Научно-технический бюллетень лаборатории ихтиологии ИНЭНКО. № 9. СПб. 2005. С.29-33. УДК 639.31 + 591.147.4 + 591.463.1
Подушка С.Б. ТЕСТИРОВАНИЕ ПЕРЕДНЕЙ И ЗАДНЕЙ ДОЛЕЙ ГИПОФИЗА САЗАНА НА САМЦАХ СТЕРЛЯДИ
В экспериментальных работах по тестированию гипофизов сазана Cyprinus carpio (Казанский, Персов, 1948) и севрюги Acipenser stellatus (Баранникова, 1949) было показано, что гормоны, вызывающие созревание и овуляцию икры у самок и спермиацию у самцов, содержатся в передней доле гипофизов этих рыб. При гипофизарных инъекциях производителям вводятся не только гонадотропные, но и другие гормоны, которые могут вызывать ряд нежелательных побочных эффектов (Гарлов, 1972; Бурлаков, 1978). Избавиться от негативных последствий инъекций суспензии гипофизов можно различными путями: применением очищенных гонадотропных гормонов (Баранникова и др., 1981), использованием гонадотропин-рилизинг гормонов и их аналогов (Гончаров, 1985; Баранникова и др., 1989) и др. Одним из путей частичного решения данной проблемы П.Е.Гарлов и соавторы (Гарлов, 1979; Гарлов и др., 1987) считают механическое разделение гипофизов на переднюю и заднюю доли. При этом самкам вводится препарат, изготавливаемый из изолированной передней доли гипофиза (ИПД), свободный от значительной части нежелательных и балластных факторов, содержащихся в задней доле. Заднюю долю (ЗДГ) гипофиза было предложено использовать для стимуляции спермиации у самцов рыб (Гарлов и др., 1985). Однако попытка тестировать препараты ЗДГ на самцах бесхвостых амфибий оказалась безуспешной. Задняя доля гипофизов сазана, в отличие от передней, при широком диапазоне испытанных дозировок не вызывала реакцию спермиации у традиционно используемого в рыбоводстве тест-объекта – самцов озерной лягушки Rana ridibunda (Подушка, Куриличев, 1987). Поэтому представляло интерес провести тестирование на каком-либо другом объекте.
В опытах использовали ацетонированные гипофизы сазана, заготовленные весной 2000 г. в г. Астрахани. Разделение передней и задней долей гипофиза производили по методике, описанной в работе Б.Н.Казанского и Г.М.Персова (1948). Средняя относительная масса ЗДГ составила 22% от массы целого гипофиза. Тестирование проводили на самцах стерляди Acipenser ruthenus зимой 2002 г. в Кармановском рыбхозе. Рыб перевозили из садковой линии (температура воды 6°С) в бассейны инкубационного цеха, и в течение суток поднимали температуру воды до нерестовых значений (13-16°С). Необходимые дозы ЗДГ и ИПД отвешивали на торсионных весах и растирали пестиком в фарфоровой ступке. Из полученного порошка делали суспензию на дистиллированной воде. Различные концентрации суспензии получали путем последовательных разбавлений. Препарат инъецировали в мышцы спины. Средняя масса использованных самцов стерляди равнялась 1,0 кг. Реакцию рыб оценивали через 12 и 24 часа после введения препарата. Результат считали нулевым, если самцы при изгибании тела и массировании брюшка не давали сперму или давали прозрачную жидкость, не содержащую сперматозоидов. Отреагировавшие на препарат самцы выделяли семенную жидкость со сперматозоидами. Определяли объем и степень мутности сцеженной жидкости. Мутность, характеризующую концентрацию сперматозоидов, оценивали в баллах по следующей шкале: 1 – жидкость имеет цвет сильно разбавленного молока; 2 – жидкость имеет цвет разбавленного молока; 3 – жидкость имеет цвет цельного молока. Средний объем и средний балл мутности семенной жидкости в каждом варианте опытов определяли в расчете на число положительно отреагировавших на инъекцию рыб.
В табл.1 и 2 приведены результаты тестирования ИПД и ЗДГ гипофиза сазана на самцах стерляди. Анализ данных этих таблиц показывает, что, как передняя, так и задняя доля гипофиза сазана стимулировали спермиацию у самцов стерляди, однако в их действии наблюдались определенные различия. Реакция самцов стерляди на инъекцию препарата ЗДГ, по сравнению с реакцией на ИПД, носила несколько обедненный характер: спермиация наблюдалась не у всех рыб, запаздывала во времени, животные выделяли меньшее по объему количество семенной жидкости с более низкой концентрацией сперматозоидов. Наблюдалась тенденция к усилению реакции с возрастанием дозы вводимого препарата. Скорее всего, отмеченные различия обусловлены различными механизмами действия ИПД и ЗДГ на самцов рыб. Таблица 1
Результаты тестирования ИПД гипофиза сазана на самцах стерляди
Доза ИПД, мг на рыбу
| Результаты созревания через 12 часов после инъекции
| Результаты созревания через 24 часа после инъекции
| Число рыб
| Количество рыб, давших семенную жидкость, %
| Средний объем семенной жидкости, мл
| Средняя мутность
семенной жидкости, баллы
| Количество рыб, давших семенную жидкость, %
| Средний объем семенной жидкости, мл
| Средняя мутность
семенной жидкости, баллы
| 0,25
| 100
| 2,7
| 1,3
| 100
| 6,7
| 1,7
| 3
| 0,5
| 100
| 9,3
| 2,3
| 100
| 14,7
| 3,0
| 3
| 4,0
| 100
| 8,0
| 2,3
| 100
| 13,3
| 2,3
| 3
|
Таблица 2
Результаты тестирования 3ДГ гипофиза сазана на самцах стерляди
Доза 3ДГ, мг на рыбу
| Результаты созревания через 12 часов после инъекции
| Результаты созревания через 24 часа после инъекции
| Число рыб
| Количество рыб, давших семенную жидкость, %
| Средний объем семенной жидкости, мл
| Средняя мутность
семенной жидкости, баллы
| Количество рыб, давших семенную жидкость, %
| Средний объем семенной жидкости, мл
| Средняя мутность
семенной жидкости, баллы
| 0,5
| 12,5
| 1,0
| 1,0
| 62,5
| 1,9
| 1,0
| 8
| 1,0
| 25,0
| 3,0
| 1,5
| 50,0
| 1,6
| 1,0
| 8
| 2,0
| 37,5
| 3,3
| 1,7
| 62,5
| 4,8
| 1,8
| 8
| 4,0
| 16,7
| 1,0
| 2,0
| 83,3
| 6,4
| 2,0
| 6
| 7,6
| 0
| –
| –
| 100,0
| 5,0
| 1,7
| 3
|
Проведенные опыты подтверждают данные о возможности использования ЗДГ для стимуляции спермиации у рыб (Гарлов и др., 1985). Следует констатировать отсутствие строгой таксономической специфичности присутствующего в ЗДГ фактора, стимулирующего спермиацию: препарат ЗДГ из сазаньего гипофиза (сем. Карповые) оказался эффективным для стимуляции спермиации у рыб семейства Осетровых. Действующим началом в ЗДГ при стимуляции спермиации у рыб, по-видимому, не могут быть ни гонадотропные гормоны, ни гонадотропин-рилизинг гормоны, поскольку предыдущие опыты показали, что самцы озерной лягушки, достаточно чувствительные и к тем, и к другим препаратам, на препараты ЗДГ рыб не реагируют (Подушка, Куриличев, 1987; Подушка и др., 1988). Литература
Баранникова И.А. 1949. Локализация гонадотропной функции в гипофизе севрюги (Acipenser stellatus) // Доклады АН СССР. Т.69. № 1. С.117-120.
Баранникова И.А., Боев А.А., Буковская О.С. и др. 1989. Анализ созревания русского осетра Acipenser gueldenstaedti под действием люлиберина в связи с возможностью использования этого препарата в рыбоводстве // Вопросы ихтиологии. Т. 29. Вып. 3. С.439-447.
Баранникова И.А., Боев А.А., Зенкевич Г.А. и др. 1981. Результаты использования очищенного гонадотропина осетровых по сравнению с другими гипофизарными препаратами для стимуляции созревания самок русского осетра Acipenser gueldenstaedti Brandt // Вопросы ихтиологии. Т. 21. Вып. 4. С.719-725.
Бурлаков А.Б. 1978. Влияние гипофизарных инъекций на активность и изоферментный состав малатдегидрогеназы в некоторых тканях самок белого толстолобика // Вопросы ихтиологии. Т. 18. Вып. 6. С.1110-1117.
Гарлов П.Е. 1972. О регуляторном влиянии гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы осетровых на эндокринные железы и перспективы использования этого явления в рыбоводстве // Тезисы отчетной сессии ЦНИОРХа. Астрахань. С.39-40.
Гарлов П.Е. 1979. Первый опыт экспериментально-производственного использования инъекций изолированной передней доли гипофиза в осетроводстве // Осетровое хозяйство внутренних водоемов СССР. Тезисы и рефераты II Всесоюзного совещания. Астрахань: ЦНИОРХ. С.53-54.
Гарлов П.Е., Алтуфьев Ю.В., Поленов А.Л., Дубовская А.В. 1987. Результаты использования препарата изолированной передней доли гипофиза для стимуляции созревания самок русского осетра Acipenser gueldenstaedti и севрюги Acipenser stellatus // Вопросы ихтиологии. Т. 27. Вып. 5. С. 844-851.
Гарлов П.Е., Поленов А.Л., Алтуфьев Ю.В. и др. 1985. Способ стимуляции полового созревания самцов рыб. Авторское свидетельство СССР № 1163817 // Бюллетень Госкомизобретений и открытий. N 24, С. 5.
Гончаров Б.Ф. 1985. Перспективы использования синтетических аналогов люлиберина для получения зрелых половых продуктов от производителей осетровых рыб // VI Всесоюзная конф. по экологической физиологии и биохимии рыб. Тезисы докладов. Вильнюс. С.384-385.
Казанский Б.Н., Персов Г.М. 1948. Локализация гонадотропного фактора в гипофизе костистых // Доклады АН СССР. Т.61. № 1. С.169-172.
Подушка С.Б., Куриличев С.Н. 1987. Тестирование передней и задней долей гипофизов сазана и осетровых на самцах озерной лягушки // Сборник научных трудов ГосНИОРХ. № 262. С.63-65.
Подушка С.Б., Куриличев С.Н., Николаев С.В. 1988. Использование самцов озерной лягушки для тестирования синтетических аналогов люлиберина // Сборник научных трудов ГосНИОРХ. № 281. С.138-140.
|