Значение ассоциаций микроорганизмов в этиологии и профилактике инфекционных болезней конечностей крупного и мелкого рогатого скота (некробактериоз, копытная гниль)
Скачать 1.02 Mb.
|
| C. perfringens тип А (присутствующий в инфицированных ранах, один из основных возбудителей газовой гангрены человека и энтеротоксемии животных) и возбудитель копытной гнили овец D. nodosus (72-79%) случаев. В связи с трудностью его выделения в большинстве случаев для диагностики заболевания и идентификации D. nodosus использовали феномен «Бевериджа». В эту группу также включили возбудитель некробактериоза F. necrophorum (9-39% случаев). Вторую большую группу микроорганизмов, постоянно выделяемых при инфекционных болезнях конечностей, составили пиогенные кокки: Streptococcus pyogenes (31-43%случаев), Staphylococcus aureus (26-42% cлучаев), Actinomyces pyogenes (9-12% cлучаев), а также представители родов Peptococcus, Peptostreptococcus, Enterococcus. В третью группу микроорганизмов, постоянно изолируемых из пораженных копыт, вошли условно-патогенные и сапрофитные бактерии, такие как Escherichia coli (28-38% случаев), Proteus vulgaris (20-33% случаев), Prevotella melaninogenicus (1-6% случаев) и микроорганизм Bacteroides fragillis, часто присутствующий в гнойных ранах человека и животных. Остальные микроорганизмы, за исключением Clostridium septicum, выделялись непостоянно, при этом был отмечен тот факт, что из пораженных конечностей овец в Ставропольском крае и Республике Киргизия чаще выделяли споровые микроорганизмы, чем из патматериала от овец Центральной России. Поэтому постоянно выделяемый в небольших количествах Clostridium septicum, почвенный споровый микроорганизм, один из возбудителей газовой гангрены, брадзота и злокачественного отека (4 – 12 % случаев), а также спорадически выделяемые споровые микроорганизмы Clostridium perfringens типов С и D, Clostridium оedematiens и Bacillus cereus были условно отнесены в четвертую группу. Подобный, во многом сопоставимый с результатами исследований патматериала от овец, видовой спектр микроорганизмов наблюдался и при некробактериозе КРС. Обобщенные результаты исследований пораженных конечностей КРС из тех же трех выше перечисленных регионов представлены в таблице 2. Из данных таблицы 2, следует, что весь спектр микроорганизмов, выделенных из патматериала и идентифицированных при некробактериозе конечностей КРС, можно условно разделить на несколько групп. В первую группу вошли наиболее часто выделяемые микроорганизмы Clostridium perfringens т. А (68–75% случаев) и возбудитель некробактериоза КРС Fusоbacterium necrophorum (63–71 % случаев). Во вторую группу, как и при болезнях конечностей овец, вошли наиболее часто выделяемые пиогенные микроорганизмы Streptococcus pyogenes (24-42%случаев), Staphylococcus aureus (18-28% cлучаев), Actinomyces pyogenes (9-15% cлучаев), Pseudomonas aeruginosa (3-9% случаев). Представителями третьей группы так же, как и при инфекционных заболеваниях конечностей овец, являлись условно-патогенные и сапрофитные микроорганизмы Escherichia coli (36-43% случаев), Proteus vulgaris (16-24% случаев). К этой группе могли быть отнесены непостоянно выделяемые представители родов Propionibacterium, Prevotella, Eubacterium, Flavobacterium, а также Bacteroides fragillis. Четвертую группу составили споровые микроорганизмы: постоянно выделявшиеся в малых количествах Clostridium septicum (6 – 10 % случаев), непостоянно выделявшиеся Clostridium оedematiens, Bacillus cereus, Bacillus subtilis. При этом споровые микроорганизмы из патматериала от КРС и овец, чаще выделяли в Ставропольском крае и в Республике Киргизия. Проведенные исследования позволили констатировать факт наличия широкого спектра видов микроорганизмов, участвующих в патогенезе инфекционных болезней конечностей овец и КРС, что подтверждает данные многих ученых (Самоловов А.А., 1988; Балабанов В.А., 1971; Гришаев Н.Е., 1971; Сидорчук А.А. и др. 1999, 2006) о важной роли микробных ассоциаций в этиологии некробактериоза крупного рогатого скота, некробактериоза и копытной гнили овец. Они также позволяют несколько иначе посмотреть на этиологию и патогенез некробактериоза крупного и мелкого рогатого скота и копытной гнили овец. Таблица 1 Результаты исследований патологического материала от овец, взятого из хозяйств Центральной России, Ставропольского края и Республики Киргизия
Таблица 2 Результаты исследований 213 проб патологического материала от крупного рогатого скота, взятого из хозяйств Центральной России, Ставропольского края и Республики Киргизия
Полученные результаты позволили сделать вывод, что представители гнойно-раневой микрофлоры (C. perfringens, S. aureus, A. pyogenes) в ассоциации с D. nodosus и F. necrophorum значительно усиливают вирулентность последних, позволяя им действием своих ферментов значительно быстрее преодолевать защитные барьеры организма животного и вызывать тяжелые поражения конечностей и внутренних органов, часто приводя к летальному исходу. Поэтому, на другом этапе исследований были отобраны следующие микроорганизмы: F. necrophorum, D. nodosus, C. perfringens т. А, S. aureus, A. pyogenes для изучения их биологических свойств. При этом учитывались как культурально-морфологические свойства штаммов F. necrophorum, D. nodosus, C. perfringens т. А, S. aureus, A. pyogenes, так и их биохимические показатели, включая протеолитические и гемолитические, токсигенные, вирулентные и антигенные свойства. В результате проведенных исследований были описаны свойства: 17 штаммов F. necrophorum, в том числе 10 музейных и 7 вновь выделенных, проведена их типизация и отобраны 4 штамма биотипа «А» для дальнейших экспериментов; 5 штаммов С.perfringens т. А, в том числе 2 музейных и 3 вновь выделенных, из них отобраны 2 штамма; 8 штаммов S. aureus, в том числе 3 музейных и 5 вновь выделенных. Для последующих исследований отобрали 2 штамма; 15 штаммов А. pyogenes, в том числе 5-и музейных и 10-и вновь выделенных. Из этого количества отобрали 5 наиболее перспективных для дальнейших исследований штаммов; 7 штаммов D.nodosus. из которых были отобраны 4 штамма. Изучение биологических свойств и отбор штаммов позволили перейти к экспериментам, подтверждающим значение ассоциаций указанных микроорганизмов в этиологии инфекционных боленей конечностей. 2.3.1. Экспериментальное подтверждение значения ассоциаций микроорганизмов в этиологии болезней конечностей. С этой целью провели подтитровку культур F. necroforum, А. pyogenes, S. аureus на кроликах и определили LD50 для каждой культуры. После определения LD50 был поставлен основной опыт по подтверждению значения ассоциаций микроорганизмов на кроликах массой 2,0-2,5 кг, где животных заражали культурами F. necrophorum, А. pyogenes, S. aureus и различными вариантами смеси этих культур. Результаты исследований продемонстрировали, что при одинаковом количестве инфекционного материала, использованного для заражения животных, в дозе 4 LD50 кролики, зараженные ассоциациями микроорганизмов в различных вариациях, погибали значительно быстрее по сравнению с животными, зараженными монокультурами. Два кролика, зараженные монокультурами, на период наблюдения остались живыми. На вскрытии животных, зараженных ассоциациями, отмечали поражения, характерные для септического процесса: множественные кровоизлияния во внутренние органы, очаги некроза и абсцессы. Результаты повторного эксперимента, полностью совпали с результатами первого опыта. На селективных средах из отдельных органов удалось реизолировать и идентифицировать исходные культуры микроорганизмов F. necrophorum, А. рyogenes, S. аureus. Заболевание у кроликов, зараженных ассоциациями, протекало остро, и через 2 – 3 дня животные погибали. На вскрытии отмечали поражения внутренних органов, характерные для сепсиса. Выделение и идентификация культур подтверждали чистоту экспериментов. На втором этапе исследований для подтверждения значения ассоциаций микроорганизмов в этиологии заболеваний конечностей был поставлен опыт на овцах результаты которого отображает таблица 3. Таблица 3 Степень проявления болезни в зависимости от состава микробной ассоциации
*-числитель – количество заболевших животных, знаменатель – тяжесть поражений: л – легкая степень поражения копытец; с - средняя степень поражения копытец; т – тяжёлая степень поражения копытец. Для постановки опыта использовали 12 овец и 6 баранов 1,5 – 2 летного возраста. Всех животных разделили на 6 групп по 3 овцы в каждой. Для заражения использовали 36 часовые культуры F. necrophorum, А. pyogenes, S. aureus в дозах, составляющих 20 LD50 для кроликов массой 2,5 – 3 кг. В опыте также использовали 12 часовую культуру C. рerfringens т. А штамма 28 в дозе 100 LD50 для морских свинок массой 250 г. Культуру D. nodosus штамм ПП82/90 использовали в дозе 50 млрд. м.т. Заражение осуществляли путем втирания инфекционного материала в скарифицированный свод межкопытной щели с последующим наложением тампона, содержащего инфекционный материал и повязки. Все животные на протяжении опыта содержались в клетках с сухими полами. За животными установили наблюдение в течение 15 дней. Через 3 дня после заражения у всех животных были сняты повязки с инфекцион- ным заражающим материалом и проведен первый осмотр конечностей всех зараженных овец. В последующем осмотры провели на 7, 11 и 15 дни после заражения. Результаты представлены в таб. 4. В опыте отмечали 3 степени поражения и характеризовали их как: Л - легкая степень поражения; общее легкое угнетение, снижение аппетита, животные иногда поднимают больную конечность в покое, при движении – слабо выраженная хромота. При осмотре: выпадение волос в межкопытной щели, гиперемия и отечность кожи свода межкопытной щели, повышение местной температуры; С – средняя степень поражения; общее легкое угнетение, гиподинамия, снижение аппетита, выраженная хромота при движении, в покое животное держит больную конечность приподнятой. При осмотре: в области свода межкопытной щели гиперемия, отечность, наличие эрозий и язв, покрытых сероватым экссудатом с ихорозным запахом, повышение местной температуры; Т – тяжелое поражение; те же клинические признаки поражений, как и при средней тяжести (с), а также поражение основы кожи пяточных частей внутренних стенок копыт и гнойное воспаление основы кожи подошвы, отслоение рогового башмака. Из таблицы 4 видно, что заражение овец монокультурами микроорганизмов не всегда вызывало их заболевания или отмечали в основном легкую степень поражения. Животные, зараженные ассоциациями микроорганизмов, заболели уже на 3 - е сутки после заражения. В этом случае отмечали среднюю степень поражения у всех зараженных, а у двух баранов отмечена впоследствии тяжелая степень поражения копыт и начато их досрочное лечение. Эксперименты, проведенные на кроликах и овцах, позволили сделать вывод о том, что избранная ассоциация микроорганизмов значительно сильнее угнетает защитные системы организма и в короткие сроки вызывает более тяжелые поражения конечностей животных по сравнению с воздействием монокультур тех же организмов, входящих в состав ассоциаций. Эти эксперименты подтвердили правомочность концепции создания ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечностей копытных животных. 2.4. Определение оптимальных соотношений антигенов в ассоциированных вакцинах. Изучение конкуренции антигенов в организме животных, привитых ассоциированными вакцинами. С целью определения оптимальных концентраций антигенов для конструирования ассоциированных вакцин были изготовлены инактивированные формалином антигены D.nodosus, F.necrophorum, C.perfringens т. A, S. aureus, A. pyogenes в концентрациях 10, 20, 40 млрд. микробных клеток в мл , которыми иммунизировали 36 овец 1,5 – 2 летнего возраста. По уровню гуморальных антител в РА подбирали оптимальные концентрации для составления опытных серий ассоциированных вакцин. В результате проведенных исследований были установлены следующие концентрации антигенов для составления опытных серий ассоциированных вакцин: F. necrophorum и D.nodosus 20 млрд. м.т./мл,S.aureus, C. perfringens т. А, A. рyogenes – 30 – 40 млрд. м.т./мл. Конкуренцию антигенов изучали также на овцах, которых прививали моновакцинами из указанных штаммов на ГОА адъюванте и экспериментальной ассоциированной вакциной с этим же адъювантом. Количество каждого антигена в ассоциированной вакцине и моновакцинах было одинаковым. О наличии или отсутствии конкуренции антигенов судили по титру специфических агглютининов и токсиннейтрализующих антител. Результаты исследований приведены в табл. 4. Исследования позволили установить факт отсутствия конкуренции указанных антигенов в организме привитых овец. Уровни антител, стимулируемых каждой валентностью (антигеном) ассоциированной вакцины в сравнении с уровнем антител, стимулируемых моновакцинами, были примерно одинаковыми и даже несколько большими у ассоциированной вакцины по некоторым валентностям. Проведенные исследования позволили перейти к изготовлению опытных серий ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечностей овец и некробактериоза КРС и их испытаниям в неблагополучных по этим болезням овцеводческих и животноводческих хозяйствах. 2.5. Испытания опытных образцов ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечностей овец и некробактериоза КРС. Разработка схемы применения ассоциированных вакцин. Испытание опытной серии инактивированной ассоциированной вакцины против инфекционных заболеваний конечностей овец с масляным адъювантом, провели в сравнении с Югославской ассоциированной вакциной «Памавак» и отечественной моновакциной против копытной гнили овец в совхозе «Кузнецовский» Тверской области. В свою очередь, в совхозе «Мир» Рузаевского района Республики Мордовия испытывались несколько вариантов инактивированной вакцины против инфекционных заболеваний конечностей овец с различными адъювантами и антигенным составом. Аналогично в совхозе «им. Кирова» Балашихин- Таблица 4 Результаты сравнительного испытания ассоциированной вакцины и моновакцин
ского района Московской области были испытаны несколько вариантов инактивированной ассоциированной вакцины против некробактериоза КРС с лечебной и профилактической целями, включая вариант вакцины с им- муномодулятором «Гликопин» (ГМДП), в сравнении с Югославской ассоциированной вакциной «Памавак» на 170 головах крупного рогатого скота. Впоследствии, лучшим вариантом вакцины против некробактериоза КРС было привито все поголовье (1347 коров) этого хозяйства. Другой вариант (эмульгированной) опытной серии инактивированной ассоциированной вакцины против некробактериоза КРС был испытан на 381 голове КРС в совхозе «Луховский» Октябрьского района г. Саранска. В дальнейшем в совхозе «Барыбино» опытно-промышленной серией инактивированной ассоциированной вакцины против некробактериоза КРС с ГОА адъювантом, было привито 32 коровы различными дозами этого препарата. В этом хозяйстве были исследованы также некоторые параметры иммунитета, стимулируемого этой вакциной. В результате проведенных исследований было установлено, что вакцинация животных инактивированными ассоциированными вакцинами против инфекционных заболеваний конечностей овец и некробактериоза КРС является эффективным методом борьбы с этими болезнями. Их эффективность оказалась выше, чем у Югославской ассоциированной вакцины «Памавак» и эмульгированной моновакцины против копытной гнили овец. В итоге, в качестве адъюванта был выбран 3% ГОА как менее реактогенный по сравнению с масляным и дешевый. Наиболее эффективной оказалась двукратная иммунизация животных с интервалом 28 – 30 дней при подкожном введении в области коленной складки для КРС и в области нижней трети шеи для овец в дозах по 5 мл на 1 голову животного. Срок иммунитета, стимулируемого этими вакцинами не превышал 6 месяцев, поэтому перспективной являлась однократная реиммунизация через 5-6 месяцев после второй вакцинации для поддержания иммунитета у привитых животных. Инактивированная ассоциированная вакцина против инфекционных заболеваний конечностей овец получила название «Овикон», а инактивированная ассоциированная вакцина против некробактериоза конечностей КРС – «Нековак». 2.6. Разработка методов контроля ассоциированных вакцин. За основу лабораторных методов контроля вакцин «Овикон» и «Нековак» брали существующие стандартные методики: отбор проб по ОСТ 10-07-001-93, определение внешнего вида визуально, определение стерильности согласно ГОСТ 28085-89 – «Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности». При этом в питательных средах с посевами и пересевами не должно быть визуальных признаков роста микрофлоры. Определение безвредности проводили также по стандартной методике, используя 10 белых мышей и двух кроликов, при подкожном введении в соответствующих дозах. Вакцины считали безвредными, если животные в течение 10 суток оставались живы и клинически здоровы. Допускалось образование в местах введения вакцин припухлостей различной величины. Принципиально важным и сложным стал вопрос о разработке методов контроля антигенной и иммуногенной активности ассоциированных вакцин «Овикон» и «Нековак» ввиду большого количества антигенов и анатоксинов входящих в их состав. Ранее, нами в качестве лабораторного контроля антигенной активности вакцины против копытной гнили овец инактивированной эмульгированной был разработан метод определения антител в РА у вакцинированных кроликов. Предварительно нами были изучены вирулентные и иммуногенные свойства D. nodosus на лабораторных моделях. В результате исследований было установлено, что лабораторные животные (кролики, белые мыши, морские свинки и другие) не чувствительны к D. nodosus. При различных методах заражения и дозах культуры D. nodosus не вызывали заболевания и падежа лабораторных животных (Панасюк С.Д., 1982). Однако, нами было экспериментально установлено, что динамика накопления антител в крови вакцинированных кроликов в половинных дозах (от дозы овцы) повторяет динамику накопления агглютининов у привитых овец только на более низком уровне соответственно 1:720-1:880 и 1:2133-1:2533 на пике накопления. При этом коэффициент корреляции был в высокой степени положительным (r=+0,83-+ 0,99). Это позволило использовать кроликов в качестве лабораторной модели контроля антигенной активности вакцины против копытной гнили овец ВИЭВ инактивированной эмульгированной (Панасюк С.Д. 1982, 1983). Предложенный метод прошел проверку на Орской и Армавирской биофабриках и надежно обеспечивал качество указанной вакцины до момента снятия её с производства. Учитывая тот факт, что в состав вакцины «Овикон» входит антиген D. nodosus, мы использовали указанный метод контроля антигенной активности этой валентности на кроликах в тех же параметрах, как и у вакцины против копытной гнили овец. Более того, учитывая потерю вирулентных свойств культур F. necrophorum (быструю потерю вирулентных свойств культур при пересевах на жидких питательных средах и возможность образования L-форм). Нами были проведены сравнительные исследования по определению динамики антител у вакцинированных кроликов, овец и КРС. Результаты исследований показали, как для валентности D. nodosus, так и для валентности F. necrophorum имеется возможность использовать кроликов в качестве лабораторной модели для оценки антигенной активности вакцин. Корреляция титров агглютининов у вакцинированных кроликов и овец, а также у привитых кроликов и КРС была очень высокой и соответственно составляла r=+0,97 и r=+ 0,99,что показано в таблице 5. Полученные результаты позволили нам расширить эксперимент и продолжить использовать кроликов в качестве лабораторной модели антигенной активности вспомогательных валентностей S. aureus, C. perfringens т. А, A. pyogenes ассоциированных вакцин «Овикон» и «Нековак». Полученные результаты позволили установить тот факт, что привитые вакцинами «Овикон» и «Нековак» кролики могут быть лабораторной Таблица 5 Сравнительное антителообразование у вакцинированных (валентность F.necrophorum) кроликов, овец, КРС
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 | Перечень лабораторных исследований, проводимых бу чр "Чувашская республиканская... Ррс свиней, ротавирусную инфекцию крупного рогатого скота, коронавирусную инфекцию крупного рогатого скота, стельность коров | | Лейкоз лейкоз крупного рогатого скота Лейкоз крупного рогатого скота – хроническое вирусное заболевание, которое протекает бессимптомно или проявляется лимфоцитозом и... |
| Реферат Тема: Животноводство в годы ВОВ. Работу В украинской сср поголовье крупного рогатого скота уменьшилось на 44%, овец и коз — на 74, свиней — на 89, лошадей — на 70%. В районах... |  | Бизнес-план Создание фермы по разведению крупного рогатого скота для получения мяса 2011 год Концепция проекта предусматривает создание фермы по разведению крупного рогатого скота для получения мяса в Алматинской области |
| Методические рекомендации по диагностике, лечению и профилактике... Рекомендации разработаны авторским коллективом сотрудников фгу «фцтрб-вниви» и Главного управления ветеринарии км рт | | Адаптация чёрно-пёстрого скота разных эколого-генетических типов в условиях ростовской области Акклиматизационно-адаптивные и продуктивные качества крупного рогатого скота |
| Сравнительные физико-химические и морфологические свойства трубчатых... «Новоубеевская основная общеобразовательная школа» Дрожжановского муниципального района Республики Татарстан | | 1 обзор литературы Особенности лейкоза крупного рогатого скота и современные методы его диагностики |
| Стрептококкоз крупного рогатого скота в краснодарском крае Клинические симптомы и патологоанатомические изменения при стрептококкозе | | Программа рекомендуется для направления подготовки (специальности)... Целью специализации является глубокое овладение теоретическими и практическими знаниями особенностей проявления инфекционных болезней... |
| Реферат Совершенствование схемы профилактики и лечения инфекционного... В процессе увеличения поголовья герефордского скота на территории Челябинской области наметилась тенденция к широкому распространению... | | Кафедра инфекционных болезней «Гемоконтактные гепатиты. Избранные вопросы этиологии, клиники, дифференциальной диагностики и лечения» |
| Рабочий план по эпизоотологии и инфекционным болезням для студентов... Диагностика и мероприятия при чуме крупного рогатого скота, злокачественной катаральной горячке | | «Мероприятия по улучшению воспроизводства крупного рогатого скота... Место проведения: «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К. И. Скрябина» |
| Формирование мясной продуктивности молодняка крупного рогатого скота... Лазаренко Виктор Николаевич, доктор сельскохозяйственных наук, профессор кафедры генетики и разведения сельскохозяйственных животных... | | Рабочая программа учебной дисциплины физиология крупного рогатого... Проректор по учебной работе, заместитель председателя умо по агрономическому образованию д т н |
