Применение иммуномодулятора тимогена для стимуляции половой охоты и оплодотворяемости у коров

На правах рукописи ЛОГВИНОВ Александр Анатольевич ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОМОДУЛЯТОРА ТИМОГЕНА ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ ПОЛОВОЙ ОХОТЫ И ОПЛОДОТВОРЯЕМОСТИ У КОРОВ 03.00.13 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Белгород 2009 Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия». Научный руководитель: Заслуженный ветеринарный врач РФ, доктор биологических наук, профессор Безбородов Николай Васильевич Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Ли Анатолий Ченсонович; кандидат биологических наук Пальчиков Михаил Юрьевич Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия» Защита состоится « 21 » октября 2009 г., в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.01 при ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 308503, Россия, Белгородская область, Белгородский р-н, пос. Майский, ул. Вавилова 1. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия». Автореферат разослан «____» __________ 2009 г. Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук Ю.Н. Литвинов 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Воспроизводство сельскохозяйственных животных является основой технологии разведения, содержания и получения продукции при промышленном ведении животноводства. От состояния воспроизводства стада зависит продуктивность, экономичность и рентабельность отрасли. Рядом исследований (Дедов Ю.М., 1989; Ибрагимова А.Х., 1993, Мингазов Т.А., 1994) отмечено, что одним из способов интенсификации воспроизводства самок является применение различных медикаментозных средств и методов повышения оплодотворяемости (Нежданов А.Г., 1985; Полянцев Н.И., 1989; Равилов М.Н., 1994; Шубин А.А., 1996 и др.) Современные физиологические, биохимические, иммунологические методы исследований позволяют накапливать объективные данные и глубже понять процессы, способствующие в организме самок обеспечивать половую цикличность и своевременную оплодотворяемость. Дальнейшее решение проблемы повышения воспроизводительной способности самок животных, которое определяется запросами производства, связано с всесторонним изучением гормональных изменений при становлении половой цикличности, динамики клеточных и гуморальных факторов, характеризующих защитные силы организма, и на их основе внедрением современных методов стимуляции цикличности и оплодотворяемости коров. Одним из таких методов стимуляции половой цикличности в ранний послеродовой период является применение иммуномодулирующих препаратов пептидной природы, к числу которых относится биокорректор Тимоген. Цель и задачи исследований. Целью работы было изучение механизмов действия и определение эффективности применения пептидного регулятора тимогена для стимуляции половой охоты и повышения оплодотворяемости коров в ранний послеродовой период. Для достижения цели были поставлены на разрешение следующие задачи: - определить динамику стероидных гормонов в крови коров до и после применения тимогена; - изучить биохимические показатели крови, характеризующие уровень компенсаторно-приспособительных механизмов до и после введения тимогена; - определить характер гистоструктурных изменений в половых и вторичных иммунокомпетентных органах коров до и после применения тимогена; - определить эффективность применения тимогена в качестве средства стимуляции половой охоты и оплодотворяемости коров в ранний послеродовой период; - отразить экономическую эффективность применения тимогена для стимуляции половой охоты и оплодотворяемости коров. Научная новизна работы. Впервые комплексными исследованиями изучены процессы становления и активизации адаптационно-метаболических процессов у коров после стимуляции половой охоты в ранний послеродовой период синтетическим пептидным регулятором тимогеном. Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенных исследований расширяют и дополняют существующие представления о механизмах регуляции и стимуляции половой цикличности с последующей оплодотворяемостью у коров путем применения глутамил-триптофанового комплекса (Тимоген) в ранний послеродовой период. Предложенные производству способы ранней стимуляции половой охоты и оплодотворяемости коров обеспечивают повышение рентабельности молочного скотоводства и могут быть использованы при проведении акушерско-гинекологической диспансеризации и оптимизации сервис - периода. Положения, выносимые на защиту. Глутамил-триптофановый комплекс (Тимоген) обладает гормонокорригирующим действием в отношении глюкокортикостероидов и половых стероидов у коров в ранний послеродовой период. Активизация процессов становления адаптационно-метаболических изменений глутамил-триптофановым комплексом способствует повышению естественной резистентности и индукции половой охоты. Гистоструктурные изменения в тканях вторичных иммунокомпетентных и половых органов коров подвергнутых стимуляции тимогеном, свидетельствуют о биокорригирующем влиянии препарата. Применение тимогена в ранний послеродовой период стимулирует половую охоту и оплодотворение коров в оптимальные сроки. Апробация работы. Материалы работы были представлены на ежегодных научно-производственных международных конференциях г. С-Петербург, СПбГАВМ (2006 г.), г. Казань, КГАВМ (2006 г.) и ежегодных отчетах аспирантов факультета ветеринарной медицины БелГСХА (2006-2008 гг.) Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 5 статей. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 128 страницах печатного текста. Список литературы включает 209 отечественных и 62 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 29 таблицами и 19 рисунками. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Научные исследования и производственные опыты проведены на коровах чёрно-пёстрой породы в ОПХ «Белгородское» Белгородского района, в летний и зимне-стойловый период. Животные находились на привязи в типовых коровниках, а в летний период на выгульных прифермских площадках. Тип кормления животных – силосно-концентратный. Рацион кормления сбалансирован по основным питательным компонентам. Среднегодовой удой по стаду 5050 кг молока. Хозяйство благополучно по инфекционным и инвазионным заболеваниям. Формирование опытных групп коров осуществляли на основании анализа воспроизводства стада (учет искусственного осеменения, амбулаторный журнал лечения гинекологически больных животных), учета физиологического состояния животных и после клинико-гинекологического обследования коров. При этом учитывали следующие показатели: длительность инволюции половых органов после родов, время и количество осеменений, длительность сервис-периода, наличие заболеваний во время беременности и после родов, оплодотворяемость (в том числе после первого осеменения). В сравниваемых группах подбирали пары-аналоги коров по породной принадлежности, возрасту, продуктивности, живой массе и физиологическому состоянию. Коров в состоянии половой охоты выявляли визуально по рефлексу неподвижности и при проявлении всех феноменов, присущих стадии полового возбуждения у самок животных (Студенцов А.П., 1980). В опыты по изучению механизма действия и возникших физиологических изменений со стороны репродуктивных органов коров, подвергнутых стимуляции половой охоты, включали животных на 2-е сутки после отёла. Осеменение коров опытных групп проводили маноцервикальным методом двукратно (с 12-часовым интервалом). Стельность после проведенной обработки коров определяли ректальным исследованием комиссионно через 3 месяца после осеменения. В качестве средства, стимулирующего половую цикличность и оплодотворяемость у коров, применяли препарат Тимоген®. Тимоген – синтетический пептид, состоящий из остатков глутаминовой кислоты и триптофана (рис.1), оказывает регулирующее влияние на реакции клеточного и гуморального иммунитета, активизирует процессы регенерации и обмен веществ, повышает неспецифическую резистентность организма к неблагоприятным факторам внешней среды. При парентеральном введении тимоген, попадая в кровоток, распадается до аминокислот, которые затем используются организмом в синтезе пептидов. Период полураспада тимогена составляет от 30 до 60 мин. Рис. 1 – Структурная формула L-глутамил-L-триптофана (тимоген). Исследования иммуномодулирующих свойств тимогена показали высокое сродство дипептида тимогена с мембранными рецепторами тимоцитов. Исследованиями установлено (Смирнов В.С., 2004), что иммуномодулирующие свойства дипептида реализуются путём трансляции содержащегося в нем сигнала через систему вторичных посредников, часть из которых также имеет пептидную природу. Всего было проведено три серии опытов по определению эффективности стимуляции половой охоты и иммуно-биохимических изменений в крови коров до и после применения тимогена. В первой серии опытов была исследована эффективность применения тимогена самостоятельно коровам спустя двое суток после отёла, в дозе 15 мл/гол/сут, 0,01% раствора, внутримышечно в течение: 3-х суток (1-я группа, n=26); 6-и суток (2-я группа, n=20); 9-и суток (3-я группа, n=24); а также совместно тимогена в дозе 15 мл/гол/сут, 0,01% раствора в течение 9-и суток и сурфагона (Гн-РГ) в дозе 50 мкг/гол внутримышечно, однократно на 10-е сутки (4-я группа, n=26). Контрольной группе коров (n=25) препараты не вводили (5-я группа). Учёт эффективности применения тимогена осуществляли в течение сервис-периода (90 суток) и начала стимуляции коров ( n=121) по следующим показателям: время появления половой цикличности после введения препаратов, количество полноценных половых циклов, количество осеменений, наличие послеродовых заболеваний, количество оплодотворённых коров, в том числе после первого осеменения, индекс осеменения. Во второй серии опытов приводили отбор крови из яремной вены в каждой группе коров (n=6) для проведения биохимических исследований. Взятие крови осуществляли четыре раза: первый раз – до введения тимогена и затем на 10-е, 20-е и 30-е сутки. Изучение механизма действия пептидного комплекса (глутамил-трипто­фан) тимогена по показателям крови, отражающим физиологическое состояние организма во всех группах до и после курса стимуляции, определяли с помощью общепринятых методик (Кондрахин И.П., 2004). В крови коров были определены следующие иммуно-биохимические показатели: прогестерон, эстрадиол, кортизол, тироксин, общий белок, альбумины, глобулины – α, β, γ; АлАТ (аланинаминотрансфераза); АсАТ (аспартатаминотрансфераза); ЩФ (щелочная фосфатаза); триацилглицерины, холестерол, глюкоза, Ca, P, резервная щёлочность, лейкоцитарная формула. Основные лабораторные исследования проведены на кафедре диагностики болезней, терапии, акушерства и хирургии Белгородской ГСХА, в Белгородской областной ветеринарной лаборатории, вирусологической лаборатории Центра Госсанэпиднадзора Белгородской области и паталогоанатомического отдела городской больницы №2 г. Белгорода. Всего в опытах было использовано 157 коров, на которых были проведены исследования по следующей схеме (рис.2). Исследования содержания стероидных гормонов в крови коров проводили путём количественного определения в сыворотке крови уровня стероидных гормонов эстрадиола – 17 β, прогестерона и кортизола при помощи методики твёрдофазного иммуноферментного анализа (инструкция Департамента государственного контроля качества эффективности безопасности лекарственных средств и медицинской техники МЗ РФ от 5.01.2001 г., а также методики ООО «Хемамедико», 2000 г.). Определение общего белка проводили по методике, основанной на взаимодействии белков с ионами меди в щелочной среде. Фотометрическое определение интенсивности окраски давало результат, соответствующий концентрации общего белка в пробе (Титов В.Н., Творогова Т.Г., 1995). Изучение механизма действия и определение эффективности стимуляции половой цикличности Глутамил-триптофан (Тимоген) 1 группа 15мл/гол/сут, 3-е сут. 2 группа 15мл/гол/сут, 6 сут. 3 группа 15мл/гол/сут, 9 сут. 4 группа 15мл/гол/сут, 9 сут. + сурфагон 50 мкг/гол 5 группа - контроль (интактные животные) Изучаемые показатели Динамика кортизола, тироксина и половых гормонов Показатели белкового и липидного обменов крови животных Активность индикаторных ферментов крови коров Показатели естественной резистентности в крови коров Гистостуктурные изменения в иммунокомпетентных органах Предложения производству Рис. 2 – Алгоритм исследований Триацилглицерины определяли путем катализирования липазной реакции гидролиза триацилглицерола с образованием жирных кислот и эквимолярного количества глицерина (Trinder P., 1969; Кондрахин И.П., 2004). Для определения холестерола использовали методику гидролиза эфиров холестерола холестеринэстеразой (Zlatkis A., Zak B., Boyle A.I., 1958; Trinder P.,1969; Кондрахин И.П., 2004). Определение альбуминов, α, β, γ-глобулинов в сыворотке крови проводили методом электрофореза на бумаге (Kohn J., 1975; Сентебова Н.А., Медведьева Л.А., Александровская Т.Н., 1978). Для определения активности АлАТ, АсАТ и ЩФ использовали унифицированный метод Райтмана-Френкеля (Вилкинсон Д., 1981; Лабораторные методы исследования в клинике, 1987). В третьей серии опытов проводили изучение гистоструктурных изменений в тканях иммунокомпетентных органов по гистопрепаратам от коров, подвергнутых стимуляции тимогеном в дозе 15 мл/гол/сут (1-я группа) в течение 9-и суток (n=3) и коров (2-я группа) интактных (n=3). Забой проводили на 12-е сутки от начала введения препарата. Гистопрепараты готовили согласно общепринятых методик классической гистотехники (Ролдугина Н.П. с соавт., 2004). Микроскопирование и фотодокументирование материалов проводили на микроскопе ЛОМО с фотонасадкой ФН-11. Полученный цифровой материал обработан статистически. При определении достоверности разницы между показателями опытных групп использовали аргумент Стьюдента и таблицу Фишера-Снедока по вычислению критерия достоверности. Результаты рассматривали как достоверные, начиная со значения p<0,05.

Похожие:

	«25» апреля 2014 года Протокол общественных слушаний по отчету об... Лебедев Вячеслав Михайлович – руководитель департамента охоты и рыболовства Самарской области		Правила добывания объектов животного мира, отнесенных к объектам охоты Уважаемые охотники! В управление Россельхознадзора по Республике Карелия, Архангельской области и Ненецкому автономному округу все чаще поступают обращения...
	Как решается вопрос профилактики бесплодия коров в странах с высокоразвитым... Проблема с плодовитостью коров — одна из самых обсуждаемых сейчас в молочном скотоводстве. Остановимся сегодня на профилактических...		Что за период новотельности и раздоя? В этот период необходимо провести эффективное лечение. Обильное кормление коров в новотельный период без учета состояния вымени и...
	Пробуждение сознания I сеансы светозвуковой стимуляции ...		Функциональные и иммунно-биохимические изменения у цыплят-бройлеров... Работа выполнена в фгоу впо «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия»
	Оренбургский государственный педагогический университет Древний человек пользовался выжиганием растительности для решения своих проблем, как-то: расчистка земель для пашни, улучшение пастбищ,...		Молочная продуктивность коров при скармливании комбикормов концентратов... Молочная продуктивность коров при скармливании комбикормов концентратов с экструдированным
	Север Дальнего Востока и хребет Джугджур протянулись от Чукотского... России к постиндустриальному этапу развития, необходимых для развития профессиональных компетенций студентов		Компьютерные тесты для исследования глазодвигательных реакций у больных... Наиболее информативными в дифференциальной диагностике органических и функциональных психогенных нарушений цнс являются качественные...
	Тема: Итоговое занятие Хромосомы в интерфазе состояние и функция. Понятие о хроматине, виды хроматина. Половой хроматин		Домашнее задание по химии ноябрь –декабрь 2013 г. Учитель Леонова Н. А Рефераты на выбор: «Соединения щелочных и щелочно-земельных металлов и их применение», «Соединения алюминия, их применение», «Соединения...
	Ковариация и ее применение в финансовом деле В настоящей заметке вводится понятие ковариации между двумя переменными и его применение для управления портфелем активов. Эта задача...		Объявляет конкурс на замещение вакантных должностей федеральной государственной... Отдел по контролю и надзору в сфере охоты, за особо охраняемыми природными территориями и разрешительной деятельности
	Варнавский 9 «в» Получение и применение кальция и его соединений Применение: Благодаря большой химической активности кальций применяют для восстановления некоторых тугоплавких металлов (титан, цирконий,...		Структурно-функциональные изменения лизосом печени при стимуляции... Работа выполнена в Государственном учреждении Научно-исследовательском институте физиологии Сибирского отделения Российской академии...