Разработка лекарственных форм с флуконазолом для лечения кандидозов 14. 04. 01 технология получения лекарств
Скачать 0.51 Mb.
|
Связь задач исследования с проблемным планом науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России (номер государственной регистрации 0120. 0 803352). Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 188 стр., состоит из введения, обзора литературы (1 глава), 3-х глав экспериментальных исследований, общих выводов, приложения; содержит 28 таблиц и 13 рисунков; библиографический указатель включает 236 источника, из них 75 – на иностранных языках. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования В экспериментальных исследованиях использованы лекарственные и вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению и отвечающие требованиям нормативной документации. Для достижения поставленной цели и решения задач использовали физические и физико-химические методы, определяя для суппозиториев среднюю массу и отклонение от нее, температуру плавления, время полной деформации и растворения, значение рН водных извлечений, дисперсность флуконазола и однородность его дозирования; для биорастворимой полимерной пленки – среднюю массу и отклонение от нее, время растворения и потери прочности, силу и время адгезии, индекс набухания, значение рН водных извлечений, дисперсность флуконазола. Количественное определение флуконазола проводили методом УФ-спектрофотометрии при (261±1)нм относительно раствора стандартного образца (СО) флуконазола (EurPhCRS), на спектрофотометре модели UV-1700 (ф. Shimadzu). Разработанная методика валидирована и применялась для определения однородности дозирования флуконазола в суппозиториях, проведения теста «Растворение» (прибор DT 600 ф. Erweka) и изучения профиля высвобождения субстанции из лекарственных форм. Подлинность флуконазола подтверждали методами УФ-спектрофотометрии и тонкослойной хроматографии (пластинки «Kieselgel 60F254», система растворителей – этилацетат, изопропиловый спирт, раствор аммиака концентрированный (8:7:3), детекция зон адсорбции в УФ-свете) на фоне стандартного образца вещества. Биофармацевтические исследования осуществляли методом равновесного диализа через полупроницаемую мембрану, диффузией в агаровый гель и использованием теста «Растворение». Антимикробную активность разработанных лекарственных форм и их микробиологическую чистоту определяли, соответственно, методом диффузии в агаровый гель и мембранной фильтрации (ГФ XII изд.). Статистическую обработку, полученных в ходе исследования данных, проводили с использованием t-критерия Стьюдента при доверительной вероятности 0,95 в соответствии с требованиями ГФ XI изд. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Исследования по разработке состава, технологии получения и показателей качества суппозиториев с флуконазолом При создании суппозиториев учитывали наиболее значимые факторы, влияющие на качественные характеристики и максимальное проявление фармакотерапевтической активности лекарственной формы. Одним из них является вид суппозиторной основы. В эксперименте использованы наиболее широко применяемые в промышленном производстве витепсол Н-15, комплексно-жировая основа (КЖО – сплав гидрожира, парафина, масла какао, эмульгатора Т-2 в соотношении 53,3:16:28:2,7, соответственно), полиэтиленоксидная (сплав ПЭО-400 и ПЭО-1500 в соотношении 2:8), ГХМ-5Т (сплав гидрогенизированного хлопкового масла с эмульгатором Т-2 в соотношении 95:5), бутирол (сплав гидрогенизированного жира, парафина, масла какао в соотношении 50:20:30). При выборе содержания флуконазола в суппозиториях (150 мг на одну единицу) ориентировались на дозы при его однократном пероральном назначении в капсулах и таблетках. Суппозитории готовили методом выливания, флуконазол вводили в основы по типу суспензии. Существенным показателем качества суппозиториев, содержащих нерастворимое ни в основе, ни в воде вещество, является степень его дисперсности. Субстанция флуконазола промышленного производства неоднородна и имеет размер частиц до 100 мкм и более. Перед введением в суппозиторные основы флуконазол измельчали в мельнице марки МЛ-1, а затем с одним из поверхностно-активных веществ (ПАВ) – твином-80 или бензалкония хлоридом (БАХ), взятых в общеизвестных концентрациях (2% и 0,02%, соответственно), а также при их совместном сочетании, условно названном «комплексный диспергатор». В последнем случае флуконазол измельчали вначале с БАХ, а затем – с твином-80. Выбор твина-80 обусловлен его широким применением как диспергатора и промоутера всасывания, а выбор БАХ – не только в качестве ПАВ, но и антисептика, поскольку в последнее время кандидозы рассматриваются как микст-инфекции и клиницисты наряду с противогрибковыми средствами назначают антибактериальные. БАХ в малых концентрациях обладает бактериостатическим действием в отношении многих грам-положительных и грам-отрицательных микроорганизмов, а также оказывает фунгицидное действие на грибы рода Сandida. Кроме того, БАХ использовали как консервант разрабатываемых лекарственных форм. Дисперсность флуконазола изучали с использованием микроскопа марки «Микмед-1» (объектив маркировки 10х0,2, измерительный окуляр К 15х). Установлено, что измельчение в мельнице позволило получить, в сравнении с исходной, более однородную субстанцию с размером частиц до 50 мкм (рис. 1). Дальнейшее измельчение с одним из ПАВ или их сочетанием привело к уменьшению размера частиц до 30 мкм, с преобладанием фракции до 10 мкм, при этом наилучшие результаты (86%) были достигнуты при совместном использовании БАХ и твина-80 (рис. 2). Не отмечено влияние основы и технологического процесса на дисперсность антимикотика при изготовлении модельных образцов суппозиториев.
На следующем этапе изучали влияние ПАВ и степени измельченности флуконазола на антимикробную активность суппозиториев методом диффузии в агар. Критерием оценки служили зоны ингибирования роста тест-штаммов микроорганизмов и их сравнение с контролем – водной суспензией флуконазола (табл. 1). Из представленных данных следует, что суппозитории флуконазола, не содержащие ПАВ, независимо от основы на которой они изготовлены, обладают достаточной активностью к специфическому тест-штамму C. albicans АТСС 885-653 и оказывают слабое антимикробное действие в отношении B. subtilis АТСС 6633, B. cereus АТСС 10702, St. aureus АТСС 6538 – Р, E. coli АТСС 25922, Ps. aeruginosa АТСС 9027. Измельчение флуконазола с твином-80 приводит к повышению биоцидной активности всех модельных образцов суппозиториев к C. albicans. В отношении других тест-штаммов достоверное увеличение зон ингибирования их роста отмечено только у суппозиториев на ПЭО-основе. Введение флуконазола в суппозитории диспергированием с БАХ обеспечивает более выраженный антибактериальный эффект, чем с твином-80. Следовательно, сочетание флуконазола и БАХ в суппозиториях оправданно. Однако рациональным является использование «комплексного диспергатора», увеличивающего степень измельчения флуконазола и антимикробное действие модельных образцов суппозиториев, о чем свидетельствует достоверное увеличение зон ингибирования роста не только С. albicans, но и других музейных культур микроорганизмов. Наилучшие результаты получены при исследовании суппозиториев, приготовленных на основах витепсол Н-15 и ПЭО. Таблица 1 Антибактериальная активность модельных образцов суппозиториев с флуконазолом (р<0,05; n=6)
Примечания: * – различия достоверны при р<0,05 по сравнению с суппозиториями флуконазола, не содержащими поверхностно-активные вещества. ** – различия достоверны при р<0,05 по сравнению с суппозиториями флуконазола, содержащими БАХ или твин-80. Исходя из полученных данных и используя биофармацевтический подход, методами диализа через полупроницаемую мембрану и теста «Растворение», изучали влияние основы и ПАВ (БАХ + твин-80) на процесс высвобождения флуконазола из суппозиториев. Проводили по шесть параллельных опытов. При проведении диализа в качестве полупроницаемой мембраны применяли целлофановую пленку МСАТ-200 (толщина 0,25 мм, размер пор 50 мкм), акцепторной среды – 0,1М раствор кислоты хлористоводородной, имеющий температуру (37±1)ºС. Установлено, что введение ПАВ в суппозитории флуконазола изменяет профиль его высвобождения из всех основ (рис. 3, 4). Однако более высокая скорость и полнота высвобождения субстанции (около 100%) отмечена из витепсола Н-15 и ПЭО, в то время, как из суппозиториев, приготовленных на этих же основах и не содержащих сочетание ПАВ, за время эксперимента в диализате обнаружено 36,6% и 76% флуконазола, соответственно.
Результаты теста «Растворение» (рис. 5, 6), полученные при соблюдении следующих условий: прибор «вращающаяся корзинка», объем среды растворения – 1000 мл, скорость вращения корзинки – 100 об/мин подтвердили, что последовательное диспергирование флуконазола с БАХ и твином-80 при получении суппозиториев на основах витепсол Н-15 и ПЭО значительно повышает скорость и полноту высвобождения из них активного ингредиента. Изменение динамики процесса особенно наглядно из суппозиториев, приготовленных на витепсоле Н-15. Содержание антимикотика в акцепторной среде увеличилось в 9 раз, в сравнении с суппозиториями, не содержащими ПАВ (30,5% против 103,7%).
Анализируя данные проведенных экспериментов сделаны выводы, что рациональными основами для изготовления суппозиториев являются витепсол Н-15 и ПЭО, в которые флуконазол целесообразно вводить диспергированием БАХ в сочетании с твином-80. Кроме того, использование «комплексного диспергатора» обеспечивает равномерность распределения лекарственной субстанции в суппозиторной массе и однородность ее дозирования в суппозиториях, о чем свидетельствуют рассчитанные относительные ошибки определения, представленные в табл. 2. Таблица 2 Влияние БАХ и твина-80 на однородность дозирования флуконазола в суппозиториях (n=10, P=95)
Таким образом, на основании результатов проведенных исследований разработаны следующие составы суппозиториев, технологическая схема получения которых представлена на рис. 7:
Рис. 7. Технологическая схема производства суппозиториев флуконазола методом выливания Примечание: ВР – стадии вспомогательных работ; ТП – стадии основного технологического процесса; УМО – стадии упаковки, маркировки. Согласно указанной технологической схеме, наработаны суппозитории и проведена валидация методики количественного определения флуконазола. Результаты представлены в табл. 3, из которых следует, что предложенная методика специфична и характеризуется корректной правильностью, линейностью и воспроизводимостью в диапазоне концентраций 80% – 120% от номинального содержания флуконазола в лекарственной форме, независимо от используемого вида основы. Таблица 3 Результаты валидации методики количественного определения флуконазола в суппозиториях
Примечание (здесь и в табл. 5): er – относительная погрешность; Δer – доверительный интервал относительной погрешности; Srср – среднее значение относительного стандартного отклонения; εср – относительный доверительный интервал среднего значения; r – коэффициент корреляции. Приготовленные методом выливания суппозитории на двух основах – торпедовидной формы, однородные, белого цвета, без механических включений, средней массой 1,5 г ± 5%, с размером частиц флуконазола не более 30 мкм. Установленные температура плавления (34,5-35,5)ºС и время полной деформации (12,5-13,5 мин) для суппозиториев на основе витепсол Н-15 и время растворения (9-11 мин) на ПЭО основе, соответствуют требованиям нормативной документации. Значение рН водной вытяжки суппозиториев на витепсоле Н-15 – 6,8-7,6, на ПЭО-основе – 5,0-5,6. Подлинность флуконазола подтверждается методами УФ-СФМ (при длине волны (261±1) нм) и ТСХ (значение Rf 0,62±0,05 в системе этилацетат, изопропиловый спирт, раствор аммиака концентрированный (8:7:3)). Содержание флуконазола в суппозиториях находится в пределах от 0,142 г до 0,158 г, отклонение по показателю «однородность дозирования» не превышает 15%. При использовании прибора «вращающаяся корзинка» (тест «Растворение») через 30 мин в акцепторной среде флуконазола определяется не менее 90% (Q) (критерий оценки – не менее 80% (Q)). По микробиологической чистоте лекарственная форма соответствует требованиям ГФ XII изд (категория 2). Несмотря на установленный спектр антибактериального действия суппозиториев, специфическую активность определяют по зонам ингибирования роста грибов рода Candida. В эксперименте в отношении музейной культуры C. aldicans АТСС 885-653 они составили 22-26 мм. Суппозитории (по три серии на каждой основе), упакованные в контурную ячейковую упаковку из полимерного материала, хранили в условиях холодильника при (4±1)°С. Через каждые 6 мес образцы отбирали на анализ и по перечисленным показателям оценивали качество. Установлена их стабильность на протяжении 24 мес (срок наблюдения). | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
± ε, %
