Изучение метаболома сырья и лекарственных форм крапивы двудомной

На правах рукописи Скалозубова Татьяна Александровна Изучение метаболома сырья и лекарственных форм крапивы двудомной 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Москва – 2013 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор Сорокина Алла Анатольевна Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор, профессор кафедры фармацевтической и токсикологической химии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России Прокофьева Вера Ивановна кандидат фармацевтических наук, руководитель отдела клинических исследований и регистрации лекарственных средств ЗАО «SKY LTD» Чубарова Галина Дмитриевна Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации Защита диссертации состоится « » 2013 г. в часов на заседании Диссертационного Совета Д.208.040.09 при ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России по адресу: 119019, г. Москва,  Никитский бульвар, д. 13. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России по адресу: 117418, Москва, Нахимовский проспект, д. 49. Автореферат разослан « » 2013 г. Ученый секретарь Диссертационного Совета Д.208.040.09, доктор фармацевтических наук, профессор Наталья Борисовна Демина ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы. Несмотря на достигнутые успехи в области синтеза лекарственных веществ, лекарственные растения остаются важным источником для получения лекарственных препаратов. В их число входят препараты, получаемые из листьев крапивы двудомной. Крапива двудомная используется в официнальной и народной медицине в качестве кровоостанавливающего и витаминного средства, применяется в гомеопатии. Наиболее часто листья крапивы используются в виде настоя, также разрешен к применению жидкий экстракт. Крапива двудомная изучалась достаточно подробно (работы Сошниковой О.В., Сапроновой Н.Н. и др.), однако данные о гидрофильной фракции биологически активных веществ (БАВ) растения представлены недостаточно. Действующая на настоящий момент нормативная документация на листья крапивы не отвечает современным требованиям стандартизации лекарственного растительного сырья (ЛРС). Рост заболеваний, связанных с нарушением обмена кальция в организме (остеопороз, дефицит кальция у детей), обуславливает повышенный интерес к лекарственным средствам (ЛС), являющимися источниками кальция. Широкий спектр таких ЛС в аптеках представлен, в основном, синтетическими препаратами, которые имеют ряд побочных эффектов. В тоже время, минеральные вещества лекарственных растений (ЛР) находятся в биоусваиваемой форме и более эффективны в нормализации минерального обмена. Листья крапивы двудомной, помимо богатого комплекса БАВ (флавоноиды, витамины, дубильные вещества, органические кислоты и др.), содержат значительное количество кальция, который переходит в жидкие лекарственные формы (работы Арзамасцева А.П., Листова С.А., Петрова А.В. и др.), поэтому, получаемые из сырья крапивы, настой и жидкий экстракт могут рассматриваться в качестве возможного источника кальция. Целью исследования является углубленное изучение гидрофильной части БАВ и минерального состава метаболома крапивы двудомной, а также рассмотрение возможности получения лекарственной формы (ЛФ) крапивы двудомной, обогащенной кальцием. Постановка задач и выбор средств для их решения: Для осуществления поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: провести информационно-аналитическое исследование по вопросам изучения метаболома и биологической активности крапивы двудомной; изучить гидрофильную фракцию БАВ и минеральный комплекс сырья крапивы двудомной; уточнить и разработать характеристики листьев крапивы двудомной для создания проекта фармакопейной статьи (ФС) на сырье; провести сравнительный анализ БАВ в сырье, аллопатических и гомеопатических лекарственных формах крапивы двудомной, используя принцип «сквозной стандартизации»; изучить факторы, способствующие переходу кальция из сырья в ЛФ. Решение задач осуществлялось путем обобщения данных литературы и проведения экспериментальных исследований. Научная новизна. Дана подробная качественная и количественная характеристика гидрофильной фракции БАВ и минерального состава метаболома крапивы двудомной с использованием комплекса современных методов анализа (тонкослойная хроматография (ТСХ), атомно-абсорбционая спектрометрия, титриметрия, потециометрия, спектрофотометрия). Идентифицированы: флавоноиды – рутин, кверцетин, лютеолин, кумарин – скополетин, кислоты – аскорбиновая, кофейная, галловая, хлорогеновая. Для определения содержания суммы свободных органических кислот, кислоты аскорбиновой, дубильных веществ, суммы флавоноидов, суммы гидроксикоричных кислот, хлорофилла, полисахаридов, восстанавливающих моносахаров, суммы свободных аминокислот, макроэлементов кальция и магния адаптированы действующие и разработаны оригинальные методики определения, защищенные двумя патентами РФ на изобретение. В процессе исследований в сравнительном аспекте методик титриметрического анализа (титрование 2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия, йодометрия и йодатометрия) показана равноценная возможность их использования для анализа кислоты аскорбиновой в листьях и ЛФ крапивы. Установлено, что наиболее оптимальной для анализа является методика йодометрии. Разработаны оригинальные методики комплексонометрического определения макроэлементов кальция и магния, и определения содержание кальция методом потенциометрии с использованием ионселективного кальциевого электрода в листьях и ЛФ крапивы двудомной, методики защищены патентами РФ № 2466387 и № 2488818. Подобраны условия увеличивающие переход кальция и магния из сырья в извлечение. Показана возможность получения методом дробной мацерации жидкого экстракта листьев крапивы двудомной, обогащенного ионами кальция. Дана качественная и количественная характеристика полученного экстракта. Практическая значимость результатов исследования. На основании проведенных исследований: разработан проект ФС «Крапивы листья» для ГФ XII изд. В проект ФС введены новые разделы «Количественное определение» и «Микробиологическая чистота», существенно дополнены разделы: «Внешние признаки» (добавлено описание порошков разной степени измельченности), «Микроскопия» (проведена визуализация и добавлены микроскопические характеристики на измельченное сырье и порошки), «Качественные реакции» (добавлены хроматографические характеристики сырья по аскорбиновой кислоте и флавоноидам), «Числовые показатели» (введены разработанные показатели содержания действующих веществ и показатели, характеризующие порошки крапивы); в работу испытательной лаборатории ООО «ЦККЛС «Центр Экофарм» внедрена йодометрическая методика количественного определения аскорбиновой кислоты в лекарственном растительном сырье, содержащем витамины, и методика определение кальция в растительных биологически активных добавках (БАД) методом потенциометрии с использованием кальций-селективного электрода; в учебный процесс кафедры фармакогнозии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России в тему «Лекарственное растительное сырье, содержащее витамины» внедрена альтернативная методика определения аскорбиновой кислоты методом йодометрии и йодатометрии. Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов. В работах, выполненных в соавторстве, автором лично проведен мониторинг основных параметров, аналитическая и статистическая обработка, научное обоснование и обобщение полученных результатов. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии во всех этапах исследования: от постановки задач, их теоретической и практической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях, докладах и внедрения их в практику. Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 6 и 7паспорта специальности фармацевтическая химия, фармакогнозия. Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, из них 6 статей – в журналах, рекомендованных ВАК РФ, 2 патента РФ на изобретение. Основные положения, выносимые на защиту: результаты изучения состава и определения содержания биологически активных веществ (органических кислот, кислоты аскорбиновой, дубильных веществ, флавоноидов, гидроксикоричных кислот и хлорофилла, полисахаридов, восстанавливающих моносахаров, аминокислот, макроэлементов кальция и магния) в листьях и лекарственных формах крапивы двудомной; данные по изучению ЛФ крапивы: настоя и жидкого экстракта из листьев крапивы, настоя гомеопатического и настойки матричной гомеопатической; результаты исследований по разработке методик количественного определения макроэлементов кальция и магния в листьях и ЛФ крапивы двудомной. Апробация диссертации. Основные положения диссертации доложены на «XXI Московской Международной Гомеопатической конференции» (Москва, 2011 г.), Итоговой Всероссийской научной конференции молодых исследователей с международным участием «Татьянин день» (Москва, 2011 г.), конференции «Вопросы стандартизации лекарственных препаратов» (секция молодых ученых) (Москва, 2010 г.), 5-й Международной научно-методической конференции «Фармобразование-2013. Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Создание новых физиологически активных веществ» (Воронеж, 2013 г.). Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО Первого МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (№ государственной регистрации 01.2.006 06352.) по научной проблеме «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований». Объем и структура диссертации. Работа изложена на 131 странице машинописного текста, содержит 36 таблиц и 21 рисунок. Работа состоит из введения, обзора литературы, 8 экспериментальных глав, выводов, библиографии из 135 наименований, из которых 14 на иностранных языках и 3 интернет ресурса, приложений. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования. Объектами исследования служили: промышленные образцы листьев крапивы фирмы ЗАО АПФ «Фито-ЭМ», в пачках по 50 г серии 020210; высушенные и свежие трава, листья, корневища и корни крапивы двудомной собранные в Домодедовском районе Московской области в 2011 году; настой листьев крапивы 1:10, приготовленный по методике ГФ XI изд.; настой гомеопатический листьев крапивы, приготовленный по методике ОФС 42-0001-00; жидкий экстракт листьев крапивы 1:1, приготовленный методом дробной мацерации; настойки гомеопатические матричные, приготовленные из свежего целого цветущего растения крапивы двудомной и из свежих листьев крапивы двудомной по методике ВФС 42-2799-96. Для получения экспериментальных данных были использованы следующие методы: метод спектрофотомерии применялся для изучения количественного содержания суммы флавоноидов, суммы аминокислот, восстанавливающих моносахаров, гидроксикоричных кислот и хлорофилла в объектах исследования. Исследования проводили на спектрофотометре SPECORD 200 Analytik Jena (Германия). Этот метод применялся также для получения абсорбционных спектров сырья и настоев крапивы, которые снимали как в видимой, так и в УФ области при длинах волн от 200 до 800 нм; метод титриметрии применялся для количественного определения суммы свободных органических кислот, аскорбиновой кислоты, дубильных веществ, кальция и магния; метод гравиметрии использовался для количественного определения полисахаридов и экстрактивных веществ, извлекаемых водой и водно-спиртовой смесью в ЛРС крапивы, а также сухого остатка в ЛФ крапивы; метод потенциометрии использовался для определения рН настоев и определения содержания кальция и магния в объектах исследования. Определение проводилось с помощью потенциометра (иономера) «И 130 М» (Россия); метод ТСХ использовался для идентификации различных групп БАВ: кумаринов, флавоноидов, органических кислот в сырье и ЛФ крапивы. Сорбенты, подвижные фазы и детекторы указаны в третьей главе работы; метод атомно-абсорбционной спектроскопии (ААС) применялся для количественного определения кальция и магния в сырье крапивы. Был использован атомно-абсорбционный спектрометр AAS Solaar 969 MKII (Германия). Для определения качественного состава БАВ сырья и лекарственных форм крапивы использовали качественные реакции, методики которых приведены в статьях ГФ XI, том 2, стр. 275 «Листья толокнянки» (дубильные вещества), ГФ XI, том 2, стр. 323 «Трава зверобоя», ГФ XI, том 2, стр. 244 «Цветки бессмертника песчаного» (флавоноиды), ГФ XI, том 2, стр. 264 «Листья подорожника большого», а также методики описанные в научной литературе. Микроскопический анализ проводился по общей фармакопейной статье (ОФС) «Техника микроскопического анализа» ГФ XI изд. на оптическом микроскопе фирмы «ЛОМО» марки «МИКМЕД-6» при увеличении 10, 20, 40. Статистическую обработку результатов исследований осуществляли в соответствии с требованиями ГФ XI, вып. 1, стр. 199, а также с помощью компьютерной программы STATISTICA 7,0. Изучение гидрофильных биологически активных веществ листьев крапивы двудомной Листья крапивы двудомной являются фармакопейным сырьем, и используются в официнальной медицине в качестве кровоостанавливающего средства в виде водных или водно-спиртовых ЛФ – настоя и жидкого экстракта. Что потребовало углубленного изучения состава гидрофильной фракции растительного сырья. Для проведения качественного анализа получали водные и водно-спиртовые извлечения из листьев крапивы двудомной в соотношении 1:10. С использованием пробирочных реакций в сырье было показано наличие сапонинов, дубильных веществ, флавоноидов, полисахаридов. Для доказательства присутствия в сырье аскорбиновой кислоты, флавоноидов, кумарина скополетина, фенолкарбоновых кислот использовали метод ТСХ. Определено содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой и 50% спиртом этиловым (17,35±0,03% и 25,01±0,02%, соответственно). Для количественной оценки БАВ, входящих в гидрофильную фракцию метаболома крапивы двудомной, был адаптирован ряд фармакопейных методик, применяемых в анализе ЛРС. Полученные данные приведены в табл. 6. Анализ УФ-спектров спиртовых извлечений листьев крапивы двудомной показал возможность определять количественное содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, используя в качестве рабочей длину волны 410 нм. Учитывая химический состав и реакцию среды извлечений из листьев крапивы, определение флавоноидов проводили с использованием ацетатного буфера (рН 4,75). Содержание аскорбиновой кислоты в листьях крапивы определяли тремя методиками: по методике ст. 38 ГФ XI «Плоды шиповника» (титрование 2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия), по методикам йодатометрии и йодометрии, используемым в анализе субстанции и препаратов аскорбиновой кислоты и модифицированным для анализа листьев крапивы. Исследование проводили на одной серии сырья. Проведенный сравнительный анализ (табл. 1, 2), вследствие сопоставимости результатов, показал возможность их использования для анализа аскорбиновой кислоты в листьях крапивы двудомной. Данные, полученные нами, подтверждают результаты, описанные в работе Сергуновой Е.В. (2002 г.) Таблица 1. Содержание аскорбиновой кислоты в листьях крапивы, определенное разными методиками (n=10; р=0,95) Методика количественного определения Содержание аскорбиновой кислоты, мг% Титриметрия (ГФ XI) 30,15±0,03 Йодатометрия 36,40±0,02 Йодометрия 34,35±0,02 Таблица 2. Метрологические характеристики методик количественного определения аскорбиновой кислоты в листьях крапивы (n=10; р=0,95) , мг% S² S ±∆Х ɛ, % Титрование 2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия 30,15 2,42 1,56 0,03 0,10 Йодатометрия 36,40 0,77 0,88 0,02 0,05 Йодометрия 34,35 1,03 1,01 0,02 0,06 Для последующих исследований нами был использован метод йодометрии как наиболее легкий в исполнении и воспроизводимый.

Похожие:

	Рабочая программа учебной дисциплины пм. 02 Изготовление лекарственных форм и ПМ. 02 «Изготовление лекарственных форм и проведение обязательных видов внутриаптечного контроля» разработана на основе федерального...		Методические указания для студентов 5 курса отделения заочного обучения... Канд фармац наук, старший преподаватель кафедры технологии лекарственных форм и организации фармацевтического дела фармацевтического...
	Русский язык для казахских школ в шпаргалке а утром все хрустело... А утром все хрустело вокруг: подмерзшие дороги, листья на крыльце, черные стебли крапивы, торчавшие из под снега. Обощающее слово...		Рабочая программа по дисциплине В. В ресурсоведение по направлению... Цель дисциплины состоит в углублении теоретических знаний и приобретении практических умений и навыков по вопросам ресурсоведения,...
	Рабочая программа по дисциплине В. В ресурсоведение по направлению... Цель дисциплины состоит в углублении теоретических знаний и приобретении практических умений и навыков по вопросам ресурсоведения,...		Рабочая программа дисциплины «природа техногенного сырья и проблемы его использования» Задача курса – ознакомить будущих магистров с основными крупномасштабными источниками твердых отходов при переработке минерального...
	Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Ективных и безопасных лекарственных средств или их комбинаций для информации врачей на основе знаний фармакодинамики, фармакокинетики,...		Создание форм антибиотичесого препарата нового поколения доксициклина... Канд фармац наук, старший преподаватель кафедры технологии лекарственных форм и организации фармацевтического дела фармацевтического...
	М. Г. Елисеева «Соблюдение условий хранения лекарственных средств... Актуальные вопросы по обеспечению качества лекарственных средств в аптечных учреждениях и учреждениях здравоохранения Республики...		Методические указания по проведению лекций и семинарско-практических... Ении, оформлении и отпуске лекарств. От уровня организации контроля качества лекарственных средств в аптеке зависит качество и культура...
	Требования к информации, необходимой при представлении заявок на... ...		Методические указания Введение Актуальность темы Между тем, промышленные заготовки этого сырья совершенно не ведутся, а сборы его местным населением для собственных нужд и для Аптекоуправления...
	Приказ представлен в сокращённом варианте. Министерство здравоохранения российской федерации Ввести в действие с 1 января 1998 года "Инструкцию по изготовлению в аптеках жидких лекарственных форм" (приложение)		Разработка лекарственных форм с флуконазолом для лечения кандидозов... О муниципальной целевой программе «Профилактика терроризма и экстремизма на территории Кировского района рсо-алания»
	«Лесная служба спасения» Способы заготовки лекарственных растений. Применение лекарственных растений. 6		Курсовая работа по технологии лекарств тема: «Законодательные основы... Государственное регулирование отношений, возникающих в сфере обращения лекарственных средств 13