Методические указания для обучающихся по дисциплине «Микробиология, вирусология»

5.2. Основные понятия и положения темы.

Клиническая микробиология как раздел медицинской микробиологии решает две основные задачи: этиологическую диагностику инфекционного заболевания и рациональный выбор средств этиотропной терапии.

Основным методом микробиологической диагностики, позволяющим решить эти задачи, является бактериологический метод. Суть бактериологического метода заключается в выделении чистой культуры возбудителя, определение его вида и чувствительности к антимикробным препаратам.

Выбор исследуемого материала зависит от вида заболевания и преимущественной локализации возбудителя на определенном этапе его развития (патогенеза). Материалом может служить кровь, ликвор, раневое отделяемое, мокрота, испражнения, моча и т. д. Техника забора материала имеет большое значение в получении достоверного результата.

Успех выделения чистой культуры определяется правильностью выбора питательной среды и условий культивирования. Универсальной питательной среды, использование которой позволит выделить любые микроорганизмы из любого исследуемого материала, не существует. Поэтому с учетом физиологических особенностей возможных возбудителей заболевания производится посев материала на определенную питательную среду или комплекс питательных сред (специальные, элективные, дифференциально-диагностические). Для некоторых микроорганизмов требуются и особые условия культивирования (анаэробные, микроаэрофильные, с повышенным содержанием углекислоты).

Патологический материал от больного часто представляет смесь микроорганизмов. В этой связи задачей является их разобщение и получение изолированных колоний. Изолированная колония, как результат размножения одной микробной клетки и состоящая из одного вида клеток, является основой для получения чистой культуры. В микробиологической практике используют различные методы получения изолированных колоний. Наиболее чаще используются следующие:

1. 
   Посев исследуемого материала методом «штрих с площадкой» – исследуемый материал наносят на поверхность плотной питательной среды на ограниченном участке, а затем распределяют путем посева частыми параллельными штрихами.
   
2. 
   Метод Дригальского – материал, внесенный на первую чашку с питательной средой и посеянный с помощью шпателя, последовательно засевают тем же шпателем, не стерилизуя его, еще на 1-2 чашки.
   

Метод секторных посевов – исследуемый материал одной петлей засевают последовательно на несколько секторов. При этом определенная техника посева (метод Gould) позволяет не только получить изолированные колонии, но и определить количество микроорганизмов в 1 мл (г) исследуемого материала, что имеет значение при оценке этиологической роли условно-патогенных микроорганизмов (УПМ).

5.3. Самостоятельная работа по теме:

1. 
   Ознакомиться с приборами, используемыми для стерилизации в медицинской и микробиологической практике: паровой стерилизатор (автоклав), печь Пастера.
   
2. 
   Выбрать приборы и режимы стерилизации питательных сред, лабораторной посуды, медицинского инструментария.
   
3. 
   Ознакомиться с дезинфектантами, используемыми в медицинской и микробиологической практике. Выбрать дезинфектанты и режим дезинфекции для предлагаемых объектов.
   
4. 
   Ознакомиться с различными питательными средами, применяемыми в микробиологической практике, дать их характеристику по составу, консистенции, назначению.
   
5. 
   Провести 1 этап бак. метода выделения аэробов на примере определения бактерионосительства золотистого стафилококка у студентов.
   

5.1. Взять тампоном мазок из носа (при наличии воспалительных процессов – также из зева).

5.2. Посеять исследуемый материал методом «штрих с площадкой».

6. Ознакомиться с набором средств для взятия и транспортировки патологических материалов.
Методические указания к выполнению исследовательского задания:

1. 
   Знакомство с приборами, используемыми для стерилизации: паровой стерилизатор (автоклав), печь Пастера.
   
   1. 
      Паровой стерилизатор (автоклав) - стерилизация паром под давлением.
      

Наиболее надежным и универсальным методом стерилизации в медицинской и микробиологической практике является стерилизация паром под давлением. Производят ее в автоклаве, в котором стерилизуемые объекты нагревают насыщенным паром под давлением выше атмосферного. Между показаниями манометра и температурой насыщенного пара имеется следующая зависимость:

Давление (атм)	Температура ( ° С)
0,0	100
0,5	112
1,0	121
1,5	127
2,0	132

Нулевым давлением считают нормальное атмосферное давление (760 мм рт. ст.).

Стерилизация достигается только при полной исправности автоклава и правильной его эксплуатации специально обученным персоналом. Поэтому необходим постоянный контроль за режимом стерилизации, который производится физическим (термометр максимальный и др.), биологическим (биотест со спорами тест-культур микроорганизмов) и химическим (химические тесты, индикаторы типа ИС) способами.

Контроль режима стерилизации автоклавов проводят химическим способом при каждой загрузке автоклава. Химический тест – стеклянная трубочка с химическим веществом, имеющим определенную температуру плавления: антипирин, резорцин - 110±1°, бензойная кислота - 120±2°, бензамид - 126±1°, мочевина, никотинамид, Д (+)-манноза - 132±2°. В состав химических тестов вводят анилиновый краситель (фуксин, генцианвиолет и др.), который равномерно окрашивает вещество при его расплавлении. В настоящее время чаще используются индикаторы типа ИС (фирма «Винар», Россия), представляющие полоску бумаги с нанесенным на нее слоем индикаторной смеси и предназначенные для оперативного визуального контроля не только температуры, но и времени стерилизации (ИС-120, ИС-132). Ежеквартально проводится контроль режима стерилизации с использованием биотеста со спорами тест-культуры Bacillus stearotermophilus BKM B-718.

1.2. Печь Пастера – стерилизация сухим жаром.

В печи Пастера стерилизуют изделия из стекла, металлов и резин на основе силиконового каучука. Режим стерилизации: 160°С – 150 мин; 180°С – 60 мин. Контроль режима стерилизации при каждом цикле осуществляется с помощью индикаторов стерилизации ИС-160, ИС-180; ежеквартально - с использованием биотеста со спорами тест-культуры Bacillus licheniformis шт. G BKM B-1711 Д.

2. 
   Заполнить дома таблицу №1.
   

Таблица 1.

Стерилизация

№ пп	Объект	Приборы	Режим
1.	Питательные среды: МПА; Гисса
2.	Лабораторная посуда
3.	Шприцы (пометка 200°)
4.	Хирургические, гинекологические, инструменты из коррозионностойких металлов
5.	Перевязочный и шовный материал, хирургическое белье
6.	Перчатки

3. Ознакомиться с дезинфектантами и заполнить на занятии таблицу №2, используя приложения №1, 2.

Таблица 2.

Дезинфекция

№ пп	Объект	Дезинфектант	Режим дезинфекции		Способ обработки
			Концентрация р-ра, %	Время (мин)
1.	Рабочий стол
2.	Халаты, шапочки
3.	Мазки
4.	Руки
5.	Фонендоскоп

4. Ознакомиться с питательными средами и заполнить на занятии таблицу №3 «Питательные среды».
Таблица 3.

№ пп	Название питательной среды	Классификация
		по составу	по консистенции	по назначению
1.
2.
3.
4.
5.

5. Проведение 1 этапа бактериологического метода выделения аэробов:

6. Средства для взятия и доставки патологического материала.

Одной из мер профилактики внутрибольничных инфекций в ЛПУ является выявление носителей золотистого стафилококка среди медицинского и обслуживающего персонала с последующей санацией.

При проведении бактериологического обследования обязательным является исследование слизи из передних отделов носа; исследование слизи из зева проводят выборочно, прежде всего, при наличии воспалительных процессов в зеве.

2.1. Забор материала из передних отделов носа осуществляется одним стерильным сухим ватным тампоном, который сначала вводят в один, а потом в другой носовой ход, не касаясь крыльев носа снаружи.

2.2. Посев исследуемого материала на 1/2 чашки Петри с желточно-солевым агаром (ЖСА) - элективной средой для выделения стафилококков проводят не позже 2-х часов после его забора.

При посеве методом "штрих с площадкой" исследуемый материал втирают в среду со всех сторон тампона на участке площадью 2 х 1 см. Затем этим же тампоном засевают оставшуюся поверхность 1/2 чашки. Посев производят частыми параллельными штрихами, не меняя положение тампона. Такой метод позволяет засеять весь материал с тампона и получить изолированные колонии. Засеянные чашки инкубируют 24 ч. при 37° С, а затем 24 ч. при комнатной t°. Посев следует производить на чашки с ЖСА, согретые при комнатной t° или в термостате (15-20 мин).

№ пп	Средства	Патологический материал
1.	Шприцы	Кровь, гной, экссудаты
2.	Стерильные ватные тампоны	Отделяемое из ран, мазки со слизистых оболочек, из глаза, уха, носа, зева, цервикального канала, влагалища
3.	Контейнеры, лабораторная посуда	Мокрота, моча, кал
4.	Транспортные среды*	Для различного патологического материала

Примечание:* - используют в случае, если сроки доставки материала в лабораторию после его получения превышают 1,5-2 ч.
5.4. Итоговый контроль знаний:

• 
  ответы на вопросы по теме занятия
  

1. 
   Бактериостатическое и бактерицидное действие низких и высоких температур на микроорганизмы.
   
2. 
   Влияние химических веществ различных классов на микроорганизмы. Антисептики и дезинфектанты.
   
3. 
   Понятия: стерилизация, дезинфекция, асептика, антисептика.
   
4. 
   Методы, аппаратура и режимы стерилизации, их выбор в зависимости от свойств стерилизуемого объекта.
   
5. 
   Основные группы дезинфектантов и тактика их применения в ЛПУ.
   
6. 
   Принципы и методы культивирования микроорганизмов.
   
7. 
   Питательные среды: понятие; требования, предъявляемые к ним; классификация.
   
8. 
   Понятие о виде, штамме, колонии, чистой культуре микроорганизмов.
   
9. 
   Сущность бактериологического метода и области его применения.
   
10. 
    Цель и последовательность выполнения 1 этапа бактериологического метода выделения аэробов.
    

• 
  решение ситуационных задач, тестовых заданий по теме.
  

ЗАДАЧА №1. Назовите фактор, оказывающий антимикробное действие при автоклавировании.

ЗАДАЧА №2. Какими способами можно проверить эффективность стерилизации?

ЗАДАЧА №3. Можно ли приготовить универсальную питательную среду, на которой росли бы, если не все, то большинство микроорганизмов?

ЗАДАЧА №4. В бактериологическую лабораторию поступил исследуемый материал (мазок из носа) хирурга, работающего в ОРИТ.

1. 
   С какой целью доставлен исследуемый материал в бактериологическую лабораторию?
   
2. 
   С какой целью проводится обследование сотрудников ОРИТ на носительство золотистого стафилококка.
   

6. Домашнее задание для уяснения темы занятия (контрольные вопросы по теме занятия)

1. 
   Назовите и обоснуйте принципы культивирования микроорганизмов.
   
2. 
   Почему при посеве патологического материала используются элективные, дифференциально-диагностические среды и среды накопления.
   
3. 
   Обоснуйте принцип получения чистых культур микроорганизмов.
   
4. 
   Почему бактериологический метод является «золотым стандартом» в микробиологической диагностике инфекционных заболеваний?
   
5. 
   На чем основаны химические и биологические способы получения чистых культур микроорганизмов?
   
6. 
   В чем состоит отличие стерилизации от дезинфекции?
   
7. 
   Обоснуйте назначение стерилизации и дезинфекции в микробиологической и медицинской практике.
   
8. 
   Обоснуйте преимущество использования термоиндикаторных систем при контроле режима стерилизации (на примере индикатора ИС фирмы «Винар», Россия).
   

7. Рекомендации по выполнению НИРС, в том числе список тем, предлагаемых кафедрой.

Темы рефератов:

1. 
   Роберт Кох - выдающийся учёный «золотого века» микробиологии.
   
2. 
   Области применения бактериологического метода в медицине.
   
3. 
   Стерилизация, дезинфекция в ЛПУ.
   

8. Рекомендованная литература по теме занятия:

Обязательная:

1. 
   Поздеев, О. К. Медицинская микробиология: учеб. пособие / О.К. Поздеев – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. – 768 с.
   

Дополнительная:

1. 
   Ярилин, А.А. Имунология: учебник / А.А. Ярилин – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 752 с.
   
2. 
   Гиллеспи, С.Х. Наглядные инфекционные болезни и микробиология / С.Х. Гиллеспи, К.Б. Бамфорд – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 136 с.
   
3. 
   Хаитов, Р.М. Иммунология: учебник / Р.М. Хаитов – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 528 с.
   
4. 
   Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: 1 т.: учебник / ред. В.В. Зверев [и др.] – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.- 448 с.
   
5. 
   Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: 2 т.: учебник / ред. В.В. Зверев [и др.] – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.- 477 с.