Влияние секретируемых плацентой факторов на количество клеток и миграционную активность эндотелиальных клеток линии EA.hy926. По результатам медианного теста количество ЭК в присутствии факторов плацент в III триместре физиологической беременности было ниже по сравнению с I триместром при разведениях кондиционированных сред от 1:2 до 1:256 (рис.1). При этом ширина линии нарушенного монослоя была ниже (рис. 2). Таким образом, происходит ограничение ангиогенеза к III триместру физиологической беременности. Рис. 1. Изменение количества эндотелиальных клеток линии EA.hy926. *- p<0,05, **- p<0,01, ***- p<0,001 – по сравнению с контролем. Рис. 2. Миграционная активность эндотелиальных клеток линии EA.hy926. *** - p<0,001 по сравнению с группой «9-11 недель»; # - p<0,05 по сравнению с группой «38-39 недель». В присутствии факторов, секретируемых плацентой при гестозе, в разведениях от 1:2 до 1:126 количество ЭК было ниже по сравнению с количеством ЭК в присутствии факторов плацент женщин в III триместре физиологической беременности (рис. 1). При этом факторы, секретируемые плацентой при гестозе, снижали количество мигрировавших клеток по сравнению с III триместром физиологической беременности (рис. 2). Обнаруженное нарушение миграционной активности ЭК и снижение их количества под влиянием факторов плацент при гестозе, возможно, участвует в индукции эндотелиальной дисфункции, способствует нарушению проницаемости сосудов, появлению отеков и развитию протеинурии. Влияние секретируемых плацентой факторов на экспрессию поверхностных молекул эндотелиальными клетками линии EA.hy926. Факторы, секретируемые плацентой в I триместре физиологической беременности, повышали экспрессию исследованных молекул ЭК за исключением CD29 и CD58. Экспрессия изученных адгезионных молекул и рецепторов ангиогенных факторов ЭК после их инкубации в присутствии кондиционированных сред плацент в III триместре физиологической беременности была ниже по сравнению с экспрессией после инкубации ЭК в присутствии кондиционированных сред плацент в I триместре беременности. Такое изменение фенотипа ЭК в условиях in vivo коррелирует с активным ангиогенезом плаценты и активной миграцией лимфоцитов в плаценту в I триместре беременности и со снижением секреции ангиогенных факторов клетками иммунной системы плаценты и стабилизацией сосудистого русла, снижением уровня миграции лейкоцитов в децидуальную оболочку к III триместру физиологической беременности. В присутствии факторов плацент женщин с гестозом экспрессия CD119 была выше по сравнению с экспрессией в присутствии факторов плацент женщин в III триместре физиологической беременности, что отражает усиление чувствительности ЭК к действию провоспалительных цитокинов в условиях развития воспалительной реакции в плаценте при гестозе при участии NK-клеток. Влияние секретируемых плацентой факторов на секрецию цитокинов эндотелиальными клетками линии EA.hy926. Секреция исследованных цитокинов и хемокинов ЭК в присутствии секреторных продуктов плацент в I и III триместрах физиологической беременности не различалась, что указывает на роль секреторной активности ЭК в поддержании базового уровня миграции лимфоцитов в плаценту. В присутствии кондиционированных сред плацент женщин с гестозом, секреция bFGF была выше, а секреция IL-8 - ниже по сравнению с III триместром физиологической беременности (рис. 3), что не соответствует изменению секреторной активности плаценты при этой патологии и указывает на преимущественную роль клеток иммунной системы в секреции цитокинов плацентой. Рис. 3. Изменение секреции цитокинов эндотелиальными клетками линии EA.hy926. # - p<0,05 по сравнению с группой «38-39 недель». Влияние факторов, секретируемых плацентой, на адгезию и трансэндотелиальную миграцию моноцитоподобных клеток линии THP-1. Адгезия моноцитоподобных клеток к ЭК в присутствии секреторных продуктов плацент женщин всех исследованных групп не отличалась от адгезии в контроле. Количество клеток, мигрировавших в нижнюю камеру после внесения в нее секреторных продуктов плацент в III триместре физиологической беременности и беременности, осложненной гестозом, было ниже по сравнению со спонтанным уровнем (рис.4). Под влиянием секреторных продуктов плаценты в III триместре физиологической беременности активность трансэндотелиальной миграции клеток линии ТНР-1 была ниже по сравнению с влиянием секреторных продуктов плацент в I триместре беременности (рис.4). При этом экспрессия CD11a моноцитоподобными клетками, находящимися в верхней камере, была снижена. Снижение трансэндотелиальной миграции может быть обусловлено как сниженной экспрессией CD11a моноцитоподобными клетками при одновременном снижении экспрессии CD54 ЭК, так и отмеченной ранее сниженной секрецией IL-6 и IL-8 плацентой в III триместре физиологической беременности по сравнению с I триместром [Соколов Д.И., 2009]. Рис. 4. Количество клеток линии ТНР-1 в нижней камере после трансэндотелиальной миграции. ♦♦ - p<0,01, ♦♦♦ - p<0,001 по сравнению с контролем; *** - p<0,001 по сравнению с группой «9-11 недель», # - p<0,05 по сравнению с группой «38-39 недель» Полученные результаты указывают на участие молекул CD11a и CD54 в регуляции миграции моноцитов в плаценту in vivo. Под влиянием факторов, секретируемых плацентой при гестозе, активность трансэндотелиальной миграции моноцитоподобных клеток линии ТНР-1 была выше по сравнению с действием факторов, секретируемых плацентой в III триместре физиологической беременности (рис. 4), чему может способствовать как повышенная секреция IL-6 плацентой при гестозе, так и обнаруженная повышенная экспрессия CD11b клетками линии ТНР-1 в этом случае и усиленная секреция эндотелиальными клетками цитокина bFGF в присутствии факторов, секретируемых плацентой при гестозе. В присутствии провоспалительных цитокинов, секретируемых при гестозе клетками иммунной системы, присутствующими в децидуальной оболочке и плаценте, bFGF может стимулировать трансэндотелиальную миграцию моноцитоподобных клеток, а в условиях in vivo за счет усиления миграции мононуклеаров в плаценту, активизировать воспаление в плаценте. Влияние препарата на основе магния аспарагината (ООО «НФФТ «Полисан») на изменение количества ЭК линии EA.Hy926. Препарат на основе магния аспарагината в разведении 1:2000 (концентрация магния аспарагината 2,5 мг/л) увеличивал количество ЭК линии EA.Hy926 (рис. 5). Таким образом, препарат на основе магния аспарагината представляется перспективным для коррекции эндотелиальной дисфункции. Количество клеток линии EA.Hy926 под влиянием препарата на основе магния аспарагината Рис. 5. Влияние препарата на основе магния аспарагината на количество эндотелиальных клеток. ** - p<0,01 увеличение количества ЭК по сравнению с контролем; ♦ p<0,05; ♦♦ p<0,01; ♦♦♦ p<0,001 снижение количества ЭК по сравнению с контролем. Таким образом, ограничение ангиогенеза плаценты и привлечения моноцитов в плаценту и децидуальную оболочку к концу беременности происходит не только за счет изменения секреторной активности клеток плаценты, но и посредством изменения экспрессии адгезионных молекул и рецепторов ЭК, следствием чего является изменение функциональной активности ЭК. При гестозе в развитии воспаления в плаценте ЭК принимают участие посредством усиления чувствительности к провоспалительным стимулам (повышение экспрессии рецептора IFNγ) и стимуляции миграции моноцитов за счет локальной секреции цитокинов (bFGF). Выводы
От первого к третьему триместру физиологической беременности снижается секреция плацентой проангиогенных молекул PlGF (p<0,05), MMP-2 (p<0,001), Ang-2 (p<0,001) и секреторных вариантов поверхностных молекул sFasL (p<0,001), sICAM-3(p<0,05), а секреция молекул sTRAIL (p<0,001), sVE-Cadherin (p<0,01), sPECAM (p<0,001), sE-Selectin (p<0,001), и sVCAM-1(p<0,01) повышается.
Беременность, осложненная гестозом, характеризуется повышением секреции плацентой sVEGF-R1 (p<0,05), sFas (p<0,05), sVE-Cadherin (p<0,05) и снижением секреции sICAM-3 (p<0,05). Изменения секреции этих растворимых форм адгезионных молекул плацентой ведут к изменению содержания этих молекул в сыворотке периферической крови женщин с патологическим течением беременности.
При физиологической беременности экспрессия эндотелиальными клетками линии EA.Hy926 адгезионных молекул CD9, CD29, CD34, CD54,CD49d, CD62P, integrin β7, рецепторов ангиогенных факторов VEGF-R1, VEGF-R2, VEGF-R3, Tie-1, CD140a, CD140b, CD184 и молекулы CD119 снижается в третьем триместре под влиянием секреторных продуктов плацент, что сопровождается снижением количества и миграционной активности эндотелиальных клеток линии EA.Hy926.
При патологической беременности, характеризующейся развитием гестоза, происходит усиление экспрессии эндотелиальными клетками линии EA.hy926 рецептора для IFNγ (CD119), усиление секреции этими клетками bFGF и снижение секреции IL-8 под влиянием факторов, секретируемых плацентой, что ассоциировано со снижением количества и миграционной активности эндотелиальных клеток линии EA.Hy926.
Сниженние трансэндотелиальной миграции моноцитоподобных клеток линии ТНР-1 в присутствии факторов плацент в третьем триместре физиологической беременности (по сравнению с первым триместром) коррелирует со снижением экспрессии CD54 эндотелиальными клетками линии EA.hy926 и CD11a клетками линии ТНР-1. Повышение трансэндотелиальной миграции клеток линии ТНР-1 в присутствии факторов плацент беременных с гестозом по сравнению с физиологической беременностью сопровождается усилением экспрессии CD11b этими клетками.
Препарат на основе магния аспартата (ООО «НТФФ «Полисан») в разведении 1:2000 (концентрация магния аспарагината 2,5 мг/л) повышет количество эндотелиальных клеток линии EA.Hy926 в культуре (p<0,01).
Список работ, опубликованных по теме диссертации:Статьи, опубликованные в изданиях, рекомендованных ВАК России:
Степанова, О.И. Влияние препарата, содержащего магний, на пролиферативную и секреторную активность эндотелиальных клеток / О.И.Степанова, Н.В.Аманова, М.С.Зайнулина, Д.И.Соколов, С.А. Сельков // Журнал акушерства и женских болезней. – 2011. – Т.LX, №4. – С.98-103.
Степанова, О.И. Влияние растворимых продуктов ткани плаценты на экспрессию адгезионных молекул эндотелиальными клетками EA.Hy926. / О.И.Степанова, Т.Ю.Львова, Е.Н.Пюрбеева, М.И.Мирашвили, М.С.Зайнулина, С.А.Сельков , Д.И.Соколов // Медицинская иммунология. – 2011. – Т.13,№6. – С.589-596.
Степанова, О.И. Влияние секреторных факторов плаценты на продукцию цитокинов эндотелиальными клетками / О.И.Степанова, Н.Ю. Сафронова, К.Н.Фураева, Т.Ю. Львова, Д.И.Соколов, С.А. Сельков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2012. – Т. 154, № 9. – С. 361-364.
Степанова, О.И. Влияние факторов, секретируемых тканью плаценты, на пролиферативную активность эндотелиальных клеток линии EA.hy926 / О.И.Степанова, К.Н.Фураева, И.П Николаенков., С.А.Сельков, Д.И. Соколов // Журнал акушерства и женских болезней. – 2012. – Т. LXI, №5. – С.80-84.
Степанова, О.И. Изменение экспрессии поверхностных рецепторов на эндотелиальных клетках линии EA.Hy926 под влиянием факторов, секретируемых тканью плаценты / О.И.Степанова, Т.Ю.Львова, М.И.Мирашвили, К.Н.Фураева, Д.И.Соколов, С.А. Сельков // Медицинская иммунология. – 2012. – Т.14, №4-5. – С. 321-328.
Степанова, О.И. Продукция секреторных вариантов поверхностных молекул sFas, sFasL, TRAIL тканью плаценты в норме и при гестозе / О.И.Степанова, М.В.Лесничия, М.А.Клюкина, О.Н.Аржанова, С.А. Сельков, Д.И.Соколов // Медицинский академический журнал - 2010. – Т.10, №1. – С.52-56.
Степанова, О.И. Секреция ангиопоэтинов тканью плаценты при физиологическом развитии беременности и при гестозе / О.И.Степанова, М.В.Лесничия, Т.Ю Львова., Д.И.Соколов, С.А. Сельков // Журнал акушерства и женских болезней. – 2010. – Том LIX. - №6. – С.69-74.
Степанова, О.И. Сравнительная оценка концентрации sVEGF-R1 и sVE-cadherin в сыворотке крови беременных и их продукции тканью плаценты / Степанова О.И., Лесничия М.В., Аржанова О.Н., Сельков С.А., Соколов Д.И. // Молекулярная медицина. – 2010. - №2. – С.43-47.
Степанова, О.И. Сравнительная оценка концентрации секреторных вариантов молекул адгезии в сыворотке крови беременных и их продукции тканью плаценты / О.И. Степанова, Н.В. Аманова, М.С. Зайнулина, С.А. Сельков, Д.И. Соколов // Молекулярная медицина. – 2011. - №1. – с.48-53.
Тезисы:
Лесничия М.В., Степанова О.И., Мирашвили М.И. Клинико-иммунологические аспекты в оценке и прогнозировании гестоза // Материалы научной конференции молодых ученых «Репродуктивная медицина: взгляд молодых – 2010». – 2010. – С. 24-25.
Степанова О.И., Львова Т.Ю. Секреция про- и анти-ангиогенных факторов тканью плаценты при физиологической беременности и при гестозе // Российский иммунологический журнал. – 2010. – Т.4(13), №4. – С. 384
Степанова О.И., Львова Т.Ю., Соколов Д.И. Нарушение пролиферативной активности эндотелиальных клеток при гестозе // Медицинский академический журнал. – 2010. – Т.10, №5. – С.219.
Степанова О.И., Соколов Д.И., Сельков С.А. Экспрессия PlGF и MMP клетками плаценты // Медицинская иммунология. – 2009. – Т.11. – С. 423.
Степанова, О.И. Влияние секреторных продуктов ткани плаценты на трансэндотелиальную миграцию моноцитоподобных клеток линии ТНР-1 / О.И. Степанова, Т.Ю.Львова, Н. Ю.Сафронова, К.Н.Фураева, С.А.Сельков, Д.И. Соколов // Медицинская иммунология. – 2011. – Т.13,№4-5. – С. 439-440.
Степанова, О.И. Влияние факторов, секретируемых тканью плаценты при физиологической беременности и при гестозе, на миграционную активность эндотелиальных клеток линии EA.hy926 / О.И.Степанова, Г.Р.Козонов, Т.У.Кузьминых, Д.И.Соколов // Российский иммунологический журнал. – 2012. – Т.6(14), №2. – С.162.
Фураева К.Н. Изменение пролиферации, миграции, образования трубок сосудов и секреции цитокинов эндотелиальными клетками линии . EA.Hy926 в присутствии факторов, секретируемых тканью плаценты / К.Н.Фураева, О.И. Степанова, Т.Ю.Львова, С.А.Сельков, Д.И.Соколов // Медицинский академический журнал. – 2012. – Т.12,№3. – С.67-69.
Stepanova O.I. Soluble forms of cell surface adhesion molecules in preeclampsia / O.I.Stepanova, N.V. Amanova, T.U. Lvova, D.I.Sokolov, M.S. Zainulina, S.A.Selkov // International Immunology meeting abstracts – 2010. – Vol.22, Suppl.1 Pt 4. – P. i181.
Stepanova O.I., Selkov S.A., Sokolov D.I. Characterictic of placental secretion of PlGF, MMP-2 and MMP-9 // European Journal of Immunology, Supplement 1/09. –2009. - S.710.
Stepanova, O.I. Adhesion molecules contribution in placental tissue development during normal pregnancy and complicated with preeclampsia one / O.I. Stepanova, D.I. Sokolov, T.U. Lvova, K.N. Furaeva, E.N. Purbeeva, S.A.Selkov // Abtracts of ISCOM-2011. – 2011. – P.265.
Список сокращений:
ЭТС – эмбриональная телячья сыворотка
ЭК – эндотелиальные клетки
Ang – ангиопоэтин
bFGF - фактор роста фибробластов
CD- кластер дифференцировки
Fas - рецептор суперсемейства TNFα
FasL – лиганд для рецептора Fas
IL – интерлейкин
MCP-1 - моноцитарный хемотактический протеин-1
MMP – металлопротеиназы матрикса
PECAM-1 - тромбоцитарно-эндотелиальная адгезионная молекула-1
PlGF – плацентарный ростовой фактор
RANTES – фактор, экспрессируемый и секретируемый Т-лимфоцитами после их активации
TRAIL - TNF-подобный лиганд, инициирующий апоптоз
VCAM-1 - сосудистая молекула клеточной адгезии-1
VE-cadherin - кадгерин эндотелия сосудов
VEGF - фактор роста эндотелия сосудов
VEGF-R – рецептор VEGF
|
