Глава 1 Исследование изменения апоптозной активности (исследование уровня лигандов апоптоза sFAS, ФНОα, ИЛ-2, TRAIL в крови и отделяемом цервикального канала; оценка экспрессии рецепторов апоптоза CD 95, TRAIL на клетках крови и клеточных элементах цервикального канала) при подключении препаратов антиоксидантов в профилактике развития канцерогенеза у клинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки (диагностированная ВПЧ инфекция) и женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки (через 3 месяца на фоне терапии антиоксидантами)
Материалы и методы. В исследование были включены 250 пациенток, стратифицированных по патологии:
1 группа – 152 клинически здоровые женщины с выявленным ВПЧ высокого онкогенного риска в возрасте 25–45 лет;
2 группа – 98 пациенток с предраковыми заболеваниями шейки матки в возрасте 25–52 лет.
Все пациентки предоставили подробную информацию об имевшихся ранее случаях заболеваний, передающихся половым путем. У всех пациенток был проведен тщательный осмотр промежности, вульвы, влагалища, уретры и канала шейки матки.
Разделение участников исследования. Каждая из женщин-участниц рандомизированного исследования эффективности подключения препаратов антиоксидантов в профилактике развития канцерогенеза подписала подтверждение согласия на участие. После стратификации пациентов по патологии (см. схему 1) они были распределены случайным образом (двойное слепое рандомизированное исследование) в опытную группу или в плацебо-группу:
1 группа «Иммуджен 1» – 82 клинически здоровые женщины с выявленным ВПЧ высокого онкогенного риска в опытной группе; 70 клинически здоровых женщин с выявленным ВПЧ высокого онкогенного риска в группе плацебо (группа «Плацебо 1»).
2 группа «Иммуджен 2»– 50 пациенток с предраковыми заболеваниями шейки матки в опытной группе; 48 женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки в группе плацебо (группа «Плацебо 2»).
Схема 1 – Разделение пациенток с риском развития рака шейки матки
(диагностированная ВПЧ-инфекция) и женщин с предраковыми
заболеваниями шейки матки в испытании эффективности
подключения препаратов-антиоксидантов.
В качестве препарата-антиоксиданта апробирован «Immugen» IDIFARMACEUTICIS.p.A. (Италия), который является одной из последних разработок в области комбинаций антиоксидантов и аминокислот и представляет собой уникальный комплекс оптимально сочетающихся компонентов [9,10,11,12]. Препарат состоит из убихинона, витамина Е (альфа-токоферол-ацетат), фосфолипидов сои (лецитин), альфа-метионина и селена. Метионин и селен обладают антиоксидантными свойствами, снижая разрушающее действие свободных радикалов. КоэнзимQ усиливает метаболические процессы и ускоряет ранозаживление, снижает интоксикацию, улучшает общую сопротивляемость организма, является одним из основных веществ, активно противостоящих процессам старения. Фосфолипиды сои и витамин Е дополняют комплекс за счет выраженных антисклеротических и противораковых свойств. Показано эффективное действие препарата при некоторых вирусных инфекциях, папилломатозе кожи, атопическом дерматите, гнойно-воспалительных процессах мягких тканей [13,14,15,16].
Комплексная терапия пациенток из группы «Плацебо 1» включала «Виферон» №2 2 раза в день внутри влагалищнов течение 7 дней в сочетании с индукторами интерферона (амиксин - 0,125 г через день, курс лечения - 2 г (16 таблеток), ридостин - 8 мг один раз в три дня (курс — 3 инъекции), циклоферон - по 2-4 таблетки на прием на 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17, 20 и 23 сутки). [17]. Комплексная терапия пациенток из группы «Плацебо 2» включала при большой площади поражения метод эксцизии или деструкции, в сочетании с противовирусной и иммуномодулирующей терапией (изопринозин 1000мг, 3 раза в сутки, 10 дней, свечи «Виферон» №2 2 раза в день внутри влагалищно в течение 10 дней в сочетании с индукторами интерферона (амиксин, ридостин, циклоферон, дозы и длительность приема указаны выше) [17,18].
В группах «Иммуджен 1» и «Иммуджен 2» дополнительно к стандартной терапии соответствующей группы добавлялся препарат Иммуджен по 2 капсулы 3 раза в день во время еды в течение 3 месяцев [9,19]. При оценке переносимости препарата Immugen проводился мониторинг и регистрация любых эпизодов (как общих, так и местных), которые могут быть связаны или не связаны с применением препарата. На каждую женщину, участвующую в исследовании, была заведена и тщательно заполнялась «Индивидуальная регистрационная карта» для учета общих и местных реакций. В исследование не включались больные, подвергнутые ранее любому виду противовирусной и противоопухолевой терапии, и пациентки, имеющие серьезные сопутствующие заболевания других систем организма. Во всех группах пациенток были изучены показатели апоптоза в различном биологическом материале согласно нижеприведенным методам.
В группу контроля вошли 30 здоровых доноров, не имеющих антител к ВПЧ, ВПГ-1, ВПГ-2, ЦМВ в сыворотке крови и не содержащих ДНК ВПЧ, ВПГ, ЦМВ и других инфекций, передающихся половым путем в половом тракте.
Показатели апоптоза измерялись в следующих биологических материалах: сыворотка крови, цервикальное отделяемое, в лейкоцитах периферической крови пациенток, в клеточных элементах цервикального канала.
Метод определения sFAS
Для определения использовались 96-луночные тест-системы BenderMedSystems (USA). Определение растворимого sFAS проводили следующим образом:
Промывали ячейки планшета дважды промывочным буфером.
Добавляли по 100 мкл разбавителя образцов в ячейки, предназначенные для стандартов.
Вносили по 100 мкл разбавителя образцов в ячейки «Бланк».
Вносили по 90 мкл разбавителя образцов в ячейки, предназначенные для образцов.
Вносили по 10 мкл каждого образца в дублях в соответствующие ячейки.
Приготовили стандартные разведения добавлением 100 мкл разбавленного стандарта sAPO-1/Fas в ячейки А1 и А2, создавая разведения стандарта sAPO-1/Fas в диапазоне от 1000 до 16 пг/мл переносом по 100 мкл из ячейки в ячейку. Удалили и выбросили 100 мкл жидкости из последних ячеек (G1, G2).
Приготовили биотиновый конъюгат. Добавили по 50 мкл разбавленного биотинового конъюгата, готового для использования, во все ячейки, включая Бланк.
Закрыли планшет плёнкой и инкубировали 1 час при температуре 37С.
Приготовили стрептавидиновый конъюгат.
Полностью удалили содержимое ячеек и промыли ячейки 4 раза промывочным буфером.
Вносили по 100 мкл стрептавидинового конъюгата во все ячейки. Закрыли планшет плёнкой и инкубировали 1 час при температуре 37 °C.
Приготовили субстратный раствор за несколько минут до использования. Полностью удалили содержимое ячеек и промыли ячейки 4 раза промывочным буфером. Внесли по 100 мкл субстратного раствора во все ячейки, включая Бланк. Инкубировали при комнатной температуре 15 минут (18–25 °C). Добавили по 100 мкл стоп-раствора во все ячейки, включая Бланк. Определили оптическую плотность ячеек при 450 нм против «Бланка» при длине волны сравнения 610–650 нм.
Ход определения содержания TRAIL-связанного апоптоз-индуцирующего лиганда
А. Приготовление и разбавление стандартов было произведено согласно следующей методике:
Восстанавливающий стандарт (3000 пг/мл) соединяли со стандартным разбавляющим буфером. Перемешивали и оставляли на 10 минут. Использовали не позже 1 часа после приготовления.
Добавляли 300 мкл стандартного разбавляющего буфера в каждую из 6 ячеек, обозначенную 1500; 750; 375; 187,5; 93,7; 46,8 пг/м TRAIL.
Сделали серийные разведения, как описано выше.
В. Разбавление и хранение стрептавидин-hrp
100-кратный стрептавидин-hpr разбавлялся в 50 % растворе глицерола. Раствор доводился до комнатной температуры и перемешивался
Растворяли 10 мкл 100-кратного стрептавидина-hpr в 1 мл растворителя стрептавидин-hpr для каждого стрипа. Отмечали рабочее разведение.
С. Разбавление промывающего буфера
Доводили 25-кратный раствор до комнатной температуры и хорошо перемешивали. Добавляли к 1 объему 24 объема дистиллированной воды. Рабочий раствор хранили в холодильнике 14 дней.
Проведение процедуры и подсчет
Сыворотку или плазму разбавляли 1–2-стандартным разбавляющим буфером.
Добавляли 100 мкл стандартного разбавляющего буфера в нулевую ячейку.
Добавляли 100 мкл стандартов или проб в соответствующие ячейки.
Накрывали и оставляли в инкубаторе на 2 часа при комнатной температуре.
Отмывали 4 раза.
Добавляли 100 мкл биотинилированного антиTRAIL.
Инкубировали 1 час при комнатной температуре.
Промывали 4 раза.
Добавляли 100 мкл стрептавидина-hpr.
30 минут инкубировали при комнатной температуре.
Промывали 4 раза.
Добавляли 100 мкл стабилизирующего хромогена.
30 минут инкубировали при комнатной температуре в темном месте
Добавляли 100 мкл стоп-раствора в каждую ячейку.
Подсчитывали оптическую плотность при длине волны 450 нм.
Определение фактора некроза опухоли α(ФНОα).
Для изучения содержания ФНОα использовали метод твердофазного иммуноферментного анализа (производитель тест-системы «Протеиновый контур», Россия).
Исследуемый образец (сыворотка, отделяемое цервикального канала) в количестве 50 мкл вносили в 50 мкл инкубационного буфера и выдерживали при комнатной температуре 2 часа. Затем удаляли содержимое ячеек и промывали 4 раза. Добавляли биотинилированный конъюгат в объеме 100 мкл и инкубировали 2 часа при комнатной температуре.
После четырехкратного промывания добавляли 100мкл стрептавидинового конъюгата и спустя 30 минут 100 мкл хромогенного раствора. После 30-минутной инкубации добавляли 100 мкл стоп-раствора и считывали оптическую плотность при 450 нм.
Определение интерлейкина-2 (ИЛ-2).Для изучения содержания ИЛ-2 использовали метод твердофазного иммуноферментного анализа (производитель тест-системы «Протеиновый контур», Россия).).
Исследуемый образец (сыворотка, отделяемое цервикального канала) в количестве 50 мкл вносили в 50 мкл инкубационного буфера и выдерживали при комнатной температуре 2 часа. Затем удаляли содержимое ячеек и промывали 3 раза. Добавляли биотинилированный конъюгат в объеме 100 мкл и инкубировали 2 часа при комнатной температуре. После четырехкратного промывания добавляли 100мкл стрептавидинового конъюгата и спустя 30 минут 100мкл хромогенного раствора. После 30-минутной инкубации добавляли 100 мкл стоп-раствора и считывали оптическую плотность при 450 нм.
Для сопоставления показателей пациентов с данными сывороточных маркеров апоптоза у здоровых людей провели исследование 15 доноров (таблица 1).
Таблица 1 – Показатели сывороточных маркеров апоптоза в группе здоровых доноров, (пг/мл).
Сывороточные показатели апоптоза
|
Показатели контрольной группы
|
ФНОα
|
18,0±2,0
|
sFas
|
1250,5 ± 135,5
|
TRAIL
|
199,0±5,3
|
ИЛ-2
|
1,0±0,2
|
Для оценки экспрессии рецепторов апоптоза CD95, TRAIL были исследованы лейкоциты периферической крови и клеточные элементы цервикального канала.
Выделение лейкоцитов из периферической крови. Для выделения лейкоцитов использовали центрифугирование в градиенте плотности фиколл-верографина. Из локтевой вены пациентов брали 10 мл крови, смешивали с 1 мл 3,8 % раствора трехзамещенного цитрата натрия. Плазму отстаивали при 37С, наслаивали на фиколлсодержащий раствор («ICN», США) и центрифугировали при 230 gв течение 30 минут при комнатной температуре. Интерфазный слой в виде кольца, содержащий лейкоциты, отбирали в чистые пробирки, добавляли фосфатно-солевой буфер (ФСБ) до 15 мл, проводили двукратную отмывку лейкоцитов ФСБ с центрифугированием при 230 g в течение 10 минут при комнатной температуре. Клетки ресуспендировали в 2 мл ФСБ, отбирали 10 мкл для подсчета количества клеток в камере Горяева (без окрашивания), доводя пробы до концентрации 1х106 кл/мл.
Выделение клеточных элементов цервикального канала женщин. Содержимое цервикального канала получали при гинекологическом осмотре. Взятие материала из цервикального канала шейки матки производилось только после того, как шейку матки открывали при помощи зеркал. После того, как шейка матки была открыта в зеркалах, влагалищная часть ее протиралась сухим ватным тампоном. Материал брался зондом. Зонд вводился в цервикальный канал на 1–1,5 см, осторожно поворачивался, вынимался, не прикасаясь к стенкам влагалища. После взятия биологического материала зонд помещали в транспортную среду. К пробам добавляли 10 мл ФСБ и отмывали центрифугированием при 230g в течение 10 минут при комнатной температуре. Осадок ресуспендировали, подсчитывали и определяли клеточный состав.
Иммунофенотипический анализ. Для определения рецепторного фенотипа клеток 5 мл крови помещали в пробирку VACUTAINER, содержащую динатриевую соль ЭДТА (BD).
Для выделения лейкоцитов использовали стандартный метод градиентного центрифугирования с последующей отмывкой клеток фосфатно-солевым буферным раствором (рН 7.2).
Концентрация клеток во всех проведенных исследованиях составляла 1х106 клеток/мл, жизнеспособность более 95 %.
Оценку рецепторной структуры клеток лейкоцитарной фракции осуществляли стандартным методом прямого двухпараметрического иммунофлюоресцентного окрашивания с использованием коммерческих лизирующих/фиксирующих (CellLyse, ВD) и промывающих растворов (CellWash, BD) и панели моноклональных антител (IOTest, BeckmanCoulter), – антиCD95-FITC/антиDR5+–PE (CaltagLabs). В планшет раскапывали клеточную взвесь (400 тыс. клеток на лунку), добавляли моноклональные антитела (по схеме) по 5 мкл и инкубировали в течение 30 минут при 4 С. Отмывали дважды холодным ФСБ c азидом натрия путем центрифугирования по 5 мин при 1000 об/мин. Цитофлюорометрию осуществляли на проточном цитофлюориметре FACSCalibur (BD), при этом регистрировали суммарно не менее 10000 событий. Данные анализировали в рамках программного обеспечения CellQuest (BD).
Статистическая обработка полученных результатов
Статистическую обработку проводили с использованием пакета программы Statistica for Windows. Результаты представляли как М±m, где М – среднее арифметическое, m – стандартное отклонение. Достоверность различий между группами оценивали с помощью критерия Уилкоксона для связанных величин и U-теста или t-критерия Стьюдента для несвязанных величин. Достоверным считали отличие при p<0,05. Проверка на нормальность выборки осуществлялась с помощью критерия Колмогорова – Смирнова в системе STATISTIKA 5.5. [20,21]. Для определения корреляционных связей использовали коэффициент линейной корреляции Пирсона (k).На рисунках и в таблицах приведены среднеарифметические значения показателей, в качестве разброса указаны среднеквадратичные отклонения.
Результаты.
Были исследованы группы женщин, разделенных по нозологической форме (клинически здоровые женщины, но инфицированные ВПЧ высокого онкогенного риска и пациентки с предраковыми заболеваниями шейки матки) и применяемой комплексной терапии (стандартная терапия и терапия с подключением препарата Иммуджен). Обнаружено, что на фоне терапии антиоксидантами через 3 месяца нормализуются концентрации ФНОα и ИЛ-2, (p<0,05 по сравнению с предыдущим сроком наблюдения). Уровень TRAIL в сыворотке крови на фоне терапии с подключением антиоксидантов достоверно повышался в группе «Иммуджен 1» по сравнению с группой «Плацебо 1», (p<0,05), но не достигал нормальных величин. Концентрация sFAS, независимо состава комплексной терапии и сроков наблюдения не изменялась (см. таблицу 2). Схожие изменения концентраций лигандов апоптоза были обнаружены в группах больных с предраковыми заболеваниями шейки матки (таблица 3).
При оценке изменений уровня лигандов апоптоза sFAS, ФНОα, ИЛ-2, TRAIL в отделяемом цервикального канала клинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки (диагностированная ВПЧ инфекция) и в группе пациенток с предраковыми заболеваниями ШМ на фоне комплексной терапии с подключение комплекса антиоксидантных витаминов и аминокислот выявлено повышение уровня TRAIL (на 3 месяц терапии, р<0,05), (таблица 4).
Ранее было обнаружено, что концентрация TRAIL уменьшается при тяжелом течении инфекционного процесса: сывороточный и цервикальный уровни TRAIL у женщин с ВПЧ 16,18 типов, у пациенток с предраковыми и раковыми заболеваниями шейки матки ниже по сравнению с соответствующими показателями пациенток с ВПЧ10,13 типов и здоровых женщин,(p<0,05). Повышение уровня TRAIL должно привести к увеличению активности процессов апоптоза через DR5+рецепторы и, следовательно, к повышению эффективности элиминации зараженных и трансформированных клеток.
Таблица 2 – Концентрация лигандов апоптоза sFAS, ФНОα, ИЛ-2, TRAIL в крови клинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки (диагностированная ВПЧ инфекция) на фоне терапии антиоксидантами, пг/мл.
Показатель
|
В момент первичного обращения к специалистам
|
Через 3 месяца
|
показатели доноров
|
Группа «Иммуджен 1»
|
Группа
«Плацебо 1»
|
Группа
«Иммуджен 1»
|
Группа
«Плацебо 1»
|
sFAS
|
900,5±105,51
|
920,5±101,01
|
913,0±75,01
|
909,5±101,01
|
1250,5±135,5
|
ФНОα
|
42,0±5,01
|
39,0±8,51
|
17,0±1,0 2
|
31,0±5,51
|
18,0±2,0
|
ИЛ-2
|
3,5±0,81
|
3,3±0,51
|
1,2±0,4
|
2,9±0,51
|
1,0±0,2
|
TRAIL
|
97,0±17,01
|
90,0±16,01
|
143,0±8,01, 2
|
90,0±16,01
|
199,0±5,3
|
Примечание: 1 –достоверность различий по отношению к показателям доноров, р<0,05;2 - достоверность p<0,05 по сравнению с предыдущим периодом исследований.
Таблица 3 – Концентрация лигандов апоптоза sFAS, ФНОα, ИЛ-2, TRAIL в крови женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки (диагностированная ВПЧ инфекция) на фоне терапии антиоксидантами, пг/мл.
показатель
|
в момент первичного обращения к специалистам
|
через 3 месяца
|
показатели доноров
|
Группа «Иммуджен 1»
|
Группа
«Плацебо 1»
|
Группа «Иммуджен 1»
|
Группа
«Плацебо 1»
|
sFAS
|
780,5±85,51
|
760,5±76,01
|
723,0±21,01
|
745,0±29,01
|
1250,5±135,5
|
ФНОα
|
36,0±3,01
|
34,0±3,01
|
19,0±1,02
|
32,0±1,01
|
18,0±2,0
|
ИЛ-2
|
4,5±0,81
|
4,8±0,41
|
2,0±0,82
|
4,9±0,51
|
1,0±0,2
|
TRAIL
|
52,0±1,51
|
53,0±2,01
|
134,0±7,01,2
|
63,0±7,01
|
199,0±5,3
|
Примечание: 1 –достоверность различий по отношению к показателям доноров, р<0,05;2 - достоверность p<0,05 по сравнению с предыдущим периодом исследований.
Таблица 4 - Концентрация лигандов апоптоза sFAS, ФНОα, ИЛ-2, TRAIL в отделяемом цервикального канала клинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки (диагностированная ВПЧ инфекция) и женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки, пг/мл.
Показатели апоптоза
|
Показатели
контрольной
группы
|
Группа
пациентов
|
В момент первичного обращения к специалистам
|
Через 3 месяца
|
ФНОα
|
13,0±2,0
|
«Иммуджен 1»
|
15,0±2,0
|
14,0±1,5
|
«Плацебо 1»
|
14,0±2,0
|
13,0±1,5
|
«Иммуджен 2»
|
13,0±2,0
|
13,5±2,0
|
«Плацебо 2»
|
13,0±1,5
|
13,5±2,0
|
sFas
|
1000,5±150,5
|
«Иммуджен 1»
|
750,5 ± 80,01
|
810,5 ± 71,01
|
«Плацебо 1»
|
760,5 ± 99,01
|
750,5 ± 90,01
|
«Иммуджен 2»
|
720,5 ± 100,01
|
742,5 ± 85,01
|
«Плацебо 2»
|
750,5 ± 110,01
|
720,5 ± 121,01
|
TRAIL
|
145,0±25,0
|
«Иммуджен 1»
|
55,0±5,51
|
105,0±9,51,2
|
«Плацебо 1»
|
58,0±5,01
|
53,0±6,01
|
«Иммуджен 2»
|
44,0±5,51
|
96,5±8,51,2
|
«Плацебо 2»
|
49,0±8,51
|
48,0±7,51
|
ИЛ-2
|
4,0±0,5
|
«Иммуджен 1»
|
5,0±1,5
|
5,0±1,0
|
«Плацебо 1»
|
5,0±5,5
|
4,5±1,5
|
«Иммуджен 2»
|
4,0±5,5
|
4,5±2,5
|
«Плацебо 2»
|
5,0±5,5
|
5,0±1,5
|
Примечание: 1 –достоверность различий по отношению к показателям доноров, р<0,05;2 - достоверность p<0,05 по сравнению с предыдущим периодом исследований.
Оценка экспрессии рецепторов апоптоза CD 95, TRAIL на клетках крови и клеточных элементах цервикального канала) при подключении препаратов антиоксидантов в профилактике развития канцерогенеза у клинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки (диагностированная ВПЧ инфекция) и женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки (через 3 месяца на фоне терапии антиоксидантами).
В случае исследования клеток лейкоцитарной фракции при ВПЧ инфекции ранее было обнаружено значительное (38,4 %) снижение уровня CD95+клеток при вирусной инфекции высокого онкогенного риска, при отсутствии значимых изменений экспрессии рецептора смерти при ВПЧ низкого онкогенного риска (см. отчет по 2 этапу).
В группах пациенток с предраковыми и раковыми заболеваниями отличий практически нет (p>0,05), низкий уровень CD95+клеток является одной из основных причин нарушения апоптических процессов в зараженных интегративными вирусами клеток (таблица 5).
Так как нарушение рецепторного фенотипа является существенным звеном патогенеза в канцерогенезе шейки матки, представляло интерес изучение влияния комплексной терапии с подключением препаратов антиоксидантов на уровень экспрессии основных лигандовапоптоза – sFAS (CD95) и TRAIL (DR5).
Не исключено, что при ВПЧ-инфицировании снижение экспрессии CD95 и готовности клеток к спонтанному апоптозу является неблагоприятным признаком, так как оно ассоциировано с переключением на менее эффективный при вирусной инфекции гуморальный путь иммунной защиты с присущими такому переключению проявлениями иммуносупрессии.
При исследовании относительного числа CD95+клеток в лейкоцитарной фракции периферической крови и цервикальной жидкости клинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки и женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки обнаружено, что достоверно сниженный уровень CD95+клеток независимо от вида терапии не изменяется (таблица 5 и таблица 6). TRAIL (TNF-related apoptosis inducing ligand) – белок, синтезируемый клетками иммунной системы; способен вызывать апоптоз злокачественных клеток, не влияя при этом на нормальные клетки организма [22].
При папилломавирусной инфекции общий уровень DR5+клеток в цервикальной жидкости женщин независимо от типа ВПЧ-инфекции не изменен (см. отчет по 2 этапу).
Таблица 5 – Относительное число CD95+клеток в лейкоцитарной фракции периферической крови клинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки (диагностированная ВПЧ инфекция) и женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки, %
Группа
|
в момент первичного обращения к специалистам
|
через 3 месяца
|
«Иммуджен 1»
|
3,5 ±0,51
|
3,3 ±0,51
|
«Плацебо 1»
|
3,1 ±0,31
|
3,9 ±0,81
|
«Иммуджен 2»
|
2,9 ±0,81
|
3,4 ±0,51
|
«Плацебо 2»
|
3,6 ±0,71
|
3,1 ±0,41
|
Доноры
|
5,5±0,5
|
-
|
Примечание: 1 –достоверность различий по отношению к показателям доноров, р<0,05;2 - достоверность p<0,05 по сравнению с предыдущим периодом исследований.
В группах «Иммуджен 1» и «Иммуджен 2» количество DR5+ клеток достоверно повышается (через 3 месяца на фоне терапии с подключением антиоксидантного комплекса), следствием чего, вероятно, будет являться активация TRAIL-зависимого пути апоптоза.
Таблица 6 – Относительное число CD95+клеток цервикального канала клинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки (диагностированная ВПЧ инфекция) и женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки, %.
Группа
|
в момент первичного обращения к специалистам
|
через 3 месяца
|
«Иммуджен 1»
|
2,5 ±0,51
|
2,1 ±0,51
|
«Плацебо 1»
|
2,1 ±0,31
|
2,9 ±0,81
|
«Иммуджен 2»
|
2,0 ±0,81
|
2,4 ±0,51
|
«Плацебо 2»
|
2,6 ±0,71
|
2,1 ±0,41
|
Доноры
|
5,5±0,5
|
-
|
Примечание: 1 –достоверность различий по отношению к показателям доноров, р<0,05;2 - достоверность p<0,05 по сравнению с предыдущим периодом исследований.
Таблица 7 – Относительное число DR5+клеток в лейкоцитарной фракции периферической крови клинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки (диагностированная ВПЧ инфекция) и женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки, %.
Группа
|
в момент первичного обращения к специалистам
|
через 3 месяца
|
«Иммуджен 1»
|
4,5 ±0,5
|
6,9 ±0,51,2
|
«Плацебо 1»
|
4,1 ±0,31
|
3,9 ±0,81
|
«Иммуджен 2»
|
4,5 ±0,5
|
6,4 ±0,51,2
|
«Плацебо 2»
|
4,6 ±0,71
|
4,1 ±0,41
|
Доноры
|
4,5±0,5
|
-
|
Примечание: 1 –достоверность различий по отношению к показателям доноров, р<0,05;2 - достоверность p<0,05 по сравнению с предыдущим периодом исследований.
Таблица 8 – Относительное число DR5+клеток цервикального каналаклинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки (диагностированная ВПЧ инфекция) и женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки, %.
Группа
|
в момент первичного обращения к специалистам
|
через 3 месяца
|
«Иммуджен 1»
|
4,1 ±0,5
|
6,9 ±0,51,2
|
«Плацебо 1»
|
3,9 ±0,3
|
3,9 ±0,81
|
«Иммуджен 2»
|
4,5 ±1,5
|
6,8 ±0,51,2
|
«Плацебо 2»
|
4,6 ±0,71
|
4,1 ±0,41
|
Доноры
|
4,0±0,5
|
-
|
Примечание: 1 –достоверность различий по отношению к показателям доноров, р<0,05;2 - достоверность p<0,05 по сравнению с предыдущим периодом исследований.
Таким образом, при подключении в стандартную терапию пациенток с выявленной ВПЧ инфекцией и предраковыми заболеваниями комплекса антиоксидантных витаминов и аминокислот «Иммуджен» происходит уменьшение концентрации и нормализация уровня провоспалительных медиаторов, таких как ФНОα и ИЛ-2.
Провоспалительные цитокины поддерживают состояние хронического воспаления в тканях, что является одним из факторов канцерогенеза, так как активирует макрофагальную систему и приводит к радикал-зависимой трансформации клеток и тканей [20].
Через 3 месяца на фоне комплексной терапии с подключением антиоксидантов выявлено повышение сывороточной и цервикальной концентрации TRAIL, а также повышение количества DR5+ клеток.
|
