Измерение авидности специфичных к ВЗН IgG позволяет определить период времени, прошедший после первичного инфицирования. Так, IgG, выявляемые в первые 3 - 5 месяцев после первичного инфицирования, имеют низкую авидность, в то время как в более поздние сроки IgG показывают высокую авидность.
При индексе авидности (ИА) менее 50% сыворотка содержит низкоавидные антитела, что указывает на текущую либо недавно перенесенную инфекцию (2 - 3 месяца назад). Если индекс авидности более 70%, то сыворотка содержит высокоавидные антитела, что указывает на перенесенную ранее инфекцию.
В то же время высокое значение ИА анализируемой пробы к антигенам ВЗН не позволяет установить время начала заболевания ЛЗН, тогда как аналогичная величина ИА к антигенам ВКЭ указывает на перенесенный ранее (более 80 дней) КЭ. Однако при клещевом энцефалите могут обнаруживаться IgG-антитела к ВЗН с высокой авидностью (до 100%).
Таким образом, наличие IgM свидетельствует об острой либо недавно перенесенной инфекции, обусловленной ВЗН. Выявление антител класса IgG необходимо использовать в парных сыворотках в качестве подтверждающего теста и при проведении сероэпидемиологических исследований.
Результаты лабораторных анализов оформляют в соответствии с Приложением 8 МУ.
5.1.6. Порядок взаимодействия медицинских организаций
с учреждениями Роспотребнадзора
Информацию о выявленных случаях ЛЗН направляют в установленном порядке в соответствии с действующими нормативными документами.
Клинический материал (сыворотки крови, СМЖ) от больного с подозрением на ЛЗН для подтверждения диагноза направляют в ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации. При невозможности проведения исследований на базе ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" материал, в соответствии с комплексными планами по эпиднадзору за ЛЗН на территории конкретного субъекта или по согласованию, направляют в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней.
Клинический материал (взятый в острый период и от больных тяжелой формой) для выделения вируса, а также секционный материал от трупа с подозрением на ЛЗН направляют в Референс-центр по мониторингу за лихорадкой Западного Нила. Такой же материал передают для подтверждения диагноза в ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации. При невозможности проведения исследований на базе ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" материал, в соответствии с комплексным планом по эпиднадзору за ЛЗН на территории конкретного субъекта или по согласованию, направляют в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней. Отправку секционного и клинического материала для выделения вируса обеспечивает ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии".
Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности.
5.2. Порядок работы при проведении лабораторной
диагностики лихорадки Западного Нила для филиалов ФБУЗ
"Центр гигиены и эпидемиологии" в муниципальном образовании
(городе, административном районе) в субъекте
Российской Федерации
Специалисты филиалов ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в муниципальном образовании в субъекте Российской Федерации при осуществлении эпидемиологического надзора и по эпидпоказаниям проводят сбор полевого материала (комары, клещи, органы птиц и грызунов). При необходимости для забора крови лошадей и КРС привлекаются специалисты ветеринарной службы.
В лабораториях филиалов ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в муниципальном образовании в субъекте Российской Федерации диагностические исследования материала на наличие возбудителя ЛЗН не проводят.
5.2.1. Порядок работы при отборе материала для исследования
на лихорадку Западного Нила в лабораториях филиалов ФБУЗ
"Центр гигиены и эпидемиологии" в муниципальном
образовании в субъекте Российской Федерации
5.2.1.1. Сбор и транспортировка полевого материала
Материалом для исследования на наличие возбудителя ЛЗН из окружающей среды являются:
- орнитофильные антропофильные комары, относящиеся к различным родам, в том числе Culex, Aedes и Anopheles;
- иксодовые клещи Hyalomma marginatum marginatum и другие, различных фаз метаморфоза (имаго, личинки, нимфы), снятые с прокормителей и собранные в открытых стациях; аргасовые и гамазовые клещи;
- птицы (дикие и врановые);
- мелкие млекопитающие;
- пробы крови крупного и мелкого рогатого скота.
Сбор материала и его транспортировку осуществляют с соблюдением требований безопасности работы с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями I - II групп патогенности.
Отбор, упаковка и транспортировка проб для исследования
Сбор комаров и клещей, птиц и мелких диких млекопитающих проводят в соответствии с действующими нормативными документами по сбору, учету, подготовке к лабораторному исследованию кровососущих членистоногих - переносчиков возбудителей природно-очаговых инфекций и методическими указаниями по мероприятиям по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации.
Хранение и транспортировку пробирок с кровью осуществляют с применением термоконтейнеров. Допускается хранение пробирок с кровью при температуре окружающей среды не более 2 - 3 часов.
5.2.2. Оформление направления на исследование
На пробы полевого материала заполняют направление (Приложение 10) в двух экземплярах, один - вкладывают в контейнер с пробами, второй - доставляет нарочный. Направляемые пробы сопровождают письмом на имя руководителя учреждения, в котором указывают вид направляемого материала и цель его исследования, количество объектов; письмо подписывает руководитель направившего учреждения. К сопроводительным документам прилагают опись с указанием места отбора каждой пробы.
5.2.3. Порядок взаимодействия филиалов
ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в муниципальном
образовании в субъекте Российской Федерации
с другими учреждениями Роспотребнадзора
Материал из объектов окружающей среды направляют в соответствии с требованиями действующей нормативной документации в ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации. При невозможности проведения исследований на базе ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" материал, в соответствии с комплексными планами по эпиднадзору за ЛЗН на территории конкретного субъекта или по согласованию, направляют в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней.
Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности (опасности).
5.3. Порядок организации и проведения лабораторной
диагностики лихорадки Западного Нила для лабораторий ФБУЗ
"Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте
Российской Федерации
Исследования материала на наличие возбудителя ЛЗН в ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации проводят на базе вирусологической лаборатории, лаборатории ПЦР-исследований, лаборатории особо опасных инфекций.
5.3.1. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации
5.3.1.1. Требования к лабораториям ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации, осуществляющим исследования на лихорадку Западного Нила
Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов
Лаборатории ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации.
Лаборатории ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации должны соответствовать требованиям действующих нормативных документов.
Учет, хранение, передача и транспортирование материала, зараженного или подозрительного на заражение ВЗН, утилизация отходов должны осуществляться в соответствии с действующими нормативными документами (п. 5.1.1).
Проведение исследований на всех этапах: отбор проб, их хранение, доставка в лабораторию, регистрация, порядок исследования, выдача результатов, а также взаимодействие с учреждениями Роспотребнадзора должны соответствовать требованиям действующих нормативных документов.
Требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на ЛЗН
Исследования на ЛЗН могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним профессиональным образованием, окончившие соответствующие курсы профессиональной переподготовки по специальности "Вирусология" и/или "Бактериология" с основами безопасной работы с патогенными биологическими агентами (ПБА) I - II групп, не имеющие противопоказаний к лечению специфическими препаратами и имеющие допуск к работе с ПБА II - IV групп на основании приказа руководителя учреждения. Специалисты, проводящие исследования на ЛЗН, должны иметь необходимые профессиональные навыки (Приложение 1).
Специалисты, осуществляющие деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных болезней, должны повышать квалификацию не реже одного раза в пять лет.
Требования к обеспечению безопасности работы персонала
Каждая лаборатория должна иметь пакет документов, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Документы должны быть согласованы с комиссией по контролю соблюдения требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале.
Все сотрудники должны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным и зараженным возбудителями инфекционных болезней II - IV групп патогенности (опасности), в соответствии с действующими нормативными документами.
Порядок организации внутреннего контроля лабораторных исследований
Контроль качества диагностических исследований на ЛЗН в специализированных лабораториях ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" включает:
- проведение контроля качества диагностических препаратов и тест-систем, дезинфицирующих средств, химических реактивов;
- контроль эффективности мембранных фильтров;
- проведение своевременной поверки средств измерений, аттестации испытательного оборудования;
- контроль качества стерильности фильтровальных установок, лабораторной посуды, дистиллированной воды;
- контроль работы паровых и суховоздушных стерилизаторов, автоклавов;
- контроль температурного режима холодильников;
- контроль температурного режима термостатов;
- контроль работы бактерицидных ламп;
- проверка состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности, давления;
- проверка санитарного состояния помещений, включая условия уборки, контроль качества дезинфекции, контроль смывов с поверхностей и оборудования.
Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.
Правила ведения документации
Ведение лабораторной документации, включая регистрационные и рабочие журналы, осуществляют в соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов.
Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на ЛЗН
Для проведения диагностических исследований на ЛЗН в лабораториях должны быть в наличии:
- диагностические препараты, тест-системы, зарегистрированные в установленном порядке (Приложение 2);
- приборы, оборудование (Приложение 3);
- расходные и дезинфицирующие материалы (Приложение 4);
- комплект медицинский (укладка универсальная для забора материала от людей и из объектов окружающей среды для исследования на особо опасные инфекционные болезни);
- рабочая и защитная одежда, тип защитной одежды зависит от характера выполняемой работы.
5.3.1.2. Номенклатура и объем исследований
ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации проводит:
- сбор полевого материала (комары, иксодовые Hyalomma marginatum marginatum и другие, различных фаз метаморфоза (имаго, личинки, нимфы), снятые с прокормителей и собранные в открытых стациях; аргасовые и гамазовые клещи, органы птиц и мелких млекопитающих), а также забор крови лошадей, крупного и мелкого рогатого скота, с привлечением специалистов ветеринарной службы (по эпидпоказаниям);
- исследование проб полевого материала;
- исследование материала от больных и умерших с подозрением на ЛЗН (кровь; сыворотка крови и/или плазма; спинномозговая жидкость; секционный материал: печень, легкие, селезенка, почки, мозг (головной и спинной), сгустки крови);
- исследование сывороток крови от здорового населения и сельскохозяйственных животных для определения уровня иммунной прослойки (по эпидпоказаниям).
Диагностические исследования материала осуществляют в следующем объеме:
- полевой материал исследуют на наличие антигена и специфической РНК ВЗН;
- клинический материал от больных (умерших) с подозрением на ЛЗН исследуют на наличие специфических антител класса M (IgM) и класса G (IgG), а также суммарных специфических антител, антигена и специфической РНК ВЗН;
- материал от здоровых людей (доноров, выборочных групп населения), проживающих на территории природных очагов, а также сельскохозяйственных животных для изучения иммунной прослойки исследуют на наличие специфических антител класса G (IgG).
Исследования проводят согласно действующим методическим указаниям по лабораторной диагностике ЛЗН.
5.3.1.3. Порядок диагностических исследований на лихорадку Западного Нила в лабораториях ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации
Забор клинического материала от больных и умерших с подозрением на ЛЗН осуществляют в соответствии с п. 5.1.3 МУ.
Сбор материала из окружающей среды осуществляют в соответствии с п. 5.2.3 МУ.
Порядок исследования материала включает:
I этап:
- прием, сортировку и регистрацию проб;
- первичную обработку проб и подготовку их к исследованию;
- постановку ПЦР, ИФА, МФА, РАО.
Прием, сортировка и регистрация проб
Первичная обработка проб и подготовка их к исследованию
Подготовку образцов проводят в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к тест-системам для постановки МФА, ИФА, РАО, ОТ-ПЦР.
Подготовку суспензий членистоногих и органов животных проводят общепринятым методом с использованием раствора для разведения образцов, заложенного в диагностические тест-системы, или 0,9% раствора хлористого натрия. При заборе органов и приготовлении суспензий в полевых и лабораторных условиях необходимо принять меры для исключения перекрестной контаминации: для получения и обработки проб от каждого животного используют отдельный комплект инструментов и одноразовую посуду.
В случае необходимости длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре от минус 20 до минус 70 °C.
Постановка ИФА, ОТ-ПЦР, МФА, РАО
Проведение ИФА, ОТ-ПЦР, МФА, РАО осуществляют согласно инструкциям, прилагаемым к тест-системам.
|
