Оценка гуморального иммунного ответа на вакцинацию против гепатита в и А

Материалы и методы Для решения поставленных задач использовали эпидемиологические, лабораторные и статистические методы исследования. Эпидемиологические методы. Для оценки эффективности специфической профилактики и анализа заболеваемости ГВ и ГА определяли широту распространения маркеров инфицирования ВГВ и ВГА (HBsAg, анти-HBс (сум.), анти-ВГА класса IgG и IgA) среди различных группнаселения. Выявление маркеров инфицирования проводили методом иммуно-ферментного анализа с использованием диагностических тест-систем отечественного производства «Вектор-Бест» и «Диагностические системы», с обязательным использованием подтверждающих тестов: Вектогеп В-HBs-антиген-подтверждающий тест («Вектор-Бест»), ИФА-HВsAg-подтверждающий тест («Диагностические системы»). Материалом для исследования уровней гуморального ответа на вакцинацию против ГА и ГВ и определения сохранения поствакцинальных антител в зависимости от сроков, прошедших после прививок, служили образцы сывороток крови вакцинированных. Для вакцинации против ГВ использовались вакцины «Engerix B» (Бельгия), «Heberbiovac HB» (Куба), «Recombivax HB» (США), против ГА - «Havrix 720» фирмы «GlaksoSmithKline» (Бельгия). Лабораторные исследования. Выявление анти-HBs проводили, используя следующие диагностические тест-системы: диагностикум для выявления анти-HBs – «ВектоHBsAg-антитела» производства «Вектор-Бест», г. Новосибирск, «ИФА-анти-HBs» производства «Диагностические системы», г. Нижний – Новгород. В качестве диагностикума сравнения нами был выбрана тест-система для определения анти-HBs фирмы «BIO-RAD», “Monolisa, 3.0” (Франция). Для количественного определения концентраций анти-HBs использовали панель сывороток фирмы «BIO-RAD» с концентрациями антител: 10 мМЕ/мл, 50 мМЕ/мл, 100 мМЕ/мл и 150 мМЕ/мл, что позволило при помощи графика зависимости концентраций антител от показателей оптической плотности ферментативной реакции (ОП), определять концентрации анти-HBs в исследуемых образцах. Для анализа полученных результатов были приняты рабочие диапазоны: <10 мМЕ/мл (к ним относились образцы с показателями ОП выше ОПкр., но ниже 10 мМЕ/мл), от 10 до 50 мМЕ/мл, от 51 до 100 мМЕ/мл, от 101 до 150 мМЕ/мл и более 151 мМЕ/мл. Выявление анти-ВГА осуществляли с помощью диагностических систем: «BIO-RAD» «HAV TOTAL»(Франция) для качественного и количественного определения суммарных анти-ВГА (в состав набора входит калибратор, содержащий анти-ВГА в концентрации 20 мМЕ/мл), «anti-HAV total» производства « ROCHE» (Швейцария) и «Вектогеп А – IgG стрип» г. Новосибирск. Объем проведенных исследований представлен в таблице № 1. Таблица № 1. Объемы и методы проведенных лабораторных исследований. Направления исследований Метод исследования Название определяемых маркеров ВГА и ВГВ Количество обследован-ных лиц Общее число исследований 1 2 3 4 5 Сравнительная оценка диагностических тест-систем для выявления анти-HBs ИФА Анти-НВs 333 1008 Сравнительная оценка диагностических тест-систем для выявления анти-ВГА ИФА Анти-ВГА суммарные 228 496 Определение и оценка частоты выявления маркеров инфицирования ВГВ и поствакцинальных анти-НВs в различных группах ИФА ПЦР HBsAg Анти-НВs Анти-НВs колич. Анти-НВс ДНК ВГВ 555 1738 7 Определение и оценка частоты выявления маркеров инфицирования ВГА и поствакцинальных анти-ВГА ИФА Анти-ВГА IgG Анти-ВГА IgM 572 2557 Раздел диссертации, посвященный характеристике гуморального иммунного ответа через 11 лет после вакцинации против гепатита В, выполнен совместно с руководителем Тувинского республиканского центра по профилактике и борьбе со СПИДом Ооржак Н.Д. Вакцинация больных хроническими гепатитами В и С против ГА проводилась на базе Московского гепатологического центра однократно вакциной «Havrix 1440». Пациенты давали добровольное согласие на участие в данном исследовании. Статистические методы. Для обработки полученных результатов использовали общепринятые методы вариационной статистики. Оценку достоверности различий между сравниваемыми величинами осуществляли, используя Т-распределение Стьюдента. Результаты и их обсуждение. Сравнительная оценка различных диагностических препаратов для определения иммунного гуморального ответа и его напряженности при вакцинации против гепатитов А и В. Для того, чтобы дать оценку иммунному ответу, необходимо использовать адекватные методы исследования. В связи с этим встает вопрос о пригодности для этих целей диагностических систем, зарегистрированных в РФ. Появилась необходимость установить, насколько качество предлагаемых иммуноферментных тест-систем для определения маркеров ГА и ГВ удовлетворяет потребности для проведения поствакцинального скрининга. С момента испытания вакцины и начала активной вакцинации против ГВ и ГА в РФ начались исследования с целью оценки иммунного ответа на применяемые вакцины. Для проведения пред- и поствакцинального скрининга рекомендовано определять следующие серологические маркеры: HВsAg, анти-HBs (качественный и количественный тест) – для гепатита В и анти-ВГА (качественный и количественный) для гепатита А. Принято считать, что наличие у вакцинированных лиц анти-HBs и анти-ВГА в протективной концентрации, как ответ на вакцинацию соответствующими вакцинными препаратами обеспечивает защиту от этих инфекций. С целью определения частоты выявления анти-HBs с помощью различных диагностических тест-систем нами была сформирована панель сывороток. Она включала в себя: образцы сывороток крови медицинских работников, вакцинированных против гепатита В (с разными сроками после окончания полного курса вакцинации); вакцинированных школьников и детей и группы сравнения - первичных доноры крови, не вакцинированных против гепатита В. Для определения частоты выявления антител в зависимости от сроков вакцинации и от возраста вакцинированных медицинских работников (г. Тольятти) были исследованы сыворотки крови 93 человек, получивших полный курс вакцинации вакциной «Engerix В». Панель образцов сывороток крови производства «BIO-RAD» (Франция), включающая 4 образца с содержанием анти- HBs в известных концентрациях, была использована в качестве контрольной. Первоначально было установлено, что испытуемые тест-системы от производителей «BIO-RAD», «Вектор-Бест» и «Диагностические Системы», обладают достаточной чувствительностью для определения анти-НВs в протективных концентрациях. Подтверждением тому являются показатели оптической плотности ферментативной реакции (ОП) для образца с концентрацией 10мМЕ/мл и отношение показателя ОП образца к ОП критической (ОПобр/ОПкр), рассчитанной по инструкции к набору: в тест-системе «BIORAD» – ОП 10мМЕ/мл - 0,124, ОПобр/ОПкр – 1; в «Диагностические системы» – ОП 10 мМЕ/мл- 0,496, ОПобр/ОПкр – 3,9; «Вектор-Бест» соответственно: 0,289 и 1,6. При выявлении анти-HBs в сыворотках крови вакцинированных против ГВ лиц получены результаты, свидетельствующие о различной частоте выявления поствакцинальных антител при помощи испытуемых тест-систем в этих группах. Результаты определения анти – HBs в сформированных панелях сывороток крови первичных доноров г. Москва (группа сравнения) и вакцинированных против ГВ лиц приведены таблице № 1. Таблица № 1 Наличие анти-HBs в образцах сывороток крови лиц, вакцинированных против гепатита В и не вакцинированных первичных доноров. Обследованные группы и время после курса вакцинации Колич. обслед. Д и а г н о с т и к у м (выявление анти-НВs) «BIO-RAD» n (%) «Вектор» n (%) «Диагн. Системы» n (%) Медицинские работники 58 46 (79%) 48 (82%) 45 (77.5%) до 2 лет после вакцинации 15 14 (93%) 14 (93%) 13 (86%) Через 4 -6 лет после вакцинации 43 32 (74.4%) 34 (79%) 32 (74.4%) Школьники 45 33 (73.3%) 40 (88.9%) 41 (91.1%) Через 1 год 16 13 (81,3%) 14 (87,5%) 14 (87,5%) Через 5 лет 29 20(68,9%) 26 (89,7%) 27 (93,1%) Дети (Тыва) Через 10 –11 лет 71 36 (50,7%) 40 (56,3%) 39 (54,9%) Итого 174 115 (66,1%)* 128 (73,5%)* 125 (71.8%)* Первичные доноры 40 5 (12,5%) 5 (12,5%) 5 (12,5%) *- t< 2 Определение анти-HBs в образцах сывороток крови лиц, вакцинированных против гепатита В, продемонстрировало сопоставимость результатов, полученных с использованием тест-системы сравнения («BIO RAD») и диагностических препаратов Российского производства («Вектор-Бест» и «Диагностические системы»). При определении анти-HBs в отдельных возрастных группах медицинских работников получены показатели частоты выявления анти-HBs с использованием различных тест – систем (таблица № 2). Таблица № 2 Частота выявления анти- HBs в зависимости от возраста вакцинированых против гепатита В. Возрастные группы Количество обследованных. Тест-системы для выявление анти-НВs фирм: «BIO-RAD» «Диагн. Системы» 18-29 лет 12 12 100% 12 100% 30-39 лет 27 24 88,9%* 24 88,9%* Старше 40 лет 54 39 72,2%* 35 64,8%* * Р<0.01(в зависимости от возраста) Статистически достоверная разность частоты выявления поствакцинальных антител в различных возрастных группах подтверждает положение о зависимости наличия антител от возраста вакцинированных против ГВ. Полученные результаты выявления поствакцинальных анти-HBs при использовании различных тест-систем позволяют оценить испытуемые тест-системы как пригодные для проведения пред- и поствакцинального скрининга, так как они обладают чувствительностью, необходимой для определения анти-HBs в протективных концентрациях. К тому же они позволяют выявить общие тенденции, характерные для динамики поствакцинального гуморального иммунного ответа на вакцину против ГВ, а также определить зависимость частоты выявления поствакцинальных анти-HBs от возраста иммунизированных против ГВ лиц и от сроков, прошедших после завершения курса вакцинации. При выявлении поствакцинальных антител к ВГА получены результаты, свидетельствующие о низкой чувствительности диагностических систем отечественного производства по сравнению с тест-системами зарубежного производства. Применение тест-системы фирмы «BIO-RAD» позволило выявить анти-ВГА у 82,5% вакцинированных через 11 месяцев после вакцинации, а тест-систем производства «Вектор-Бест» - у 17.5%. Такая низкая выявляемость анти-ВГА с помощью тест-системы фирмы «Вектор-Бест» (17.5%) связана с её недостаточно высокой чувствительностью. Через 3 года после проведения описанных исследований мы с использованием тест-системы «анти-ВГА IgG» производств «Вектор-Бест» а и «anti-HAV total» производства фирмы «ROCHE» выявляли анти-ВГА через месяц после вакцинации, проведенных по эпидпоказаниям. Полученные результаты свидетельствуют о сопоставимости показателей: «ROCHE» – 68.1%, «Вектор-Бест» – 60.6%. Разница показателей была не достоверна (p>0.05). Полученные результаты свидетельствуют о явном прогрессе в производстве отечественных диагностических тест-систем, но их чувствительность в настоящее время не позволяет дать адекватную оценку поствакцинального гуморального иммунитета у привитых против гепатита А. Особенности проявления иммунного гуморального ответа у медицинских работников через 5 – 6 лет после вакцинации против ГВ. На наличие анти-НВs тестированы сыворотки крови 254 медицинских работников, которые за 5-6 лет до этого были вакцинированы против гепатита В. Позитивный результат обнаружения анти-НВs зарегистрирован у 159 из них, что составило 52,6%. Учитывая, что напряженность поствакцинального иммунитета характеризуется уровнем (титром) специфических антител, проведено их количественное определение. Для характеристики напряженности гуморального иммунитета избраны следующие диапазоны концентраций анти-HBs: менее 10 мМЕ\мл; 11-50 мМЕ\мл; 51-100 мМЕ\мл; 101- 150мМЕ\мл и более 150 мМЕ\мл. Полученные результаты представлены в таблице № 3. Таблица № 3 Частота выявления концентраций анти-НВs среди медицинских работников города С.Петербурга (*) и Свердловской области (**) через 5-6 лет после завершения курса вакцинации против ГВ различными вакцинными препаратами. Вакцинный Препарат N Концентрации анти-НВs мМЕ/мл <10 10-50 51-100 101-150 >150 N % n % N % n % N % Engerix B * 47 8 17.1 15 31.9 8 17 1 2.1 15 31.9 Heberbiovac HB* 25 - - 8 32 4 16 4 16 9 36 Recombivax HB / Engerix B* 36 1 2.8 13 36.1 5 13.9 5 13.9 12 33.3 Engerix B** 51 - - 20 39.2 9 17.7 4 7.8 18 35.3 Всего 159 9 5,7 56 35,2 26 16,3 14 8,8 54 34 В результате исследований образцов сывороток крови медицинских работников через 5 – 6 лет после вакцинации против ГВ определено, что в среднем у 53, 5% циркулируют анти-НВs в концентрациях, превышающих 10 мМЕ/мл.. Получены данные, которые свидетельствуют о наличии незначительной доли лиц (5.7%), имеющих антитела в концентрациях ниже протективного уровня. В 2 образцах из 95 сывороток крови, собранных у серонегативных по анти-HВs медицинских работников, обнаружен HВsAg. Специфичность полученного результата подтверждена реакцией нейтрализации. Серологические исследования, проведенные через 1 месяц после завершения вакцинации, установили, что у одного из них отсутствовали поствакцинальные анти-НВs, а у второго медицинского работника они были обнаружены в низкой концентрации. Полученные результаты позволяют расценить этих лиц как “non responder”и слабым первичным иммунным ответом на вакцинацию, что не обеспечило надежную защиту от последующего заражения гепатитом В. Через 5-6 лет после вакцинации поствакцинальные антитела в защитных концентрациях обнаружены у 50,5% вакцинированных. Следовательно, только половина вакцинированных против гепатита В медицинских работников имеют анти-НВs, свидетельствующие о гарантированной защите против инфицирования ВГВ. В наших исследованиях не выявлено статистически подтвержденного влияния возраста и стажа работы по специальности на напряженность поствакцинального гуморального иммунитета. Это позволяет сделать предположение о том, что значительное влияние на сохранность иммунитета оказывает уровень первичного иммунного ответа. Характеристика гуморального иммунного ответа через 11 лет после вакцинации против гепатита В. Изучение длительности (более 10 лет) сохранения поствакцинальных анти-HBs важно как с научной, так и практической точки зрения. Это определяется необходимостью решения вопроса проведения бустер вакцинации различных групп населения. Учитывая, что начало широкой вакцинации против гепатита В в нашей стране произошло 3-5 лет тому назад, характеристика гуморального ответа на вакцинацию против гепатита В через 6 и более лет практически отсутствует. В 1999-1992 году в Республике Тыва была проведена вакцинация против гепатита В («Engerix B») более 12 тысяч детей первого года жизни. В то же время более 3 тысяч детей этого возраста не были охвачены вакцинацией против этой инфекции. На протяжении последующих 12 лет введение бустерной дозы вакцины не проводилось. В результате этого возникла уникальная ситуация, позволяющая оценить частоту сохранения поствакцинальных анти-HBs среди детей, проживающих в гиперэндемичном по гепатиту В регионе, а также определить уровень распространения вируса гепатита В среди не вакцинированных детей, проживающих там же. Для определения уровня сохранения гуморального иммунного ответа на вакцинацию против гепатита В через 11 лет после завершения полного курса вакцинации сформирована группа детей, состоящая из 238 человек (124 мальчика и 114 девочки). При исследовании их сывороток крови на наличие анти-HBs позитивный результат зарегистрирован в 138 образцах, что составило 58 %. Результаты определения концентраций анти-HBs в этих образцах сывороток крови представлены на рисунке № 1. Рисунок №1 Частота и уровень концентраций анти-HBs в сыворотках крови детей, вакцинированных против гепатита В, через 11 лет после вакцинации. Анализ полученных результатов свидетельствует, что у значительной части детей анти-HBs циркулируют в низкой концентрации. Так у 16,8% детей концентрация этих антител ниже защитного уровня (<10 мМЕ/мл), а у 23,9% не превышает показателя 50 мМЕ/мл. Не более 7,6% обследованных детей имеют концентрацию анти- HBs выше 150 мМЕ/мл. Данные по анализу регистрируемой заболеваемости острым гепатитом В, представленные Тывинским Республиканским Центром Госсанэпиднадзора среди вакцинированных и не вакцинированных детей, свидетельствует о эпидемиологической эффективности вакцинопрофилактики. Так в 2002 году заболеваемость среди не вакцинированных детей составила 9 случаев на 1000 детей данной возрастной группы, а среди вакцинированных 0,2 (Н.Д.Ооржак, 2003). Более точную информацию об интенсивности эпидемического процесса ГВ, возможно получить при анализе результатов выявления серологических маркеров инфицирования ВГВ, свидетельствующие о предыдущей встрече с вирусом. Для решения этой задачи нами были сформированы две группы: 1-ая - 149 подростков, вакцинированных при рождении против ГВ 11 лет назад; 2-ая – 185 детей, того же года рождения, не вакцинированных против гепатита В. Данные, полученные в результате исследования сывороток крови этих детей, представлены в таблице № 4. Таблица № 4 Результаты выявления маркёров вирусного гепатита В в сыворотках крови вакцинированных (1-ая группа) и не вакцинированных (2-ая группа) детей. Группы обследованных детей Маркеры ВГВ HBsAg Анти-НВс Анти-НВs n % n % N % Вакцинированные N=149 0 0 5 3.3 92 61.7 Не вакцинированные N =185 4 2.2 23 12.4 22 11.9

Похожие:

	Клинико-эпидемиологическая оценка эффективности вакцинации против... Работа выполнена в Государственном учреждении инфекционной клинической больнице №1 Комитета здравоохранения Москвы и в Государственном...		Феноменология иммунного ответа на т-независимые антигены 2-го типа... В этом плане явились мероприятия, проведенные в 9-11 классах «Нет – наркотикам», «Мы за здоровый образ жизни» с приглашением мед...
	Феноменология иммунного ответа на т-независимые антигены 2-го типа Защита состоится 17 мая 2012г в 12 часов на заседании диссертационного совета д 001. 035. 01 при фгбу «ниивс им. И. И. Мечникова»...		Реферат "Регуляция иммунного ответа" Введение Иммунный ответ, как... Активация т- и в-клеток происходит в результате эффективного связывания антигенного материала их антигенспецифичными рецепторами
	Эпидемиологическая характеристика гепатита в в крупном промышленном...		Оценка ответов учащихся Оценка “5” ставится в том случае, если учащийся Оценка “4” ставится, если ответ удовлетворяет основным требованиям к ответу на оценку “5”, но учащийся не использует собственный...
	Какими документами регламентирована в России вакцинация против гепатита В? Приказ Минздравсоцразвития РФ от 31 января 2011 г. N 51н «Об утверждении национального календаря профилактических прививок и календаря...		Циррозы печени. Осложнения циррозов печени В редких случаях возможна непосредственная эволюция острого вирусного гепатита, осложненного массивными печеночными некрозами, в...
	Реферат по курсу “ ” Тема: “Гепатит формы b и С.” А и В, стало очевидным существование еще нескольких вирусных гепатитов, которые стали называть гепатитами ни А, ни В. В 1989 г удалось...		В урок г погост Эта часть работы содержит задания а 1- а 30 с выбором ответа. Из предложенных вариантов ответа только один верный. Внимательно прочитайте...
	Вакцинация против гепатита в у пациентов, получающих заместительную... Работа выполнена в негосударственном учреждении «ооо «Компания Фесфарм», Государственном учреждении инфекционной клинической больнице...		«профессиональный лицей №91» программа государственной итоговой аттестации выпускников С выбором ответа. К каждому заданию дается 4 ответа, только один из которых правильный. При выполнении задания части 1 обведите кружком...
	Положение об аттестационной комиссии по проведению промежуточной... С выбором ответа. К каждому заданию дается 4 ответа, только один из которых правильный. При выполнении задания части 1 обведите кружком...		Программа вступительных испытаний по истории россии Максимальное количество 50 баллов.)Баллы, полученные за выполненные задания, суммируются. Максимальный балл за выполнение всей работы...
	Приложение к журналу “Вопросы адвокатуры” Эта книга – о мятеже против государственной власти в России. Против самого государства и правопорядка. Она о заговоре, который направлен...		Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Отличная оценка предполагает грамотное, логичное изложение ответа (как в устной, так и в письменной форме), качественное внешнее...