 - достоверность различия по сравнению с контролем (критерий Викоксона-Манна-Уитни).

Похожие:

	Морфофункциональная характеристика мезенхимальных стромальных клеток... Работа выполнена в Федеральном Государственном бюджетном учреждении Государственном научном центре Российской Федерации – Институте...		Павел Михайлович Влияние моделирования эффектов микрогравитации на... Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Государственном научном центре Российской Федерации – Институте медико-биологических...
	Сравнительная характеристика натуральных киллерных клеток человека... Охватывает те же этапы, что и протокол предложенный Хиллом, но компания предлагает использовать свою среду неизвестного пользователю...		Рабочая учебная программа по дисциплине Изучить морфологические, цито-, биохимические и функциональные особенности клеток крови, особенности картины периферической крови...
	Клинико-иммунологическая характеристика больных атопическим дерматитом... Учитель истории и обществознания Гусевской средней общеобразовательной школы Бабаева С. В		Влияние пониженного содержания кислорода на культивируемые мезенхимальные...
	Приказ Минздрава России от 20. 12. 2012 n 1279н ...		Отек головного мозга это универсальная реакция мозговой ткани на... Отек мозга может быть местным (фокальным), если развивается, например, в зоне ушиба мозга, в дальнейшем может распространиться на...
	Феноменология иммунного ответа на т-независимые антигены 2-го типа... В этом плане явились мероприятия, проведенные в 9-11 классах «Нет – наркотикам», «Мы за здоровый образ жизни» с приглашением мед...		Программа факультативной дисциплины «Аллергология и иммунология» Формирование специальных профессиональных знаний и умений в области клинической иммунологии, аллергологии, необходимых для эффективной...
	Программа факультативной дисциплины «Аллергология и иммунология» Формирование специальных профессиональных знаний и умений в области клинической иммунологии, аллергологии, необходимых для эффективной...		Реферат по экономической географии на тему «Сравнительная характеристика... «Сравнительная характеристика Центрального и Северо-Кавказского экономических районов»
	С троение спинного мозга В сером веществе находятся тела нервных клеток, а в белом — их отростки. В передних рогах серого вещества спинного мозга (в передних...		Реферат: Циррозы печени Цирроз печени — хронические прогрессирующие заболевания, характеризу­ющиеся поражением как паренхимы, так и стромы органа с дистрофией...
	Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Образовательный стандарт послевузовской профессиональной подготовки врача по специальности «аллергология и иммунология», образовательные...		Реферат по дисциплине “Международные экономические отношения” Тема:... Тема: Место Северной и Южной Кореи в мировых экономических связях. Сравнительная характеристика