«Анализ и стандартизация лекарственной формы с модифицированным высвобождением нового оригинального отечественного препарата дилепт» 14. 04. 02 фармацевтическая химия, фармакогнозия

3.4. Определение посторонних примесей. Одним из важнейших показателей качества лекарственной формы, позволяющих оценить содержание, как технологических примесей, так и продуктов деградации, является испытание на «Посторонние примеси». В пролонгированных таблетках могут присутствовать исходные продукты синтеза субстанции: метиловый эфир L-тирозина и N-капроил-L-пролин, а также продукт гидролиза дилепта - N-капроил-L-пролил-L-тирозин. Отработку ВЭЖХ методик проводили на жидкостном хроматографе Shimadzu (Япония) LC - 10АТ, снабженном спектрофотометрическим детектором UV-VIS SPD-10A. Разделение исследуемых соединений проводили на колонках «Luna C18» и «Restek» (длина 250 мм, внутренний диаметр 4,6 мм, сорбент С18 с размером частиц 5 мкм). Скорость потока подвижной фазы – 0,5 мл/мин; объем пробы – 20 мкл. Для определения рабочей длины волны были получены УФ-спектры в подвижной фазе возможных примесей дилепта, растворов N-капроил-L-пролил-L-тирозина, N-капроил-L-пролина и метилового эфира L-тирозина, с концентрацией веществ 0,1 мг/мл. Полученные УФ-спектры N-капроил-L-пролил-L-тирозина и метилового эфира L-тирозина характеризовались наличием четкого максимума поглощения при длине волны 278 нм. В УФ-спектре N-капроил-L-пролина в области от 200 до 350 нм четко выраженные максимумы отсутствуют, однако в области от 210 до 230 нм наблюдается некоторое поглощение. Спектры примесей и дилепта представлены на рисуноке 9. Рисунок 9. УФ-спектры растворов дилепта (а), N-капроил-L-пролил-L-тирозина (б), метилового эфира L-тирозина (в) и N-капроил-L-пролина (г) с концентрацией 0,1 мг/мл в подвижной фазе ацетонитрил - фосфатный буферный раствор (1:1) с рН=3,8. Учитывая тот факт, что поглощение примесей и дилепта в области длин волн от 210 до 230 нм выше, чем в интервале от 250 до 300 нм, а также совпадение максимумов поглощения дилепта и примесей в диапазоне длин волн 210 – 230 нм, детектирование посторонних примесей было решено проводить при длине волны 230 нм. В качестве подвижной фазы была опробована система, включенная в проект ФСП на субстанцию дилепта ацетонитрил - вода очищенная - ледяная уксусная кислота (500:500:1) [17], а также был исследован ряд систем, включающих ацетонитрил и фосфатный буферный раствор, доведенный фосфорной кислотой до рН 3,8, в различных соотношениях. Использование фосфатного буферного раствора с данным значением рН объясняется тем, что все три основные примеси дилепта представляют собой кислоты, которые могут находиться в растворе в виде двух форм, ионизированной и неионизированной, причем соотношение этих форм в подвижной и неподвижной фазах различно, что как правило, приводит к асимметрии этих пиков и нестабильности времен удерживания. Работая в «режиме подавления ионизации», удается добиться лучшей воспроизводимости результатов по времени удерживания, а также добиться симметрии пиков этих соединений. При проведении анализа на модельных смесях дилепта, примесей и плацебо наилучшего разделения удалось добиться, используя систему ацетонитрил - фосфатный буферный раствор (1:1) с рН=3,8, на колонке Luna C18 (250 x 4,6 мм) (Phenomenex, CША); скорость потока подвижной фазы – 0,5 мл/мин; объем пробы – 20 мкл, детектирование при длине волны 230 нм, температура колонки комнатная, объем вводимой пробы 20 мкл. Содержание индивидуальных примесей в процентах (X%) оценивали по методу внешнего стандарта относительно площади пика РСО по формуле: , (2) где Ss – площадь пика индивидуальной примеси; Sr - площадь пика дилепта на хроматограмме раствора РСО; m – масса навески РСО, мг; ma – средняя масса таблетки, мг. Типичные хроматограммы образцов таблеток дилепта пролонгированного действия представлены на рисунке 10. Рисунок 10. Хроматограмма таблеточной массы дилепта в системе ацетонитрил - фосфатный буферный раствор (1:1), λ=230 нм. Результаты определения посторонних примесей в образцах таблеток дилепта пролонгированного действия представлены в таблице 7. Таблица 7. Результаты определения содержания посторонних примесей в таблетках дилепта пролонгированного действия. № Вещество Ацетонитрил - фосфатный буферный раствор(1:1) tуд, мин tотн, мин Rs Процентное содержание 1 дилепт 11,172 1 - 2 N-капроил-L-пролин 9,093 0,724 (1 и 2) = 1,7 0,05 % 3 неидентифицированная примесь 17,583 1,572 (1 и 3) = 2,8 0,29 % Валидация разработанной методики определения «Посторонних примесей» в таблетках дилепта, 50 мг пролонгированного действия включала определение пригодности хроматографической системы, линейности (значение коэффициента корреляции – 0,998), предела количественного определения, прецизионности (сходимости и внутрилабораторной прецизионости), специфичности и правильности (относительнаяпогрешность – менее 2%). Тест пригодности хроматографической системы выполняли путем оценки не менее 3-х хроматограмм раствора B для проверки пригодности хроматографической системы и не менее 5 хроматограмм раствора РСО. Из этих пяти вводов рассчитывают степень разделения пика дилепта и метилового эфира тирозина (внутреннего стандарта), среднее число теоретических тарелок (N), фактор асимметрии (Т) и относительное стандартное отклонение. Хроматограммы извлечения из плацебо и модельной смеси таблеточной массы дилепта и примесей, подтверждающие специфичность методики представлены на рисунках 11, 12. Рисунок 11. Хроматограмма извлечения из плацебо таблеток дилепта. Рисунок 12. Хроматограмма модельной смеси таблеточной массы дилепта и примесей. Методика определения однородности дозирования. Определение однородности дозирования лекарственной формы дилепта проводили методом ВЭЖХ в условиях аналогичных количественному определению, при длине волны 278 нм. От опытной серии отбирали пробу таблеток в количестве 30 штук. В каждой из 10 таблеток определяли содержание лекарственного вещества по указанной ниже методике. Одну таблетку помещали фарфоровую ступку и растирали пестиком до получения однородной массы. Растертый порошок пересыпали в мерную колбу вместимостью 100 мл, остатки порошка смывали со стенок ступки в мерную колбу примерно 60,0 мл подвижной фазы. Полученную взвесь помещали на УЗ баню на 20 мин, после чего доводили объем раствора тем же растворителем до метки, перемешивали и фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм, отбрасывая первые порции фильтрата. 5 мл фильтрата помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводили объем раствора до метки подвижной фазой и перемешивали, получая испытуемый раствор с концентрацией дилепта 0,1 мг/мл. Перед хроматографированием колонку промывали подвижной фазой до установления стабильной базовой линии. Далее проводили проверку пригодности хроматографической системы, регистрируя не менее 5 хроматограмм раствора PCO (объем пробы 20 мкл), после этого хроматографировали не менее 3 раз испытуемый раствор. Содержание дилепта (Х) в одной таблетке в граммах вычисляют по формуле: где: Ss – площадь дилепта на хроматограмме испытуемого раствора Sr- площадь дилепта на хроматограмме раствора РСО mr- масса навески РСО, г W – содержание дилепта в РСО, % Предварительные нормы качества твердой дозированной лекарственной формы дилепта, таблеток пролонгированных, 50 мг. Три серии дилепта, таблеток пролонгированных, 50 мг были проконтролированы с использованием разработанных методик в соответствии с проектом фармакопейной статьи предприятия. Результаты контроля серий 031111, 040112, 050312 соответствуют нормам спецификации и представлены в таблице 8. Таблица 8. Нормы качества твердой дозированной лекарственной формы дилепта, таблеток пролонгированного действия, 50 мг. Показатели Метод испытания Нормы Серия 031111 Серия 040112 Серия 050312 Описание Визуально Таблетки белого или почти белого цвета плоскоцилиндрической формы без риски Соотв. Соотв. Соотв. Подлинность Спектрофотометрия в УФ области ВЭЖХ 1. УФ-спектр 0,1 % раствора в этиловом спирте 95%, в области от 250 до 300 нм имеет максимум поглощения при длине волны (278±2) нм 2. Время удерживания основного пика дилепта на хроматограмме испытуемого раствора должно совпадать со временем удерживания пика дилепта на хроматограмме раствора стандарта Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Средняя масса ГФ ХI, вып.2, с.154 От 0,285 г до 0,315 г (0,3 ± 5%) Соотв. Соотв. Соотв. Отклонение от средней массы ГФ ХI, вып.2, с.154 18/20:  5%; 2/20:  10% Соотв. Соотв. Соотв. Однородность дозирования ВЭЖХ 10/10: ±15% или 28/30: ±15%, 0/30: более чем ±25% Соотв. Соотв. Соотв. Посторонние примеси ВЭЖХ Индивидуальной примеси: не более 0,5%; Сумма примесей: не более 2% КП -0,05%; неидент. -0,29% КП -0,08%; неидент. -0,20% КП -0,02%; неиден0,33% Микробиологическая чистота ГФ ХII, часть 1, с. 160 Категория 3А Cooтв. Соотв. Соотв. Растворение ГФ ХI, вып.2, с.154 и ОФС 42-0003-04, Спектрофотометрия в ультрафиолетовой области спектра Время анализа % высвободившегося вещества 2 часа от 15 до 30% 5 часов от 50 до 65% 8 часов не менее 85% 2 часа -24%; 5 часов -58%; 8 часов – 87% 2 часа -25%; 5 часов -56%; 8 часов – 88% 2 часа -20%; 5 часов -53%; 8 часов – 86,5% Количественное содержание ВЭЖХ от 0,04625 г до 0,05375 г (0,05 г±7,5%) 0,05065 г 0,04998 г 0,05105 г Общие выводы Изучены особенности стандартизации лекарственных веществ пептидной природы и лекарственных форм с модифицированным высвобождением, в частности пролонгированных таблетированных лекарственных форм. Для анализа дилепта, таблеток пролонгированного действия, выбраны метод УФ-спектрофотометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии, как наиболее доступные и воспроизводимые методы анализа. На основании теоретических и экспериментальных данных выбрана подвижная фаза для метода ВЭЖХ, растворитель для метода УФ-спектрофотометрии. На основании анализа теоретических данных выбраны среды для теста растворения таблеток дилепта пролонгированного действия, проведены эксперименты, показывающие растворимость дилепта, таблеток пролонгированного действия в данных средах. Проведено сравнение кинетики растворения дилепта в «классических» средах с биорелевантной средой FaSSIF. Для включения в проект ФСП выбрана среда растворения - 2% раствор додецилсульфата натрия в фосфатном буфере с pH=7,2. На основании теоретических и экспериментальных данных разработаны и валидированы методики анализа подлинности, количественного определения, теста растворения, однородности дозирования, посторонних примесей (родственных соединений) для дилепта, таблеток пролонгированного действия. Валидация методик включала определение линейности, предела количественного определения, прецизионности (сходимости и внутрилабораторной прецизионности), специфичности и правильности. В соответствии с требованиями нормативной документации выбраны и определены допустимые значения показателей качества и разработан проект фармакопейной статьи предприятия на дилепт, таблетки пролонгированного действия, в который включены следующие разделы: подлинность, описание, средняя масса и однородность по массе, однородность дозирования, посторонние примеси, микробиологическая чистота, растворение, количественное определение, упаковка, маркировка, хранение. Изучена стабильность таблеток дилетка в течение года в режиме естественного хранения. Список работ, опубликованных по теме диссертации 1)Гаевая Л.М., Орлов Ф.С., Щепочкина О.Ю., Грушевская Л.Н., Пятин Б.М., Родионова Е.А. Разработка методик анализа новой лекарственной формы таблеток дилепта с модифицированным высвобождением.//Сборник материалов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство», - М., 2012. C.254. 2)Орлов Ф.С., Щепочкина О.Ю., Грушевская Л.Н., Пятин Б.М. ВЭЖХ методика определения посторонних примесей в таблетках дилепта пролонгированного действия.//Сборник материалов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство», - М., 2012. C. 408. 3) Орлов Ф.С., Щепочкина О.Ю., Родионова Е.А., Грушевская Л.Н., Пятин Б.М., Прокофьева В.И. Разработка методики теста «Растворение» для таблеток дилепта пролонгированного действия.//Сборник материалов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство», - М., 2012. C. 408. 4)Орлов Ф.С., Щепочкина О.Ю., Родионова Е.А., Грушевская Л.Н., Пятин Б.М. Стандартизация таблеток дилепта пролонгированного действия по показателю «Посторонние примеси»// Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / под ред. М.В. Гаврилина. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2012. – Вып. 67. – С 260. 5)Орлов Ф.С., Щепочкина О.Ю., Родионова Е.А., Грушевская Л.Н., Пятин Б.М. Стандартизация таблеток дилепта пролонгированного действия по тесту «Растворение»// Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / под ред. М.В. Гаврилина. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2012. – Вып. 67. – С 261. 6)Орлов Ф.С., Щепочкина О.Ю., Грушевская Л.Н., Пятин Б.М., Родионова Е.А. Разработка гармонизированной методики теста «Растворение» для таблеток дилепта пролонгированного действия. - Вестник Воронежского государственного университета, серия: Химия, Биология, Фармация, 2012, №1. – С. 203-207. 7)Щепочкина О.Ю., Орлов Ф.С., Грушевская Л.Н., Пятин Б.М. Разработка ВЭЖХ методики определения посторонних примесей в таблетках дилепта пролонгированного действия. – Биофармацевтический журнал, 2012.-Т4., №1. – С. 29-34. 18

Похожие:

	Программа рекомендуется для направления подготовки (специальности)... «специализированные дисциплины». Специализация по ветеринарной фармации включает следующие дисциплины: фармацевтическая химия, токсикологическая...		Методические указания по организации и проведению интернатуры для... Методические указания предназначены для провизоров-интернов и руководителей интернатуры
	Отчет об экспериментальном доклиническом изучении безопасности лекарственной...		Программа вступительных экзаменационных испытаний в интернатуру по... Разработка методов государственного регулирования процессов рождаемости, смертности, брачности и разводимости
	Разработка липосомальной лекарственной формы противоопухолевого препарата... Введение федерального государственного образовательного стандарта в Липецкой области		Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья и... В соответствии с приказом Минздравсоцразвития России от 7 июля 2007 года №402 19-21 октября в г. Москве состоялся III всероссийский...
	Особенности состояния систем общего и специфического иммунитета у... Оторых лежат как специфические, так и неспецифические проявления лекарственной гиперчувствительности. Неспецифическое действие лекарственного...		Отчет об экспериментальном доклиническом изучении безопасности лекарственной... «Герпезал, мазь для местного и наружного применения 1 %» производства зао «интелфарм»
	Учебно-методический комплекс. Рабочая учебная программа для студентов... «Химия нефти и экологическая безопасность», «Химия фторидных, сульфидных соединений металлов в макро-, мезо- и наносостояниях», «Физико-химический...		Темы реферата: 1 Роль лекарственной формы в современной фармакотерапии... ...
	Рабочая программа дисциплины «Фармацевтическая химия» Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования		Рабочая программа по дисциплине в фармацевтическая биоэтика Главная задача дисциплины «Фармацевтическая биоэтика» заключается в профессиональной подготовке конкурентоспособного специалиста...
	Рабочая программа по дисциплине дс. Ф. 01 Фармацевтическая химия... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования		Особенности состояния систем общего и специфического иммунитета у... Среди многообразия побочного действия лекарственных препаратов на организм человека значительное место занимают реакции, в основе...
	Рабочая программа по дисциплине «стандартизация, метрология и сертификация» Программа курса по дисциплине Стандартизация, метрология и сертификация составлена в соответствии с требованиями основной образовательной...		Аналитическая химия учебно-методический комплекс «Химия», профили подготовки: «Неорганическая химия и химия координационных соединений», «Физическая химия», «Химия окружающей среды,...