Феноменология иммунного ответа на т-независимые антигены 2-го типа 14. 03. 09 клиническая иммунология, аллергология
Скачать 336.07 Kb.
|
Таблица 2. Динамика иммунного ответа на SIII
В динамике появления АОК и ИГОК наблюдался четкий параллелизм: максимальное их количество достигалось на 4-5 сутки, затем снижалось и на 7-10 дни возвращалось к исходному уровню. Об уровне неспецифической стимуляции свидетельствует количество инНИГОК. Эти клетки появлялись (как и АОК) после введения и ПВП, и SIII, достигая максимума также к 4-му дню; затем их число постепенно снижалось, и на 10-й день выявить их вообще не удавалось. Это свидетельствует о том, что появление индуцированных НИГОК обусловлено введением ТН-2 АГ. Динамика ответа на ТН-2 АГ оказалась в целом сходна с таковой при иммунизации животных ТЗ АГ [Агаджанян М.Г. и др, 1981], хотя амплитуда ответа на ТН-2 АГ была намного ниже. Зависимость иммунного ответа от дозы введенных ТН-2 и ТЗ антигенов. Известно, что величина специфического ответа зависит от дозы введенного АГ. В то же время в опытах с ТЗ АГ было показано, что in vitro при высоких концентрациях антигена часть В лимфоцитов может связывать его неспецифически и активироваться таким способом [Bach M.A et al, 1983]. Для определения зависимости ответа от дозы ТН-2 АГ мышам BALB/c вводили от 10-2 до 1 мкг ПВП/мышь и для сравнения ТЗ-АГ – эритроциты барана в дозах 106 –5х108/мышь. На 4-е сутки определяли количества АОК и ИГОК методом локального гемолиза в геле агарозы и рассчитывали число НИГОК. Данные, представленные в табл. 3, свидетельствуют о том, что увеличение дозы и ТЗ, и ТН-2 АГ приводит к пропорциональному увеличению количеств АОК и НИГОК, соответственно. Образование последних проявлялось в широком диапазоне доз ТН-2 АГ. Повышение числа НИГОК вызывало уже введение низких доз АГ; АОК выявлялись при более высоких концентрацияхТН-2 АГ. Таким образом, результаты, полученные при иммунизации мышей ТН-2 АГ, в принципе, не отличались от таковых при введении ТЗ АГ. Таблица 3. Зависимость иммунного ответа от дозы введенного антигена
Зависимость иммунного ответа от природы ТН-2 антигена. Иммуногенные свойства разных ТЗ АГ неодинаковы. Следовало установить зависимость иммунного ответа и от природы ТН-2 АГ. Для этого мышей BALB/c иммунизировали Декс, SIII, Фик и ПВП (по 2 мкг/мышь). Для сравнения использовали иммунизацию ТН-1 АГ (ЛПС – 1 мкг/мышь) и ТЗ АГ (эритроциты барана – 5х108/мышь и вирус гриппа A/PR8 – 5 мкг/мышь). Иммунизация мышей ТЗ АГ приводила к четко выраженному специфическому ответу и неспецифической активации спленоцитов. Количества АОК на эритроциты барана и вирус гриппа увеличивались соответственно от 10± 3 до 1234±116/млн и от 8±2 до 989±158/млн спленоцитов (~ в 120 раз), числа ИГОК – соответственно от 1583±340 до 5911±508/млн и от 1527±181 до 4860±392/млн клеток (~ в 3,4 раза) и количества НИГОК – соответственно от 1572±337 до 4677±390/млн и от 1519±179 до 3871±234/млн спленоцитов (~ в 2,7 раза). Оба ТЗ АГ вызывали появление индуцированных ими НИГОК (3105/млн и 2352/млн спленоцитов, соответственно, для эритроцитов барана и для вируса гриппа). Картина иммунного ответа на введение ТН-1 и ТН-2 АГ оказалась несколько другой. Известно, что ЛПС, обладающий митогенной активностью, в низких дозах вызывает специфический иммунный ответ [Coutinho A. et al, 1974]. Использование иммуногенной и митогенной концентраций ЛПС показало, что при дозах, не превышающих 0,5–1 мкг/мышь, наблюдается «обычный» для ТН-2 АГ специфический ответ и появление индуцированных НИГОК. Однако даже при иммуногенных дозах ЛПС поликлональная активация превышала «обычную» неспецифическую поликлональную стимуляцию В лимфоцитов ТН-2 АГ. Возможно, дело в остаточной митогенной активности даже низких доз ЛПС. Сравнительное изучение ответа на разные ТН-2 АГ показало, что их иммуногенная активность неодинакова (Рис. 1, А-Г). Наименее иммуногенным оказался Фик (Рис. 1, Б.), а наиболее иммуногенным SIII (Рис.1, Г). Так иммунизация мышей Фик вызвала рост числа АОК от 47±7 до 102±23/млн спленоцитов, ИГОК – от 2760±446 до 3880±547/млн и НИГОК – от 2713±439 до 3778±527/млн, т.е. увеличение числа АОК, ИГОК и НИГОК относительно нормы, соответственно, составило 55±10, 1120±101 и 1065±86/млн клеток. Введение мышам SIII индуцировало рост числа АОК от 30±4 до 500±72/млн , ИГОК от 1500±261 до 4900±356 и НИГОК от 1470±258 до 4400±284, т.е. увеличения количеств АОК, ИГОК и НИГОК оказались наибольшими по сравнению с другими ТН-2 АГ (Декс и ПВП,) и составили, соответственно, 470±68, 3400±98 и 2930±32/млн спленоцитов. Такая же картина наблюдалась и в отношении образования НИГОК, индуцированных этими ТН-2 АГ, – наименьшее их количество выявлялось при иммунизации Фик (1065/млн), а наибольшее (2930/млн) также после введения SIII.    - в норме - при иммунизации Рис. 1. Иммунный ответ на ТН-2 антигены (А.- ПВП, Б.- Фик, В.- Декс, Г.- SIII). Анализ полученных результатов позволяет заключить, что действие ТЗ, ТН-1 и ТН-2 АГ в принципе сходно. Вместе с тем в ответе на них имеются и различия: так амплитуда иммунного ответа на ТЗ и ТН АГ неодинакова. ТЗ АГ вызывают значительно больший специфический ответ, чем ТН-2, а ТН-1 АГ – значительно более выраженную поликлональную активацию, чем ТЗ АГ. Следует подчеркнуть, что хотя, согласно общепринятой точке зрения, ТН-2 АГ не являются митогенами [Mond J.J. et al, 1995; Сидорова Е.В., 2002], их введение приводит к неспецифическому/ поликлональному ответу, хотя и не очень высокому. Механизм неспецифической стимуляции В клеток под влиянием ТН-2 АГ до сих пор неясен. Представлялось интересным выяснить, как влияет на специфический ответ и неспецифическую/ поликлональную активацию одновременная иммунизация мышей разными типами АГ – ТЗ и ТН-2 или двумя ТН-2 АГ. Очевидно, что если каждый из антигенов вызывает появление индуцированных НИГОК, то при их совместном введении можно ожидать суммацию числа последних. Влияние одновременного введения ТЗ и ТН-2 или двух ТН-2 антигенов на специфический и поликлональный ответ. Ранее было показано, что одновременное введение двух ТЗ АГ или ТЗ и ТН-2 АГ приводит, во-первых, к появлению АОК на каждый из них, а во-вторых, к суммации числа НИГОК, индуцированных антигенами [De Vos-Cloetens C. et al, 1971; Агаджанян М.Г. и др., 1981]. Аналогичные результаты были получены и нами при иммунизации мышей ВРАБЭ и ПВП. Число НИГОК после введения ВРАБЭ возросло с 2800±267 до 10492±759 /млн спленоцитов, соответственно количество НИГОК, индуцированных ВРАБЭ, составило 7692±494/106 клеток. После иммунизации ПВП число НИГОК увеличилось от 2755±246 до 5050±600/млн клеток и также привело к появлению индуцированных НИГОК в количестве 2295± 356/106 клеток. Суммарное количество индуцированных НИГОК при введении ПВП и ВРАБЭ должно было составить 9987±846/106 спленоцитов. Действительно совместное введение этих антигенов вызвало рост числа АОК на каждый из них (от 245±39 до 1913±109/млн клеток для ПВП и от 200±19 до 2896±232/млн спленоцитов для ВРАБЭ), увеличение количества НИГОК с 255±317 до 13091±701/106 клеток и, соответственное, появление индуцированных НИГОК – 10536±384/млн спленоцитов. Таким образом, одновременное введение ТЗ и ТН-2 АГ привело к ожидаемой суммации числа индуцированных НИГОК (Рис. 2, 1). Аналогичная картина наблюдалась в наших опытах in vitro. На 4-е сутки культивирования спленоцитов мышей CBA в присутствии иммуногенных доз ЛПС и ПВП одновременно была отмечена и специфическая, и неспецифическая/ поликлональная стимуляция В клеток. Число НИГОК, индуцированных совместным введением ТН-1 и ТН-2 АГ (19101±2062/млн), практически равнялось сумме чисел НИГОК, индуцированных ПВП (3273±570/млн клеток) и ЛПС (15681±2180/млн клеток) в отдельности. Таким образом, одновременное введение как ТЗ и ТН-2, так и ТН-1 и ТН-2 АГ приводило к суммации чисел НИГОК, индуцированных антигенами. Принципиально другая картина наблюдалась при совместном введении двух ТН-2 АГ (Рис. 2, 2-5).  Рис. 2. Образование индуцированных НИГОК при раздельном и совместном введении ТЗ и ТН-2 АГ или двух ТН-2 АГ (1. ПВП+ВРАБЭ; 2. ПВП+Декс; 3. Декс+Фик; 4. Дек+SIII; 5. ПВП+SIII). Одновременная иммунизация двумя ТН-2 АГ в любом сочетании приводила к появлению специфичных для каждого антигена АОК и росту числа ИГОК, однако количество появляющихся индуцированных антигенами НИГОК при этом обычно не превышало их числа, индуцированного наиболее иммуногенным из двух использованных в паре ТН-2 АГ. Ни в одном случае суммации числа индуцированных НИГОК при одновременном введении двух ТН-2 АГ, в отличие от иммунизации парой ТЗ и ТН-2 АГ, обнаружить не удалось (Рис. 2), [Гаврилова М.В.и др., 2007]. Ограничение неспецифической активации при одновременном введении двух ТН-2 АГ могло быть связано с общим угнетением иммунного ответа из-за использования суммарно большей дозы АГ (4 мкг вместо оптимальных 2 мкг/мышь). Однако было показано, что на образование АОК одновременная иммунизации разными парами ТН-2 АГ не влияла. Это значит, что доза введенных ТН-2 АГ не является супрессивной. Таким образом, отсутствие суммации числа индуцированных НИГОК при одновременной иммунизации двумя ТН-2 АГ с общей супрессией иммунного ответа не связано. Наличие суммации числа индуцированных НИГОК при введении пары ТЗ и ТН-2 АГ позволило предположить, что в неспецифическую активацию (как и в специфическую), индуцируемую ТЗ и ТН-2 АГ, вовлекаются разные субпопуляции В лимфоцитов. В настоящее время известны 4 субпопуляции В клеток, характеризующиеся разными поверхностными маркерами и разными свойствами [Сидорова Е.В., 2002, 2006]. Выяснению роли разных субпопуляций В клеток в иммунном ответе на ТН-2 АГ были посвящены следующие серии опытов. Роль Lyb5+ и Lyb5– B лимфоцитов в иммунном ответе на ТН-2 антигены. Ранее было показано, что у нормальных мышей ТЗ АГ индуцируют образование АТ как зрелыми (Lyb5+), так и незрелыми (Lyb5–) В лимфоцитами, а ТН-2 АГ индуцируют АТ-образование только в зрелых Lyb5+ В клетках [Ahmed A. et al, 1977; Smith H.R. et al, 1985]. Неспецифическая/ поликлональная активация при этом вообще не исследовалась. Чтобы выяснить, какие В клетки отвечают за неспецифическую активацию, индуцируемую ТЗ и ТН-2 АГ, сравнивали ответ на эти антигены у мышей конгенных линий СВА и СВА/N. У xid-мышей СВА/N нарушены конечные этапы дифференцировки В лимфоцитов, что приводит к отсутствию у них популяции зрелых Lyb5+ В клеток [Scher I., 1982; Subbarao B. et al, 1982; Сидорова Е.В, 1993]. Иммунизация ТЗ АГ как in vivo, так и in vitro (табл. 4 и 5) индуцировала образование АОК и рост числа ИГОК и НИГОК у мышей обеих линий; число АОК коррелировало с числом НИГОК. Введение ТН-2 АГ индуцировало появление АОК и рост числа НИГОК только у мышей СВА. Таблица 4. Иммунный ответ мышей CBA и CBA/N на ТЗ и ТН-2 антигены in vivo
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 | Феноменология иммунного ответа на т-независимые антигены 2-го типа Защита состоится 17 мая 2012г в 12 часов на заседании диссертационного совета д 001. 035. 01 при фгбу «ниивс им. И. И. Мечникова»... | | Методические рекомендации по организации изучения дисциплины 62 Протокол... «Иммунология – клиническая иммунология» состоит в овладении знаниями по изучению иммунной системы организма человека, форм иммунного... |
| Клиническая иммунология Клиническая иммунология: Учебно-методическое обеспечение самостоятельной работы / А. А. Савченко. – Красноярск: Сиб федер ун-т, 2011.... | | Клинико-иммунологическая характеристика больных атопическим дерматитом... Учитель истории и обществознания Гусевской средней общеобразовательной школы Бабаева С. В |
 | Сравнительная характеристика натуральных киллерных клеток человека... Охватывает те же этапы, что и протокол предложенный Хиллом, но компания предлагает использовать свою среду неизвестного пользователю... | | Сэндвич-метод иммуноферментного определения hbsAg с помощью рн чувствительных... Данный период был обозначен неизбежным моментом, который в любом случае наступил в результате перехода от феодализма к капитализму.... |
| Иммунология клиническая иммунология Основной целью обучения является усвоение определенной суммы информации по предмету, а также выработка и развитие у студентов умений... | | Иммунология клиническая иммунология Основной целью обучения является усвоение определенной суммы информации по предмету, а также выработка и развитие у студентов умений... |
| Оценка гуморального иммунного ответа на вакцинацию против гепатита в и А Ведущее учреждение: гу научно-исследовательский Институт вирусологии им. Д. И. Ивановского рамн | | Программа факультативной дисциплины «Аллергология и иммунология» Формирование специальных профессиональных знаний и умений в области клинической иммунологии, аллергологии, необходимых для эффективной... |
| Программа факультативной дисциплины «Аллергология и иммунология» Формирование специальных профессиональных знаний и умений в области клинической иммунологии, аллергологии, необходимых для эффективной... | | Рабочей учебной программы по дисциплине общая и клиническая иммунология... |
| Рабочая программа дисциплины дисциплина сд. Р «Клиническая иммунология» Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования | | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Образовательный стандарт послевузовской профессиональной подготовки врача по специальности «аллергология и иммунология», образовательные... |
| Роль индикации отдельных специфических маркеров вируса гепатита в... Работа выполнена в фгун «Нижегородский нии эпидемиологии и микробиологии им академика И. Н. Блохиной» Роспотребнадзора и филиале... | | Реферат "Регуляция иммунного ответа" Введение Иммунный ответ, как... Активация т- и в-клеток происходит в результате эффективного связывания антигенного материала их антигенспецифичными рецепторами |
