Глава 3 Подведение итогов этапа НИР
В рамках проекта были исследована эффективность подключения препаратов-антиоксидантов в профилактике развития канцерогенеза у клинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки (диагностированная ВПЧ-инфекция) и женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки.
После стратификации пациентов по патологии они были распределены случайным образом (двойное слепое рандомизированное исследование) в опытную группу или в плацебо-группу:
1 группа «Иммуджен 1» – 82 клинически здоровые женщины с выявленным ВПЧ высокого онкогенного риска в опытной группе; 70 клинически здоровых женщин с выявленным ВПЧ высокого онкогенного риска в группе плацебо (группа «Плацебо 1»).
2 группа«Иммуджен 2»– 50 пациенток с предраковыми заболеваниями шейки матки в опытной группе; 48 женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки в группе плацебо (группа «Плацебо 2»).
3 группа «Иммуджен 3» - 22 пациентки с раком шейки матки; 25 пациенток с раком шейки матки (группа «Плацебо 3»).
Обнаружено, что на фоне терапии антиоксидантами через 3 месяца:
Нормализуются концентрации ФНОα и ИЛ-2 в сыворотке крови и цервикальной жидкости, (p<0,05 по сравнению с предыдущим сроком наблюдения).
Уровень TRAIL на фоне терапии с подключением антиоксидантов достоверно повышался в группе пациенток «Иммуджен 1» по сравнению с группой «Плацебо 1», (p<0,05), но не достигал нормальных величин.
Концентрация sFAS, независимо состава комплексной терапии и сроков наблюдения и исследуемой группы не изменялась.
При исследовании относительного числа CD95+клеток в лейкоцитарной фракции периферической крови и цервикальной жидкости клинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки и женщин с предраковыми заболеваниями шейки матки обнаружено, что достоверно сниженный уровень CD95+клеток независимо от вида терапии не изменялся.
На фоне терапии с подключением антиоксидантов количество DR5+клеток как в крови, так и в цервикальной жидкости пациенток с риском развития рака ШМ (выявленная ВПЧ инфекция высокого онкогенного риска) и женщин с предраковыми заболеваниями ШМ достоверно повышалось.
На фоне терапии препаратом Иммуджен через 3 месяцадостоверно снизились концентрации нитрат-нитритов во всех группах «Иммуджен-1,2,3», (р<0,05). Однако нормализация до показателей доноров уровня нитрат-нитритов произошла только в группе «Иммуджен 1».
Заключение
Несмотря на активное изучение особенностей интегративных вирусных инфекций и их роли в возможных процессах канцерогенеза, многие звенья патогенеза ВПЧ-ассоциированной трансформации тканей шейки матки до сих пор остаются неизвестными.
В иммунологическом ответе организма на папилломавирусную инфекцию ведущими являются Th1 клеточный ответ (активация цитотоксических лимфоцитов) и интерфероновый статус [28,29]. Цитотоксическая иммунная реакция при ЦИН развивается в четыре этапа: фагоцитоз и презентация антигенов ВПЧ цервикальными макрофагами (клетки Лангерганса) – активация хелперов Th1 (хелперы Th2 активируют В лимфоциты) – активация цитотоксических Т лимфоцитов – уничтожение клеток, инфицированных ВПЧ. Доказательством актуальности клеточного иммунитета служит факт сочетания спонтанной регрессии бородавок с инфильтрацией лимфоцитами и макрофагами. Иммунные эффекторные клетки продуцируют разнообразные цитокины, в том числе и интерфероны (ИФН). a–, b– и g–ИНФ снижают транскрипцию генов Е6 и Е7 у ВПЧ 16, 18 и 33 типов в трансформированных вирусами клетках. Апоптоз при интегративных вирусных инфекциях, таких как ВПЧ, является одним из защитных механизмов [30]. Персистенция вируса с длительной активной экспрессией вирусных онкогенов инициирует многостадийный процесс, в результате которого клетки эпителия шейки матки приобретают генетические и эпигенетические нарушения, способствующие опухолевой прогрессии.
Принятые стандарты оказания медицинской помощи пациенткам данной категории не затрагивают стимуляцию процессов элиминации трансформированных клеток за счет апоптоза и в основном они касаются методов удаления патологического очага шейки матки, при этом отсутствует патогенетически обоснованная терапия для пациенток разных категорий, инфицированных ВПЧ. Также отсутствует методы терапии, воздействующие на радикал-ассоциированные механизмы повреждения тканей [2].
Активно разрабатываются различные физико-хирургические деструктивные методы – электротерапия, криотерапия, лазерная терапия, электрорадиохирургический метод, аргоноплазменная коагуляция и радиохирургия [31,32,33]. Применяются и совершенствуются различные методы химической декструкции тканей [34].
Однако методы иммунного сопровождения больных данной категории разрознены и, в основном, касаются отдельных препаратов, в то время как комплексная терапия патологии, в патогенезе которой участвуют онкогенные вирусы и выявлены нарушения иммунного надзора, требует системного подхода, дающего информацию о прогнозе течения заболевания и мониторинге эффективности проводимого лечения. Кроме того, по мнению ряда авторов, сформировавшиеся в последние годы тенденции к необоснованному и порой агрессивному лечению женщин, инфицированных ВПЧ, нередко приводит к отдаленным осложнениям, таким как стенозы, склерозирование, термические и химические ожоги, а также отрицательное влияние на репродуктивную функцию и течение последующих родов [35,36]. Все методы медикаментозного лечения ВПЧ-ассоциированной патологии являются паллиативными и поисковыми [35,36,37,38,39].
В связи с этим, актуальной является разработка индивидуально обоснованных методов комплексной терапии женщин разных категорий, позволяющих максимально нетравматично относится к тканям шейки матки, и в тоже время, минимизировать риск развития трансформации пораженной ткани.
В рамках данного проекта разрабатывается методы воздействия на радикал-зависимые звенья патогенеза патологи ШМ при ВПЧ. В данном проекте (на втором этапе) предусматривалось выявление способности организма к самостоятельной элиминации зараженных вирусами клеток апоптоза. Было обнаружено, что на всех исследованных уровнях регуляция программируемой смерти инфицированных клеток нарушена (исследование уровня лигандов апоптоза sFAS, ФНОα, TRAIL в крови цервикального канала; оценка экспрессии рецепторов апоптоза CD 95, TRAIL на клетках крови и клеточных элементах цервикального канала; изучение и анализ экспрессии генов, кодирующих активность апоптоза в тканях биоптата от пациенток и РНК иммуноцитокинов и других лигандов (sFAS, ФНОα, ИЛ-2, TRAIL).
Свободные радикалы, участвующие в активации апоптоза и продуцирующиеся в повышенной концентрации при вирусной инфекции (см. отчет по 2 этапу), становятся основными воспалительными и цитотоксическими медиаторами. Так как активность апоптоза снижена на фоне повышения активности радикалов, на следующем этапе была оценена эффективность подключения препаратов антиоксидантов к комплексной терапии. В патогенезе папилломавирусного канцерогенеза выявлено два основных звена (см. отчет по 2 этапу):
блокирование процессов апоптоза, выявленное на разных уровнях (уровень лигандов, рецепторный уровень, генный уровень);
первоначально защитные свободные радикалы, инициирующие, в том числе процесс апоптоза вирус-инфицированных клеток, из-за блокады программируемой смерти клетки являются одним из звеньев поражения ткани эпителия шейки матки. В связи с этим целесообразно применение препаратов антиоксидантов.
На предыдущем этапе было выявлено, что наиболее значимыми показателями уменьшения активности апоптических процессов среди маркеров, исследованных в рамках данного этапа НИР, являются концентрации основных лигандов апоптоза sFas и TRAIL.
В результате проведения 3 этапа исследований получены следующие результаты и выявлены следующие закономерности:
сниженное количество sFas приводит к уменьшению возможности клетки запустить апоптоз [40,41,42] и, таким образом, к увеличению персистенции интегративных вирусов. Выявлены достоверно сниженные показатели sFas у пациенток с раковыми заболеваниями шейки матки (р<0,05). Сывороточные концентрации TRAIL в изученных группах пациентов оказались близки к нормальным значениям лишь в группе больных с ВПЧ низкого онкогенного риска. Резко сниженные показатели у пациентов с ВПЧ высокого онкогенного риска приводят к заключению о том, что отсутствие TRAIL-рецепторного апоптоза может быть одной из причин онкогенеза, о чем дополнительно свидетельствуют более чем в 6–7 раз сниженные показатели TRAIL у пациентов с предраковыми заболеваниями шейки матки и раком шейки матки;
при оценке изменений уровня лигандов апоптоза sFAS, ФНОα, ИЛ-2, TRAIL в отделяемом цервикального канала клинически здоровых женщин с риском развития рака шейки матки (диагностированная ВПЧ инфекция) и в группе пациенток с предраковыми заболеваниями ШМ на фоне комплексной терапии с подключение комплекса антиоксидантных витаминов и аминокислот выявлено повышение уровня TRAIL (на 3 месяц терапии, р<0,05), (таблица 4). Ранее было обнаружено, что концентрация TRAIL уменьшается при тяжелом течении инфекционного процесса: сывороточный и цервикальный уровни TRAIL у женщин с ВПЧ 16,18 типов, у пациенток с предраковыми и раковыми заболеваниями шейки матки ниже по сравнению с соответствующими показателями пациенток с ВПЧ10,13 типов и здоровых женщин,(p<0,05). Повышение уровня TRAIL должно привести к увеличению активности процессов апоптоза через DR5+рецепторы и, следовательно, к повышению эффективности элиминации зараженных и трансформированных клеток;
на фоне терапии препаратом Иммуджен через 3 месяца достоверно снизились концентрации нитрат-нитритов во всех группах «Иммуджен-1,2,3», (р<0,05). Однако нормализация до показателей доноров уровня нитрат-нитритов произошла только в группе «Иммуджен 1».
Таким образом, можно суммировать основные эффекты антиоксидантной терапии в схеме (Приложение А).
В рамках третьего этапа полностью решены все поставленные задачи, научное и практическое значение подобных исследований заключается в том, что на выявлены основные звенья влияния антиоксидантной терапии у пациенток изученных групп.
Результаты научно-исследовательской работы могут быть применены в области здравоохранения. Результаты проекта будут находить применение в практической деятельности муниципальных женских консультаций, стационарных медицинских учреждениях гинекологического и онкологического профиля.
Результаты проведенных НИР могут быть использованы для проведения опытно-технологических работ (ОТР), направленных на создание новой лекарственной формы комплекса антиоксидантных витаминов и аминокислот для профилактики и терапии женщин с риском развития опухолей шейки матки и раком шейки матки.
В результате реализации НИР ожидается повышения эффективности терапии больных папилломавирусной инфекцией, с предраковыми и раковыми заболеваниями шейки матки, что приведет к снижению материальных и временных затрат на стационарное лечение, снижению риска смертности, повышению продолжительности жизни
Полученные результаты исследований соответствуют мировому уровню исследований в данной области. Полученные результаты исследований развивают лучшие достижения в данной области.
|
