Влияние натрия нуклеината на уровень естественной резистентности и иммунный статус организма поросят при вакцинации против лептоспироза

На правах рукописи КРИВОПУШКИН АНДРЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ ВЛИЯНИЕ НАТРИЯ НУКЛЕИНАТА НА УРОВЕНЬ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ И ИММУННЫЙ СТАТУС ОРГАНИЗМА ПОРОСЯТ ПРИ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА 03.00.13 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Белгород 2009 Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Брянская государственная сельскохозяйственная академия». Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Крапивина Елена Владимировна Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Семенютин Владимир Владимрович доктор биологических наук, профессор Грушкин Александр Георгиевич Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет» Защита состоится « _09_»_декабря_2009 г. в _1300_часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.01 при ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 308503, Белгородская обл., Белгородский р-н, пос. Майский, ул. Вавилова, 1. Тел./факс – (4722) 39-22-62 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия». Автореферат разослан «______»____________________2009 г. Ученый секретарь диссертационного совета Литвинов Ю.Н. 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Проблему обеспечения населения мясом практически невозможно решать без интенсивного развития свиноводства. Дальнейшее развитие и повышение рентабельности отрасли связано с обеспечением физиологически благоприятных условий содержания поголовья свиней, при которых наиболее полно реализуется продуктивный потенциал. Повышение устойчивости организма к неблагоприятным факторам, вызывающим дестабилизацию гомеостаза, является важнейшим компонентом комплексной программы сохранения здоровья и высокой продуктивноси животных. (А. Т. Мысик, А. И. Нетеса, 1984; И.П. Шейко, В.С. Смирнов, 2005; Н. С. Гегамян, Н. В. Пономарев, 2008). Промышленная технология производства свинины сопровождается рядом неблагоприятных факторов, при этом большая доля питательных веществ затрачивается не на рост и производство продукции, а на пластическое и энергетическое обеспечение защитно-приспособительных реакций (А.Ф. Кузнецов, 2007). Естественная резистентность является врожденной защитной реакцией организма против химических, физических и биологических патогенных агентов, а также связующим звеном со специфическими иммунными реакциями, поскольку подготавливает для их индукции антиген и его сигнализацию на В- и Т-клетки, без чего начало активного иммунитета против тимусзависимых антигенов (их большинство), невозможно (А.М. Земсков, В.М. Земсков, Ю.В. Сергеев и др., 2002). Практические специалисты в хозяйствах мало внимания уделяют улучшению показателей иммунной реактивности животных. Кроме того бесконтрольное применение антибиотиков и такие обязательные процедуры как иммунизация, в еще большей степени снижают уровень естественной резистентности и иммунный статус, что делает невозможным адекватный иммунный ответ организма. В основе практически любого патологического процесса лежит нарушение функций иммунной системы, для терапии различного рода иммунодефицитов, возникающих под воздействием патогенных агентов, неблагоприятных факторов физической или химической природы, необходимо использовать препараты, стимулирующие функциональную активность защитных систем (Ю.Н. Федоров, 2005; Ф. Шевцов, 2007). Лептоспироз - один из самых распространенных зооантропонозов. При лептоспирозе наиболее экономичной и эффективной мерой борьбы считают иммунизацию. Эпизоотологические данные свидетельствуют о необходимости дальнейшего совершенствования средств специфической профилактики лептоспироза животных (А.М. Панин, Ю.А. Малахов, Г.Л. Соболева и др., 2002). Для усиления иммунного ответа на вакцину и повышения уровня естественной резистентности организма, оправдано применение биологически активных препаратов, в частности, нуклеината натрия. До настоящего времени не совсем ясны механизмы действия натрия нуклеината на защитные системы организма, не исследовано его действие на организм поросят и, в частности, не установлены сроки его введения относительно иммунизации, которые наиболее эффективно стимулируют иммунный ответ. Цель и задачи исследования. Целью наших исследований являлось изучить влияния натрия нуклеината на физиологическое состояние и функциональную активность защитных механизмов организма молодняка свиней. В связи с этим в задачи исследования входило: 1. Определить влияние введения низкой дозы натрия нуклеината на уровень естественной резистентности и иммунный статус организма поросят. 2. Изучить влияние натрия нуклеината при разных сроках его введения относительно иммунизации на морфологические и биохимические показатели крови, уровень естественной резистентности и иммунный статус организма молодняка свиней. 3. Установить оптимальную схему применения натрия нуклеината, обеспечивающую повышение функциональной активности защитных механизмов организма молодняка свиней при введении антигенов лептоспир с целью выработки иммунитета. Научная новизна. Впервые изучено влияние различных режимов применения натрия нуклеината, на активность защитных механизмов, морфологические и биохимические показатели крови поросят. Исследовано влияние препарата на уровень активности оксидазных механизмов микробицидности нейтрофилов крови у поросят и адаптационный резерв этого защитного механизма. Установлены: адаптационный резерв поглотительной функции нейтрофилов крови молодняка свиней; коэффициент метаболической активации; показатель резерва оксидазной способности и реактивности нейтрофилов крови молодняка свиней в поствакцинальный период. Дана оценка влияния малой дозы натрия нуклеината на механизмы естественной резистентности и иммунной защиты организма молодняка свиней, в том числе и на фоне введения антигенов. Исследовано влияние натрия нуклеината на уровень Т- и В-лимфоцитов, степень дифференцировки лимфоцитов, а также уровень специфических антител в крови у поросят после введения антигенов лептоспир. Практическая значимость работы заключается в том, что на основе физиолого-биохимических исследований был определен оптимальный режим применения натрия нуклеината, способствующий активизации защитных систем организма молодняка свиней и созданию более напряженного иммунитета после иммунизации против лептоспироза. Результаты исследований используются в учебном процессе Брянской ГСХА при изучении дисциплин: физиология, патологическая физиология, эпизоотология. Основные положения, выносимые на защиту 1. Препарат натрия нуклеинат оказывает стимулирующее влияние на уровень естественной резистентности организма молодняка свиней 3-х месячного возраста. 2. Для повышения естественной резистентности в поствакцинальный период наиболее эффективно двукратное применение натрия нуклеината в дозе 0,01 мл/кг живой массы. 3. Введение натрия нуклеината оказывает активирующее влияние на иммунную систему организма молодняка свиней, повышая напряженность иммунитета. 4. Внутримышечное введение 0,2% раствора натрия нуклеината оказывает положительное влияние на белковый и углеводный обмен в организме поросят. 5. Двукратное введение 0,2% раствора натрия нуклеината в дозе 0,01 мл/кг за 8 суток до иммунизации и одновременно с ней оказало антистрессорное влияние на организм молодняка свиней. Апробация работы. Основные теоретические положения и практические результаты диссертации доложены на Международной научно-прак­ти­че­ской конференции «Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения ее качества» (Брянск, 2007); 23 научной конференции студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии «Научные и практические аспекты совершенствования технологии производства продукции животноводства, профилактики и лечения сельскохозяйственных животных» (Брянск, 2007); 25 научной конференции студентов и аспирантов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии «Проблемы производства продукции животноводства, профилактики и лечения болезней животных» (Брянск, 2009). Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 научных статей в научных журналах и сборниках региональных и межвузовских научно-практических конференций. Структура и объем работы. Диссертация изложена на 131 странице и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, материалов и методов собственных исследований, их результатов и обсуждения, выводов, практических предложений. Содержит 7 таблиц, 10 рисунков и 3 приложения. Список литературы включает 213 литературных источников, в том числе 52 иностранных авторов. 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Для решения поставленных задач в период с 2006 по 2009 гг. были проведены научно-хозяйственный опыт и производственная апробация на молодняке свиней. Экспериментальная часть работы выполнена в условиях хозяйств Брянской области: СПК-Агрофирма «Культура» и ОАО «Новый путь». Схема исследований приведена на рисунке 1. Анализы проб крови проводили в лаборатории кафедры нормальной и патологической морфологии и физиологии животных Брянской ГСХА, лаборатории иммунологии ВНИИ экспериментальной ветеринарии и Брянской межобластной ветеринарной лаборатории. При формировании групп по принципу аналогов, проводили подбор животных с учетом породности, возраста, живой массы, идентичности физиологического состояния. Научно-хозяйственный опыт проводили в СПК-Агрофирма «Культура», Брянского района, Брянской области. Из поросят крупной белой породы в период отъема сформировали три группы по 12 голов в каждой: 1 группа - контрольная, 2 и 3 – опытные. Содержание подопытных животных соответствовало ветеринарно-зоогигиеническим требованиям, им скармливали одинаковый рацион, который был составлен с учетом живой массы и сбалансирован по основным компонентам питания в соответствии с нормами кормления животных (А.П. Калашников, В.И. Фисинин, В.В. Щеглов и др., 2003). В 3-месячном возрасте животных иммунизировали поливалентной вакциной «ВГНКИ» против лептоспироза серогрупп: помона, иктерогеморрагия, тарассови. За 8 суток до этого поросятам 3 группы внутримышечно ввели по 0,01 мл/кг живой массы (ЖМ) натрия нуклеината. Животным 1 и 2 групп в это время внутримышечно вводили физраствор в той же дозе. Во время иммунизации, животным 1-й группы вводили плацебо, 2 и 3 группам - натрия нуклеинат по 0,04 и 0,01 мл/кг ЖМ соответственно. Кровь для анализов брали из хвостовой вены у 5 животных из группы до утреннего кормления перед началом опыта, через 8 суток (день иммунизации), и спустя 14 и 22 суток после неё. Производственную апробацию проводили в ОАО «Новый Путь» с. Глинищево Брянского района Брянской области. Было сформировано 2 группы по 20 голов в каждой, контрольная и опытная. Животным опытной группы за 8 суток до иммунизации и в момент нее вводили натрия нуклеинат в дозе 0,01 мл/кг ЖМ. Кровь исследовали у 8 животных из каждой группы. В крови определяли: количество лейкоцитов и эритроцитов в крови подсчитывали в камере Горяева, лейкоцитарную формулу – методом Филипченко, СОЭ - микрометром Панченкова, гематокрит – с помощью микроцентрифуги, гемоглобин - гемиглобинцианидным методом. Фагоцитарный показатель (ФП, %) рассчитывали как процент нейтрофилов, способных к поглощению частиц латекса, фагоцитарный индекс (ФИ, у.е.) - среднее число частиц латекса, поглощенных одним активным нейтрофилом, абсолютный фагоцитоз крови (АФ, 109/л) – общее количество частиц латекса, поглощаемое нейтрофилами в литре крови. Фагоцитарное число (ФЧ, у.е.) - рассчитывали как среднее количество частиц латекса, приходящееся на один нейтрофил (В.Е. Чумаченко, А.М. Высоцкий, Н.А. Сердюк и др., 1990). Микробицидную способность нейтрофилов периферической крови оценивали по активности их кислородозависимых (оксидазных механизмов) и содержанию катионных белков, осуществляющих киллинг независимо от наличия кислорода. Кислородозависимую микробицидную активность нейтрофилов определяли с помощью НСТ-теста (М.Г. Шубич, В.Г. Медникова, 1978; М.Г. Шубич, И.В. Нестерова, В.М. Старченко, 1980). Индекс активации нейтрофилов (ИАН) вычисляли согласно инструкции "Риакомплекс" по использованию НСТ-тест набора. Поглотительную способность нейтрофилов (ФП, %, ФИ, у.е., ФЧ, у.е., АФ, 109/л) и активность их оксидазных систем (+НСТ, %, ИАН) оценивали в двух состояниях: базальном (баз.) - в свежевзятой крови, стабилизированной гепарином, и стимулированном (стим.) - после внесения в пробы крови зимозана (Р.Б. Хаитов, Б.В. Пинегин, Х.И. Истамов, 1995). Показатель резерва оксидазной способности нейтрофилов периферической крови (ПР) и коэффициент их метаболической активации (К) рассчитывали по И.А. Пахмутову, М.С. Ульяновой, 1984. Кислородонезависимую микробицидность нейтрофилов периферической крови оценивали по содержанию в них катионных белков по методу В.И. Жибинова,1983, рассчитывая средний цитохимический коэффициент (СЦК) по формуле, предложенной Н.А.Макаревичем, 1988. Содержание популяции Т-лимфоцитов (Е-РОЛ %) определяли с помощью реакции розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами барана, В-лим­фоцитов (М-РОЛ, %) - с эритроцитами мыши (И.Д. Понякина, К.А. Лебедев, М.И. Васенович и др., 1984). Субпопуляции иммунорегуляторных Т-лимфоцитов, обладающих преимущественно хелперной (Е-РОЛтр, %) и супрессорной (Е-РОЛтч %) активностью, - в тесте с теофиллином (Р.В. Петров, Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин и др., 1989). Содержание иммуноглобулинов определено в лаборатории иммунологии и биотехнологии ВНИИ экспериментальной ветеринарии по Манчини (Э. Бэм, 1987). Обратный титр специфических антител к лептоспирозу определяли по реакции микроагглютинации (РМА). В сыворотке крови определяли концентрацию общего белка (рефрактометрический метод), активность AcAT и АлAT (динитрофенилгидразоновый метод Рейтмана-Френкеля), концентрацию глюкозы глюкозооксидазным методом. В качестве значений физиологической нормы принимали интервалы соответствующих показателей, приведенные в литературе (И.М. Карпуть, 1986; В.Е. Чумаченко, А.М. Высоцкий, Н.А. Сердюк и др., 1990; I.R. Tizard, 2000). Статистическую обработку материалов эксперимента проводили с использованием компьютерной техники. При определении достоверности разницы между показателями контрольной и опытных групп был использован критерий Стьюдента (Н.А. Плохинский, 1961). Результаты рассматривались как достоверные, начиная со значения p≤0,05. 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 3.1.1. Влияние времени и дозы введения натрия нуклеината поросятам при иммунизации на гемограмму Одним из важнейших исследованных показателей эффективности применения биокорректора является гемограмма подопытных животных (табл. 1.). Как видно из таблицы 1, у животных 3 группы отсутствуют существенные изменения в гемограмме через 8 суток после введения натрия нуклеината в дозе 0,01 мл/кг ЖМ, следовательно, однократное его применение не оказало существенного влияния. Через 14 суток после введения антигенов лептоспир у животных третьей группы установлено достоверно значимое, в пределах нормативных значений, увеличение числа эозинофилов в крови по сравнению с животными контрольной группы (на 50,64%, p<0,05), что может быть связано со снижением функциональной активности коры надпочечников (А.А.Кудрявцев, Л.А.Кудрявцева, 1974; Д.А.Устинов, 1976; Ч.Вейсс и др., 1986). Введение поросятам натрия нуклеината как только при иммунизации, так и двукратно, интенсифицировало переход моноцитов из кровяного русла в ткани через 14 суток после введения антигенов лептоспир и препятствовало снижению уровня лимфоцитов в крови через 22 суток после иммунизации. Уровень моноцитов в крови у животных контрольной группы через 14 и 22 суток после введения антигенов лептоспир существенно не изменялся. У поросят 2 группы отмечено снижение содержания моноцитов в крови: через 14 суток после иммунизации на 49,49% (p>0,05) и через 22 суток – на 70,71% (p<0,05) по сравнению с начальным периодом. Относительное количество моноцитов в крови у животных 3 группы через 14 суток после иммунизации также снижалось (на 75,71%, p>0,05) по сравнению с начальным периодом, но через 22 суток после неё, в отличие от поросят 2 группы, повышалось на 488,24% (p<0,05) по сравнению с предыдущим периодом исследования. При этом содержание моноцитов через 22 суток после введения антигенов лептоспир в крови у животных 3 группы было достоверно выше (на 244,83%), чем у поросят 2 группы.

Похожие:

	Исследование клеточных факторов естественной резистентности при воздействии... Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Государственном научном центре Российской Федерации-Институте медико-биологических...		Выращивание грибов «Вешенка обыкновенная» с помощью регуляторов роста Гумат натрия применяется для повышения урожайности. Результаты наших исследований по отзывчивости гумата натрия при обрастании субстрата...
	«Влияние динамики учебного процесса на состояние организма студента» Объективные и субъективные факторы обучения и реакция на них организма студентов		Календарно-тематическое планирование 10 класс Естественные основы: Влияние возрастных особенностей организма и его двигательной функции на физическое развитие и физическую подготовленность...
	Иммуномодулирующий эффект гала-вета и его влияние на физиологическое состояние поросят Работа выполнена на кафедре физиологии, фармакологии и ветеринарно-санитарной экспертизы фгоу впо «Белгородская государственная сельскохозяйственная...		Клинико-эпидемиологическая оценка эффективности вакцинации против... Работа выполнена в Государственном учреждении инфекционной клинической больнице №1 Комитета здравоохранения Москвы и в Государственном...
	Лечебно-профилактическая эффективность хлорофилло-каротиновых препаратов... Работа выполнена в фгоу впо «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия»		Тема Форма материала Влияние легкоатлетических упражнений на укрепление здоровья и основные системы организма
	Лечебная и профилактическая эффективность сахаптина при ассоциированных... Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология		Биочек: титры после вакцинации у бройлеров титры могут меняться в... Титры могут меняться в зависимости от возраста и типа птицы, типа вакцины, программы вакцинации и других факторов содержания. Эти...
	Гематологические показатели, естественная резистентность и интенсивность... Работа выполнена на кафедре физиологии, фармакологии и ветеринарно-санитарной экспертизы фгоу впо «Белгородская государственная сельскохозяйственная...		Влияние скармливания содержимого рубца коров, пробиотиков и их комплекса... Защита состоится «21» сентября 2006 г в 1300 часов на заседании диссертационного совета д 220. 004. 01 при Белгородской государственной...
	Морфофункциональная характеристика детского организма в разные возрастные периоды жизни Именно в процессе развития осу­ществляется постепенная реализация наследственной информации, которая была заложена при оплодотворении....		Показатели антиоксидантной защиты организма при экспериментальном... Показатели антиоксидантной защиты организма при экспериментальном дисбактериозе кишечника
	Приложение к журналу “Вопросы адвокатуры” Эта книга – о мятеже против государственной власти в России. Против самого государства и правопорядка. Она о заговоре, который направлен...		Русское Восстание против апокалипсиса Личности, ее демонизации и... Дробница Августина Васильевна доктор исторических наук, профессор кафедры истории и культуры фгбоу впо «Дальневосточный институт-филиал...