Отчет о научно-исследовательской работе по Государственному контракту от «07» июля 2009 г. №02. 740. 11. 0270 по теме: «Разработка методик и создание биохимических коллоидных систем для ветеринарно-биологических и зоотехнических направлений»
Скачать 2.98 Mb.
|
| in vivo проницаемость эндотелия по отношению к альбумину уменьшается с увеличением сдвига или растяжения (среднего по времени) по сравнению с нормальными значениями. Кроме того, проницаемость эндотелия увеличивается незначительно по мере осцилляции этого индекса [131]. Гипотеза, что значительная часть поглощения макромолекул сосудистой стенкой имеет место, когда эндотелий приспосабливается к изменениям в гемодинамическом окружении, была тестирована в серии in vivo измерений поглощения альбумина, меченного КЭГ, в подвздошных артериях свиньи, подвергавшимся острым изменениям потока крови. Данные по поглощению были интерпретированы посредством специальной модели ответа динамической проницаемости, который, как предполагается, сопровождает изменения в пристеночном слое. Модель способна коррелировать в одном комплекте параметров с ответом сосуда при разнообразных экспериментальных протоколах, включая шаговое увеличение и уменьшение сдвига или растяжения в различные периоды. Анализ наиболее походящих параметров модели заставляет предположить, что перед адаптивным ответом на увеличение среза имеется латентный период приблизительно в 1,5 мин, что существенно меньше, чем при ответе на уменьшение сдвига [132]. Атеросклероз преимущественно бывает в областях с турбулентым потоком и низким уровнем стресса среза, в то время как ламинарный поток и высокий сдвиг (растяжение) являются атеропротективными. Хорошо охарактеризованный атеропротективный механизм включает ингибирование тромбоза (увеличенный уровень тканевого активатора плазминогена и уменьшенный уровень ингибитора – 1 активатора плазминогена), ингибирование апоптоза эндотелиальных клеток, ограничение проницаемости (поглощения липопротеинов низкой плотности), предотвращение связывания белых клеток крови и трасмиграции (отсутствие экспрессии молекул адгезии, таких, как межклеточная молекула адгезии – 1 [ICAM-1] и сосудистая клеточная адгезивная молекула – 1 [VCAM-1]) и отсутствие увеличенной биодоступности окиси азота (из-за увеличенной экспрессии эндотелиальной синтетазы окиси азота и магниевой супероксид дисмутазы). Было проведено исследование опосредованного потоком ингибирующего действия воспалительных цитокинов. Установлено, что поток предотвращает опосредованную фактором некроза опухолей альфа сигнальную трансдукцию. Фактор некроза опухолей регулирует экспрессию воспалительных генов (т.е. ICAM - 1 и VCAM - 1) в эндотелиальных клетках, частично за счет стимулирования митоген - активированных белковых киназ, которые фосфорилируют транскрипционные факторы. Выдвинута гипотеза, что сдвиг (растяжение) потока ингибирует воспалительные эффекты фактора некроза опухолей(TNF) на эндотелиальные клетки путем ингибирования TNF-опосредованной активации c-Jun N-терминальной киназы. Для проверки этой гипотезы определялись эффекты устойчивого ламинарного потока на TNF-стимулируемую активность c-Jun N-терминальной киназы. Результаты показали, что поток ингибирует активацию c-Jun N-терминальной киназы через множественный механизм, включающий стимуляцию противорегуляторной MAP киназы (внеклеточные регулирующие сигнал киназы [ERK]1/2 и ERK5) и ингибирование сигнал - регулирующей апоптоз киназы. Суммарно, атеропротективный эффект устойчивого ламинарного потока на эндотелий включает множественные синергичные механизмы. Эти множественные механизмы являются привлекательными мишенями для новых лекарственных средств, направленных на ограничение развития и прогрессирования атеросклероза [133]. Важно исследовать изменение индуцированной артериальным проницаемости для альбумина в интиме и сопровождающие ее структурные ответы в артериях свиньи. Одинаковые ламинарные ответы сдвиг (растяжение) были сравнены с таковыми областями стресса «разделения потока». Эти области были созданы с использованием специально созданных образующих потоки приспособлений в экспериментально контролируемых, метаболически поддерживаемых ex vivo препаратах торакоабдоминальной аорты. Образцы проницаемости для окрашенного КЭГ альбумина определялись рефлектометрическим методом. Соответствующие структурные тканевые ответы определялись с помощью гистологической, иммуноокращивающей и ультраструктурной микроскопической техники. Показано, что когда предварительно адаптированная in vivo артерия переносится в новое механохимическое окружение, в ней происходит последовательность адаптивных процессов в течение последующих 95 часов. Области интимы, подвергшиеся воздействию сдвига (растяжения) (приблизительно 16 мН/м2 в первый период (23 часа)) отвечали увеличением проницаемости. По мере продолжения «стресса» структурные изменения в интиме - медии происходили таким образом, что восстанавливалась нормальная физиологическая проницаемость. В течение того же самого периода в смежных областях эндотелия, подвергшиеся «стрессу» полей разделенных потоков (приблизительно 0,03-0,27 мН/м2), наблюдалось раннее и прогрессивно увеличивающееся увеличение проницаемости. Это сопровождалось формированием локальной эдемы в интиме, потерей матрикса в интиме и развитием отчетливо приподнятых желатиноподобных поражений в интиме, имеющих потенциально преатероматозную структуру [134]. Поток через щели субэндотелиальной интимы и медии артериальной стенки стимулировался количественно для того, чтобы изучить распределение водного потока через небольшие поры, которое влияет на сдвиг (растяжение) в гладкомышечных клеток артериальной стенки прямо под внутренней эластичным слоем. Был выполнен анализ в двух измерениях с использованием модели Brinkman для потока в пористой среде. Обнаружено, что гидравлическая проницаемость слоя интимы должна быть значительно больше, чем таковая медии для того, чтобы предсказать разумную величину падения давления через субэндотелиальную интиму и внутренний эластичный слой. Когда Ki было установлено равным значению в медии, это падение давления оказалось нереалистично высоким. Более того, более высокие значения Ki вызывали почти однородное распределение потоков воды через простой набор небольших пор, все из которых имели одинаковый диаметр (1,2 микрона). В то время как Ki был установлен на уровне значения медии, распределение потока через поры было в высокой степени неоднородным и нефизиологичным. Деформируемая модель интимы предсказывала неоднородное распределение потока при высоких давлениях (180 мм рт.ст.). Повреждение внутреннего эластичного слоя моделировалось введением больших пор (до 17,8 микрон). Драматическое увеличение потока через большие поры наблюдалось при изменении жидкостной механической среды гладкомышечных клеток около больших пор, что имеет значение для гиперплазии интимы и атеросклероза. Модель также предсказывает, что жидкостной shear stress на дне поверхности эндотелиальной клетки порядка 10 мН/м2, что является уровнем, который может влиять на клеточную функцию [135]. Нарушение барьерной функции связано с инициацией и прогрессированием атеросклероза, болезни фокальной природы, ассоциированной с гемодинамикой. В данном исследовании проницаемость эндотелия для макромолекул и электрическое сопротивление эндотелия изучались in vitro в монослоях, подвергавшихся воздействию нарушенных (приведенных в беспорядок) полей потока, что моделировало пространственные вариации при shear stress потока, обнаруживаемого в артериальных бифуркациях. После 5 часов действия потока области высокого градиента shear stress показали увеличение в 5,5 раза трансэндотелиального транспорта декстрана (молекулярный вес 70 000) по сравнению с контролями, где не было потока. Области невозмущенного полностью развившегося потока, в том же монослое показали 2,9-кратное увеличение. Электрическое сопротивление монослоя уменьшалось при контакте с потоком. Сопротивление во время действия потока и уровень изменений в сопротивлении монослоя после удаления потока был наиболее низким поблизости от нового подключения потока (наиболее высокие значения градиента сдвига (растяжения)). Эти результаты демонстрируют, что барьерная функция эндотелия и проницаемость эндотелия к макромолекулам регулируется пространственными вариациями в силе сдвига (растяжения) in vitro [136]. Таким образом, турбулентность потока и низкий сдвиг (растяжение), а также высокий градиент стресса среза способствуют увеличению проницаемости эндотелия. Гипертония. Гипертония, фактор риска атеросклероза, увеличивает поглощение липопротеинов низкой плотности стенкой артерии. Было использовано компьютерное моделирование для идентификации физических факторов, которые могут быть частично ответственны за этот эффект. Поток жидкости и перенос массы в просвете и стенке артерии рассчитывались с помощью компьютера одновременно, повторяя насколько это было возможно предыдущие экспериментальные исследования, в которых поглощение LDL артериальной стенкой измерялось в обычных вырезанных артериальных сегментах. Как при наличии потока, так при его отсутствии модель предсказывает увеличение концентрации поляризации LDL в артериальной стенке, когда артериальное давление возрастает с 120 до 160 мм рт.ст.. Однако это ведет только к небольшому увеличению в средней концентрации LDL в стенке артерии. Если значения проницаемости эндотелия к LDL варьируется совместно с внутриартериальным давлением, тогда модель предсказывает увеличение поглощения LDL в 1.9-2.6 раза при более высоких давлениях. Величины этого увеличения согласуются с экспериментальными данными. Сделан вывод, что концентрационные эффекты поляризации не могут объяснить наблюдаемые эффекты усиления поглощения LDL при гипертонии. Вместо этого, эти данные согласуются со связанным с давлением увеличением проницаемости эндотелия для LDL [137]. Хотя хорошо установлено, что гипертония является основным фактором риска инсульта, сложность цереброваскулярных проблем в связи с гипертонией обычно недооценивается. Гипертония может вызывать инсульт через многие механизмы. Высокое внутрисосудистое давление ведет к большим изменениям в эндотелии и функции гладкомышечных клеток во внутричерепных артериях. Увеличенный «стресс» в эндотелии может увеличить проницаемость барьера кровь – мозг и локальную мультифокальную эдему мозга. Повреждение эндотелия и измененное взаимодействие между клетками крови и эндотелием может привести к локальному тромбообразованию и ишемическим повреждениям. Фибриноидный некроз может быть причиной лакунарных инфарктов и вутримозговых геморрагий. Более того, гипертония ускоряет процесс атеросклероза, этим увеличивая вероятность повреждений мозга, связанных со стенозом и образованием эмболов, происходящих из больших внутримозговых сосудов, из дуги аорты и из сердца. Адаптивные структурные изменения в сопротивлении сосудов, имеющие позитивное значение, уменьшая напряжение сосудистой стенки, могут иметь и негативное значение, увеличивая периферическое сосудистое сопротивление, которое может затруднить коллатеральную циркуляцию и увеличить риск ишемических событий в связи с эпизодами гипотонии в дистальных по отношению к стенозу областях. Гипертония является фактором риска для васкулярной деменции [138]. Гипертония является известным фактором риска развития атеросклероза, который характеризуется ненормальной аккумуляцией липопротеинов низкой плотности и других, происходящих из плазмы молекул Было измерено накопление маркера происходящих из плазмы молекул пероксидазы хрена (ПХ, 44 kDa), в интиме и меди аорты крыс с хронической гипертонией. Транспорт ПХ у двухлетних крыс со спонтанной гипертонией сравнивался с таковым у того же возраст крыс линии Wistar-Kyoto при условиях, что кровяное давление существенно не изменялось в течение 15 мин циркуляции ПХ. Накопление в интиме и профиль концентрации в медии ПХ были получены на основании анализа залитых метакрилатом срезов препаратов после реакции с 3,3’-диаминобензидином и Н2О2. Данные анализировались с помощью математической модели макромолекулярного транспорта для количественной оценки проницаемости эндотелия и внутреннего эластичного слоя (ВЭС). Хроническая гипертония увеличивает проницаемость эндотелия без изменения в ВЭС. Очевидный конвективный поток ПХ в интиму у крыс с гипертонией поднимал уровень ПХ в интиме до концентрации более высокой, чем концентрация ПХ в плазме. Эти результаты заставляют предположить, что накопление происходящих из плазмы макромолекул, вызванное обусловленной давлением конвекцией минимизируется в норме интактностью эндотелия. Сходные изменения вызываются сильным повреждением липополисахаридами, что заставляет предположить, что эндотелиальные повреждения могут быть связаны с изменениями транспорта при гипертонии. После либо острого, либо хронического повреждения эндотелия, транспорт макромолекул в интиму возрастает, но ВЭС продолжает задерживать транспорт макромолекул далее интимы, что приводит к усиленному накоплению их в интиме [139]. Таким образом, гипертония способствует увеличению проницаемости эндотелия и накоплению липопротеинов в интиме. Смерть апоптических клеток, следующая за повреждением сосудистого эндотелия, как предполагается, играет важную роль в патогенезе атеросклероза. Продемонстрировано, что липопротеины высокой плотности, основная антиатерогенная фракция липопротеинов, защищает эндотелиальные клетки против апоптоза. HDL блокируют митохондриальный путь апоптоза путем ингибирования диссипации митохондриального потенциала (дельтапси(m)), генерации активных радикалов кислорода и освобождения цитохрома с в цитоплазму. Как последствие, HDL предотвращает активацию каспаз 9 и 3 и апоптические изменения в плазматических мембранах, такие, как увеличение проницаемости и транслокация фосфотидилсерина. Обработка эндотелиальных клеток HDL индуцирует активацию протеин киназы Akt, вездесущего трансдуктора антиапоптических сигналов, и ведет к фосфорилированию BAD, основного субстрата Akt. Супрессия Akt активности как wortmannin, так и LY-294002 или доминантным негативным Akt мутантом уничтожают антиапоптический эффект HDL. Два биоактивных лизосфинголипида, присутствующие в HDL частицах, сфингозилфосфорилхолин и лизосульфатид, полностью имитируют эффект HDL, блокируя митохондриальный путь апоптоза и действенно активируя Akt. Таким образом, полученные данные идентифицируют HDL, как переносчик эндогенных факторов выживания эндотелия и заставляют предположить, что ингибирование эндотелиального апоптоза HDL - ассоцированными лизосфиголипидами может представлять важный и новый аспект антиатерогенной активности HDL [140]. Гепаран сульфат протеогликаны (HSPGs) являются ключевыми компонентами субэндотелиального матрикса, который играет важную роль в сборке и структуре базальной мембраны, регуляции проницаемости базальной мембраны, активности фактора роста и клеточной адгезии. Содержание (HSPGs) уменьшается при воспалении, атеросклерозе и диабете. Недавние исследования показали, что HSPGs негативно регулируются атерогеннными молекулами и позитивно регулируются антиатерогенными агентами. Экстрацеллюлярный матриксный HSPG, перлекан (perlecan), как выяснилось, является ключевой мишенью регуляции этих агентов. По крайней мере, два уровня регуляции контролируют перлекан HSPG в матриксе: изменения в основной экспрессии протеина или изменение в метаболизме геперан сульфата. Атерогенные уровни LDL, oxLDL и лизолецитина уменьшают не только основной синтез белка, но также увеличивают деградацию гепаран сульфата путем стимулирования эндотелиальной секреции гепараназы. ApoE и apoE-HDL, по контрасту, увеличивают содержание основного белка перлекана, также, как и сульфатирование геперан сульфата. Увеличенное содержание перлекана в эндотелиальных клетках ассоциировано с увеличенным антитромбин - связыванием и антипролиферативным эффектом. Более того, модуляция перлекана оказывает прямое действие на рост гладкомышечных клеток. Таким образом, модуляция липопротеинами сосудистого перлекана может играть ключевую роль в модуляции атерогенеза [141]. При использании препаратов из человеческих сосудов, полученных аутопсией и специфических антител, направленных к пептидным последовательностям кининовых B1 и B2 рецепторов, продемонстрирована локализация этих рецепторов в человеческой сосудистой системе. В больших эластичных артериях и венах кининовые рецепторы присутствуют только в эндотелиальных клетках, в то время как во всех мускулистых артериях и артериолах, эти рецепторы присутствуют как в эндотелиальных клетках, так и в гладкомышечных клетках. Идентификация кининовых рецепторов в человеческих сосудах подтверждает положение, что кинины могут модулировать как сосудистую проницаемость, так и контрактильность. Эпизодическое обнаружение кининовых рецепторов при гистологических исследованиях при пятнистой атероматозной болезни в коронарной, бедренной и брюшной артериях помогло в выяснении роли этих рецепторов в наиболее обычных болезнях человеческих кровеносных сосудов. Интенсивное мечение B1 рецепторов наблюдалось в эндотелиальных клетках, пенистых макрофагах, воспалительных клетках и фибробластах в утолщенной интиме бляшки, так же, как в гладкомышечных клетках подлежащей медии. Иммунореактивные B2 рецепторы также наблюдались в этих клетках, но с уменьшенной интенсивностью. Интенсивное иммунно - мечение B1 рецепторов в этих областях заставляет предположить, что оно может быть индуцировано атероматозной болезнью, и что антогонисты рецепторов B1 могут иметь терапевтическое значение [142]. Механизмы, ответственные за накопление липопротеинов низкой плотности были исследованы на новой модели перфузируемой аорты хомяка. Для этого создан метод изучения потока в реальном времени в индивидуально перфузируемых артериях; каждая артерия служила как свой собственный контроль. Уровни накопления и утечки LDL раздельно определялись с помощью количественной флуоресцентной микроскопии. Перфузия артерий буфером с липопротеин липазой (LpL) увеличивала аккумуляцию LDL в 5 раз путем увеличения удержания LDL в артериальной стенке. Этот эффект был блокирован гепарином и моноклональными антителами, направленными против амино - терминального конца аполипопротеина B (apo B). Это заставляет предположить, что специфические области apo B участвуют в накоплении LDL в артериях. Также было исследовано действие гидролиза богатых триглицеридами липопротеинов на эндотелиальную барьерную функцию. Проницаемость эндотелиального слоя изучалась с использованием водорастворимых молекул флуоресцентно меченого декстрана. Когда LpL была добавлена к гипертриглицеридемической плазме, накопление декстрана в артерии увеличилось более чем в 4 раза. Быстрая утечка LDL из артериальной стенки указывает, что увеличенная проницаемость эндотелиального слоя является первичным механизмом во время увеличенного липолиза. Эти данные могут иметь отношение к наблюдаемой связи между увеличенной после приема пищи липемией и атеросклерозом [143]. Факторы, влияющие на развитие атеросклероза, включают метаболические изменения, вызываемые определенными липидами и воспалительными цитокинами. Для проверки гипотезы, что совместное присутствие ненасыщенных жирных кислот и воспалительных цитокинов может усилить их повреждающие эффекты, культивируемые эндотелиальные клетки обрабатывались линолевой кислотой(18:2) и/или TNF в периоды времени до 24 часов. Нарушения в метаболизме эндотелиальных клеток определялись с помощью измерения клеточного окислительного стресса, индуцированного окислительным стрессом ядерного фактора kappa B (NF-kappa B) и kappa B- связанной транскрипции, внутриклеточного уровня кальция и эндотелиальной барьерной проницаемости. Эти изменения были перекрестно усилены как 18:2 и TNF по сравнению с 18:2 и TNF по отдельности. По контрасту совместное воздействие 18:2 и TNF не потенцировало эффекты опосредованные 18:2 или TNF по отдельности на NF-kappa активацию или NF-kappa B-связанную транскрипцию. Предобработка витамином Е уменьшали 18:2 и/или TNF-опосредованную дисфункцию эндотелиальных клеток. Эти результаты заставляют предположить, что определенные ненасыщенные жирные кислоты могут потенцировать TNF-опосредованную дисфункцию эндотелиальных клеток и что окислительный стресс может быть частично ответственен за эти метаболические события. Эти данные могут иметь приложения для понимания липид - опосредованных воспалительных ответов при атеросклерозе [144]. Эндотелиальные клетки покрыты поверхностным слоем ассоциированных с мембраной протеогликанов, гликозаминогликанов, гликопротеинов, гликолипидов и ассоциированных белков плазмы. Этот слой может лимитировать транспорт растворов. Определялись размеры и свойства этого транспорта в эндотелиальном поверхностном слое (ЭПС) изолированных артерий. Мезентериальные малые артерии крысы (диаметром приблизительно 150 микрон) каннулировали с двуствольными пипетками на входном конце и обычной пипеткой на выходном конце. Динамика и локализация внутриартериальной флуоресценции FITC-меченных декстранов (FITC-Deltas) и DiI красителя в эндотелиальной мембране определялись с помощью конфокальной микроскопии. Большие FITC-Delta (148 kDa) заполняли центральный обьем внутри артерий в течение 1 мин, но были исключены из области шириной 2.6 +/- 0.5-микрона эндотелия со стороны сосуда в течение 30 мин перфузии красителя. Средние FITC-Delta (50.7 kDa) медленно проникали в эту ЭПС, но не проникали в сосудистую стенку. Малые FITC-Delta (4.4 kDa) быстро проходили ЭПС и аккумулировались в сосудистой стенке. Прологированное освещение флуорохрома яркой ртутной лампой разрушало зону приблизительно в 3 микрона для FITC-Delta 148 в течение нескольких минут. Это исследование демонстрирует присутствие толстого ЭПС слоя, который вносит вклад в барьер проницаемости для растворов. Слой чувствителен к фототоксичному стрессу, и его повреждение может быть ранним событием в атерогенезе [145]. Таким образом, проницаемость эндотелия для растворенных веществ зависит от их заряда и молекулярной массы. Ее увеличивают дефицит магния, оксистеролы и воспаление. Гемодинамичесие факторы, бактериальная инфекция, липопротеин–липаза, определенные ненасыщенные жирные кислоты, цитокины и кинины, могут увеличивать проницаемость эндотелия, в то время как липопротеины высокой плотности, гепаран сульфат протеогликаны и примембранный слой эндотелиаьных клеток уменьшают ее. Количественные взаимоотношения между динамикой количества клеток (клеточные митозы и смерть клеток) и проницаемостью для макромолекул изучались на уровне индивидуальных эндотелиальных клеток (ЭК) грудной аорты взрослых самцов крыс Sprague-Dawley. Эксперименты были выполнены на препаратах образцов аорты после внутривенного введения пероксидазы хрена (ПХ). ЭК, находящиеся в состоянии митоза, идентифицировались путем окраски гематоксилином; умирающие или погибшие ЭК, содержащие цитоплазматический иммуноглобулин G, определялись с помощью непрямой иммуноцитохимии, а эндотелиальная проницаемость для ПХ визуализировались с помощью световой микроскопии. Количественные данные о вкладе митозов и смерти ЭК в эндотелиальную проницаемость для ПХ были получены на тех же самых животных. Хотя ЭК в состоянии митоза и умирающие ЭК не часто встречались, абсолютное большинство этих клеток были связаны с фокальным пропусканием ПХ. На долю этих находящиеся в состоянии митоза и умирающих клеток, однако, приходилось только сранительно небольшая часть от общего числа мест повышенной проницаемости, что указывает на то, что проникновение 4-5 нм ПХ также происходит в нормальных ЭК, морфологически не определенных в состоянии митоза или смерти. Проценты мест проницаемости, связанных с митозом или клеточной смертью, были выше для 6 нм альбумина или для 22 нм липопротеина низкой плотности, которые вероятно не могут пересечь нормальные соединения и используют проницаемые соединения во время изменения числа клеток, как свой основной путь проникновения через эндотелиальный барьер [146]. Различные формы клеточного повреждения, индуцированного иммунными эффекторными клетками, аберрантными метаболическими процессами, хемотерапевтическими лекарствами или температурными сдвигами приводят к общим морфологическим изменениям, состоящим в образовании и сбрасывании мембранных везикул с поверхностей поврежденной клетки, т.е. апоптозом. Это динамическое поведение поверхности клеточной мембраны зависит от разрушения цитоплазматических микротубул. Совместно с измененной морфологией поверхности клетки определенные физиологические и биохимические события также связаны с повреждением клетки. Они включают изменения в проницаемости мембраны, увеличенное потребление кислорода и фрагментацию ДНК. Однако, надо определить экспериментально какие из этих биологических изменений определяют необратимое повреждение клетки и/или программируемую смерть клетки. Селективное повреждение клетки и ее смерть являются целью многих терапевтических приемов, направленных на разрушение раковых клеток. С другой стороны, предотвращение повреждения клетки желательно при аутоиммунных заболеваниях, таких, как lupus erythematosus, тироидит, инсулин - зависимый диабет и многих других. Повреждение сосудистого эндотелия может играть роль не только при тромбозе, атеросклерозе и гипертонии, но также может способствовать распостранению метастазов опухолевых клеток [147]. Инкубация бычьей аорты, также как человеческих эндотелиальных клеток из пупочной вены с либо окисленными, либо нативными липопротеинами низкой плотности в присутствии следов меди индуцирует морфологические изменения в клетках и фрагментацию хроматина, характерные для программируемой клеточной смерти. Сжатие клеток становилось очевидным через 6-8 часов инкубации и, несомненно, сопровождалось освобождением лактам - дегирогеназы – маркера клеточной проницаемости. Конденсация ядерного хроматина и внутринуклеосомальная сегментация были продемонстрированы окрашиванием по Hoechst и гель - электрофорезом соответственно. Таким образом, индуцируя активную смерть эндотелиальных клеток, окисленный лиопротеин низкой плотности может негативно влиять на тканевой гомеостаз эндотелия и поэтому способствовать развитию атеросклеротических бляшек [148]. Реактивные радикалы кислорода (РРК) вызывают апоптозную клеточную смерть у различных типов клеток. В клеточной стенке РРК могут продуцироваться макрофагами в атеросклеротической бляшке или могут действовать на эндотелий после адгезии моноцитов или лейкоцитов. Более того, РРК эндогенно синтезируются NAD(P)H оксидазами эндотелиальных и гладкомышечных клеток. Увеличение продукции РРК является ранним маркером процесса атерогенеза, предполагая связь между РРК и апоптозом. В эндотелиальных клетках эндогенная генерация индуцируется различными провоспалительными и проатеросклеротическими факторами, такими как ангиотензин 11, oxLDL и фактор некроза опухолей альфа, которые все вызывают программируемую клеточную смерть. Синтез РРК поэтому причинно связан с индукцией апоптоза, поскольку антиоксиданты предотвращают смерть эндотелиальных клеток. Представляется, что проапоптозные эффекты эндогенных РРК эндотелиальных клеток включают влияние на проницаемость митохондриальных мембран, что приводит к высвобождению цитохрома с, который, в конце концов, активирует каспазы. По контрасту с проапоптозной активностью РРК в эндотелиальных клетках в сосудистых гладкомышечных клетках эндогенные РРК способствуют клеточной пролиферации и гипертрофии и не влияют на клеточное выживание. Однако высокие концентрации эндогенных РРК также стимулируют апоптоз гладкомышечных клеток, как показано для других клеточных типов через активацию р53. Рассматриваемые совместно эти эффекты эндогенных РРК могут дать ключ к пониманию антиатеросклеротических эффектов антиоксидантов, выявленных в экспериментальных исследованиях: увеличение выживаемости эндотелиальных клеток в комбинации с ингибированием пролиферации гладкомышечных клеток блокирует два очень важных события в патогенезе атеросклероза [149]. Гипергомоцистеинемия представляет собой независимый фактор риска атеросклероза, но механизмы, ведущие к клеточной дисфункции, остаются неизвестными. При использовании клеток ECV304 было обнаружено, что гомоцистеин совместно с медью обладают цитотоксичными эффектами (потеря клеточной адгезии, увеличенная проницаемость для PI, появление морфологически апоптозных клеток). Эта форма апоптоза, ингибируемая Z-VAD-fmk, связана с потерей митохондриального потенциала, цитозольным освобождением цитохрома с, активацией каспазы – 3, деградацией поли (АДФ-рибоза) полимеразы и внтринуклеосомной ДНК фрагментацией. Однако способность гомоцистеина совместно с Cu2+ индуцировать апоптоз уменьшается по мере увеличения времени прединкубации. Поскольку позитивная корреляция была найдена между продолжительностью времени культивирования перед инкубацией и усилением активности гамма-глутамил транспептидазы, было интересно выяснить, участвует ли гамма - глутамил - транспептидаза в контроле над индуцированным совместным действием гомоцистеина и Cu2+ апоптозом. Поэтому ECV304 клетки обрабатывали либо ацивицином (acivicin) или дексаметазоном, ингибируя или стимулируя гамма - глутамил - транспептидазу соответственно. В ECV304 клетках и в эндотелиальных клетках пупочной вены человека ацивицин благоприятствует индуцированному совместным действием гомоцистеина и Cu2+ апоптозу, в то время как дексаметазон противодействует процессу апоптоза. Ацивицин и дексаметазон также способны модулировать клеточную смерть у ECV304 клеток, обработанными антиопухолевыми средствами. Участие гамма-глутамил-транспептидазы в контроле апоптоза не ограничивается гомоцистеином, но также затрагивает другие клеточные компоненты [150]. Таким образом, большие молекулы, такие, как липопротеины, проникают через эндотелий в основном в местах митозов или гибели клеток. Апоптоз (программируемую клеточную смерть) индуцируют активные радикалы кислорода, oxLDL, эффекторные иммунные клетки и различные провоспалительные факторы, такие, как фактор некроза опухолей. Гамма – глутамил – транспептидаза участвует в контроле апоптоза, в частности вызванным гомоцистеином. Поток LDL в артериальную стенку (в молях LDL на площадь поверхности за единицу времени) определяется двумя главными детерминантами, концентрацией LDL в плазме и проницаемостью артериальной стенки. LDL входит в артериальную стенку, как интактные частицы путем транспортировки в везикулах через эндотелиальные клетки и/или путем пассивного прохода через поры в или между эндотелиальными клетками. Оценки in vivo LDL проницаемости для нормальной артериальной стенки варьируют между 5 и 100 nl/cm2/час. У лабораторных животных местные вариации проницаемости артериальной стенки предсказывают степень развития последующего, индуцированного диетой, атеросклероза. Более того, механическое или иммунологическое повреждение артериальной стенки увеличивает LDL проницаемость и сопровождается ускоренным развитием экспериментального атеросклероза. Это подтверждает идею о том, что увеличенная проницаемость для LDL, подобно увеличенной концентрации LDL в плазме увеличивает риск атеросклероза. Гипертония, курение, генетическая предрасположенность, атеросклероз и малый размер LDL могут увеличить проницаемость артериальной стенки для LDL и тем самым увеличить риск ускоренного развития атеросклероза. Гипотеза, что риск атеросклероза может быть уменьшен путем улучшения барьерной функции артериальной стенки для LDL, открыта для исследования. Агенты, которые прямо модулируют LDL проницаемость для артериальной стенки in vivo, ждут своей идентификации [151]. Умеренно окисленные липопротерины низкой плотности (mox-LDL) участвуют в ранних атерогенных ответах эндотелия и увеличивают проницаемость эндотелия через неизвестный сигнальный механизм. Показано, что (1) в смыкающихся эндотелиальных клетках, подвергнутых воздействию mox-LDL, но не нативных LDL , в течение минут индуцируется образование актиновых стрессовых волокон и межклеточных промежутков, ведущих к увеличению эндотелиальной проницаемости; (2) moxLDL индуцирует преходящее уменьшение содержание фосфатазы в легких миозиновых цепях (ЛМЦ), которое происходит параллельно с увеличением ЛМЦ фосфорилирования ЛМЦ; (3) фосфорилированные ЛМЦ, стимулированные moxLDL, включаются в стрессовые волокна; (4) перестройка цитоскелета и фосфорилирование ЛМЦ ингибируются С3 трансферазой из Clostridium botulinum, специфическим ингибитором Rho киназ, и (5) moxLDL не увеличивают внутриклеточную концентрацию Ca(2+). Полученные данные указывают, что контракция эндотелиальных клеток осуществляется через активацию Rho и ее эффектора Rho киназу, которая ингибирует ЛМЦ фосфатазу и фосфорилирует ЛМЦ. Предполагается, что этот новый сигнальный путь mox-LDL может быть использован для предотвращения атеросклероза [152]. Микроальбуминемия связана с увеличенным риском атеросклероза у лиц с диабетом. Выдвинута гипотеза, что трансэндотелиальный обмен липопротеинами увеличен у диабетиков, что, возможно, объясняет увеличенное накопление у них липопротеинов и таким образом атеросклероз. Трансэндотелиальный обмен липопротеинов низкой плотности измерялся с использованием изотопной техники у людей. Аутологичные иодированные J -131 LDL были инъецированы внутривенно, и почасовой их выход был вычислен как индекс трансэндотелиального обмена. Не зарегистрировано разницы в трансэндотелиальном обмене между лицами с микроальбуминемией и лицами с нормоальбуминемией. По контрасту была обнаружена позитивная корреляция между трансэндотелиальным LDL обменом и концентрацией инсулина в плазме. Эта корреляция не зависела от возраста, пола, кровяного давления, концентрации липопртеинов в плазме, размера LDL, индекса массы тела, объема плазмы, использования медикаментов, и она вряд ли вызвана измененной экспрессией LDL рецепторов в печени или гликозилированием LDL. Трансэндотелиальный обмен LDL не ассоциирован с микроальбуминемией, но возможно с гиперинсулинемией [153]. Отложения липидов более часто имеют место вниз по течению крови от мест разветвления, чем вверх по течению у незрелых кроликов и в человеческой аорте, но противоположный тип наблюдается в зрелых сосудах. Эти распределения коррелирует пространственно со связанной с возрастом проницаемостью аорты у кроликов и могут определяться ими. Зрелый, но не незрелый тип проницаемости зависит от эндогенного синтеза окиси азота. Недавние исследования показали тип против течения у некоторых зрелых кроликов, но по течению у других. Показано, что транспорт у зрелых кроликов значительно уклоняется в сторону типа по течению днем по сравнению с утром, и переходит от типа по течению к типу против течения при возрасте 21 месяца у кроликов линии Murex, но при возрасте в два раза большем у кроликов линии Highgate . Эффект времени дня не объясняется образованием окиси азота, определенным по уровню нитратов и нитритов, и не коррелирует со звуком артериального канала, определенному по периферической пульсовой волне. Эффект линии не может быть объяснен изменениями образования окиси азота, а также различиями в структуре стенки. Эффект времени дня и линии кроликов на проницаемость дает полезный инструмент для исследования механизмов проницаемости и может иметь значение для изучения болезни человека [154]. Гиперхолестеринемия вызывает эндотелиальную дисфункцию, “клеймо” атеросклеротического процесса, модулируя экспрессию генов в сосудистых эндотелиальных клетках. Путем дифференциального анализа проявлений, изучался эффект высоких концентраций нативного липопротеина низкой плотности на экспрессию эндотелиальных генов. Уровни мРНК лизилоксидазы, энзима участвующего в образовании поперечных сшивок в коллагене и эластине, понижались в эндотелиальных клетках при обработке LDL в доза - зависимым и время -зависимым образами. Это уменьшение экспрессии лизилоксидазы было связано с уменьшением активности лизилоксидазы. Ингибирование активности лизилоксидазы LDL или бета-аминопропионитрилом, ингибитором лизилоксидазы, увеличивало проницаемость эндотелия. Интересно, что уменьшение экспрессии лизилоксидазы (в 3,5 раза) наблюдалось in vivo в сосудистой стенке гиперхолестеролемических свиней. Эти данные заставляют предположить, что эндотелиальная дисфункция, вызванная гиперхолестеринемией, вносит вклад в образование атеросклеротических бляшек [155]. Транспорт макромолекул, таких как липопротеины низкой плотности, через эндотелий и их аккумуляция в артериальной стенке являются ключевыми событиями в атерогенезе. Моделировался поток жидкости в сосуде и стенке суженой осесимметричной трубки, имитирующей стенозированную артерию, и затем использовался этот образец потока для изучения транспорта массы LDL из крови в артериальную стенку. Сдвоенный анализ потока крови в сосуде и трансмурального потока жидкости был проведен с помощью модели Brinkman, которая является расширением уравнений Navier-Stokes для пористой среды. Этот сдвоенный подход имеет преимущество по сравнению с традиционным анализом этой проблемы, который использует, возможно, нереалистичные граничные условия на границе кровь - сосудистая стенка; вместо этого устанавливались более естественное граничное условие давления на адвентициальной vasa vasorum и допускались вариации в проницаемости стенки, связанные с бляшкой. Численные осложнения, связанные с конвекционным доминирующим потоком массы (низкая способность к диффузии LDL) устранялись с помощью метода Petrov-Galerkin. Этот новый жидкость - плюс -поры метод применялся для условий, типичных для транспорта LDL в стенозированной артерии с 75% сокращением просвета. Результаты показали повышенную концентрацию LDL вниз по течению от стеноза. Более высокая проницаемости Darcian стенки, которая, как считают, имеет место в областях, содержащих атероматозные повреждения, ведет к увеличенному трансэндотелиальному потоку LDL вниз по течению по отношению к стенозу. Увеличенная трансмуральная фильтрация в таких областях, когда она совпадает с концентраионно - зависимой эндотелиальной проницаемостью для LDL, может вносить важный вклад в инфильтрацию LDL в артериальную стенку [156]. Было сообщено, что продукты окисления холестерина (ChOx) взывают острое сосудистое повреждение in vivo; однако фармокинетика ChOx после введения и механизмы, с помощью которых они вызывают хроническое сосудистое повреждение, пока не поняты. Для дальнейшего изучения фармакинентики и атерогенных свойств ChOx кроликам линии New Zealand White внутривенно вводили смесь ChOx, имеющей состав сходный с таковым in vivo, в течение 70 дней. Общая концентрация ChOx в плазме достигала пика почти сразу же после однократной инъекции, быстро уменьшалась и возвращалась к уровню перед инъекцией в течение 2 часов. При множественных инъекциях концентрация ChOx повышалась постепенно до концентрации в 2-3 раза превышающей базовый уровень, причем увеличение касалось в основном фракции эфиров холестерина в LDL. Сыворотка кроликов и изолированная фракция LDL, содержащие повышенные концентрации ChOx, были цитотоксичны для V79 фибробластов и эндотелиальных клеток аорты кроликов. Ко времени забоя уровни холестерина в аорте у кроликов, которым вводили ChOx, были существенно выше, несмотря на то, что уровни холестерина в плазме оставались в норме. Кроме того, аорты от кроликов, которым вводили ChOx, удерживали больше меченой 125I пероксидазы хрена, измеренной через 20 мин после инъекции. Трансмуральные концентрационные профили через артериальную стенку также показывали увеличенное накопление во внутренней половине медии из грудной аорты у кроликов, которым вводили ChOx. Таким образом, инъекции ChOx приводили к накоплению цирулирующих ChOx и индуцировали увеличенную сосудистую проницаемость и накопление липидов и макромолекул в сосудистой стенке. Даже при нормохолестеринемических условиях ChOx может вызывать эндотелиальную дисфункцию, увеличенную проницаемость для макромолекул и увеличенное накопление холестерина, что, как полагают, связано с развитием атеросклеротических повреждений [157]. Олеиновая кислота (18:1) оказывает благоприятное действие на патогенез сосудистой болезни за счет разных механизмов. Для определения прямых протективных эффектов 18:2 на сосудистые эндотелиальные клетки эндотелиальные клетки легочной артерии свиньи (ЭКЛАС) обрабатывались гамма -линоленовой кислотой (18:3) или этанолом перед обработкой LDL или CU(2+)- окисленными LDL (oxLDL). Ни обработка LDL,ни oxLDL в течение 24-48 часов не вызывали цитоксических эффектов в ЭКЛАС, в то время как oxLDL, но не LDL вызывали дезорганизацию архитектуры ЭКЛАС актиновых микрфиламентов и дисфункцию барьерного монослоя. Добавление 18:1, но не 18:3 уменьшали дезорганизацию, вызванную oxLDL и лизофосфатидилхолином, компонентом oxLDL. Таким образом, мононенасыщенные жирные кислоты могут прямо изменять ответ сосудистых эндотелиальных клеток к oxLDL и могут замедлять процесс атеросклероза путем уменьшения потока макромолекул (т.е. LDL) в сосудистую стенку [158]. Атеросклероз характеризуется фокальными областями накопления липидов и пролиферацией гладкомышечных клеток в интиме больших артерий. Было предположено, что проницаемость эндотелия по отношению к липидам является важным фактором в инициации и прогрессировании атеросклероза. Механизм, с помощью которого макромолекулы, такие, как липопротеины низкой плотности (LDL) входят в артериальную стенку, однако, еще не совсем понятен. Было показано, что существует тесная связь между динамикой популяции эндотелиальных клеток и трансэндотелиальным транспортом и транспортом макромолекул в нормальной аорте крысы. Поскольку гиперхолестеринемия является одним из основных факторов риска атеросклероза, было проведено исследование связи между митозами эндотелиальных клеток и трансэндотелиальным транспортом LDL у гиперхолестеринемических кроликов. Оно выполнялось на грудных аортах самцов кроликов линии New Zealand, которых кормили либо диетой, обогащенной холестерином, либо нормальной диетой. Концентрации холестерина и триглицеридов сыворотки в обеих группах определяли с помощью энзиматических процедур с использованием коммерческих наборов. Аорты гиперхолестеринемических и нормохолестеринемических кроликов фиксировали после внутривенной инъекции LDL, конъюгированными с Lucifer yellow (LY-LDL) для флуоресцентной микроскопии. Препараты грудных аорт, окрашенные гематоксилином, позволяли идентифицировать эндотелиальные клетки в состоянии митоза. Определялась связь между утечкой LY-LDL и митозами эндотелиальных клеток. Хотя митозы эндотелиальных клеток редки в грудной аорте New Zealand белых кроликов, но они оказались связаны с утечкой LYLDL. Проведенное исследование не только подтверждает тесную связь между митозами эндотелиальных клеток и проницаемостью для макромолекул в нормальной группе, но также демонстрирует ту же зависимость у гирерхолестеринемических кроликов. Эти наблюдения свидетельствуют в пользу теории, что кратковременные открытия соединений, окружающие эндотелиальные клетки, претерпевающие митоз, обеспечивают пути, через которые LDL входят в субэндотелиальное пространство, что приводит к накоплению липидов при атеросклерозе [159]. Таким образом, LDL проникают через эндотелий либо через поры, либо путем переноса в везикулах эндотелиальных клеток. Повреждение эндотелия увеличивает его проницаемость для LDL и способствует развитию атеросклероза. Умеренно окисленные LDL увеличивают проницаемость эндотелия. Увеличенный трансэндотелиальный обмен липопротеинов у диабетиков возможно связан с гиперинсулинемией. Трансэндотелиальный транспорт липидов у человека увеличен вниз по течению от мест разветвления артерий, а у животных (кроликов) зависит от возраста и времени дня. Уменьшение активности лизил - оксидазы, фермента, образующего поперечные сшивки в коллагене, увеличивает проницаемость эндотелия для липопротеинов, повышенная проницаемость эндотелия для липопротеинов наблюдается вниз по течению от стеноза. Продукты окисления холестерина повышают проницаемость эндотелия для липопротеинов. Эстрогены не уменьшают проницамость эндотелия для липопротеинов и их антисклеротический эффект связан с иными механизмами. Олеиновая кислота предотвращает цитотоксические эффекты и увеличение проницаемости эндотелия для липопротеинов, вызванное oxLDL. Митозы эндтелиальных клеток увеличивают трансэндотелиальный транспорт липопротеинов. Хорошо известно, что атерогенные дислипедемии либо с повышенным уровнем LDL, либо с пониженным уровнем LDL коррелируют со степенью и тяжестью атеросклероза. Однако, как это ведет к атерогенезу понятно плохо. Роль целлюлярного окислительного стресса опосредованного oxLDL завоевала широкое признание, но этот путь вряд ли является единственным атерогенным сигналом. Недавно полученные данные на артериальных гладкомышечных клетках и эндотелиальных клетках согласуются с другим путем, который может частично объяснить ранние изменения, вносящие свой вклад в инициацию клеточных атерогенных модификаций. Этот путь включает обогащение клеточной плазматической мембраны холестеролом. In vitro(клеточная культура) и in vivo (питание холестерином) экспериментах было показано, что обогащение холестерином SMS мембран SMS происходит быстро и связано с увеличением толщины бислойной мембраны, проницаемости для кальция и клеточной пролиферацией. Удаление избытка мембранного холестерина с помощью человеческих HDL восстанавливает эти изменения, заставляя предположить, что этот структурный мембранный дефект опосредует изменения в клеточной функции. In vitro увеличенная проницаемость для кальция ингибируема блокаторами кальциевых каналов, но in vivo путь утечки кальция практически не ингибируется. Не удивительно, что литература по применению блокаторов кальциевых каналов для атеропротекции не является полностью убедительной. Однако с появлением третьего поколения блокаторов кальциевых каналов возникает новая надежда. Один из первых блокаторов кальциевых каналов этого поколения амилодипин (норваск), заряженный дигидропиридин, имеет замечательный фармакологический профиль. Первое, он заметно липофилен, что позволяет ему включаться в клеточную мембрану. Второе, он обладает способностью реорганизовывать или восстанавливать разбухший мембранный бислой к нормальному состоянию в атеросклеротических SMS. Третье, он имеет сильные антиоксидантные свойства. Четвертое, он, как оказалось, ингибирует экспрессию разнообразных генов, участвующих в атерогенезе. Пятое, он является блокатором кальциевых каналов. Амилодипин продемонстрировал атеропротективные свойства на моделях атеросклероза на кроликах и приматах. Высказано предположение, что клеточные изменения, индуцированные обогащением клеточной мембраны холестерином, которые модулируют SMS в атеросклеротический фенотип, ингибируемы амилодипином за счет комбинации его различных фармакологических свойств [160]. Эндотелий выстилает все кровеносные сосуды тела и является наиболее важной коммуникационной структурой между текущей кровью, с одной стороны, и сосудистой стенкой, составленной из гладкомышечных клеток и матриксных белков, с другой стороны. Эндотелиальные клетки выделяют факторы, которые влияют на дифференцировку и рост сосудистых гладкомышечных клеток; дифференциация и последующая пролиферация сосудистых гладкомышечных клеток является ранним механизмом патогенеза хронической сосудистой болезни. Антагонисты кальция первично влияют на клеточные взаимодействия эндотелиальных клеток, гладкомышечных клеток, моноцитов и тромбоцитов, которые важны в ранние фазы развития атеросклероза. Протективный эффект антагонистов кальция на сосудистую систему представляется небольшим на позднейших стадиях, которые включают образование матрикса и центральный некроз атеросклеротической бляшки. Настоящее свидетельство указывает, что антагонисты кальция могут быть полезными орудиями профилактики на ранних стадиях развития атеросклеротических сосудистых изменений [161]. Вероятно, наиболее значительный прогресс в сердечно-сосудистой медицине в течение последних двух декад состоял в идентификации эндотелиальных клеток, как вазоактивного органа. Эндотелий играет первостепенной важности аутокринную/паракринную регуляторную роль, секретируя вещества, которые контролируют как сосудистый тонус, так и сосудистую структуру. Дисфункция эндотелия, которая характерна для эссенциальной гипертонии и большинства сердечно-сосудистых факторов риска, является основным промотором атеротромбоза и, следовательно, мишенью для сердечно-сосудистой терапии. Одним из наиболее значимых механизмов эндотелиальной дисфункции является окислительный стресс, который вызывает разрушение оксида азота (II). Клинические проявления атеросклероза могут быть преобладающим фактором в заболеваемости и смертности у больных с гипертонией. Различные клинические исследования показали благоприятные эффекты блокаторов кальциевых каналов на эндотелиальную дисфункцию. Весьма маловероятно, что потенциальный механизм, с помощью которого антагонисты кальциевых каналов выполняют свою благоприятную активность в отношении эндотелиальной дисфункции, является кальций-зависимым механизмом, поскольку эндотелиальные клетки не экспрессируют управляемых вольтажом (напряжением) кальциевых каналов. Экспериментальные данные заставляют предположить, что антогонисты кальциевых каналов оказывают антиоксидантный эффект и поэтому могут защищать эндотелиальные клетки против повреждения свободными радикалами. Нифедипин является кальциевым блокатором, который улучшает доступность окиси азота для эндотелия, является антогонистом эндотелина – 1, восстанавливает проницаемость эндотелия и отложения липопротеинов низкой плотности. Антогонисты кальция продемонстрировали антиатерогенные свойства в различных клинических исследованиях. Антогонисты кальция, дополнительно к их первичному действию по понижению кровяного давления влияют на многочисленные клеточные процессы, участвующие в раннем атеросклерозе. Все кальциевые блокаторы не оказывают одно и то же благоприятное действие на обратимость эндотелиальной дисфункции. Амилодипин, по-видимому, не так эффективен, как нифедипин для атеропротекции. Нифедипин существенно снижает риск кардиоваскулярных событий. Поэтому нифедипин (долгодействующая формула) остается блокатором первого выбора для сердечно-сосудистой терапии- сегодня и завтра [162]. Таким образом, обогащение клеточных мембран холестерином приводит к увеличению их проницаемости для кальция и увеличению клеточной пролиферации. Эндотелиальные клетки выделяют факторы, которые влияют на дифференцировку и рост сосудистых гладкомышечных клеток; дифференциация и последующая пролиферация сосудистых гладкомышечных клеток является ранним механизмом патогенеза хронической сосудистой болезни. Антагонисты кальция первично влияют на клеточные взаимодействия эндотелиальных клеток, гладкомышечных клеток, моноцитов и тромбоцитов, которые важны в ранние фазы развития атеросклероза. Различные клинические исследования показали благоприятные эффекты блокаторов кальциевых каналов на эндотелиальную дисфункцию. Однако эндотелиальные клетки не экспрессируют кальциевых каналов. Экспериментальные данные заставляют предположить, что антогонисты кальциевых каналов оказывают антиоксидантный эффект и поэтому могут защищать эндотелиальные клетки против повреждения свободными радикалами. Таким образом, многие агенты могут увеличивать проницаемость эндотелия, но, по-видимому, наибольшее значение имеют те из них, которые создают “дырки” в эндотелии, либо путем прямого цитотоксического действия, либо путем стимулирования апоптоза. |
Похожие:
 | Список основных исполнителей по Государственному контракту 14. 740. 11. 1258 от 17 июня 2011 Государственному контракту 14. 740. 11. 1258 от 17 июня 2011 на выполнение поисковых научно-исследовательских работ для государственных... |  | Список основных исполнителей по Государственному контракту 14. 740. 11. 1258 от 17 июня 2011 Государственному контракту 14. 740. 11. 1258 от 17 июня 2011 на выполнение поисковых научно-исследовательских работ для государственных... |
| Список основных исполнителей по Государственному контракту 14. 740. 11. 1258 от 17 июня 2011 Государственному контракту 14. 740. 11. 1258 от 17 июня 2011 на выполнение поисковых научно-исследовательских работ для государственных... | | Отчет о научно-исследовательской работе, выполняемой по государственному... «Разработка алгоритмов для биоинформационного анализа комплексных метаболических и молекулярно-генетических сетей» |
| Отчет о научно-исследовательской работе контракт №21/10 от «09» октября... Целью работы является исследование теоретических и практических особенностей существующих систем ротации в правоохранительных органах,... | | Отчет о научно-исследовательской работе по государственному контракту... Русский язык и культура речи: учебно-методический комплекс для студентов очной формы обучения / сост. И. А. Крым; Кузбасский институт... |
| Отчет по государственному контракту от 04. 06. 2012 №1102-01-41/06-12... ... | | Отчет о научно-исследовательской работе по теме: «Разработка научно... «Институт законодательства и сравнительного правоведения при Правительстве Российской Федерации» (ИЗиСП) |
| Отчет о научно-исследовательской работе по теме «Эффективность использования... Отчет по теме № са-12-39 «Эффективность использования отраслевых информационных систем» Минкультуры России | | Отчет о выполненной работе по Государственному контракту №12. 741.... Целью проведения работы является эффективное освоение молодыми исследователями и преподавателями лучших научных и методических отечественных... |
| Отчет №3 о научно-исследовательской работе по теме: «Грид-технологии» Разработка методов эффективного решения задач обработки, хранения, передачи и защиты информации | | Отчет о научно-исследовательской работе Гост 32-2001. Межгосударственный стандарт. Система стандартов по информации, библиотечному и издательскому делу. Отчет о научно-исследовательской... |
| Отчет о научно-исследовательской работе Межгосударственный стандарт (гост 32-2001). Отчет о научно-исследовательской работе. Структура и правила оформления (редакция 2005... | | Отчет о научно-исследовательской работе на тему: «Разработка модифицированных... «Разработка модифицированных методов выделения гуминовых веществ для получения биологических препаратов на основе вермикомпоста» |
| Общие положения отчет Отчет о научно-исследовательской работе (нир) документ, который содержит систематизированные данные о научно-исследовательской работе,... | | Отчет по Государственному контракту № «Разработка концепции создания интеллектуальной транспортной системы на автомобильных дорогах федерального значения» |
