Клинико-иммунологическая характеристика больных атопическим дерматитом с мутациями в гене филаггрина 14. 03. 09 Клиническая иммунология, аллергология 14. 01. 10 Кожные и венерические болезни
Скачать 394.48 Kb.
|
| На правах рукописи Саликова Татьяна Ивановна КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ АТОПИЧЕСКИМ ДЕРМАТИТОМ С МУТАЦИЯМИ В ГЕНЕ ФИЛАГГРИНА 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология 14.01.10 – Кожные и венерические болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Новосибирск-2011 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России» Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Климов Владимир Васильевич доктор медицинских наук, профессор Пестерев Петр Николаевич Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Ширинский Валерий Степанович доктор медицинских наук, профессор Позднякова Ольга Николаевна Ведущая организация: ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет им. Н.И. Пирогова Росздрава Защита состоится « 31 » марта 2011 года в 16 часов на заседании диссертационного совета Д 001.001.01 в Учреждении Российской академии медицинских наук научно-исследовательском институте клинической иммунологии Сибирского отделения РАМН по адресу: 630099, г.Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института клинической иммунологии СО РАМН. Автореферат разослан «_28___» ____февраля____ 2011 г. Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук Кудаева Ольга Тимофеевна ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Рост заболеваемости, хроническое, с частыми рецидивами течение, недостаточная эффективность существующих методов лечения и профилактики ставят атопический дерматит (АтД) в ряд наиболее актуальных проблем современной медицины. Среди взрослого населения заболеваемость в развитых странах составляет 2-10% [Herd R. M., 1998]. Признание иммунологической концепции развития АтД послужило поводом для всестороннего изучения его иммунных механизмов. Однако в последнее время обосновывается представление об атопии как феномене, в развитии которого принимают участие как иммунные, IgE-опосредованные, так и многочисленные неиммунные механизмы [Пыцкий В. И., 2005]. К последним, в частности, относится повышение проницаемости кожи при АтД, связанное с нарушением процесса кератинизации вследствие дефекта синтеза филаггрина [Barker J. N., 2006; Broen S. J., 2008]. Филаггрин является ключевым белком, участвующим в конечной дифференцировке кератиноцитов и образовании кожного барьера [Korge B., 2009]. По результатам недавних исследований была доказана ассоциация мутаций в гене филаггрина с развитием АтД [C. N. Palmer et al., 2006]. По данным литературы изучение частоты мутаций в гене филаггрина у пациентов с АтД в России не проводилось. Поэтому представляется интересным исследование частоты данной мутаций среди пациентов с АтД и влияние генетического дефекта на клиническую картину заболевания. Вероятно, ослабление барьерной функции кожного покрова у пациентов с мутациями в гене филаггрина способствует повышенному проникновению аллергенов трандермальным путем. Следствием этого могут являться изменения показателей атопического воспаления в коже, в частности цитокинов, как основных регуляторов атопического процесса на местном уровне [Фрейдлин И.С., 2001; Симбирцев А.С., 2004; Маянский А.Н., 2005]. По результатам научных работ, проведенных иностранными исследователями, нарушение кожного барьера вследствие дефекта синтеза белка филаггрина, способствует активации особого подтипа клеток иммунной системы Th17 и определяет темпы хронизации аллергического воспаления [Oyoshi M., 2009]. M. D. Howell et al. [2007] показали, что изменение экспрессии белка филаггрина у мышей влияет на цитокиновый профиль в коже. Вследствие этого, представляет научный интерес изучение у пациентов с мутациями в гене филаггрина при АтД содержание ключевых цитокинов основных субпопуляций Т-лимфоцитов на местном уровне (IFN-γ, IL-4, IL-10, IL-17). В проведенном исследовании у пациентов с мутациями в гене филаггрина при вульгарном ихтиозе, ассоциированным с АтД, выявлено увеличение количества клеток Лангерганса (КЛ) в эпидермисе, что может быть обусловлено нарушением барьерной функцией кожи и возможностью проникновения аллергенов через кожу [Oji V., 2009]. Количество КЛ в эпидермисе при АтД повышается при процессах ремоделирования кожи, вызванных длительными воспалительными процессами [Leung D.Y.M., 2000]. Установлено, что при ремоделировании кожи также наблюдается увеличение содержания макрофагов в дерме. Исследование количественного состава данных клеток у пациентов с мутациями в гене филаггрина позволит оценить являются ли мутации в гене филаггрина фактором ремоделирования кожи у пациентов при АтД. Важность детального изучения патогенетического значения нарушенной барьерной функции кожи, вызванной мутациями в гене филаггрина, в развитии АтД создает предпосылки для более точного понимания тех биологических механизмов, которые лежат в основе патологического процесса. Это является важным фактором для последующего развития более эффективных методов контроля АтД, разработки новых подходов к диагностике и может оказаться концептуальной основой для новых направлений терапии. Цель работы: исследовать концентрацию цитокинов в экссудатах «кожного окна» и оценить содержание антигенпредставляющих клеток в коже у больных с атопическим дерматитом в сочетании с мутациями в гене филаггрина. Задачи:
Научная новизна работы Впервые получены данные по частоте встречаемости мутаций R501X и 2282del4 в гене филаггрина у пациентов с АтД в Западной Сибири. Впервые отмечены особенности клинико-анамнестических данных пациентов АтД с мутациями в гене филаггрина. Определены концентрации ключевых цитокинов основных адаптивных иммунорегуляторных субпопуляций лимфоцитов на локальном уровне (в экссудатах «кожного окна») у пациентов с мутациями R501X и 2282del4 в гене филаггрина при АтД. Выявлены особенности количества CD1a-положительных КЛ и CD68-позитивных клеток у пациентов с мутациями в гене филаггрина в разные периоды АтД. Теоретическая значимость Исследование содержания цитокинов в «кожном окне» и характеристика CD1a- и CD68-позитивных клеток в коже у пациентов с мутациями R501X и 2282del4 в гене филаггрина при АтД вносят вклад в понимание особенностей патогенеза этой болезни при данном генетическом дефекте. Практическая значимость Определение концентрации цитокинов в «кожном окне» и количества CD1a- и CD68-позитивных клеток в коже у пациентов АтД с мутациями R501X и 2282del4 в гене филаггрина позволяет оценить интенсивность атопического воспаления на местном уровне. Наличие резидуальной воспалительной активности в коже в период ремиссии предполагает включение в поддерживающую терапию АтД нестероидных противовоспалительных препаратов типа ингибитора кальциневрина (пимекролимус) длительными интермитирующими курсами. Основные положения, выносимые на защиту:
Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и обсуждены на научно-практических конференциях «Дни иммунологии в Сибири» (г. Омск, 2007, г. Томск, 2008), на XI Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2010), на VII Российской конференции иммунологов Урала (Сыктывкар, 2010), на заседании проблемной комиссии по иммунологии и инфекционным болезням Сибирского государственного медицинского университета (Томск, 2010). Публикации. По материалам исследования было опубликовано 11 научных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК для публикации результатов работ соискателей учёной степени кандидата наук, и 1 медицинская технология "Способ оценки минимальной воспалительной активности кожи при атопическом дерматите в стадии ремиссии" ФС№2010/217 от 10.06.2010. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 151 странице. Работа состоит из введения, обзора литературы, главы «материалы и методы исследования», результатов собственных исследований, отраженных в двух главах, заключения, выводов, практических рекомендаций. Диссертация иллюстрирована 29 таблицами, 17 рисунками. Список литературы включает 323 источника, из них 81 - отечественных и 242 зарубежных. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ. Материал и методы исследования. Всего было обследовано 143 человека (мужчины и женщины) в возрасте от 9 до 47 лет с установленным диагнозом АтД. Диагностика АтД включала сбор жалоб, анамнеза жизни и заболевания. Диагноз АтД устанавливался на основании классических диагностических критериев J. Hanifin и G. Rajka [Hanifin J. M., 1980]. В соответствии с рабочей классификацией АтД учитывались: стадии заболевания, клинико-морфологические формы, распространенность процесса на коже [Хаитов Р. М., 2002]. Степень тяжести заболевания оценивалась с учетом индекса SCORAD [Денисов Ю.М., 1999]. Кожное скарификационное аллерготестирование было проведено у 109 обследуемых, а у остальных пациентов данные были взяты из первичной медицинской документации. Аллерготестирование проводилась с использованием диагностических аллергенов производства ОАО «Биомед» им И.И. Мечникова и лечебно-диагностических аллергенов производства Филиала ФГУП НПО «Микроген» ФГУП «Аллерген» г. Ставрополь. Все пациенты предварительно дали письменное согласие на участие в проводимом исследовании, которое было разработано биоэтическим комитетом ГОУВПО Росздрава СибГМУ согласно Хельсинкской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и Правилами клинической практики в Российской Федерации", утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266. На первом этапе исследования всем пациентам было проведено генотипирование на наличие мутаций R510Х и 2282del4 в гене филаггрина. Материалом для исследования служила венозная кровь пациента.
Рис. 1. Разделение общей группы пациентов на основную группу и группу сравнения. Генотипирование проводилось на базе НИИ терапии СО РАМН г. Новосибирск в лаборатории молекулярно-генетических исследований (руководитель – д-р мед. наук, Максимов В. Н). ДНК из крови выделяли фенол-хлороформной экстракцией по модифицированной методике A. Sambrook et al. [1989]. Анализ на наличие мутации 2282del4 и R501X вблизи начала первого повтора в экзоне 3 гена филаггрина проводился с помощью ПЦР. Для верификации методики генотипирования часть образцов были секвенированы на автоматическом секвенаторе ABI Prism 310 (фирма Perkin-Elmer, США) по протоколу фирмы-изготовителя. На следующем этапе исследования для определения клинико-иммунологических особенностей пациентов с мутациями в гене филаггрина (основная группа) по сравнению с пациентами без мутаций (группа сравнения) был осуществлен анализ первичной медицинской документации и проведены дополнительные исследования (табл. 1). В работе использовался метод «кожного окна» по J. Rebuck и J. Crowlеy [Фримель Г., 1987] в модификации В.В. Климова, проведенный у пациентов с АтД в разные периоды заболевания (табл. 1). В экссудатах «кожного окна» определялись цитокины, для которых характерны короткодистантные варианты аутокринного и паракринного действия на клетки-мишени – IFN-γ, IL-4, IL-10 и IL-17. Для определения продукции данных цитокинов были использованы наборы для иммуноферментного анализа (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск, Россия). Постановку ИФА проводили в соответствии с методическими рекомендациями производителя. Для иммуногистохимического исследования в качестве материала были использованы биоптаты кожи, взятые у пациентов в разные стадии АтД (табл. 1). В период обострения участок кожи иссекался с пораженного элемента, а в период ремиссии – с очага лихенификации. Иммуногистохимическое исследование проводилось непрямым иммуноферментным методом по стандартной методике [Эллиниди В.Н. и др., 2000]. Использовались антитела: CD1a («Novocastra», мышиные) и CD68 («Novocastra», мышиные). Подсчет CD1a-положительных клеток проводился на 0,1 мм длины эпидермиса, подсчитывалось отдельно количество клеток Лангерганса и их отростков в базальном, среднем и верхнем слоях эпидермиса. Подсчет CD68-положительных клеток проводился в 1 мм2 дермы в 10 полях зрения. Изучение ультраструктуры проводили методом трансмиссионной электронной микроскопии. Контрольную группу составили 20 практически здоровых доноров-добровольцев в возрасте 17-24 лет (табл. 1). Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью пакета статистических программ «SPSS». Для представления количественных данных, не подчиняющихся нормальному закону распределения, применялись непараметрические критерии Краскал-Уолиса и Манна – Уитни. Различие двух сравниваемых величин считалось достоверным с надежностью Р>0,95. Анализ качественных данных проводился с помощью критерия χ2. Анализ взаимосвязей для данных, не подчиняющихся нормальному закону распределения, проводился с помощью коэффициента ранговой корреляции Спирмена [Гланц С., 1999; Наследов А., 2008]. Таблица 1 Обследование пациентов основной группы и группы сравнения, здоровых лиц, проведенное в рамках научной работы
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Добавить документ в свой блог или на сайт
Похожие:
 | Рабочая программа дисциплины «кожные и венерические болезни» Минобрнауки РФ от 16. 03. 2011 г. №1365; паспорта специальности научных работников 14. 01. 10 – «кожные и венерические болезни»,... |  | Антимикотическая активность активированного пиритиона цинка в отношении... Антимикотическая активность активированного пиритиона цинка в отношении дрожжей рода Malassezia у больных атопическим дерматитом... |
| Сравнительная характеристика натуральных киллерных клеток человека... Охватывает те же этапы, что и протокол предложенный Хиллом, но компания предлагает использовать свою среду неизвестного пользователю... | | 14. 01. 10 Кожные и венерические болезни Предмет: биология с углубленным изучением отдельного раздела анатомии темы – строение и функции кожи |
| Расписание занятий на цикле усовершенствования по специальности «Охрана... Кожные и венерические болезни. Организация борьбы с венерическими и кожными болезнями, роль фап | | Методические указания для обучающихся №6 к внеаудиторной (самостоятельной)... Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский... |
| Методические указания для обучающихся №5 к внеаудиторной (самостоятельной)... Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский... | | Клиническая иммунология Клиническая иммунология: Учебно-методическое обеспечение самостоятельной работы / А. А. Савченко. – Красноярск: Сиб федер ун-т, 2011.... |
| Патентам и товарным знакам (19) Скрипкин ю. К. М.: Кожные и венерические болезни, «Триада-Х», 2000, с. 361-373. Grivet V et al. Plasmapheresis. An additional treatment... | | Феноменология иммунного ответа на т-независимые антигены 2-го типа... В этом плане явились мероприятия, проведенные в 9-11 классах «Нет – наркотикам», «Мы за здоровый образ жизни» с приглашением мед... |
| Методические указания для обучающихся №3 к внеаудиторной (самостоятельной)... Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский... | | Методические указания для обучающихся №3 к внеаудиторной (самостоятельной)... Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский... |
| Рабочая программа смежной дисциплины кожные и венерические болезни... Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования | | Влияние фракционного фототермолиза на морфофункциональное состояние... Программные задачи: Воспитывать чувство гордости за родную страну, которая стала первой в освоении космоса. Обогатить и расширить... |
| Клинико-иммунологическая характеристика детей после тимэктомии Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная... | | Программа вступительных испытаний по специальности «Кожные и венерические болезни» Программа вступительных испытаний при приеме на обучение по программам подготовки научно-педагогических кадров в аспирантуре сформирована... |
