Функциональные и иммунно-биохимические изменения у цыплят-бройлеров после применения биокорректора тимогена
Скачать 382.79 Kb.
|
На правах рукописи БЕЛЯЕВА Светлана Николаевна ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ И ИММУННО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ У ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ БИОКОРРЕКТОРА ТИМОГЕНА Специальность: 03.00.13 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Белгород 2009 Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» Научный руководитель: Заслуженный ветеринарный врач РФ, доктор биологических наук, профессор Безбородов Николай Васильевич Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Семенютин Владимир Владимирович кандидат биологических наук Амельченко Ирина Анатольевна Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» Защита состоится «____» _________ 2009 г., в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.01 в ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 308503, Россия, Белгородский р-н, пос. Майский, ул. Вавилова 1; тел. /факс (4722) 39-22-62. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Белгородской государственной сельскохозяйственной академии. Автореферат разослан «____» __________ 2009 г. Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук Ю.Н. Литвинов 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Из всех отраслей животноводства, птицеводство наиболее рентабельно и высокопродуктивно, а Белгородская область – одна из лидирующих областей РФ по объему производства птицеводческой продукции (Огурцов А., 2007; Родионов В., 2008; Фисинин В.И., 2008; Шапочкин В., 2009). Несмотря на достигнутые высокие показатели, в промышленном птицеводстве остается много нерешенных проблем. Важнейшие из них – снижение стресс-факторов, вызывающих иммунодепрессивное состояние птицы, и производство экологически чистой продукции, решение которых позволит получить качественную продукцию и одновременно повысит экономическую эффективность отрасли. Как известно, в промышленном птицеводстве при выращивании цыплят-бройлеров проявляется высокая частота вторичных иммунодефицитных нарушений, которые осложняются возрастными (физиологическими) иммунодефицитами (Болотников И.А., 1983; Барабина М.Т., 1996; Джавадов Э.Д., 2003; Карпуть И.М., 2005; Mazurkiewicz M., 2005 и др.). В последние годы эффективно ведется поиск профилактических мероприятий, направленных на повышение продуктивности и резистентности сельскохозяйственной птицы. Сохранить и даже повысить ее можно, проводя коррекцию иммунодефицитных состояний организма птицы, за счет применения препаратов из группы биокорректоров, способных за короткое время активизировать неспецифическую резистентность организма и оптимизировать обменные процессы. К числу таких средств относится биокорректор Тимоген®, состоящий из глутаминовой кислоты и триптофана. Цель и задачи исследований. Целью исследований было изучение механизма действия и определение эффективности применения глутамил-триптофанового комплекса при активизации функциональных связей иммунной системы и адаптационно-метаболических процессов у цыплят-бройлеров в период выращивания, направленных на повышение их сохранности и продуктивности. Для достижения данной цели были поставлены на разрешение следующие задачи:
Научная новизна. Результаты исследований дополняют и расширяют имеющиеся представления о механизмах развития функциональной системы иммунитета и гемодинамики цыплят-бройлеров, что дает возможность выявления дополнительных критериев, характеризующих состояние птицы. Впервые комплексными исследованиями изучены иммунно-биохимические изменения, характеризующие процессы адаптации у клинически здоровых цыплят-бройлеров после внутримышечного и перорального введения синтетического биокорректора тимогена. Результаты проведенных исследований значительно расширяют существующие представления о механизмах пептидной регуляции и становлении гомеостаза у цыплят-бройлеров в период их промышленного выращивания. Теоретическая и практическая значимость. На основании результатов исследований дано научное и практическое обоснование по применению синтетического тимогена в промышленном птицеводстве для профилактики и снижения иммунодефицитного состояния цыплят-бройлеров, повышения их сохранности и продуктивности в процессе выращивания. Разработан доступный групповой метод обработки птицы, повышающий устойчивость организма к неблагоприятным факторам внешней среды – выпаивание 0,01% р-ра тимогена в критические периоды развития цыплят, что обеспечивает повышение резистентности организма. Установлены ростостимулирующая и профилактическая эффективность тимогена в процессе выращивания цыплят-бройлеров. Положения, выносимые на защиту 1. Глутамил-триптофановый комплекс (тимоген) активизирует функциональную активность клеточного иммунитета (неспецифического и специфического) в процессе постнатального роста и развития цыплят-бройлеров. 2. Коррекция адаптационно-метаболических процессов у клинически здоровых цыплят, после воздействия синтетического тимогена, способствует повышению уровня естественной резистентности организма. 3. Картина морфологических и гистоструктурных изменений в центральных (тимус и бурса) и периферических (селезенка) иммунокомпетентных органах подтверждает биокорригирующее влияние тимогена на морфофункциональное развитие органов иммуногенеза. 4. Разработанный новый доступный групповой метод повышения устойчивости организма птиц к неблагоприятным факторам внешней среды, путем выпаивания 0,01% р-ра тимогена в критические периоды развития цыплят-бройлеров, обеспечивает повышение сохранности и продуктивности птицы. Апробация работы Материалы и результаты полученных исследований представлены на XII и XIII междунар. научно-производственных конференциях «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения», г. Белгород, 2008, 2009 гг.; на междунар. научной конференции «Молекулярные механизмы адаптации», г. Махачкала, 2008 г.; на II Съезде физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека», г. Кишинев, 2008 г.; во II и III этапе Всероссийского конкурса на лучшую научную работу среди аспирантов и молодых ученых ВУЗ Минсельхоза РФ, г. Белгород, 2008, 2009 гг.; г. Москва, 2009 г.; на конференции молодых ученых ЦФО, г. Калуга, 2009 г. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 статей. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 164 страницах печатного текста. Список литературы включает 271 отечественных и 88 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 21 таблицей и 16 рисунками.
Объектом исследования служили цыплята-бройлеры кросса «Росс-508» и «Хаббард F-15» в течение всего цикла выращивания (42 дня), подобранные по принципу пар-аналогов в группы. Всего в опытах было использовано около 60 тыс. клинически здоровых цыплят-бройлеров. Исследования проходили в два этапа: в лабораторных – первая серия и производственных условиях – вторая серия опытов, алгоритм которых представлен на рис. 1. Основные лабораторные исследования проведены на факультете ветеринарной медицины во Вроцлавском университете наук о жизни и окружающей среде, Польша (Wroclaw University of Environmental and Life Sciences); на факультете ветеринарной медицины в Белгородской государственной сельскохозяйственной академии; в аккредитованной испытательной лаборатории ФГОУ ВПО БелГСХА; в ФГУ «Белгородской Межобластной ветеринарной лаборатории» (вирусологический и гистологический отделы). В качества средства активизирующего адаптационно-иммунологические процессы в организме цыплят-бройлеров использовали биокорректор тимоген (ТУ 10.07.169-91), который представляет собой синтетический дипептид, иммуномодулирующей направленности действия (С12H2N3O5Na). В первой серии опытов (виварий Вроцлавского университета наук о жизни и окружающей среде) объектом исследования служили цыплята-бройлеры кросса «Росс-508» с суточного до 42 дня жизни, которые в 5-ти суточном возрасте по принципу пар-аналогов были разделены на опытные – II, III, IV и контрольные – Iк, IIa, IIIa, IVa группы цыплят. Условия содержания, кормления и поения (свободный доступ) соответствовали общепринятым зоогигиеническим стандартам технологии. Целью лабораторного опыта было изучение становления иммунно-биохимического гомеостаза у птиц и сравнение разных способов применения 0,01% р-ра тимогена. Для этого препарат вводили птице различными методами (парентерально, внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг массы тела птицы и перорально в дозе 0,1 мл/голову) и в разные периоды онтогенеза c учетом возрастных (физиологических) иммунодефицитов на 5-е и 15-е сутки выращивания, в течение 10 дней. Цыплята «Iк» группы (n=25) служили общим контролем для всех групп. Цыплятам «II» (n=25) группы вводили 0,01%-ный раствор тимогена внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг массы тела с 5-го по 14-й день жизни в течение 10 дней; «III» (n=20) – внутримышечно с 15-го по 24-й день жизни; «IV» (n=20) – перорально с 15-го по 24-й день жизни в дозе 0,1 мл/гол. Кроме того, для экспериментальных групп были созданы дополнительные группы контроля – IIa (n=12), IIIa (n=12) и IVa (n=12), цыплятам которых вводили 0,9%-ный физиологический раствор, в той же дозе и тем же способом, что и 0,01%-ный р-р тимогена для опытных групп. Для исследований у птицы (n=6) брали кровь из подкрыльцовой вены (v. cutanea ulnaris) на 5-е; 11-е; 15-е; 21-е; 26-е; 35-е и 42 сутки эксперимента, а так же тимус, бурсу и селезенку после декапитации птицы. Количество Т-лимфоцитов с фенотипами TCR, CD3, CD4 и СD8 и В-лимфоцитов – СD19 определяли методом проточной цитофлюориметрии на цитометре FACSCalibur фирмы «Веcton Dickinson», США, c программным обеспечением CellQuest при помощью моноклональных антител к маркерам клеточной поверхности, меченных флуорохромами – флуоресцеин изотиоционатом (FITС) и фикоэритрином (PE) (Воронин Е.С., 2002; Zeromski J., 1996). Количество лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобин определяли на гематологическом автоанализаторе с программным обеспечением (Vet 2.3) для животных Cell-Dyn 3500 и ABC PACK LMGE for animal blood, а гематокрит – микро-капиллярным методом. Содержание отдельных видов лейкоцитов путем подсчета лейкограмм маз- ков крови. Исследование окрашенных по Паппенгейму мазков крови цыплят проводи- ли черырехпольным методом при подсчете 100 лейкоцитов на микроскопе Микмед-1 ОАО «Ломо», используя объектив с масляной иммерсией (Симонян Г.А., Хисамутдинов Ф.Ф., 1995; Campbell T. W., 1988). Уровень глюкозы в плазме крови птицы определяли на автоматическом биохимическом анализаторе МAXMAT унифицированным тестом. Общий белок определяли на универсальном спектрофотометре ВioTek с помощью набора реактивов фирмы Sigma-Aldrich; белковые фракции – в сыворотке крови методом электрофореза на бумаге (Кондрахин И.П., 2004). Функциональные и иммунно-биохимичекие изменения у цыплят-бройлеров после применения биокорректора тимогена  ТИМОГЕН   II СЕРИЯ ОПЫТА I СЕРИЯ ОПЫТА  (5–14-е сут.)  II Внутримышечно 0,1мл/кг массы птицы IIa Контроль – в/м 0,9% р-р NaCI     (15–24-е сут.) (15–21-е сут.) III Внутримышечно 0,1мл/кг массы птицы IIIa Контроль – в/м р-р NaCI NaCI V Энтерально 0,1мл/гол. птицы   IV Энтерально 0,1мл/гол птицы IVa Контроль – энтерально р-р NaCI р-р NaCI  VIк Контроль – интактное поголовье птицы  Iк Контроль – интактное поголовье птицы     Изучаемые показатели Оценка иммунного статуса организма птицы  Морфологические показатели крови цыплят  Биохимические исследования крови цыплят Показатели естественной резистентности птицы Гистоморфологические изменения в иммунокомпетентных органах цыплят Продуктивные показатели цыплят-бройлеров в период выращивания  ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ Рис. 1 – Алгоритм исследований Сохранность поголовья учитывали путем ежедневной оценки клинического состояния птицы. Живую массу тела и среднесуточные приросты цыплят определяли путем индивидуального взвешивания, используя весы AXIS B 15W (max=15 kg, min=20 g, e=5 g), в суточном возрасте и далее на 5-е, 10-е, 15-е, 20-е, 25-е, 30-е, 35-е и 42-е сутки выращивания; а массу иммунокомпетентных органов птицы – взвешиванием на электронных весах Wag I Elektroniczne 53-143 RAR Wag-Dolnyśląsk (max=36 g, min=2mg, e=1 mg) на 5-е, 15-е, 26-е и 42-е сутки исследований. Индексы тимуса, бурсы и селезенки определяли по отношению массы органа к массе тела умноженное на 1000 (Апатенко В.М., 1988). Во второй серии опытов, проходивших в производственных условиях птицефабрики ООО «Лопанское» Белгородского агрохолдинга «БЭЗРК-Белгранкорм» Белгородской области, объектом исследования были цыплята-бройлеры кросса «Нubbard F-15», из которых были сформированы две группы по принципу пар-аналогов, из суточных цыплят одной партии, вывода и кросса: V – опытная группа (n=29200 гол.) и VIк – контрольная группа (n=29000 гол.). Условия содержания – напольное выращивание и кормление полноценным комбикормом по периодам выращивания (ГОСТ Р 51851-2001) были идентичными. В опытной группе цыплятам-бройлерам применяли методом выпойки 0,01%-ный р-р тимогена в дозе 0,1 мл/гол/сут., в течение 7 дней, с 15-х по 21-е сутки откорма, дополнительно к основным лечебно-профилактическим мероприятиям, проводимых в хозяйстве. В контрольной группе тимоген не применяли. Учетный период наблюдений за цыплятами-бройлерами продолжался с суточного возраста до конца откорма (42-го дня). Целью второй серии опыта было определение эффективности применения и изучение биокорригирующих свойств тимогена в промышленном птицеводстве. Для исследований у птицы (n=6-10) брали кровь из подкрыльцовой вены (v. cutanea ulnaris) на 5-е; 11-е; 15-е; 21-е; 26-е; 35-е и 42 сутки эксперимента; тимус, бурсу и селезенку после декапитации птицы на 42-е сутки опыта, которые фиксировали в 10%-ном нейтральном растворе формалина; грудные и ножные мышцы в конце откорма, на 42-е сутки. Форменные элементы (количество лейкоцитов и эритроцитов) определяли по стандартной методике, подсчитывая их в камере Горяева; гемоглобин крови – гемиглобинцианидным методом; количество иммуноглобулинов – нефелометрическим методом на фотоэлектроколориметре (цинк-сульфатный тест). Общий белок определяли в сыворотке крови по биуретовой реакции; белковые фракции сыворотки крови – методом электрофоретического фракционирования на бумаге (Кондрахин И.П., 2004). Фагоцитарную активность псевдоэозинофилов в крови цыплят определяли постановкой опсоно-фагоцитарной реакции в условиях in vitro по следующим показателям: процент фагоцитоза, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число, используя отправные критерии по оценке естественной резистентности с.-х. животных (Новосибирск, 2003). В качестве тест культуры для ОФР использовали E. coli. Гистологические препараты приготавливали по общепринятым методикам (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996), окрашивая их гематоксилин-эозином, и анализировали под сканирующим микроскопом «Микмед-2» установки «Видео-тест. При гистоморфологических описаниях иммунокомпетентных органов у птицы учитывали отправные критерии, разработанные для определения иммуносупрессии и иммунодефицитов у птицы (Колоусова Н.Г., 1988). Серологические исследования на напряженность иммунитета цыплят (к болезни Ньюкасла) проводили на 15-е, 26-е, 35-е и 42-е сутки опыта: по 20 проб сыворотки крови цыплят-бройлеров из группы в РТГА (согласно утвержденным методическим указаниям по определению уровня антител к вирусу ньюкаслской болезни в реакции торможения гемагглютинации от 23 июня 1988г. № 988 Минсельхозпрод России). Сохранность поголовья учитывали путем ежедневной оценки клинического состояния птицы. Живую массу и среднесуточные приросты определяли при групповом взвешивании птицы по 100-300 голов на 1-е; 5-е; 10-е; 15-е; 20-е; 25-е; 30-е; 35-е и 42 сутки выращивания цыплят-бройлеров. В конце откорма цыплят рассчитывали конверсию корма и индекс продуктивности (Тучемский Л.И., 2004). Качество полученной мясной продукции учитывали по химическому составу тушки (грудные и ножные мышцы) и белково-качественному показателю, используя методические рекомендации по определению качества мяса сельскохозяйственных животных и птицы (1982). Оксипролин в мясе определяли по Ньюмену и Логану с применением методики кислотного гидролиза мяса по Вербицкому. Триптофан в мясе определяли по методу Спайза и Чемберза в модификации Геллера (1958). Полученный цифровой материал обрабатывали статистически на ПЭВМ с использованием пакета программ Microsoft Office 2003. Достоверность полученных результатов исследований определяли методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990). Разницу в значениях считали статистически достоверной при *р<0,05 и менее. |
Добавить документ в свой блог или на сайт
Похожие:
 | Физиолого-биохимические изменения у коров при использовании в качестве... Работа выполнена в фгоу впо «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» | | Физиологическое состояние и продуктивные качества цыплят-бройлеров... Работа выполнена в фгоу впо «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» |
| Обмен веществ и мясные качества цыплят-бройлеров при скармливании сухой молочной сыворотки Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Белгородская государственная... | | Эффективность использования корма и продуктивные качества у цыплят-бройлеров... Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Белгородская государственная... |
| Рабочая учебная программа по дисциплине Изучить морфологические, цито-, биохимические и функциональные особенности клеток крови, особенности картины периферической крови... |  | Ветеринарно-санитарная оценка качества и безопасности мяса цыплят-бройлеров... Методические указания предназначены для студентов специальности 012300 Общая биохимия. В учебном пособии представлена структура дисциплины,... |
| Структурно-функциональные изменения лизосом печени при стимуляции... Работа выполнена в Государственном учреждении Научно-исследовательском институте физиологии Сибирского отделения Российской академии... | | Преобразователь частоты с В дальнейшем достижения в области полупроводниковых технологий позволили значительно расширить функциональные возможности силовых... |
| Фамилии Имена Отчества всех авторов в последовательности приведённой... Аннотация: Что включает в себя База данных. Указывается назначение, область применения, функциональные возможности | | Клинические, биохимические и инструментальные аспекты прогнозирования... Диссертационный совет д 208. 072. 08 при гоу впо «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению... |
| Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Образовательные: развитие умения работать с учебной информацией; формирование обобщенных знаний и умений определять условия выбора... | | Применение иммуномодулятора тимогена для стимуляции половой охоты и оплодотворяемости у коров Работа выполнена в фгоу впо «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» |
| Учреждение высшего профессионального образования Вместе с патологической физиологией, изучающей функциональные изменения в больном организме, и клиническими науками патологическая... | | Реферат на тему: «Вакансии по специальности экономическая кибернетика» Занимается в области применения информационных систем, решает функциональные задачи, а также управляет информационными, материальными... |
| О внесении изменений в Указания о порядке применения бюджетной классификации Указаний о порядке применения бюджетной классификации Российской Федерации на 2013 год и на плановый период 2014 и 2015 годов 1 (в... | | Функциональные и структурные особенности интернет-версии Функциональные и структурные особенности интернет-версии the new york times на примере статей о переизбрании барака обамы на пост... |
