Методические разработки к практическим занятиям по иммунологии для студентов лечебного и педиатрического факультетов Махачкала 2013
Скачать 0.77 Mb.
|
| Тема: Серологические реакции с меткой антигена или антител (РИФ, ИФМ). Цель занятия:Ознакомить студентов с серологическими реакциями иммунофлюоресценции (РИФ) и иммуноферментного анализа (ИФА). Уметь поставить и произвести учет. Вопросы для обсуждения:
Самостоятельная работа студентов:
Методические указания к самостоятельной работе Реакции, в которых участвуют меченые антигены или антитела (иммунофлюоресценции, радиоиммунный и иммуноферментный методы) по своей чувствительности превосходят все серологические реакции. Реакция иммунофлюоресценцииКунса (РИФ)Иммунофлюоресценция – это метод, основанный на использовании специфичности и чувствительности иммунологической реакции. В отличие от других методов маркировки постановка пробы и точная локализация иммунной реакции на поверхности клетки или ткани происходит довольно быстро. Один из компонентов иммунной реакции, как правило антитело, метится флюоресцирующим красителем (маркировка, конъюгирование). После возбуждения флюоресцирующего агента положение антигена становится доступным непосредственному наблюдению вследствие развития флюоресценции. Предложенный в 1941г. Кунсом, этот метод после многочисленных усовершенствований прочно вошел в лабораторную практику. Данный метод относится кэкспресс – диагностике. Различают прямой и непрямой метод. При прямом иммунофлюоресцентном методе Кунса специфические флюоресцирующие антитела образуют комплексы с микробными антигенами, которые светятся при люминесцентной микроскопии препаратов. Недостатком прямого метода является необходимость приготовления широкого набора флюоресцирующих специфических сывороток против каждого изучаемого антигена. Непрямой метод предусматривает использование одной универсальной флюоресцирующей сыворотки – антиглобулиновой, содержащей антитела только против кроличьих глобулинов. Поскольку диагностические антисыворотки, полученные путем иммунизации кроликов, так же содержат кроличьи глобулины, они в качестве антигенов реагируют c флюоресцирующей антиглобулиновой сывороткой и, вместе с тем, в качестве антител соединяются со специфическими исследуемыми антигенами (микроорганизмов). При этом на образующемся комплексе (специфические антитела + исследуемый антиген) фиксируются флюоресцирующие антиглобулиновые антитела, вызывая его свечение при люминесцентной микроскопии. Этапы
Реакция энзим – меченых антител (РЭМА) или иммуноферментный анализ (ИФА). Английская аббревиатура «EZIZA» (enzrymelinkedimmunosorbentassoy). Иммуноферментный анализ является современным, высокочувствительным методом. Результаты реакции могут учитываться как визуально, так и инструментально. Принцип метода заключается в фиксации известного антигена или антитела на носителе с последующей обработкой его исследуемой сывороткой или исследуемым антигеном и выявлении комплекса антиген-антитело антивидовыми глобулинами, мечеными ферментом «щелочная фосфатаза» или «пероксидаза хрена». Для фиксации антигена или антитела используют полиэтиленовые пробирки или полистироловые пластинки. Сенсибилизацию лунок панелей производят антигеном или антителом при + 40С в течение 14-16 часов или при 370С в течение 30 мин. Схема постановки ИФА.
Контакт в течение 1 часа при 370С. Затем 3-х кратное отмывание буферным раствором.
Этапы постановки ИФА
Занятие № 12 Итоговое занятие 1-12. 1. Тестовый контроль. 2. Разбор типовых и ситуационных задач по серологической диагностике инфекционных болезней. Занятие № 13 Тема:Особенности иммунного ответа при различных микробных и паразитарных инфекциях. Цель занятия:Изучить факторы, способствующие развитию иммунного ответа при различных инфекционных процессах. Вопросы для обсуждения: системы. 2. Характеристика различных форм лимфоцитов. 3. Функции лимфоцитов. 4. Общая характеристика инфекционного процесса. 5. Возбудители, оказывающие патологическое действие на ткани инфицированного организма. 6. Неспецифический (врожденный) иммунитет. 7. Специфический иммунитет при инфекциях. Самостоятельная работа студентов: 1. Изучение поверхностной микрофлоры кожи: посев отпечатков кожи пальцев рук на МПА 2. Изучение микрофлоры полости рта: приготовление мазка из зубного налета и окраска по Граму. 3. Микроскопия и зарисовка демонстрационных препаратов. 4. Оформление и защита протокола. Методические указания к самостоятельной работе Макроорганизм имеет широкий спектр средств защиты своей целостности и поддержания гомеостаза. Однако для минимизации энергетических и пластических затрат макроорганизм для устранения конкретного антигена использует лишь наиболее эффективные механизмы и факторы защиты. Поэтому при воздействии различных по природе и свойствам антигенов иммунное реагирование макроорганизма имеет свои особенности. Иммунная реакция макроорганизма в ответ на бактериальную инфекцию в значительной степени определяется факторами патогенности микроба и в первую очередь его способностью к токсинообразованию. Различают иммунитет антибактериальный - против структурных компонентов бактериальной клетки и антитоксический - против белковых токсинов. Особенности иммунитета при бактериальных инфекциях. Основными факторами антибактериальной защиты являются антитела и фагоциты. Антитела эффективно инактивируют биологически активные молекулы бактериальной клетки (токсины, ферменты агрессии и др.), маркируют их, запускают антителозависимый бактериолиз и иммунный фагоцитоз. Фагоциты непосредственно осуществляют фагоцитоз, в том числе иммунный, антителозависимый бактериолиз и внеклеточный киллинг патогена при помощи ион-радикалов и ферментов. Важная роль в борьбе с грамположительными микробами принадлежит лизоциму, а с грамотрицательными - комплементу (альтернативный путь активации), кроме того, существенное значение имеют белки острой фазы (С-реактивный и маннозосвязывающий протеин). Ряд бактерий, относящихся к факультативным внутриклеточным паразитам, отличается повышенной устойчивостью к действию комплемента, лизоцима и фагоцитов (незавершенный фагоцитоз). К их числу относятся микобактерии, йерсинии, бруцеллы, сальмонеллы и некоторые другие. В такой ситуации макроорганизмвынужден переключать нагрузку на клеточное звено иммунитета, что ведет к аллергизации организма по механизму ГЗТ. Особое значение приобретают активированные макрофаги и естественные киллеры, осуществляющие АЗКЦТ, а также γδТ-лимфоциты. Напряженность специфического антибактериального иммунитета оценивают в серологических тестах по титру или динамике титра специфических антител, а также по состоянию клеточной иммунореактивности (например, по результатам кожно-аллергической пробы). Особенности иммунитета при протозойных инвазиях. Паразитарная инвазия сопровождается формированием в макроорганизме гуморального и клеточного иммунитета. В крови определяются специфические антитела классов M и G, которые чаще всего не обладают протективным свойством. Однако они активируют АЗКЦТ с участием макрофагов, а в случае внутриклеточного паразитирования - естественных киллеров и T лимфоцитов. Паразитарные инвазии соспровождаютсяаллергизацией макроорганизма по механизму ГЗТ. Характер противопаразитарного иммунитета определяется биологическими особенностями паразита. Многие паразиты обладают высокой антигенной изменчивостью, что позволяет им избегать действия факторов иммунитета. Например, каждой стадии развития малярийного плазмодия соответствуют свои специфические антигены. Напряженность противопаразитарного иммунитета оценивается в серологических тестах по титру специфических антител и в кожно-аллергических пробах с протозойным антигеном. Занятие № 14 Тема:Понятие об иммунологической толерантности. Трансплантационный иммунитет. Цель занятия:Изучить механизмы иммунологической толерантности. Вопросы для обсуждения:
Самостоятельная работа студентов:
Методические указания к самостоятельной работе Новейшие достижения в области трансплантологии позволяют все шире использовать трансплантацию органов и тканей для лечения разных заболеваний. В последнее время наряду с трансплантацией костного мозга, почки, печени и сердца стали применять трансплантацию тонкой кишки, доли и сегментов печени, легкого, костей, поджелудочной железы и клеток панкреатических островков, а также других органов и тканей. Для трансплантации используются как трупные, так и полученные от живых доноров органы и ткани. Чаще донорами служат родственники реципиента. После трансплантации в организме реципиента развивается иммунный ответ на многочисленные антигены трансплантата. Исключение составляют случаи, когда донор и реципиент — однояйцовые близнецы. Наиболее изученные антигены человека, с которым связан иммунный ответ на трансплантат, — это антигены HLA (иногда их называют трансплантационными антигенами). Механизмы трансплантационного иммунитета. Иммунный ответ на трансплантат обусловлен в первую очередь распознаванием антигенов HLA донора лимфоцитами реципиента. Это вызывает активацию T-хелперов, которые, в свою очередь, стимулируют пролиферацию B-лимфоцитов и цитотоксических T-лимфоцитов. Антитела к чужеродным антигенам HLA могут присутствовать в сыворотке реципиента и до трансплантации. Их выявление свидетельствует о предшествующей иммунизации антигенами HLA. Она возможна при переливании цельной крови и во время беременности. Выявление в сыворотке реципиента антител к антигенам HLA донора свидетельствует о высоком риске сверхострого отторжения трансплантата. Оно обусловлено образованием комплексов, состоящих из антигенов трансплантата и антител реципиента, которые активируют свертывание крови и приводят к тромбозу сосудов трансплантата. Поскольку отторжение трансплантата вызывают чужеродные антигены HLA, лучший способ его профилактики — подбор донора, совместимого с реципиентом по антигенам HLA. Если реципиент уже иммунизирован антигенами HLA, донор должен быть полностью совместим с реципиентом. Занятие № 15 |
Похожие:
 | Методические рекомендации для подготовки к практическим занятиям... Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования |  | Методические разработки к практическим занятиям и вопросы самоподготовки... Методические разработки к практическим занятиям и вопросы самоподготовки для студентов по общей микробиологии стоматологического... |
| Учебно-методическое пособие по фармакологии для студентов III курса... Методическое пособие предназначено для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов для использования... | | Конспект Компьютерный вирус Методические разработки к практическим занятиям и вопросы самоподготовки для студентов по общей микробиологии стоматологического... |
| Тема: «Компьютерные вирусы и антивирусные программы». Цели урока Методические разработки к практическим занятиям и вопросы самоподготовки для студентов по общей микробиологии стоматологического... | | Р. Кочюнас основы психологического консультирования Методическое пособие предназначено для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов для использования... |
| Методические разработки для самостоятельной подготовки студентов... Практические занятия по разделу «Общая рецептура» проводятся по методическому пособию, разработанному на кафедре. Последующие практические... | | Методические разработки к практическим занятиям для студентов и ассистентов... Методические разработки к практическим занятиям для студентов и ассистентов (хронометраж занятия) |
| Министерство здравоохранения и социального развития российской федерации... Методическое пособие предназначено для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов для использования... | | Методические рекомендации (для студентов 5 и 6 курсов лечебного факультета) Махачкала 2009 А. Т. Джабраилова-к м н., ассистент кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета дгма |
| Методическая разработка для проведения семинара по учебной дисциплине... Методическая разработка для проведения семинара по учебной дисциплине “Медицина катастроф” для студентов 4 курса стоматологического... | | Методические указания к практическим занятиям для студентов медицинских факультетов (модуль №1) Оперативная хирургия и топографическая анатомия головы, шеи, груди, переднебоковой стенки живота и брюшной полости |
| Бально-рейтинговая система оценки знаний студентов лечебного и педиатрического... | | В. Вопросы для самоподготовки: а Назначение микробиологических лабораторий,... Для студентов лечебного и педиатрического факультетов по курсу общей микробиологии |
| В. Вопросы для самоподготовки: а Назначение микробиологических лабораторий,... Для студентов лечебного и педиатрического факультетов по курсу общей микробиологии | | В. Вопросы для самоподготовки: а Назначение микробиологических лабораторий,... Для студентов лечебного и педиатрического факультетов по курсу общей микробиологии |
