Матушкина ольга Васильевна оптимизация процессов регенерации при размножении клоновых подвоев и сортов яблони и груши in vitro

На правах рукописи МАТУШКИНА Ольга Васильевна ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОЦЕССОВ РЕГЕНЕРАЦИИ ПРИ РАЗМНОЖЕНИИ КЛОНОВЫХ ПОДВОЕВ И СОРТОВ ЯБЛОНИ И ГРУШИ IN VITRO Специальность 06.01.07 – плодоводство, виноградарство Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Мичуринск- 2008 Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно–исследовательский институт садоводства им. И.В. Мичурина» Россельхозакадемии Научный руководитель: кандидат сельскохозяйственных наук Туровская Нина Ивановна Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Деменко Василий Иванович кандидат сельскохозяйственных наук Минаев Вадим Александрович Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно- исследовательский институт генетики и селекции плодовых растений им. И.В. Мичурина Россельхозакадемии Защита диссертации состоится «24» апреля 2008г. в___часов на заседании диссертационного совета Д 220.041.01 при Мичуринском государственном аграрном университете по адресу: 393760, Тамбовская обл., г. Мичуринск, ул. Интернациональная, 101. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Мичуринского государственного аграрного университета, а с авторефератом на сайте университета http: // mgau, ru / Автореферат разослан «___»_________________2008г Ученый секретарь Диссертационного совета Д 220. 041.01 кандидат сельскохозяйственных наук Соломатин Н.М. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. В условиях интенсификации садоводства и ухудшения экологической ситуации все большее значение приобретает разработка эффективных технологий производства оздоровленного высококачественного посадочного материала и создания адаптивных форм и сортов растений с использованием биотехнологических приемов. Внедрение этих приемов в садоводство позволяет не только повысить морфогенетический потенциал маточных и плодоносящих насаждений, значительно ускорить создание новых генотипов с хозяйственно - ценными признаками в короткие сроки и толерантных к неблагоприятным факторам среды, но и повысить эффективность отрасли в целом. В большинстве стран (США, Италии, Великобритании, Голландии, Новой Зеландии, Франции) производство по выпуску оздоровленного посадочного материала плодовых и ягодных культур с использованием метода клонального микроразмножения поставлено на промышленную основу и очевидна тенденция по увеличению такого посадочного материала в дальнейшем. Однако в нашей стране размножение многих видов растений остается в основном на лабораторной стадии. К тому же индивидуальная реакция генотипов при размножении в культуре изолированной ткани проявляется значительно сильнее, чем при традиционных способах размножения. Условия культивирования, разработанные для одних форм и сортов, не всегда могут быть использованы для размножения других. В связи с этим, совершенствование основных технологических приемов in vitro, поиск общих закономерностей морфогенеза плодовых растений с учетом их биологических особенностей, повышение уровня их регенерационного потенциала, технологичности и эффективности цикла размножения позволит повысить практическую значимость метода клонального микроразмножения и дает возможность использовать его, как в системе производства оздоровленного посадочного материала, так и селекции. Целью исследований явилась оптимизация отдельных этапов технологии клонального микроразмножения клоновых подвоев и сортов яблони и груши и разработка эффективных методов регенерации из соматических тканей. В связи с этим решались следующие задачи: - разработать наиболее эффективные приемы регенерации из меристематических верхушек; - оптимизировать химические факторы культивирования in vitro, обеспечивающие максимальный уровень регенерации на этапе собственно микроразмножения; - изучить роль сортовых и родовых особенностей при микроразмножении in vitro; - определить возможность длительного хранения in vitro; - оценить морфогенетический потенциал изучаемых подвоев и сортов яблони и груши и разработать эффективные способы индукции адвентивного органогенеза; - дать оценку экономической эффективности выращивания клоновых подвоев яблони с использованием метода in vitro. Научная новизна. Изучен регенерационный потенциал яблони и груши на протяжении 10 пассажей. Определено оптимальное сочетание регуляторов роста в питательной среде на этапах введения в культуру in vitro и собственно микроразмножения. Предложены приемы, улучшающие качество микропобегов, значительно снижающие уровень витрификации и увеличивающие степень пролиферации. Впервые установлено положительное влияние антиоксидантов, снижающее ингибирующее влияние фенолов на этапе собственно микроразмножения, улучшающее качество микропобегов. Показана возможность длительного (до 6 месяцев) хранения плодовых растений при пониженных температурах с последующим включением в технологическую цепочку размножения. Дана оценка морфогенетического потенциала соматических тканей подвоев и сортов яблони и груши и проведено сравнительное изучение регенерационной способности адвентивных и пазушных побегов. Практическая значимость работы. Совершенствование приемов регенерации клоновых подвоев и сортов яблони и груши на этапах введения в культуру и собственно микроразмножения, а также разработка эффективных способов индукции адвентивного органогенеза позволят успешно применять метод клонального микроразмножения, как в системе производства оздоровленного посадочного материала, так и в генной инженерии. Апробация работы. Материалы исследований представлены на International Symposium «VIII International Pear Symposium» (Италия, 2000); II Международной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии (Москва, 2000); международной научно-практической конференции «Промышленное производство посадочного материала плодовых, ягодных и цветочно-декоративных культур» (Москва, 2001); Всероссийской научно-практической конференции «Повышение эффективности садоводства в современных условиях» (Мичуринск, 2003); VIII Международной конференции «Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Саратов, 2003); международной конференции «Мобилизация адаптивного потенциала садовых растений в динамичных условиях внешней среды» (Москва, 2004); международной научно-практической конференции «Современные проблемы технологии производства, хранения, переработки и экспертизы и качества сельскохозяйственной продукции» (Мичуринск, 2007). Публикации результатов исследований. Всего опубликовано 38 научно-методических работ, из них по теме диссертации 25 работ. Реализация результатов исследований. Результаты исследований внедрены в лаборатории биотехнологии ВНИИС им. И.В. Мичурина. Полученные методом in vitro растения высажены в маточники клоновых подвоев яблони и груши в ОПО ВНИИС. Разработаны (в соавторстве) учебное пособие «Клональное микроразмножение плодовых и ягодных культур» (Воронеж, 1998, 2003), предназначенное для студентов агрономических специальностей, и «Методика регенерации яблони и груши из пазушных меристем и вегетативных органов» (Мичуринск, 2006), рекомендованная для научно-исследовательских и промышленных лабораторий in vitro, получен патент «Способ укоренения побегов плодовых культур, полученных in vitro» (1996). Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 161 страницах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав, выводов, рекомендаций для использования в науке и производстве, приложения, 27 таблиц, 32 рисунков. Список используемой литературы включает 268 источников, в том числе 156 на иностранных языках. Методика, объекты и условия проведения исследований. Работа проводилась в лаборатории биотехнологии ГНУ ВНИИС им. И.В. Мичурина Россельхозакадемии, а также в ОПО института в течение 1986 – 2007гг. Объекты исследований - клоновые подвои яблони: 54-118, 62-396, 57-491, 57-195 (селекции МичГАУ); 2-46-77, 3-17-38, 3-5-44 (селекции ВНИИС им. И.В. Мичурина); Р16, Р22, Р59, Р60 (польской селекции), ММ106, М26 (английской селекции); клоновые подвои груши - груша № 12, груша № 10 (селекции ВНИИС им. И.В. Мичурина); сорта яблони – Лобо, Вишневое, Спартан, Орлик, Синап Орловский; сорта груши – Осенняя Яковлева, Пхорун. Регенерация яблони и груши из пазушных меристем. Основными стерилизующими реагентами служили 6% раствор гипохлорита кальция в экспозиции 3-6 минут и 0,4% раствор нитрата ртути в течение 45-60 секунд с последующей тщательной промывкой эксплантов не менее 15 -20 минут автоклавированным дистиллятом. На этапах введения в культуру in vitro и собственно микроразмножения использовали минеральную основу сред Мурасиге-Скуга, Кворина–Лепуавра, Гамборга, Ллойда–Маккауна с добавками, мг/л: мезоинозит – 100, сахароза – 30000, аскорбиновая кислота-1,5, тиамин НСl, пиридоксин НСl, никотиновая кислота по 0,5, агар – 8000, рН-5,8/ Растения культивировали при температуре воздуха 24±2оC, освещенности 2-3 тыс. люксов, 16-часовом фотопериоде. Анализ этапа введения эксплантов в культуру проводили по 4 фазам: 1 - слабое увеличение апексов в размерах; 2- слабый линейный рост, раскрытие 2-3 примордиев; 3 -образование розетки с листьями и почками; 4 - формирование конгломератов почек и побегов длиной свыше 1 см. Этап пролиферации оценивали по количеству «клубочков», пригодных к клонированию, коэффициенту размножения, который подсчитывали путем деления количества побегов на количество исходных эксплантов, и количеству побегов >1,5 см. Адвентивный органогенез яблони и груши. Эксплантами служили: лист с поперек надрезанными жилками; сегмент стебля (междоузлие) и сегмент корня длиной 5-6 мм. Культивирование проводили на средах Мурасиге-Скуга, Ллойда-Маккауна, Гамборга, №6 (Fasolo F. et al. 1989). Из регуляторов роста ислользовали, мг/л: БАП - 1,0-3,0, TDZ – 0,5, ИМК - 0,1, НУК - 0,1, 2,4-Д - 0,1. Первоначально, в течение первых 2 недель, экспланты культивировали в темноте, затем - при обычных условиях (16-часовой фотопериод, освещенность 2-3 тыс. лк и температура воздуха 24±20С). У адвентивных новообразований отмечали начало формирования каллуса и побегов, по окончанию опыта – количество эксплантов с побегами, количество побегов на эксплант, расположение зон регенерации. Опыты проводили в трехкратной повторности по 10-15 эксплантов. Статистическая обработка экспериментальных данных проводилась методом дисперсионного анализа (Доспехов Б.А., 1985) с оценкой по наименьшей существенной разнице и t-критерию Дункана. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Оптимизация приемов регенерации клоновых подвоев и сортов яблони и груши из пазушных меристем Регенерационная способность изолируемого экспланта в зависимости от морфологических и биологических особенностей растений. Первостепенным фактором, влияющим на введение в культуру in vitro эксплантов, является стерилизация. Наиболее эффективно происходит стерилизация при использовании 0,4% раствора нитрата ртути в экспозиции 45-50 секунд, позволяющая не только на 22,5%, сократить контаминацию, но и достичь максимальной регенерации эксплантов (80,0%), по сравнению с 6% раствором гипохлорита кальция в течение 3-6 минут (20,0%). Оптимальный срок введения в культуру in vitro яблони и груши, соответствует фазе активного роста побегов (июнь), при котором скорость разрастания эксплантов значительно опережает другие сроки (мартовский и августовский). При введении верхушечных и пазушных почек только у первых через 1 месяц культивирования все экспланты достигли 3 и 4 фаз развития. Лучшей регенерационной способностью обладают экспланты более крупного размера (до 1,5 мм), клонирование которых возможно уже в первом пассаже. Влияние химических компонентов питательной среды на меристематическую активность эксплантов. Сравнительное изучение сред Мурасиге-Скуга (MC) и Кворина-Лепуавра (QL) на фоне БАП 0,5 мг/л при введении в культуру in vitro яблони и груши свидетельствует о наиболее эффективной регенерации меристематических верхушек через 3 месяца культивирования на среде Кворина-Лепуавра (рис.1). Рисунок 1 - Регенерация меристематических верхушек яблони и груши на разных средах (t- критерий Дункана рассчитан для каждого вида новообразований). У большинства генотипов яблони и груши на этой среде наблюдалось увеличение на 13,4–46,7% количества эксплантов, достигших 3-4 фаз развития. Лишь у подвоя яблони 62-396, наоборот, это значение на среде Мурасиге-Скуга было в 13,1 раз выше, но общий уровень регенерации на 52,5% ниже. Скорость дифференциации меристематической ткани эксплантов груши ниже, чем у яблони: максимальное количество эксплантов, достигших 3-4 фаз развития у яблони составило 60,0%, а у груши - 33,3%. Добавление к среде, содержащей 0,5 мг/л БАП ИМК (0,02 мг/л) или ИМК и ГК (по 0,02 мг/л) не стимулировало морфогенез яблони и груши. Особенности влияния биологически активных веществ на морфогенез плодовых культур на этапе пролиферации. Цитокинины. Из изучаемых цитокининов (БАП, кинетин, зеатин, TDZ) наиболее эффективным оказался БАП в концентрации 2,0 мг/л, обеспечивающий лучшее развитие побегов и максимальный коэффициент размножения до 7,2 (табл. 1). Таблица 1 - Влияние цитокининов на пролиферацию яблони и груши Подвой, сорт Цитокинины, мг/л Коэффициент размножения, шт. Количество побегов, пригодных для укоренения, % 62-396 БАП 2,0 (контроль) 6,3 25,0 b TDZ 0.5 8,1 0,0 Кинетин 5,0 1,5 80,0а Зеатин 5,0 5,3 35,5 b 57-195 БАП 2,0 (контроль) 7,2 12,0 с TDZ 0.5 7,4 0,0 Кинетин 5,0 1,2 58,3 а Зеатин 5,0 4,9 51,1 аb Вишневое БАП 2,0 (контроль) 1,3 0,0 TDZ 0.5 4,0 0,0 Кинетин 5,0 1,6 44,4 b Зеатин 5,0 2,8 73,3 а Груша № 10 БАП 2,0 (контроль) 3,5 90,1 аb TDZ 0.5 5,6 0,0 Кинетин 5,0 1,7 100,0 а Зеатин 5,0 4,5 69,9 b Осенняя Яковлева БАП 2,0 (контроль) 3,9 35,7 b TDZ 0.5 2,9 0,0 Кинетин 5,0 1,0 85,0 а Зеатин 5,0 3,8 50,7 b НСР05 1,3 t- критерий Дункана рассчитан отдельно для каждой формы. Тидиазурон, как более сильный цитокинин, хотя и увеличивал коэффициент размножения (до 8,3), но способствовал образованию мелких побегов с видоизмененными листьями, которые не пригодны для укоренения. Повышение концентрации БАП от 1,0 до 3,0 мг/л приводило к увеличению коэффициента размножения в 1,4–1,7 раза и уменьшению на 9,1-31,4% количества микропобегов оптимальной для укоренения длины (рис 2). Субкультивирование эксплантов на среду без гормонов позволило увеличить количество микропобегов, пригодных для укоренения, более чем в 2 раза по сравнению с вариантами, содержащими в среде БАП постоянно. Рисунок 2 - Влияние концентрации БАП и времени его воздействия на пролиферацию клоновых подвоев яблони и груши. Постоянное присутствие в составе среды повышенных концентраций БАП вызывает образование витрифицированных побегов. При этом нарушается технологический цикл получения растений-регенерантов, и теряется растительный материал in vitro. Наиболее подвержены обводнению тканей груша № 12 (51%), подвои яблони 62-396 (94%), Р59, Р60 (74%), 54-118 (47%). Исследования показали, что для устранения витрификации при культивировании подвоев яблони Р60, 62-396, груши № 12 целесообразно снижать содержание в среде БАП до 0,5 мг/л или вводить более слабый цитокинин – кинетин в концентрации 5,0 мг/л (рис. 3). У подвоя яблони 54-118 решить эту проблему удалось только в присутствии кинетина. Рисунок 3 - Влияние цитокининов на витрифицикацию побегов. Введение аденин-сульфата в состав среды в концентрации 50,0 мг/л на фоне БАП 2 мг/л позволило не только увеличить в 1,2-2,0 раза, в зависимости от генотипа, коэффициент размножения, но и улучшить качество микропобегов подвоев яблони и груши за счет увеличения их длины и количества листьев на побег. Цитокинины, ауксины, гиббереллины. В наших исследованиях добавление к среде, содержащей 2,0 мг/л БАП 0,2 мг/л ГК и 0,1 мг/л ИМК не влияло ни на коэффициент размножения (рис. 4), ни на длину микропобегов яблони и груши и оказалось менее эффективным, чем снижение содержания БАП до 1 мг/л (рис. 5). Рисунок 4 - Влияние регуляторов роста на коэффициент размножения яблони и груши. Рисунок 5 - Влияние регуляторов роста на удлинение микропобегов яблони и груши. Коэффициент размножения при этом зависел от генотипа. У яблони он варьировал от 1,1 (сорт Орлик) до 13,4 (подвой Р59), а у груши от 5,3 (сорт Осенняя Яковлева) до 9,0 (подвой груша № 12). Увеличение концентрации ГК до 0,5 мг/л на фоне БАП 2,0 мг/л и кинетина 5,0 мг/л также не влияло на коэффициент размножения и длину микропобегов. Влияние состава питательной среды на регенерационные процессы этапа размножения. Минеральный состав. Сравнительное изучение, проведенное нами, наиболее часто рекомендуемых для плодовых культур сред Кворина-Лепуавра, Мурасиге-Скуга, Гамбурга, Ллоида-Маккауна свидетельствовало о явном преимуществе среды Кворина-Лепуавра (рис. 6). Рисунок 6 - Влияние минерального состава питательных сред на пролиферацию клоновых подвоев и сортов яблони и груши. Положительное влияние на процесс пролиферации побегов яблони и груши in vitro также оказывет снижение в 4 раза аммонийной формы азота в среде Мурасиге-Скуга, обеспечивающее увеличение коэффициента размножения в 1,3-1,5 раза, по сравнению с контролем. Антиоксиданты. Введение в состав среды на фоне 2,0 мг/л БАП антиоксидантов: аскорбиновой (АК) или лимонной (ЛК) кислот, или поливинилпирролидона (ПВП) позволило не только снизить ингибирующую активность полифенолов на поверхности среза, особенно у сортов и подвоев яблони, но и активизировать ростовую активность ткани. В результате чего улучшалось качество микрочеренков и, как следствие, увеличивалось количество побегов оптимальной для укоренения длины: у подвоя яблони 62-396 в присутствии ЛК, сорта яблони Лобо и подвоя груши №12 - ПВП, сорта груши Пхорун – АК, а для подвоя яблони Р 59 – любого исследуемого антиоксиданта (рис. 7), но не оказывало влияние на коэффициент размножения. Установлено, что источником углеводов наряду с сахарозой (30 мг/л) в питательной среде для размножения может служить и сахар пищевой в концентрации 30 мг/л. Рисунок 7 - Влияние антиоксидантов на удлинение микропобегов яблони и груши. Влияние длительности культивирования на процесс регенерации плодовых культур. При анализе регенерационного потенциала клоновых подвоев и сортов яблони и груши на протяжении 10 пассажей прослеживалась генотипическая реакция. Установлено увеличение коэффициента размножения к 5 - 7 пассажам у всех подвоев и сортов и последующее его снижение к 8 и 10 пассажам (табл. 2). Наибольшая степень пролиферации наблюдалась у клоновых подвоев яблони 62-396 и 54-118 и сорта груши Пхорун. При этом средний коэффициент размножения у них за 10 пассажей составил 6,1; 5,5 и 6,0, соответственно. Выявлено, что низким регенерационным потенциалом обладают сорта яблони Лобо и груши Осенняя Яковлева (коэффициент размножения варьировал от 1,0 до 5,3). При увеличении числа субкультивирований до 10 не было отмечено появление фенотипических отклонений. Влияние ориентации микропобегов на коэффициент размножения. Исследования показали, что у горизонтального побега без верхушки, по сравнению с горизонтальным и вертикальными побегами, за счет лучшего контакта со средой и удаления верхушки наблюдается увеличение в 1,2-1,6 раза коэффициента размножения вне зависимости от генотипа. Изучение возможности длительного хранения in vitro. Сохранность эксплантов при беспересадочном хранении при пониженных температурах, а также уровень их регенерационной способности зависит как от генотипа, так и от времени депонирования и гормонального состава среды (табл. 3). Для увеличения времени беспересадочного хранения плодовых культур in vitro до 6 месяцев целесообразно культивировать экспланты на среде с БАП 1,0 мг/л в контролируемых условиях (температура +40 С, темновая фаза). Таблица 2 - Коэффициент размножения клоновых подвоев и сортов яблони и груши в зависимости от субкультивирований Подвой, сорт Пассаж n3 n4 n5 n6 n7 n8 n9 n10 3-17-38 3,8 3,2 7,5 5,5 4,8 4,7 3,2 3,5 4,5 62-396 4,8 5,8 6,9 6,8 6,7 6,5 6,0 5,9 6,1 57-491 3,7 3,8 5,0 10,0 6,4 4,2 4,5 4,0 5,2 57-195 2,0 4,0 5,3 7,0 8,0 4,0 5,6 5,3 5,1 54-118 3,3 4,7 5,9 6,0 6,8 6,0 6,8 4,8 5,5 Р59 4,5 4,8 4,5 6,3 7,9 4,4 6,3 4,9 5,4 Р60 4,1 2,5 5,0 5,0 4,8 3,7 3,7 4,2 4,1 Лобо 1,0 2,0 5,3 4,0 3,2 2,6 2,5 2,2 2,8 Груша№12 3,5 3,3 4,3 6,2 7,2 5,5 6,0 5,3 5,1 Груша№10 2,6 5,0 5,5 7,8 6,5 4,5 5,3 4,9 5,2 Пхорун 2,5 3,4 3,9 9,7 9,0 6,5 7,9 5,6 6,0 ОсенняяЯковлева 2,0 1,8 2,5 4,9 4,0 3,1 3,1 3,5 3,1 3,1 3,6 5,1 6,1 6,2 4,5 5,9 4,5 4,8 НСР 05 0,5 Таблица 3 - Влияние длительности хранения эксплантов на регенерационную способность подвоев и сортов яблони и груши П о д в о й, с орт Р е г у л я т о р ы р о с т а, мг/л Ч е р е з 4 м е с я ц а Ч е р е з 5 м е с я ц е в Ч е р е з 6 м е с я ц е в С о х р а н н о с т ь, % К о э ф ф и ц и е н т р а з м н о ж е н и я, ш т. Д л и н а п о б е г о в, с м С о х р а н н о с т ь, % К о э ф ф и ц и е н т р з м н о ж е н и я, ш т. Д л и н а п о б е г о в, с м С о х р а н н о с т ь, % К о э ф ф и ц и е н т р а з м н о ж е н и я, ш т. Д л и н а п о б е г о в, с м О с е н н я я Я к о в л е в а БАП 1, 0 1 0 0, 0 а 3, 5 2, 5 7 5, 0 b 1, 0 1, 4 5 0, 0 с 1, 0 3, 7 БАП 1, 0 + АБК 1, 0 6 5, 0 b с 2, 0 0, 5 5 0, 0 b 1, 0 1, 3 2 5, 0 d 1, 0 0, 5 АБК 1, 0 2 5, 0 с 1, 0 0, 3 2 5, 0 d 1, 0 0, 3 0, 0 - - Г р у ш а № 10 БАП 1, 0 1 0 0, 0 а 2, 5 2, 6 7 5, 0 b 1, 0 1, 1 2 5, 0 d 1, 0 0, 2 БАП 1, 0+АБК 1, 0 1 0 0, 0 а 2, 5 1, 7 5 0, 0 с 1, 0 2, 5 2 5, 0 d 1, 0 1, 7 АБК 1, 0 25, 0 с 1, 0 0, 3 0, 0 - - - - - Г р у ш а № 12 БАП 1, 0 1 0 0, 0 а 7, 2 2, 1 1 0 0, 0 а 4, 3 1, 1 1 0 0 а 3, 7 1, 6 БАП 1, 0+АБК 1, 0 1 0 0, 0 а 7, 0 1, 7 7 5, 0 b 1, 0 0, 7 1 0 0, 0 а 5, 0 1, 3 АБК 1, 0 7 5, 0 а b 1, 0 0, 3 7 5, 0 b 1, 0 1, 1 5 0, 0 с 1, 0 1, 0 6 2 – 3 9 6 БАП 1, 0 1 0 0, 0 а 2, 5 2, 0 1 0 0, 0 а 1, 7 1, 2 100, 0 а 1, 2 2, 1 БАП 1, 0+АБК 1, 0 1 0 0, 0 а 1, 2 1, 7 7 5, 0 b 1, 3 1, 5 7 5, 0 b 1, 0 1, 4 АБК 1, 0 7 5, 0 a b 1, 0 0, 2 5 0, 0 с 1, 0 1, 2 2 5, 0 d 1, 0 0, 2 3 – 1 7 – 3 8 БАП 1, 0 1 0 0, 0 а 3, 5 1, 7 1 0 0, 0 a 2, 0 0, 8 1 0 0, 0 а 3, 0 1, 9 БАП 1, 0+АБК 1, 1 0 0, 0 а 1, 2 2, 9 1 0 0, 0 a 1, 5 1, 1 1 0 0, 0 а 1, 2 2, 2 АБК 1 7 5, 0 а b 1, 0 0, 3 5 0, 0 с 1, 0 0, 6 5 0, 0 с 1, 0 0, 4 Н С Р 0 5 1, 3 0, 5 Fфакт < Fтеорет 0, 5 Fфакт < Fтеор 0, 9

Похожие:

	Оценка ситуативной морозоустойчивости имунных к парше сортов яблони методом дта Познакомиться с понятием электрометаллургия, процессом электролиза расплавов и растворов солей		Рабочая программа по дисциплине опд. Ф. 08 Моделирование и оптимизация Курс «Моделирование и оптимизация технологических процессов» является прикладной наукой, занимающейся вопросами моделирования рациональных...
	Рабочая программа по дисциплине опд. Ф. 08 Моделирование и оптимизация... Курс «Моделирование и оптимизация технологических процессов» является прикладной наукой, занимающейся вопросами моделирования рациональных...		Программа научного семинара " Моделирование и оптимизация бизнес процессов " Программа предназначена для преподавателей, ведущих данную дисциплину, учебных ассистентов и студентов направления 080500. 68 Бизнес-информатика...
	Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Дети в садике съедают за один день яблок столько же, сколько и груш. При этом каждая девочка съедает 1 яблоко и 3 груши, а каждый...		Физиолого-биохимические подходы в изучении зимостойкости у сортов яблони из коллекции внииспк1 Одной из важнейших задач школы является воспитание культурного, всесторонне развитого человека, воспринимающего мир как единое целое....
	Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Перми, учителя г. Перми и Пермского края: Алёшкина Татьяна Васильевна, Белова Вера Михайловна, Борцова Вера Владимировна, Караваева...		«Учебно-методический комплекс 150501 «Моделирование и оптимизация...
	Заглавная буква Х Составитель: Красова Ольга Васильевна, мбоу «Катромская основная общеобразовательная школа» Харовского района		Тема: Векторная графика (программа OpenOffice. Draw) Корелова Ольга Васильевна, руководитель бму «Ресурсный центр в сфере образования»
	Наша» клубника – оттого, что я не большой специалист в «клубничном... Всего же за почти 20 лет, и наиболее активно последние лет 6, мы испытали, в основном на своем участке, более 30 сортов клубники...		Оптимизация сохранения биологического разнообразия лекарственных... Разработка методов государственного регулирования процессов рождаемости, смертности, брачности и разводимости
	Урока по теме «Атомное ядро» Автор: Ромась Ольга Васильевна, учитель физики сош №1 им. А. Н. Ёлгина с. Теренколь Качирского района Павлодарской области		Производство белка Так, при изготовлении некоторых сортов колбасы используется кислотное брожение, обычно при участии комплекса молочнокислых бактерий....
	Влияние предшественников на урожайность сортов озимой пшеницы, технологические...		Данильченко Ольга Васильевна Учебно-методический комплекс по дисциплине сервисная деятельность составлен в соответствии с требованиями Государственного образовательного...