1.1.7 ФКС – диагностические тест-системы
Клинико-биохимические анализы относятся к числу самых распространенных методов используемых для диагностики заболеваний человека. Такого рода исследования, как известно, включают общие анализы крови и мочи, изучение состава ряда других биожидкостей организма.
Не менее перспективным и многообещающим является применение наночастиц-ферментов в создании индикаторных и диагностических тест-систем (прототипов биочипов) для биологии и медицины.
В частности, если фермент катализирует какую-нибудь реакцию с изменением рН, то любой рН-чувствительный электрод, покрытый пленкой иммобилизованного фермента, будет чувствовать только то вещество, которое превращается под действием данного фермента. Есть другой путь: поместить фермент на поверхность термистора, в этом случае термодатчик будет чувствителен к реакции субстрата, сопровождающейся выделением или поглощением тепла. При использовании абсолютно специфичных ферментов можно получить абсолютно специфичные электроды, настроенные только на одно определенное вещество [1].
Биологическим материалом биосенсоров являются ферменты и высокоселективные клетки микроорганизмов. Созданные биосенсорные системы являютсяя базовыми и могут быть настроены на анализ широкого спектра сахаров и алифатических спиртов сахарозы, ксилозы, арабинозы, метилового, изопропилового спиртов и т.д., оценки качества применяемых ферментов, оценки качества дрожжевой массы.
Уже развиты быстрые клинические методы анализа на глюкозу, мочевину и ряд других компонентов.
Созданные анализаторы имеют ряд важных преимуществ. К таковым в первую очередь относится высокая специфичность и чувствительность анализа, простота его аппаратурной реализации, выполнение анализа без привлечения высококвалифицированного персонала, возможность его автоматизации и выполнения в режиме реального времени.
К упорядоченным белковым пленкам проявляется неослабевающий интерес при фундаментальных и прикладных исследованиях в ряде областей науки и техники, таких, как аналитическая биотехнология, биоэлектроника, микробиология, генетика, фармакология и т.д. К числу важнейших сфер практического применения белковых пленок относится использование таких структур в качестве активных элементов в биосенсорном приборостроении.
Тонкие пленки на основе иммобилизированных ферментов широко используется в биологии, биохимии и медицине с диагностической целью – для иммуноферментного анализа. Конструирование упорядоченных на молекулярном уровне белковых ансамблей позволяет достигать максимальной чувствительности и специфичности биосенсора благодаря высокоаффинным взаимодействиям типа лиганд/рецептор.
Кроме того, исследование адсорбированных ферментов является одним из хорошо известных методов изучения их структурной макромолекулярной организации, а также природы химических взаимодействий, лежащих в основе ферментативной активности. Применение белковых пленок позволяет моделировать отдельные этапы самоорганизации и получать информацию, важную для идентификации биосистем, находящихся как в нормальном, так и патологическом состоянии. Фундаментальное значение таких исследований обусловлено поиском ответа на вопрос, как из простейших элементов возникают сложные биологические системы.
Несмотря на многолетние усилия предпринятые для создания способов нанесения упорядоченных белковых пленок, общего и надежного метода получения упорядоченных белковых наноструктур на твердых подложках до сих пор не было предложено. Главные трудности при формировании белковых пленок на твердых подложках связаны с частичной потерей функциональной активности, нарушением конформационного строения и другими деструктивными изменениями белковых молекул. Поэтому продолжают оставаться актуальными научные исследования, направленные на дальнейшее совершенствование методов нанесения белковых пленок на подложки, а также поиск новых иммобилизующих соединений, позволяющих обеспечить создание наиболее благоприятных условий для проявления каталитической активности при высокой степени связывания и упорядочение молекул в пленке.
Одним из наиболее эффективных методов иммобилизации белков с сохранением их функциональной активности является адсорбция белков на предварительно сформированный ленгмюровский слой амфифильных соединений (липиды, полимеры), осуществляющие специфическую связь с определенными функциональными группами белковых молекул. В работе Степина Н.Д. и др. для получения упорядоченных белковых пленок на твердых подложках был использован органический полимер – ацетопивалинат целлюлозы. Ацетопивалинат целлюлозы имеет следующее строение:
[(CH3)3 COO]х ·(OH)z ·(CH3COO)y.
Количество заместителей ОН-группы (на 100 глюкозидных колец) в молекуле целлюлозы: х = 175 (пивалинат), у = 10 (ацетат), z = 115 – ( где ОН–группа обозначает оставшиеся незамещенные гидроксильные группы в полимерной цепи). Разработанный в Институте высокомолекулярных соединений РАН (Санкт-Петербург) метод синтеза ацетопивалината целлюлозы позволяет получать препарат с определенным содержанием гидроксильных групп полимерной цепи. Ацетопивалинат целлюлозы обладает улучшенными иммобилизирующими свойствами (по сравнению с другими полимерами и липидами) за счет оптимального соотношения гидрофильных и гидрофобных остатков.
Предложен способ нанесения упорядоченных белковых пленок на твердые подложки, основанный на адсорбции белковых молекул на предварительно сформированный ленгмюровский монослой природного полимера – ацетопивалината целлюлозы. Была реализована комбинация метода Ленгмюра-Блоджетт с молекулярной самосборкой. Исследования методом атомно-силовой микроскопии показали, что разработанный способ обеспечивает нанесение однородных ультратонких белковых пленок, отличающихся высокой степенью заполнения. Проведена оценка функциональной активности белковых пленок [57].
1.1.8 Инкапсулирование ферментов
Общим недостатком существующих клинико-биохимических методов качественного и количественного анализа нативных биологических жидкостей является необходимость их фракционирования. До недавнего времени эти анализы проводились с помощью химических методов, но в связи с токсичностью многих из них, низкой чувствительностью и другими недостатками, в настоящее время широкое распространение получили энзимологические методы, когда используется «свободный» фермент. Однако, наряду с явными преимуществами такого подхода есть и ряд недостатков: неоднозначность анализа в присутствии других, агрессивных к ферменту высокомолекулярных соединений, в частности, протеаз и других внутриклеточных компонентов, одноразовое использование фермента и т.д. Таким образом, появляется необходимость защитить фермент-сенсор от неблагоприятного воздействия, сохранив при этом к нему доступ субстрата. Одним из видов такой защиты нам представляется инкапсулирование ферментов в полиэлектролитные нано- и микрокапсулы (ПНМК) изготавливаемые методом поочередного наслаивания противоположно заряженных полиэлектролитов на дисперсные частицы нано- и микро размеров с последующим разрушением и удалением этих частиц.
В работе Сухорукова Б.И. [58] с соавт. описана разработка нового типа диагностикума широкого, в том числе и медицинского назначения. Основным элементом диагностикума является мультислойная полиэлектролитная нано- и микрокапсула с включенным в нее ферментом, исходным субстратом, ингибитором или активатором которого является один из компонентов анализируемой среды. По сравнению с существующими в медицине ферментативными методами анализа биожидкостей предлагаемый микродиагностикум имеет явные преимущества, поскольку инкапсулированный фермент, во-первых, сохраняет свою активность в течение нескольких месяцев, в то время как активность фермента в растворе в «свободном» состоянии падает практически до нуля через несколько дней, во-вторых, сохраняет активность в анализируемой биологической жидкости, содержащей протеиназы, исключая тем самым необходимость их удаления из анализируемой среды, в-третьих, может быть использован многократно, уменьшая тем самым расход фермента [58].
Полиэлектролитные нано- и микрокапсуы (ПНМК) относятся к изделиям новой области полимерной нанотехнологии.
Начиная с 1998 г., в литературе был опубликован ряд работ[58-60] по получению и изучению свойств полых полиэлектролитных микрокапсул с нанометровой толщиной. Такие капсулы изготавливались путем поочередного наслаивания противоположно заряженных полиэлектролитов на дисперсные частицы нано- и микроразмеров, так называемые «коры», с последующим разрушением и удалением этих частиц. Основным свойством полиэлектролитной нано- и микрокапсулы (ПНМК), определяющим как само ее получение, так и другие свойства и особенности, является полупроницаемость оболочки капсулы – проницаемость для низкомолекулярных соединений и их мелких агрегатов и непроницаемость для высокомолекулярных веществ и крупных частиц. Для получения полых ПНМК в качестве «кора» были широко использованы монодисперсные микрочастицы (0,5–10 мкм) меламинформальда (МФ), латекса (ЛТ) и SiO2. Разрушались МФ микрочастицы подкислением среды до рН 1, ЛТ частицы – органическими растворителями, а SiO2 – плавиковой кислотой. В последнее время в качестве кора стали использовать микросферолиты СаСО3, которые способны разрушаться в мягких условиях (комнатная температура, нейтральные рН в присутствии ЭДТА или небольшое подкисление среды). Это позволяло снять практически все существующие ограничения на типы полиэлектролитов, пригодных для получения мультислойных ПНМК и, что особенно важно, решить проблему загрузки ПНМК различными ферментами-сенсорами и сделать возможным создание микродиагностикума на анализ низкомолекулярных веществ в нативных биологических жидкостях и сточных водах. При использовании СаСО3 в качестве кора загрузка фермента в полиэлектролитную капсулу принципиально отличается от тех подходов, которые использовали ранее. Она состоит в том, что первоначально фермент включается в микросферолит СаСО3 , а затем уже на составном микросферолите СаСО3-фермент формируется полиэлектролитная оболочка. Принципиальным моментом в предлагаемой нами технологии получения ПНМК, содержащей фермент, является формирование оболочки лишь из селективно подобранной пары полиэлектролитов. Это связано с тем, что определенные полиэлектролиты при взаимодействии с ферментом способны его инактивировать. Поэтому технология получения ПНМК, содержащих ферменты, должна включать в себя контроль за ингибиторным действием полиэлектролитов, используемых для конструирования оболочки капсулы.
Авторами разработана технология получения содержащих ферменты полиэлектролитных нано- и микрокапсул – основных элементов ферментного микродиагностикума. Она состоит из: 1- стадии получения в качестве «кора» микросферолита СаСО3 с включенным в него ферментом; 2- стадии поочередного наслаивания селективно подобранных противоположно заряженных полиэлектролитов на частицы «кора» и формирования мультислойной оболочки; 3- стадии разрушения и удаления карбонатного компонента «кора»; 4 - стадии контроля за функциональным состоянием инкапсулированного фермента. Благодаря полупроницаемости полиэлектролитной оболочки содержащая фермент микрокапсула, помещенная в многокомпонентную среду, становится анализатором в ней низкомолекулярных веществ-субстратов, ингибиторов или активаторов фермента. В работе Шабарчиной Л.И. с соавт. функциональные свойства разрабатываемого микродиагностикума проиллюстрированы на примере работы уреазной микрокапсулы – анализатора на мочевину [59].
Еще одна работа [60] посвящена инкапсулированию белков в полиэлектролитные микрокапсулы и разработке ферментных микродиагностикумов для определения низкомолекулярных веществ в нативных биологических жидкостях. Эта задача решена на примере двух ферментов - лактатдегидрогеназы и уреазы. Для получения полиэлектролитных микрокапсул были использованы два полианиона: полистиролсульфоyат и декстрансульфат и два поликатиона - полиаллиламин и полидиаллилдиметиламмоний. При формировании полиэлектролитных микрокапсул в качестве «ядра» использованы микросферолиты карбоната кальция с включенным в них ферментом. Показано, что основной проблемой при создании полиэлектролитного микродиагностикума является подбор противоположно заряженной пары полиэлектролитов, оптимальной для активного функционирования фермента. Для лактатдегидрогеназы наилучшими полиэлектролитными парами оказались полиаллиламин/декстрансульфат и полиаллиламин/полистиролсульфонат, а для уреазы – полистиролсульфонат/полиаллиламин и полистнролсульфонат/полиди-аллилдиметиламмоний. Принимая во внимание эти данные, учеными сконструированы содержащие фермент микрокапсулы с разным полиэлектролитным составом и числом слоев и изучены их свойства.
1.1.9 Использование иммобилизованных ферментов в терапии
В лечебной практике в качестве лекарственных средств широко применяются препараты, оказывающие влияние на ферментные процессы организма. Получен ряд препаратов протеолитического действия (трипсин, химопсин и др.), специальные фибринолитические средства (фибринолизин, стрептокиназа), препараты, деполимеризующие РНК и ДНК (рибонуклеаза, дезоксирибонуклеаза), препараты, снижающие вязкость гиалуроновой кислоты (лидаза, ранидаза), и др.
Современные полиэнзимные препараты представляют собой комбинации высокоактивных ферментов растительного и животного происхождения. Эти комплексы обладают противовоспалительным, противоотечным, фибринолитическим, иммуномодулирующим и вторично обезболивающим действием. Они позитивно влияют на протекание воспалительного процесса, ограничивают патогенные проявления аутоиммунных и иммунокомплексных процессов, улучшают рассасывание гематом и отеков, нормализуют проницаемость стенок сосудов, вязкость крови и ее микроциркуляцию, питание тканей кислородом и питательными веществами, обладают некролитическим, противоотечным, противовоспалительным действием, стимулируют регенерацию тканей и др. В целом полиэнзимные препараты обеспечивают гиполипидемическое, иммунокорригирующее и антиоксидантное действие.
Все перечисленное выше весьма важно и эффективно, однако у полиэнзимных препаратов есть еще один важный аспект действенности — это то, что они ускоряют лизис токсических продуктов обмена веществ и некротизированных тканей.
Таким образом, полиэнзимные препараты обладают тремя аспектами действия:
восполнительным,
иммуномодулирующим,
детоксикационным.
Рассматривая эти три аспекта, можно разделить их на процессы, которые протекают на клеточном и гуморальном уровне за пределами ЖКТ, и процессы, протекающие внутри кишечника.
Негативными свойствами ферментов являются нестабильность в физиологических условиях, антигенность, токсичность.
Успехи современной фармакологии позволили устранить эти недостатки, создав иммобилизованные ферменты, обладающие повышенной устойчивостью к температурным факторам, изменениям рН среды. Они не токсичны, не вызывают сенсибилизацию организма.
В кишечнике ферменты могут осуществлять свое действие как в свободном так и в иммобилизированном состоянии [61-75]. Как правило, нормальная внутрикишечная деятельность ферментов возможна только в иммобилизированном состоянии. Для иммобилизации ферментов нужны специальные поверхности раздела фаз (поверхностные матрицы). Ими в реальных условиях пищеварения являются структурные поверхностные надмолекулярные фрагменты твердых конгломератов пищи и пищевых волокон. Иммобилизация ферментов, которая осуществляется путем их присоединения тем или иным способом к инертной и обычно нерастворимой полимерной матрице, — это сфера научных исследований, которая вызывает в последнее время большой интерес у исследователей, ведущих поиск в области биохимии, микробиологии, диетологии, гастроэнтерологии.
Суть биохимического действия ферментов заключается в катализе определенных биохимических и химических реакций [61, 63]. Сегодня достоверно установлено, что, находясь в иммобилизированном состоянии на поверхности твердых структурированных матриц, ферменты усиливают каталитическое действие и повышают активность. Они также продлевают период собственной активности и способны проявлять биохимическое и каталитическое действие в более агрессивных средах и более жестких условиях. Это явление связано с защитным и конформационно-ориентирующим действием иммобилизирующих матриц на ферменты. Разворачиваясь при иммобилизации на матрице из глобулярных структур в линейные, ферменты проявляют максимум каталитической активности.
Углеродные структурированные активированные микроволокна современных углеволокнистых энтеросорбентов способны проявлять в отношении энзимов универсальное бифакторное действие. Во-первых, они являются эффективными матрицами для иммобилизации ферментов, во-вторых — субстанциями, способными к поглощению большого спектра токсических веществ, выделяющихся в просвет кишечника в результате прямого каталитического действия энзимов внутри и за его пределами.
Рассмотрим более подробно первый фактор. Углеродные микроволокна современных углеволокнистых энтеросорбентов — это пористые углеродные субстанции с диаметром волокнистых частиц 6—8 мкм и длиной 50—300 мкм [62]. Они содержат на своей углеродной поверхности функциональные кислородсодержащие группы и способны осуществлять иммобилизацию энзимов по всем известным механизмам адсорбции (физико-химическому, электростатическому, комплексообразующему, ионообменному). Помимо этого надмолекулярная структура углеродных микроволокон обладает высокой структурной ориентацией и кристалличностью, что обеспечивает пространственную однонаправленность иммобилизированных макромолекул энзимов, высокие коэффициенты их развернутости в линейные структуры и, как следствие, обеспечивают максимальную степень их каталитической активности.
Рисунок 23 – Схема, показывающая влияние конформационно ориентирующего растяжения на активность ферментов, иммобилизированных на углеродных микроволокнах.
На рисунке 23 показано влияние ориентирующей иммобилизации и “растяжения” молекул фермента на их каталитическую активность. Из рисунка видно, что в неиммобилизированном состоянии многие активные центры фермента имеют стерические барьеры для подхода ингибиторов, а в иммобилизированном состоянии таких стерических затруднений нет. В литературе [63] имеются данные о том, что ориентированная иммобилизация ферментов увеличивает активность ферментов в несколько раз.
В научной литературе 80—90-х годов имеются сведения о попытках создания специальных комбинированных энтеросорбентов на основе углеродных микроволокон и ферментов [64]. Это, в частности, известный препарат энтеросорбент Панзисорб. Доклинические и клинические исследования показали высокую эффективность этого препарата, обусловленную иммобилизированными на микроволокнах его субстанции полиферментными комплексами [64].
Описывая действие ферментных препаратов, которое протекает на клеточном и гуморальном уровне за пределами ЖКТ, необходимо остановиться, в первую очередь, на использовании их в хирургии.
β-гиалуронидаза, иммобилизованная методом включения в биоразлагаемые полимерные пленки, может использоваться для формирования раневых покрытий с заранее заданными свойствами. При создании «биогиалуронидазной пленки» фермент β-гиалуронидазу иммобилизовали в пленки на основе метилцеллюлозы с добавлением желатина и глицерина в качестве пластификатора. Активность фермента – 100 % [73, 76].
На собственном материале хирургического лечения 154 больных с инфекционным эндокардитом врачами Межобластного кардиохирургического центра г. Иркутска предложен и обоснован оригинальный метод внутрисердечной санации очагов инфекции с применением препарата бактериальных протеиназ, иммобилизованных на полимерных носителях.
Экспериментальные исследования показали, что микробы, погруженные в фибрин, становятся недосягаемыми для лейкоцитов, а скорость их роста остается такой же, как и при культивировании на искусственных питательных средах в идеальных условиях инкубации. Нами разработана и внедрена методика полного удаления микроорганизмов из зоны имплантации клапанов сердца при хирургическом лечении активного инфекционного эндокардита. После визуального адекватного удаления фрагментов клапана и вегетаций, микрофлора, вызывающая процесс, как правило, оставалась на фиброзном кольце и подлежащих структурах сердца, которые в послеоперационном периоде, при определенных условиях, могут вызвать рецидив болезни с развитием протезного эндокардита. Это подтверждено нами при исследовании мазков-отпечатков взятых непосредственно после иссечения клапана на операционном столе. Промывание полостей сердца, обработка фиброзного кольца антисептиками не решают проблему, т.к. оставшиеся колонии микробов защищены оболочкой из организованного фибрина [77, 78].
Обосновывая данную концепцию, внимание привлекли препараты бактериальных протеиназ, иммобилизованных на полимерных носителях. В последние годы показано, что денатурированные белковые субстраты, непременно присутствующие в очаге гнойно-некротического процесса, являются средой вегетации возбудителей и источником перманентного реинфицирования. В этих структурах, являющихся «резервом нагноения», содержится на 1-2 порядка больше микроорганизмов, чем в гнойном экссудате[79].
Применение ферментов, иммобилизованных на биологически совместимых носителях по методике Желтовского Ю.В. с соавт. [80], позволило реализовать идею лизиса девитализированных тканей, фибрина – защитного барьера и среды вегетации различных микроорганизмов. Эти препараты, сохранив известные протеолитические свойства, обладают повышенной устойчивостью к изменениям рН, температурным факторам, не вызывают аллергизации организма, совместимы с большинством антибактериальных препаратов, оказывая синэргическиий эффект [81].
Один из них - имозимаза представляет собой продукт радиационно-химической сшивки протосубтилина и водорастворимой матрицы – полиэтиленоксида [82]. Многолетний опыт применения имозимазы в хирургии показал, что они не имеют побочных эффектов в виде аллергических реакций и токсического воздействия на организм продуктов протеолиза [83].
С целью определения минимального времени экспозиции воздействия имозимазы на девитализированные ткани авторами был проведен эксперимент in vitro. Удаленные во время операции фрагменты клапана с вегетациями подвергались тотчас же обработке стандартным раствором имозимазы. Выявлено, что уже через 5 минут уменьшается масса фибрина и форменных элементов крови, «открываются» колонии микробов. Поскольку имозимаза не действует на живые микроорганизмы, то возникает необходимость для их уничтожения обработкой антисептиком.
Предложенный метод химической санации камер сердца с использованием иммобилизованных ферментов является обоснованным, простым, доступным и эффективным для профилактики специфических осложнений при хирургическом лечении ИЭ.
Проведение в последние годы целого комплекса мероприятий по профилактике осложнений кариеса зубов не снизило актуальности этой проблемы, частота обращаемости больных с пульпитом в стоматологические учреждения остается высокой и достигает 30 % от общего количества.
Одним из перспективных направлений в этой области является использование ферментных препаратов.
Полученные Аброковой М.Ф. положительные результаты применения иммобилизированных ферментов имеют практическую ценность для работы стоматолога, т.к. позволяют повысить эффективность лечения глубокого кариеса и инициального пульпита и уменьшить количество осложнений, возникающих в ближайшие и отдаленные сроки. Общедоступность, техническая простота исполнения и минимальная механическая инвазия в твердые ткани зубов дает возможность широкого использования метода лечения в детской и взрослой стоматологической практике [84].
Достаточно широко используются иммобилизированные ферменты и в ветеринарии. Проведены исследования действия иммобилизованного протеолитического фермента иммозима (ИМ) при асептическом артрите у телок. Общая протеолитическая активность (ОПА) синовиальной жидкости при артрите составила 0,5 мкмоль. После извлечения экссудата из пораженных суставов в полость суставных капсул был инъецирован ИМ в дозе 2 мл. Через 3, 6, 12, 24 ч ОПА составляла соответственно 0,33; 0,43; 0,41; 0,31 мкмоль. Анализ показал, что ОПА при применении ИМ повышается к 6 ч от момента введения, затем понижается к 24 ч. Это позволяет определить кратность применения ИМ, она не должна превышать одной в течение 24 ч. ОПА сыворотки крови пришла через 24 ч к изначальной величине с момента инъецирования ИМ в полость пораженных суставов. Анализ результатов по общему белку пунктата полости сустава при асептическом артрите показал, что его количество повышается через 3 и 6 ч от начала исследований; максимальная величина приходится на 12 ч от начала введения ИМ, а затем происходит снижение его уровня. Та же картина наблюдалась при анализе соотношений белковых фракций: альбумина, альфа-, бета- и гамма-глобулинов [85].
Иммозим (ИМ) - иммобилизованный протеолитический фермент, применяли при лечении асептического артрита путового и пястного суставов у телок, вызванного раствором натрия хлорида. Изучали влияние ИМ на морфологические и биохимические показатели крови. У животных брали пробы крови на 2-е сут развития асептического артрита, а затем через 3, 6, 12 и 24 ч после введения ИМ в полости суставов. Содержание гемоглобина в крови до начала опыта составляло 107,0 г/л, после введения ИМ - 105,0-107,0 г/л. Количество эритроцитов до введения ИМ и спустя 24 ч изменялось незначительно, количество лейкоцитов увеличивалось. Содержание базофилов на протяжении срока исследований не изменялось. Содержание эозинофилов после применения ИМ незначительно понижалось. Доля моноцитов и лимфоцитов были практически постоянными. Процент юных нейтрофилов повысился с 0,5 до 0,6. Содержание палочкоядерных нейтрофилов имело тенденцию к волнообразному изменению. Количество сегментоядерных нейтрофилов повысилось с 21,6 % до 24,7 %. Белковый состав крови после применения ИМ изменялся незначительно. Таким образом, применение ИМ при лечении телок с серозным артритом не оказывает существенного влияния на показатели крови [86].
При лечении гнойной формы мастита коров испытывали различные лечебные препараты. Для этого в ряде хозяйств Молдовы отобрали 3 группы животных с подострой формой течения гнойного мастита. Коров первой группы лечили путем интрацистернального введения 3%-го водного раствора ихтиола в пораженную четверть в дозе 25 мл с интервалом 24 ч. Животным второй группы через сосковый канал пораженной четверти вводили смесь антибиотиков - пенициллин + стрептомицин по 500 тыс. ЕД дважды в день. Животных третьей группы лечили путем интрацистернального введения иммобилизованного протеолитического фермента в дозе 10 мл с интервалом 24 ч. Средняя продолжительность лечения в первой группе 14,1 дня, а выздоровление наступило у 70% животных. Продолжительность лечения коров путем интрацистернального введения антибиотиков составляла 20 дн. при 100% выздоровлении. Наибольшей эффективностью при лечении коров с гнойно-катаральной формой мастита обладал иммобилизованный протеолитический фермент - продолжительность лечения 3 дня при 100% выздоровлении [87].
Экспериментальными исследованиями, проведенными на 18 клинически здоровых бычках черно-пестрой породы, установлено, что аппликации на раны профезима с канамицином способствуют интенсивному протеолизу некротизированных тканей ран. Наблюдается противоотечное, противовоспалительное и стимулирующее рост грануляционной ткани действие профезима. Аппликации ран линиментом Вишневского в фазу дегидратации стимулируют рост и созревание грануляций, способствуют эпителизации и рубцевания ран на 7-8 дн. раньше на фоне применения в фазу гидратации раневого процесса профезима с канамицином по сравнению с применением в эту фазу 10%-ного раствора хлорида натрия [88]. |
