Экспериментальное обоснование способа контрастирования структур стекловидного тела с использованием суспензии «витреоконтраст»
Скачать 268.72 Kb.
|
Результаты В ходе контрастирования структур СТ было выявлено, что суспензия № 3 на основе производных целлюлозы обладает способностью к гелеобразованию, что затрудняет ее интравитреальное введение. За счет небольшой плотности, сравнимой с плотностью воды, и размера частиц 10-15 микрон суспензия слабо контрастировала каналы и цистерны СТ (стенки интравитреальных структур визуализировались нечетко). Через 15 минут после введения суспензии интенсивность контрастирования структур СТ уменьшалась, что проявлялось в ухудшении визуализации, невозможности отличить каналы и цистерны от матрикса СТ. Суспензия № 1 на основе сульфата бария контрастировала структуры СТ, осаждалась преимущественно на волокнах СТ. Интенсивность окраски интравитреальных структур и степень адгезии не менялись с течением времени. Суспензия № 2 на основе сульфата бария изолированно контрастировала все структуры СТ, обладала выраженной адгезией к структурным элементам СТ. При этом была отмечена самая высокая интенсивность окраски интравитреальных структур, что можно объяснить меньшим, по сравнению с суспензиями № 1 и № 3, размером частиц. Поэтому для изолированного контрастирования и дальнейшего изучения анатомо-топографических особенностей и взаимоотношений СТ и сетчатки была выбрана суспензия № 2, названная нами «Витреоконтраст», которая представляет собой ультрадисперсную суспензию на основе нерастворимой в воде и физиологических жидкостях нейтральной нетоксичной неорганической соли сульфата бария в изотоническом растворе с осмолярностью 300-350 мОсм, размером частиц 1-5 микрон и плотностью 4,4 г/см3. Изолированное контрастирование и выделение структур CT (каналов, цистерн и их анастомозов) Исследование проведено на 18 - ти донорских глазах. Препаровку СТ осуществляли по вышеизложенному способу. Для контрастирования витреальных структур использовали суспензию «Витреоконтраст». Контрастное вещество вводили при помощи игл 30G одноразового инсулинового шприца через плоскую часть цилиарного тела в 4 мм от лимба – антеградный путь введения. При ретроградном введении через диск зрительного нерва окрашивали оптико-цилиарный канал СТ, связывающий препапиллярное пространство с ретроцилиарными цистернами верхне-носового сегмента. После окрашивания изучали анатомо-топографические особенности строения стекловидного тела: определяли размер, топографию каналов и цистерн. Далее отделяли задний полюс от кортикальных слоев СТ и повторно определяли размер и топографию каналов и цистерн через 30 секунд, 1 и 5 минут. Следующим этапом корковые слои СТ разрезали при помощи ножниц Ванасса, отсепаровывали окрашенные структуры от матрикса СТ, отсекали их и отправляли на гистологическое исследование. Для проведения морфологических исследований выделенных интравитреальных структур (лентико-макулярного, оптико-цилиарного каналов, цистрен СТ) материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, промывали проточной водой, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин. Далее выполняли серии гистологических срезов с применением окрасок гематоксилин-эозином, альциановым синим и по методике Ван Гизона. Препараты изучали под микроскопом фирмы Leica DMLВ2 (Германия) при х50, х100, х200, х400-кратном увеличении с последующим фотографированием. Результаты Суспензия «Витреоконтраст» контрастировала все структуры СТ: оптико-цилиарный и лентико-макулярный каналы, кольцо ретроцилиарных цистерн, горизонтальные и петалиформные цистерны и их анастомозы. Структуры СТ представляют собой замкнутые или сообщающиеся между собой каналы и цистерны неправильной цилиндрической формы, полые внутри. Они имеют четко очерченные стенки, отличающиеся по плотности от матрикса и кортикальных слоев СТ. В ходе исследования были определены размеры интравитреальных структур. Размер ретроцилиарных цистерн составил 10-12 мм, экваториальных – 13-15 мм, лепестковых цистерн – 8-10 мм. В ходе исследования на 10 - ти глазах был выявлен анатомический вариант расположения интравитреальных каналов, при котором оба канала занимают центральное положение, проходят в едином кожухе и в верхней трети СТ разделяются, оканчиваясь в ретроцилиарном и ретролентальном пространствах соответственно. При гистологической и гистохимической окраске лентико-макулярного, оптико-цилиарного каналов и ретроцилиарных цистерн световая микроскопия подтверждала наличие стенок контрастированных каналов и цистерн. Они были структурированы и отличались от внутреннего матрикса стекловидного тела. В ходе препарирования была выявлена способность стенок цистерн СТ к растяжению без нарушения целостности структур. Было отмечено, что при образовании дефекта в кортикальных слоях (КС) образуется грыжа СТ. При этом изменяются конфигурация и взаиморасположение каналов и цистерн СТ с сохранением их анатомической целостности. При увеличении давления путем введения дополнительного количества суспензии в СТ происходил разрыв КС в области дефекта с опорожнением интравитреальных структур и последующим сокращением КС. Необходимо отметить, что при формировании и отсечении лепестков сетчатой оболочки во всех случаях было выявлено полное или частичное расслоение КС. Расслоенные участки имели гладкую, блестящую поверхность и не контрастировались суспензией «Витреоконтраст». Нерасслоенные КС имели шероховатую поверхность матового цвета и контрастировались снаружи вышеуказанной суспензией. Сравнительное контрастирование структур стекловидного тела суспензией «Витреоконтраст» и препаратом «Кеналог-40» Исследование проведено на 24 - х донорских глазах, разделенных на 3 группы по 8 глаз в каждой. В 1-й группе проводили контрастирование интравитреальных структур при помощи суспензии «Витреоконтраст», в глаза 2-й группы вводили суспензию «Кеналог-40», в 3-й группе проводили сравнительное контрастирование вышеуказанными суспензиями (одновременное введение). Для максимального приближения к клиническим условиям контрастирование интравитреальных структур во всех группах осуществляли следующим способом. В верхне-наружном сегменте в 4 мм от лимба устанавливали порт 25G. Далее препарировали СТ по вышеизложенному способу. Затем проводили контрастирование лентико-макулярного, оптико-цилиарного каналов, цистерн и кортикальных слоев СТ. В 1-й группе (8 глаз) через установленный порт системы 25G осуществляли введение суспензии «Витреоконтраст» при помощи игл 30G одноразового инсулинового шприца. При этом применяли антеградный и ретроградный пути введения красителей. Контрастировали последовательно ретроцилиарные цистерны, далее проводили иглу вглубь до уровня середины хрусталика и окрашивали лентико-макулярный канал, горизонтальные цистерны. При ретроградном пути введения через проекцию диска зрительного нерва окрашивали оптико-цилиарный канал СТ, далее проводили иглу параллельно задним кортикальным слоям СТ, окрашивая петалиформные (листовидные) цистерны. Во 2-й группе (8 глаз) вводили суспензию «Кеналог-40» с помощью игл 27G. Контрастирование интравитреальных структур осуществляли по вышеизложенной методике. В 3-й группе (8 глаз) при сравнительном контрастировании антеградно через порт 25G вводили суспензию «Кеналог-40», затем суспензию «Витреоконтраст», при этом контрастировали ретроцилиарные цистерны, оптико-цилиарный канал. Далее вводили суспензии в той же последовательности в область проекции лентико-макулярного канала. Следующим этапом проводили контрастирование КС с наружной стороны, при этом определяли способность красителей к выявлению расслоения кортикальных слоев СТ. Результаты В 1-й группе (8 глаз) при контрастировании структур СТ суспензией «Витреоконтраст» были контрастированы все интравитреальные структуры: каналы, цистерны и их анастомозы, кортикальные слои СТ. Суспензия заполняла интравитреальные структуры, фиксировалась на стенках, очерчивая их рельеф, не перемещалась при движениях СТ, вследствие чего было возможным избирательное окрашивание структур СТ. При этом каналы, цистерны и их анастомозы четко отличались от прозрачного матрикса СТ. Во 2-й группе (8 глаз) при контрастировании интравитреальных структур суспензией «Кеналог-40» стенки каналов и цистерн четко не визуализировались. Суспензия обладала слабой адгезией, не удерживалась в полости структур СТ, перемещалась при движении СТ, постепенно осаждаясь в его задних слоях. При ретроградном введении суспензия «Кеналог-40» не контрастировала оптико-цилиарный канал и цистерны СТ. Сравнительное контрастироание СТ суспензиями «Витреоконтраст» и «Кеналог-40» подтвердило, что «Витреоконтраст» контрастирует интравитреальные каналы, цистерны и их анастомозы. Интенсивность окраски структур СТ не меняется с течением времени. Суспензия «Кеналог-40» контрастирует отдельные волокна СТ и осаждается в его задних слоях. При контрастировании КС было выявлено, что суспензия «Кеналог-40» не окрашивает снаружи кортикальные слои СТ. При нанесении «Витреоконтраста» в тех же участках суспензия оседала на поверхности КС, что свидетельствовало об отсутствии расслоения КС. Выявленные участки расслоения КС имели гладкую и блестящую поверхность и не контрастировались суспензией «Витреоконтраст». На основании полученных данных можно заключить, что суспензия «Витреоконтраст» является наиболее оптимальной для контрастирования структур СТ и витреоретинального интерфейса, что указывает на целесообразность ее внедрения в офтальмологическую практику. Изолированное контрастирование структур СТ суспензией «Витреоконтраст» даст возможность разработки новых подходов селективного воздействия на интравитреальные структуры. Клинико-морфологическое исследование влияния суспензии «Витреоконтраст» на ткани глаза кролика Согласно результатам токсикологических испытаний (заключение по испытаниям № 463 от 17.06.2009), проведенных на базе «Института медико-биологических исследований и технологий» испытательной лаборатории доклинических исследований «Биомир» (г. Москва) образцы раствора для контрастирования структур СТ «Витреоконтраст» не обладают сенсибилизирующим, местнораздражающим и токсическим действием, стерильны, соответствуют требованиям, предъявляемым к изделиям, длительно контактирующим с внутренней средой глаза. С целью изучения безопасности применения суспензии «Витреоконтраст» при интраокулярном введении были проведены экспериментальные исследования in vivo. Проведены две серии опытов: первая серия – исследование действия суспензии «Витреоконтраст» на структуры переднего отрезка глаза; вторая серия опытов – на структуры заднего отрезка глаза. Все животные были разделены на две равные группы по способу введения «Витреоконтраста». Кроликам первой группы (8 животных, 8 глаз) производили инъекцию 0,1 мл суспензии «Витреоконтраст» в переднюю камеру глаза, кроликам второй группы (8 животных, 8 глаз) – интравитреальную инъекцию 0,1 мл суспензии «Витреоконтраст». Контролем служили парные глаза кроликов, в которые вводили 0,1 мл физиологического сбалансированного раствора. Для поддержания максимального мидриаза в конъюнктивальный мешок инстиллировали 1% раствор тропикамида. Инъекцию в переднюю камеру выполняли на 3-х часах с использованием игл 30G одноразового инсулинового шприца. Прокол оболочек глазного яблока при введении суспензии в СТ также осуществляли инъекционной иглой 30G одноразового инсулинового шприца через конъюнктиву на расстоянии 2,0 мм от лимба в направлении к экватору в верхне-наружном квадранте. Иглу проводили вглубь СТ параллельно хрусталику. Медленно вводили 0,1 мл суспензии «Витреоконтраст» в верхней трети полости стекловидной камеры. Для оценки состояния внутриглазных структур перед инъекцией и на 1-е, 7-е, 14-е, 30-е сутки наблюдения проводили офтальмологическое обследование, включавшее биомикроскорию переднего отрезка глаза на щелевой лампе фирмы «Opton» (Германия), офтальмоскопию с помощью бинокулярного офтальмоскопа фирмы «Heine» (Германия), фоторегистрацию изображений глазного дна с использованием диагностической ретинальной системы «Ret Cam-120» (США) и электроретинографию на электродиагностической системе «Tomey» (Япония) (кроликам второй группы). После проведения вышеуказанных исследований в те же сроки животных выводили из эксперимента путем воздушной эмболии, глаза энуклеировали и выполняли морфологические исследования. Для этого материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, промывали проточной водой, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин. Далее выполняли серии гистологических срезов с применением окраски гематоксилин-эозином и по методике Ван Гизона. Препараты изучали под микроскопом фирмы Leica DMLВ2 (Германия) при х50, х100, х200, х400-кратном увеличении с последующим фотографированием. Результаты исследования влияния суспензии «Витреоконтраст» на структуры переднего отрезка глаза кролика. После инъекции в переднюю камеру животным 1-й группы суспензии «Витреоконтраст» вещество диффузно осаждалось на поверхности радужной оболочки. Элиминация суспензии «Витреоконтраст» из передней камеры происходила постепенно в течение 10-14 дней. При исследовании глаз лабораторных животных 1-й опытной группы в раннем послеоперационном периоде (1-3-и сутки) выявляли небольшое скопление суспензии вокруг зрачка и в нижних отделах передней камеры. К 7-м суткам отмечалось уменьшение уровня суспензии в нижних отделах передней камеры, а к 14-м суткам суспензия «Витреоконтраст» не обнаруживалась в передней камере глаз кроликов. В течение всего периода наблюдения роговица глаз кроликов опытной и контрольной групп оставалась прозрачной, передняя камера была средней глубины, влага передней камеры сохраняла прозрачность, радужка была структурна, хрусталик оставался прозрачным. При офтальмоскопии патологических изменений со стороны структур глазного дна выявлено не было. Ни в одном глазу 1-й группы не было выявлено воспалительной реакции и каких-либо изменений структур переднего отрезка глаза (гиперемия конъюнктивы, преципитаты на роговице, гипопион, гифема, катаракта, изменение формы зрачка и др.) во время всего периода наблюдения. Результаты световой микроскопии. Морфологические исследования глаз опытной группы на ранних сроках исследования (1-е и 7-е сутки) выявили наличие суспензии «Витреоконтраст» в передней камере без воспалительных явлений и механического повреждения структур. В отдаленные (14-е сутки) сроки следов пребывания суспензии обнаружено не было. На глазах 1-й опытной и контрольной групп на протяжении всего эксперимента (в течение 1 месяца послеоперационного наблюдения) изменений структуры тканей роговицы, радужки и цилиарного тела также не выявлено. Таким образом, полученные результаты инъекции суспензии «Витреоконтраст» в переднюю камеру подопытных животных свидетельствуют об отсутствии повреждающего действия на структуры переднего отрезка глаза кролика. Результаты исследование влияния суспензии «Витреоконтраст» на структуры заднего отрезка глаза кролика. Во 2-й группе после интравитреальной инъекции «Витреоконтраст» определялся в канале СТ глаза кролика в виде гомогенной суспензии белого цвета, полностью прокрасив стенки канала. В течение всего периода наблюдения происходила постепенная элиминация суспензии «Витреоконтраст» из витреальной полости. На 30-й день исследования суспензии «Витреоконтраст» в витреальной полости не определялось. Видимых изменений структур переднего отрезка глаза, СТ и сетчатки отмечено не было (воспалительной реакции, дегенераций и помутнения СТ, отека сетчатки, геморрагий и др.). При анализе электроретинографии сетчатки глаз 2-й опытной и контрольной групп на 1-е сутки после интравитреальной инъекции суспензии «Витреоконтраст» отмечалось умеренное снижение биоэлектрической активности сетчатки, что проявлялось в снижении амплитуды b-волны в белом свете до 33 мс – 97 мкВ (норма 36 мс – 125 мкВ), что было оценинено как ответ на операционную травму, так как через 7 дней отмечалось увеличение амплитуды b-волн до 35,5 мс – 124,3 мкВ, а через 1 месяц - не выявлено значимых отклонений b-волны от нормы. |
Похожие:
 | Техническое задание. Частотный датчик уровня 2 Сравнительная характеристика... Сравнительная характеристика датчиков обоснование выбора рекомендованного способа измерения, его достоинства и недостатки, а также... |  | Клинико-экспериментальное обоснование применения карофила для профилактики... Работа выполнена на кафедре физиологии, фармакологии и ветеринарно-санитарной экспертизы фгоу впо «Белгородская государственная сельскохозяйственная... |
| Экспериментальное исследование энергетического баланса динамически... Уравнения 1 есть дифференциальные уравнения Навье1 – Стокса2 движения вязкой жидкости, являющиеся математическим описанием полей... | | Санкт-петербурга Обоснование выбора оптимального способа переработки, использования и обезвреживания твердых бытовых и близких к ним по компонентному... |
| Т. М. Скляр Высшая школа менеджмента В чем заключается обоснование использования этого метода с точки зрения экономической теории? Каковы возможности и ограничения данного... | | Экспериментальное обоснование применения временныхнесъемных зубных... Для общества вопрос о знании этих социальных институтов и умении направлять их развитие имеет первостепенное значение уже потому,... |
| Сныткин Владислав Анатольевич Обоснование применения пластиночных... Ена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический... | | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Урок литературы в 6 классе по фгос с использованием образовательных структур сингапурской системы образования |
| Урок английского языка с использованием икт в 3 классе по теме: «Parts of body» Урок английского языка с использованием мультимедийной презентации редакторе Microsoft Power Point “Parts of the body” (Части тела)... | | Урок английского языка с использованием икт в 3 классе по теме: «Parts of body» Урок английского языка с использованием мультимедийной презентации редакторе Microsoft Power Point “Parts of the body” (Части тела)... |
| «По страницам великой жизни. Лев Николаевич Толстой человек, мыслитель, писатель» Методическая разработка урока литературы для студентов 1 курса спо с использованием технологии коллективного способа обучения | | 141980, Московская область, Дубна, ул. Жолио Кюри,6 Основы технологии связывания (сращивания) протонированных пластин кремния с гидрофильными подложками при получении структур кремний... |
| Существуют системы отсчета, в которых тело находится в состоянии... Импульсом тела называется вектор равный произведению массы тела на его скорость: (Подробнее, ниже) | | Образовательная программа курсов повышения квалификации «Реализация... В этом направлении идет процесс развития образования: разработка различных вариантов его содержания; использование возможностей современной... |
| Массажи и процедуры для тела Индийская процедура, способствующая гармонии души и тела. Пилинг лечебными травами; массаж тела с применением теплого кунжутного... | | 1. Отвечают на вопросы, опираясь на таблицы, рисунки, микропрепараты Цели: систематизировать знания о покровах тела, начиная с простейших и включая покров тела млекопитающих; определить функции, которые... |
