Разработка липосомальной лекарственной формы противоопухолевого препарата араноза 14. 04. 01 Технология получения лекарств

Таблица 6 Состав ЛЛФ аранозы на 1 флакон Компонент Количество, г Фосфатидилхолин 0,38 Холестерин 0,038 ФЭ-ПЭГ-2000 0,025 Араноза 0,1 Лактоза 0,5 Сорбиновая кислота 0,004 Влияние лиофилизации на качество ЛЛФ аранозы В ходе исследований установлено, что от режима лиофилизации зависит стабильность ЛЛФ при хранении, количество включённой в липосомы аранозы, а также размер везикул. Также на скорость и качество сублимации влияет концентрация липидов и лекарственного вещества в ЛЛФ, объём высушиваемого препарата, площадь поверхности испарения, наличие и свойства криопротектора. В результате проведённых исследований выбран оптимальный режим лиофилизации (Рис. 2). Рис. 2. График лиофилизации липосомальной дисперсии аранозы Как видно из рис. 2, общее время сушки составляет 31 час и включает стадии: замораживание, первичная и вторичная сушка. Разработанный режим лиофилизации позволяет получить стабильный в процессе хранения лекарственный препарат, при котором после регидратации эффективность включения ЛВ остается на уровне 77±2 % и сохраняется размер везикул 167±2 нм. Технология изготовления ЛЛФ аранозы По результатам эксперимента разработана ЛЛФ аранозы. При сравнении методов получения липосомальной дисперсии оптимальные показатели качества получены при экструдировании. Стабилизировали липосомы лиофилизацией. Технологическая схема изготовления ЛЛФ аранозы представлена на рис. 3. ВР-2.1. Подготовка воздуха ВР-2.2. Подготовка дезинфицирующих и моющих растворов ВР-2.3. Подготовка помещений и оборудования ВР-2.4. Подготовка технологической одежды ВР-2.5. Подготовка персонала ВР-1. Подготовка воды ВР-2. Санитарная обработка производства Промсток Потери В канализацию В атмосферу ВР-3. Подготовка тары с ВР.1. Промсток В канализацию ВР-3.2. Подготовка пробок ТП-4. Получение стерильной липосомальной дисперсии аранозы ВР-3.3. Подготовка колпачков Потери ТП-5. Получение готового продукта ТП-4.1. Приготовление растворов вспомогательных веществ ТП-4.2. Получение липидной пленки УМО-6. Упаковка и маркировка готового продукта На склад готовой продукции Отходы На сжигание Отходы Потери На сжигание В канализацию В канализацию Отходы На сжигание ВР-3.1. Подготовка флаконов ТП-5.1. Лиофилизация липосомальной дисперсии аранозы ТП-5.2. Укупорка флаконов и обжим колпачками УМО-6.1. Просмотр готовой продукции Отходы На сжигание ТП-4.3. Приготовление раствора аранозы ТП-4.5. Фильтрация липосомальной дисперсии и розлив во флаконы Потери с ТП-4 ОБО. Обезвреживание отходов производства ТП-4.4. Приготовление липосомальной дисперсии аранозы УМО-6.2. Маркировка и упаковка Рис. 3. Технологическая схема изготовления ЛЛФ аранозы Разработка методики количественного определения аранозы Количественное определение аранозы в ЛЛФ проводили методом спектрофотометрии. На электронном спектре поглощения спиртового разведения аранозы максимум поглощения наблюдали при 240±2 нм (Рис. 4). Подчинение основному закону светопоглощения – закону Бугера-Ламберта-Бера наблюдается в области концентраций разведения от 2 до 28 мкг/мл. Рис. 4. Электронные спектры поглощения спиртовых разведений 1 - ЛЛФ аранозы, 2 - РСО аранозы, 3- «Пустые» липосомы Из рис. 4 видно, что пустые липосомы не поглощают в области максимума ЛВ, поэтому измерение оптической плотности ЛЛФ проводили относительно 95% этилового спирта. Таблица 7 Результаты количественного определения аранозы в липосомальной дисперсии при 240±2 нм № образца Оптическая плотность разведения липосом Оптическая плотность раствора РСО Содержание аранозы в дисперсии (мг/мл) Метрологические характеристики (р=95%; t p,f= 2,57) 1 0,497 0,485 20,51 n = 6 X¯=20,12 =0,27 S=0,11 ΔX = 0,28 ε=1,56% 2 0,495 0,482 20,11 3 0,496 0,484 20,48 4 0,497 0,484 20,51 5 0,494 0,519 19,01 6 0,495 0,482 20,11 Воспроизводимость методики оценивали на модельных образцах липосом с точными навесками аранозы (Табл. 7). Как видно из табл.7, относительная ошибка количественного определения аранозы в липосомальной дисперсии не превышает 1,56%. Количественное определение аранозы в лиофилизированной ЛЛФ В ходе разработки методики количественного определения аранозы в лиофилизированной ЛЛФ методом прямой УФ-спектрофотометрии изучены спектры поглощения лиофилизированных и свежеприготовленных липосомальных дисперсий аранозы. Они оказались идентичны. Из данных табл.8 следует, что ошибка среднего результата количественного определения аранозы в лиофилизированной ЛЛФ составляет 0,18%, т.е. не превышает пределов допустимых норм отклонений. По результатам определения специфичности, линейности, правильности, прецизионности и аналитической области разработанные методики количественного определения применимы в диапазоне концентраций ЛВ от 80 до 120 %. Таблица 8 Результаты количественного определения лиофилизированной ЛЛФ аранозы № образца Содержание аранозы во флаконе, мг Метрологические характеристики (р=95%; t p,f= 2,57) 1 99,80 n=6 X¯= 99,90 Sx= 0,17 Sx¯= 0,065 ΔX = 0,18 ε¯= 0,18% 2 100,10 3 99,70 4 99,80 5 100,10 6 99,90 Применение метода тонкослойной хроматографии для качественного анализа ЛЛФ аранозы Для качественного анализа ЛЛФ аранозы методом ТСХ выбрана система растворителей «бензол-этилацетат-метанол» в соотношении 6:3:1. Пластинки «Sorbfil» с нанесёнными пробами хроматографировали восходящим способом (Рис. 5). Липосомальные растворы наносились в объёме 10 мкл, контрольные – 5 мкл. Пятна детектировали в УФ-свете при длине волны 254 нм, а затем проявляли парами йода, выдерживая в йодной камере 1-2 минуты. Рис. 5. ТСХ ЛЛФ аранозы в системе «бензол:этилацетат:метанол» (6:3:1) 1-Лиофилизированная ЛЛФ аранозы, 2-Свежеприготовленная липосомальная дисперсия аранозы, 3-Субстанция аранозы, 4-«Пустые» липосомы, 5-Фосфатидилхолин, 6-Холестерин, 7-ФЭ-ПЭГ-2000, 8-Сорбиновая кислота. Как видно из Рис. 5, на хроматограмме пробы лиофилизированной ЛЛФ аранозы видны чёткие пятна: Rf~0,15 (араноза); Rf~0,8 (холестерин); Rf~0,7 (сорбиновая кислота). В пробе свежеприготовленной липосомальной дисперсии пятна детектировали на тех же уровнях Rf, что и для лиофилизированных. В обоих образцах пятно фосфатидилхолина жёлтого цвета наблюдали на старте (Rf~0). Изучение противоопухолевого действия ЛЛФ аранозы в опытах in vivo Изучили противоопухолевое действие ЛЛФ аранозы по сравнению с нелипосомальной ЛФ на двух опухолевых моделях при различных путях введения (Табл. 9 и 10). Таблица 9 Изучение противоопухолевого действия липосомальной и нелипосомальной ЛФ аранозы на мышах с перевитой лимфоцитарной лейкемией Р-388 Препарат № группы Доза (мг/кг) Путь введения Дни введения СПЖ (дни) УПЖ, % Контроль 1 - - 10,89±1,05 - ЛЛФ араноза 4 175 в/в 1 и 5 18,8±1,31 73* 5 250 в/бр 1 и 5 13,6±0,89 98* 6 300 в/бр 1 и 5 23,4±2,19 115 7 350 в/бр 1 и 5 22,2±4,38 104 Нелипосомальная ЛФ аранозы 8 175 в/в 1 и 5 14±1,0 29 9 250 в/бр 1 и 5 22,6±2,07 108* 10 300 в/бр 1 и 5 22,2±5,63 104 11 350 в/бр 1 и 5 22,6±4,34 108 Таблица 10 Изучение противоопухолевого действия липосомальной и нелипосомальной ЛФ аранозы на мышах с перевитой меланомой В-16 при в/в введении Препарат Доза (мг/кг) ТРО, % (дни от начала опыта) УПЖ, % Гибель от токсичности 7 10 14 17 20 24 Нелипосомальная ЛФ аранозы 175 67 69 56 58 43 32 17 0/8 250 85 87 62 57 51 41 3* 0/9 300 74 90 66 62 49 34 3 1/9 350 91 92 66 53 29 21 16 2/9 ЛЛФ аранозы 175 75 83 70 62 43 36 7 0/9 250 71 98 95 76 51 51 37* 0/9 300 86 98 88 72 65 14 20 1/9 350 92 99,7 99,8 72 72 66 34 3/9 Как видно из табл. 9, на лимфоцитарной лейкемии Р-388 при внутривенном введении в дозе 175 мг/кг наиболее активной оказалось ЛЛФ аранозы, которая вызывает увеличение продолжительности жизни (УПЖ) мышей равное 73%, тогда как УПЖ при использовании нелипосомальной ЛФ составляет 29%. После внутрибрюшинного введения наибольший противоопухолевый эффект для нелипосомальной ЛФ аранозы установлен в дозе 250мг/кг (УПЖ 108%) по сравнению с ЛЛФ аранозы для которой УПЖ равно 98%. При применении ЛЛФ аранозы в дозах 300 и 350 мг/кг терапевтический эффект статистически не отличался от противоопухолевого действия нелипосомальной ЛФ аранозы в тех же дозах (Табл. 9) Из табл.10 видно, что при двукратном внутривенном введении препаратов мышам с перевитой меланомой В-16 большая активность показана при применении ЛЛФ аранозы по сравнению с нелипосомальной ЛФ аранозы. По УПЖ противоопухолевый эффект статистически значимо (р<0,05) выше при введении этих ЛФ в дозе 250 мг/кг: 37 и 3%, соответственно.

Похожие:

	Отчет об экспериментальном доклиническом изучении безопасности лекарственной...		Разработка лекарственных форм с флуконазолом для лечения кандидозов... О муниципальной целевой программе «Профилактика терроризма и экстремизма на территории Кировского района рсо-алания»
	Особенности состояния систем общего и специфического иммунитета у... Оторых лежат как специфические, так и неспецифические проявления лекарственной гиперчувствительности. Неспецифическое действие лекарственного...		«Анализ и стандартизация лекарственной формы с модифицированным высвобождением... Электронный вариант. Саратов, 2005. Патентное законодательство. Юридические акты и комментарий. М.: "Юрид литература", 1994. Справочник...
	Отчет об экспериментальном доклиническом изучении безопасности лекарственной... «Герпезал, мазь для местного и наружного применения 1 %» производства зао «интелфарм»		Темы реферата: 1 Роль лекарственной формы в современной фармакотерапии... ...
	Разработка методов получения сложных эфиров диоксановых спиртов из отходов производства изопрена ...		Особенности состояния систем общего и специфического иммунитета у... Среди многообразия побочного действия лекарственных препаратов на организм человека значительное место занимают реакции, в основе...
	Отчет о научно-исследовательской работе «Разработка технологической... «Разработка технологической схемы получения кормовых дрожжей из свекловичного жома»		Программа фундаментальных исследований Президиума ран №8 «разработка... «Разработка «безызносных» подшипников скольжения спутниковых антенн для работы в отсутствии смазки в открытом космосе»
	Методическая разработка практического занятия по теме: «лекарственная... Цель занятия: освоение навыков постановки диагноза и тактики ведения пациентов с лекарственной болезнью (целенаправленный сбор анамнеза,...		Отчет о научно-исследовательской работе на тему: «Разработка модифицированных... «Разработка модифицированных методов выделения гуминовых веществ для получения биологических препаратов на основе вермикомпоста»
	Методическая разработка урока по курсу: «технология. Технический труд» Место занятия в учебном процессе: раздел программы «Технология обработки металла»		Разработка методов получения и цифровой обработки рентгеновских изображений.
	Перечень электронных образовательных ресурсов, разработанных учителем... Увеличительные приборы. Строение светового микроскопа и правила работы с ним. Лабораторная работа «Приготовление препарата клеток...		Методическая разработка (в помощь студентам техникума) Собственность: сущность, основные формы. Особенности корпоративной формы собственности