Системный подход к банкированию пуповинной крови для восстановительной медицины
Скачать 0.67 Mb.
|
Таблица 8. Клеточный состав ПК и концентрата (х 109/л)
Показано, что при проведении процедуры концентрации ПК, основанной на процессе седиментации эритроцитов под действием гидроксиэтилкрахмала, доля нейтрофилов не изменяется, доля лимфоцитов статистически значимо повышается (рис.3) за счет того, что доля моноцитов, эозинофилов и базофилов статистически значимо снижается (рис.4). Это, по-видимому, связано с большей потерей этих клеток при концентрации.  р = 0,0001 р = 0,7 Рисунок 3. Доля нейтрофилов и лимфоцитов в пуповинной крови и концентрате мононуклеарной фракции ПК.  р = 0,0001 Рисунок 4. Доля моноцитов, эозинофилов и базофилов в ПК и концентрате мононуклеарной фракции ПК. Абсолютное количество субпопуляций лимфоцитов (CD3+клетки, CD19+клетки, CD3+CD4+клетки, CD3+CD8+клетки, CD16+CD56+клетки, HLA-DR+клетки) также повышается в процессе процедуры концентрации, но статистически незначимо. Степень повышения повторяет динамику лимфоцитов, определенную при помощи автоматического счетчика клеток крови. Полученные данные позволили охарактеризовать состав лимфоцитов ПК и продемонстрировали отсутствие влияния процедуры концентрации ПК на количество и состав CD3+лимфоцитов в сочетании с достоверным увеличением после концентрации доли NK-клеток и CD33+CD13+клеток. Доля натуральных киллеров (NK) CD16+CD56+клеток среди ядросодержащих клеток пуповинной крови составила 5,97 ± 0,67% и статистически значимо увеличилась после процедуры концентрации – 8,54 ± 0,91% (р = 0,027). Такое соотношение связано с тем, что при проведении процедуры концентрации лейкоцитов ПК, происходит статистически незначительная потеря лейкоцитов вместе с седиментирующимися эритроцитами, за счет эозинофилов, базофилов и моноцитов и, следовательно, относительное количество NK-клеток и миелоидных предшественников возрастает. Количество CD3+лимфоцитов, опосредующих развитие РТПХ, в результате процедуры лейкоконцентрации практически не менялось и составило 17,9 ± 1,44% и 19,2 ± 1,4% от всех ядросодержащих клеток соответственно. Количество и соотношение субпопуляций CD3+лимфоцитов – CD3+CD4+клеток и CD3+CD8+клеток в процессе концентрации также не изменилось и составило до концентрации CD3+CD4+клетки – 12,62 ± 1,12%, CD3+CD8+клетки – 5,62 ± 0,53%; после концентрации CD3+CD4+клетки – 13,23 ± 1,12%, CD3+CD8+клетки – 5,52 ± 0,48% от всех ядросодержащих клеток. Относительное количество предшественников миелопоэза – D33+CD13+клеток составила 12,5 ± 0,76% и статистически значимо увеличилось 15,82 ± 0,81% (р=0,005) после процедуры выделения, что может быть связано с большей потерей гранулоцитов при проведении процедуры выделения. Доля активированных лимфоцитов в результате лейкконцентрации также не изменилась и составила 0,40 ± 0,08% до выделения и 0,38 ± 0,09% после выделения. Количество CD14+клеток не увеличилось и составило 8,65 ± 1,58% до выделения и 9,11 ± 1,76% после. Количество CD15+клеток имело тенденцию к снижению, по-видимому, вследствие большей потери при процедуре выделения по сравнению с остальными субпопуляциями лейкоцитов и составило 39,32 ± 3,45% до выделения и 35,23 ± 3,26% после. Полученные данные имеют важное практическое значение при проведении планирования технологического процесса, так как показано, что при проведении процедуры концентрации ПК, основанной на процессе седиментации эритроцитов под действием гидроксиэтилкрахмала, доля нейтрофилов не изменяется, доля лимфоцитов статистически значимо повышается за счет снижения доли моноцитов, эозинофилов и базофилов. Процедура лейкоконцентрации не влияет на количество CD3+клеток, в том числе CD3+CD4+клеток и CD3+CD8+клеток и активированных лимфоцитов – CD25+клеток. В результате процедуры лейкоконцентрации статистически значимо увеличилась доля CD19+клеток и натуральных киллеров (NK) CD16+CD56+клеток. Процедура лейкоконцентрации не влияет на содержание CD34+клеток CD133+клеток и субпопуляций. Таким образом, результаты работы позволили получить референтные значения показателей состава лейкоцитов ПК, которые рекомендуется использовать в качестве факторов определяющих показания и противопоказания к сбору ПК для безвозмездного донорства ГСК. При сравнении полученных результатов выявлено, что при аппаратном методе обработки пуповинной крови (МАВК) выделение лейкоцитов в целом меньше, чем при ручном (двойном центрифугировании) (72,4±0,45 – ручной; 70,28±0,51 – аппаратный; p=0,002). Однако выделение мононуклеаров и лимфоцитов значительно выше, чем при ручном методе (MNC: 70,11±0,49 – ручной; 77,94±0,53 – аппаратный; p<0,0001; лимфоциты: 71,7±0,54 – ручной; 80,73±0,58 – аппаратный; p<0,0001). Редукция же эритроцитов при аппаратном методе выделения значительно выше, чем при ручном (36,45±0,51 – ручной; 20,85±0,5 – аппаратный; p<0,0001). Оптимизация исследования HLA–фенотипа пуповинной и периферической крови у пациентов при различных заболеваниях Типирование пуповинной крови по HLA-системе имеет свои специфические особенности: быстрота обработки большого количества биоматериала при ограниченном количестве крови каждого образца и невозможности его повторного сбора. Поэтому использование чувствительных методов HLA-типирования, требующих для исследования минимального количества ДНК, является критическим фактором. Впервые в России была апробирована и успешно внедрена технология обратной дот-блот гибридизации с олигонуклеотидными зондами (SSO) в автоматическом режиме на процессоре Dynal autoRELI™ 48 mk, позволяющая проводить скрининговое HLA-типирование большого количества образцов. Одним из несомненных достоинств этой технологии является ее большая пропускная способность и возможность использования минимального количества исследуемого материала - около 40 мкл ДНК (концентрация 13 - 15 мкг/мкл). Весь рабочий процесс осуществляется за 2,5 часа. Однако, основным недостатком данного метода является возникновение двойных интерпретаций результатов типирования. Особенно это касается локусов HLA-B и HLA-DRB (около 13% случаев по каждому из них). По локусу HLA-A было получено около 6% случаев с неоднозначной интерпретацией результатов, по локусу HLA-Cw – 8,5% случаев, по HLA-DQB1- 1,5%. Для разрешения неоднозначной интерпретации результатов типирования этих образцов проводилось повторное типирование с применением метода ПЦР с аллель-специфическими праймерами (SSP), что позволило достичь 100% однозначности результатов. Для разрешения двойной интерпретации был использован метод типирования с помощью аллель-специфических праймеров (SSP). Интерпретация полученных данных осуществлялась с помощью таблиц, где определенная комбинация сигнальных полосок соответствовала определенной группе аллелей гена. В настоящее время в реестре неродственных доноров хранится 3964 образца ГСК, типированные по пяти локусам системы HLA-A, -B, -Cw, -DRB, -DQB1. Были выявлены 17 специфических групп аллелей локуса HLA-A, 32 специфичности локуса HLA-B, 14 специфичностей локуса HLA-Cw, 14 специфичностей гена HLA-DRB1 и 5 специфичностей гена DQB1. Частота тех или иных генов гистосовместимости среди доноров стволовых клеток во многом зависит от этнических признаков входящих в неё лиц. Анализ распределения HLA-специфичностей (специфических групп аллельных вариантов) у московской популяции определил, что наиболее часто встречаемыми по локусам класса I являются (в долях): HLA-A*02 (0,288), A*03 (0,134), A*01 (0,114), A*24 (0,096); HLA-B - B*07 (0,120), B*35 (0,0793), B*44 (0,101), B*18 (0,084), B*08 (0,067), B*13 (0,066); Cw*07 (0,257), Cw*12 (0,134), Cw*06 (0,130), Cw*04 (0,0128). По классу II c наибольшей частотой встречаются следующие группы аллелей гена DRB1 – *07 (0,143), *13 (0,139), *15 (0,133), *11 (0,130), *01 (0,110), *04 (0,110) и группы аллелей гена DQB1 – *03 (0,330), *06 (0,222). Наиболее редко встречающимися группами аллелей были выявлены следующие: A* 69 (0,0033), A*34 (0,00035), A*80 (0,00035), B*47 (0,0036), B* 45 (0,002), B*46 (0,002), B*53 (0,0017), B* 73 (0,0015), B*54 (0,0003) и B*78 (0,0003). Проведенные исследования и анализ литературных данных (Зарецкая Ю.М., 2008) свидетельствуют, что характер распределения генных частот HLA класса I и II в популяции московского региона в целом соответствуют таковому для европеоидов. Характер распределения частоты встречаемости генов HLA-системы у детей с ОЛЛ. Были обследованы 187 детей с ОЛЛ из различных регионов России. Для изучения характера распределения генов HLA-системы пациенты, больные ОЛЛ, были разделены в зависимости от их иммунологического варианта на 2 группы: на В-ОЛЛ и Т-ОЛЛ. Была исследована группа из 98 детей с В-ОЛЛ (57 мальчиков и 41 девочка) (средний возраст составил 8,2 лет ± 4,8). Особенности характера распределения генов гистосовместимости в этой группе больных по сравнению с контрольной группой здоровых детей представлены на рис. 5 и в таблице 9.  Рисунок 5. Частота встречаемости HLA-специфичностей у детей, больных В-ОЛЛ. Частота встречаемости генов HLA-системы была высокой в группе больных В-ОЛЛ по сравнению со здоровыми детьми по локусу HLA-A - A*32; по локусу HLA-B – B*15, B*50; В*47 по локусу HLA-C – Cw*04; Сw*16 по локусу HLA-DRB – DRB1*09 и DRB1*14. Для изучения факторов риска развития заболевания использовали метод случай-контроль. Если этот показатель превышал OR > 2, то он считался значимым (Зарецкая Ю.М., 1983). При разделении пациентов по полу были выявлены особенности распределения в частоте встречаемости HLA-специфичностей с этим заболеванием (рис. 6). В контрольной группе различий по полу выявлено не было.  Рисунок 6. Частота встречаемости HLA-специфичностей у мальчиков и девочек В-ОЛЛ. Таблица 9. Иммуногенетические факторы предрасположенности и устойчивости к развитию В - ОЛЛ у детей.
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 | Системный подход к анализу и самоанализу урок Системный подход к анализу и самоанализу урока как средство управления проектированием процесса обучения |  | Комплексная оценка качества криоконсервированных гемопоэтических... Охватывают весь комплекс по оценке качества криоконсервированных гск пк |
| Системный подход к проблеме обобщения передового инновационного педагогического... Ипм-5 Системный подход к проблеме обобщения передового инновационного педагогического опыта 11 | | Реферат на тему эссе на тему d. Дисциплина «Методика преподавания классического танца» Дисциплины: «Теория управления», «Исследование систем управления», «Теория организации», «Методология науки, системный подход и системный... |
| Конспект урока "Группы крови. Переливание крови. Донорство" (Тема... ... | | Конкурс на должность профессора кафедры восстановительной медицины,... Приоритетные направления реализации стратегических партнерств гбоу впо сибгму минздрава России. Докладчик – и о проректора по срип... |
| Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... В рамках информатики изучаются такие понятия, как система, системный подход, моделирование. Но эти и другие понятия превращаются... | | Программа по разработке нетрадиционных, энерго-информационных методов... Охватывает огромный материал и требует проведения глубоких физиологических и биохимических исследований, мы считает оправданным выделения... |
| Автор: Лебедева Ольга Дмитриевна Координаты ... | | Комплексный системный подход к своему здоровью Тема – Методические аспекты учета финансовых результатов в пассажирских автотранспортных организациях |
| Название урока Ознакомление с окружающим миром ... | | Системный подход в управлении научно-исследовательскими организациями Зам директора по увр моу «Кадетская школа-интернат» Спасского муниципального района рт |
| Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Методологический подход: системный, стратегический. Ведущие факторы развития: социогенные | | Конспект урока. Учитель Филаевская Н. В. Тема урока Графы ... |
| Записка Шерлоку Холмсу Предлагаемый урок-детектив, на мой взгляд,- один из способов придать работе с несколькими словарями увлекательность, а также целостность,... | | Конспект урока биологии в 8 классе Тема урока. Внутренняя среда организма.... Сформировать представление о составе внутренней среды организма, продолжить формирование знаний о составе крови, функциях клеток... |
