«фотодинамическая терапия в лечении перитонита» (Экспериментальное исследование)

3.2.3. Оценка гистологической картины животных с острым экспериментальным перитонитом при различных методах лечения При гистологическом исследовании париетальной брюшины крыс с ОЭП на момент оперативного лечения имеется картина фибринозно-гнойного перитонита с выраженной нейтрофильной инфильтрацией, отеком и полнокровием стромы (рис.11). Через сутки после проведения сеанса ФДТ гистологическая картина брюшины характеризуется значительным уменьшением интенсивности экссудативного воспаления, активацией клеточных элементов системы мононуклеарных фагоцитов (макрофагов) с сохранением венозного полнокровия (рис.12). Ни в одном случаи признаков термического повреждения брюшины не отмечалось. Спустя третьи суток после проведения ФДТ отмечается значительное сниженения интенсивности дисциркуляторных изменений в виде венозного полнокровия и отека стромы (рис.13), нейтрофильная инфильтрция отсутствует, сохраняется активность клеточных элементов макрофагального ряда, отмечается увеличение количества тучных клеток. Рисунок 11. Фибринозно-гнойный перитонит с выраженной нейтрофильной инфильтрацией, отеком и полнокровием стромы. Окр. гематоксилом и эозином. Ув.Х 100. Рисунок 12. Брюшина через 1 сут. после проведения ФДТ. Значительное уменьшение интенсивности нейтрофильной инфильтрации, макрофагов с сохранением венозного полнокровия. Окр. гематоксилином и эозином. Ув. Х 120 Рисунок 13. Брюшина через 3 сут. после проведения ФДТ. Венозное полнокровие, активация клеточных элементов макрофагального ряда, отсутствие нейтрофильной инфильтрацыии, увеличение количества тучных клеток. Окр. гематоксилином и эозином, Ув.Х 180. Рисунок 14. Брюшина через 5 сут. после проведения ФДТ. Очаговая метахромазия межуточного вещества. Дегрануляция тучных клеток. Окр. толуидиновым синим. Ув. Х 180. На пятые сутки в строме выявляется очаговая метахромазия межуточного вещества, свидетельствующая об активном синтезе гликозаминогликанов (рис. 14). Полное восстановление гистологической структуры брюшины происходло к седьмым суткам после проведения санации брюшной полости методом ФДТ( рис.15). Рисунок 15. Брюшина через 7 сут. после проведения ФДТ. Отсутствие признаков воспаления,неравномерное венозное полнокровие. Окр. гематоксилином и эозином. Ув. Х 100. Рисунок 16. Контрольная группа. Гнойный перитонит. 3-и сутки. Выраженная диффузная нейтрофильная инфильтрация, венозное полнокровие и отек стромы. Окр. гематоксилином и эозином. Ув. Х100. Рисунок 17. Контрольная группа. Брюшина через 5 сут. Венозное полнокровие, отек брюшины, уменьшением интенсивности нейтрофильнай инфильтрации. Окр. гематоксилином и эозином. Ув. Х 120. Рисунок 18. Контрольная группа. Брюшина через 7 сут. Очаговое венозное полнокровие, продолжающееся уменьшение интенсивности нейтрофильнай инфильтрации стромы. Окр. гематоксилином и эозином. Ув. Х 80. В контрольной группе при использовании традиционного метода санации брюшной полости в течение первых трех суток сохраняется гистологическая картина фибринозно-гнойного разлитого перитонита с незначительным снижением нейтрофильной инфильтрации, отеком и полнокровием стромы (рис.16). На пятые сутки при гистологическом исследованиии выявляется уменьшение воспаления с сохранением отека и венозного полнокровия стромы висцеральной и париетальной брюшины, уменьшением интесивности нейтрофильной инфильтрации( рис.17). На седьмые сутки после проведения санации брюшной полости 0,02% раствором хлоргексидина сохраняются признаки воспаления с тенденцией к уменьшению интенсивности нейтрофильной инфильтрации, отека и полнокровия стромы (рис.18). Таким образом, морфологические исследования наглядно подтверждают различия в результатах интраоперационной санации брюшной полости и лечения экспериментального калового перитонита у крыс основной и контрольной группы. Гистологическая картина брюшной полости у крыс основной группы после проведения санации брюшной методом ФДТ на всех этапах исследования была качественно лучше, чем у представителей контрольной группы при операционной санации брюшной полости 0,02% раствором хлоргексидина. 3.3. Оценка антибактериальной свойств фотодинамической терапии в лечении животных с острым экспериментальным перитонитом Клиническая картина перитонита моделированного с помощью монокультуры E. coli была менее выраженная по сравнению с животными, где перитонит был вызван введением в брюшную полость каловой взвеси. При оперативном вмешательстве в брюшной полости отмечался серозный выпот объемом от 2 до 5 мл. Послеоперационный период протекал более гладко, животные в основной группе активизировались на 2 сутки, в контрольной группе на 3 сутки. В обеих группах уже на 4 сутки животные не отличались от здоровых особей. На момент проведения оперативного вмешательства у животных с признаками перитонита содержание монокультуры E. coli в одном миллилитре составляло 3,0х108±1,0х108 КОЕ/мл. Таблица 12 Влияние различных видов санации брюшной полости на уровень микробной обсемененности брюшной полости ( КОЕ/мл) Группа Сроки определении показателя от начала лечения ОЭП (сутки) 1-е сутки 3-е сутки 5-е сутки 7-е сутки Основная 7,3х102±3,4х101 1,4х101±1.1х101* - - Контрольная 8,0х104±5,1х103 6,1х103±3,8х102 3,5х102±1,9х101 - * достоверность (р<0,05) по сравнению с контрольной группой После проведения санации брюшной полости в обеих группах отмечалось выраженное снижение содержания микробных тел в одном миллилитре экссудата (табл.12). В основной группе санацию брюшной полости проводили методом фотодинамической терапии и уже на первые сутки количество микробных тел снизилось до 7,3х102 КОЕ/мл. К 3 суткам обсемененность брюшной полости составляла 1,4х101 КОЕ/мл с достоверностью (Р<0,05). При изучения смывов брюшной полости на 5 и 7 сутки патогенной микрофлоры не обнаружено. При стандартной санации брюшной полости 0,02% раствором хлоргексидина отмечалось менее активное снижение бактериальной обсемененности экссудата. К первым суткам после обработки брюшной полости количество микробных тел в 1 мл экссудата составляло 8,0х104 КОЕ/мл. Через 3 суток - 6,1х103 КОЕ/мл, а через 5 суток от начала перитонита составляло 3,5х102 КОЕ/мл. Только к 7 суткам брюшная полость стала стерильной. Полученные результаты свидетельствовали о высокой стерилизующей способноси метода ФДТ при остром экспериментальном перитоните, вызванном монокультурой кишечной палочки, по сравнению с традиционными методами лечения. Таким образом, на основании проведенных исследований можно сделать заключение о безопасности и высокой эффективности применения санации брюшной полости с применением метода ФДТ в лечении распространенного перитонита. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Несмотря на использование широкого арсенала высокотехнологических методов диагностики, появление новых мощных антибиотиков, интенсивную послеоперационную терапию, распространенность острых перитонитов остается высокой, не имея тенденции к снижению [Ахтамов Ж.А. и соавт., 2005; Бондарев Р.В. и соавт., 2008; Гельфанд Б.Р. и соавт., 2000; Гостищев В.К. и соавт., 2002; Карабаев Х.К. и соавт., 2005; Савельев В.С. и соавт., 2010; Федоров В.Д. и соавт., 2000]. Одним из составных и наиболее важных элементов комплексного лечения распространенного перитонита является устранение причины развития перитонита и эффективная санация брюшной полости. Установлено, что успешный результат лечения разлитого гнойного перитонита лишь на 20% зависит от эффективности антибактериальной терапии и на 80% от хирургической тактики с адекватной санацией брюшной полости [Савельев В.С. и соавт., 2006; Шуркалин Б.К., и соавт., 2003]. Предложенные методики интраоперационной санации брюшной полости не всегда позволяют полностью удалить патогенную микрофлору, из-за технических сложностей вызванных деструктивным процессом или анатомическими особенностями. Некоторые методы трудоемки и затратны. Поэтому дискуссия о способах послеоперационной санации брюшной полости продолжается до сих пор, и направлена на поиск более простых и эффективных методов санации брюшной полости. В последние десятилетия во многие разделы клинической медицины внедряются лазерные технологии Одним из перспективным методов в наше время является фотодинамическая терапия, успешно применяемая в лечении онкологических заболеваний, и более позднее применение данной методики в лечении воспалительных процессов разной этиологии [Странадко Е.Ф. и соавт., 2010; Толстых П.И., и соавт., 2001; Цыб А.Ф . и соавт., 2009; Dougherty T.J. et al., 1998; Henderson B.W. et al., 1992; Muschter R. et al., 2003]. Одним из преимуществ метода ФДТ является бактерицидное действие локального характера [Костюченко К.В., 2003; Лихачева Е.В. и соавт., 2007]. Вышеуказанное позволяет, с нашей точки зрения изучить возможность применения метода ФДТ для санации брюшины в лечении распространенного перитонита в эксперименте, а так же изучить его антибактериальные свойства и воздействие на синдром эндогенной интоксикации при экспериментальном перитоните. В работе были использованы 189 крыс-самцов линии Wistar, массой тела 200-250 г. Для создания модели острого распространенного калового перитонита нами применена модифицированная методика с использованием профильтрованной 10 % каловой взвеси в дозе 0,5 мл на 100 г. После введения каловой взвеси в брюшную полость подопытным крысам, у животных на 3 сутки развивалась клиническая картина острого перитонита, выражающаяся в вялости и малоподвижности животных, вздутии живота, отказе от пищи и отсутствии стула. На 3 сутки животных во всех группах на фоне картины разлитого перитонита подвергались оперативному вмешательству в условиях общей внутривенной анестезии (тиопентал-натрия: 5-7мг, 2 % р-ра на 100 г массы тела). Животным проводили лапаротомию и санацию брюшной полости. До операции в опытных группах животным внутривенно вводили фотосенсибилизатор «Фотодитазин» в дозе 0,8 мг/кг, до оперативного вмешательства. В качестве фотосенсибилизатора мы применяли препарат «Фотодитазин» – производное хлорина Е-6 (производства фирмы «Вета Гранд», Россия). В качестве источника света для проведения сеанса ФДТ был использован лазер «АТКУС-2» (Санкт-Петербург, Россия) с выходной мощностью от 1 до 2 Вт длиной волны 660±0,03 нм, в непрерывном режиме красного оптического диапазона с плотность энергии от 20 до 25 Дж/см2. Исследование включало три этапа: Первым этапом работы было изучение накопления фотосенсибилизатора «Фотодитазина» в брюшине 64 крыс. Все животные были разделены на 8 групп, из которых две были контрольными, а шесть основными. Каждая группа содержала по восемь особей: Первые 6 (основных) групп представлены крысами с распространенным серозно-фибринозным перитонитом, которым вводили фотосенсибилизатор. Эти группы различались по моменту проведения спектрографии: на 30, 60, 90, 120, 150 и 180 мин от момента введения фотосенсибилизатора (т.е. различались по времени распределения и накопления препарата в тканях). 7 контрольную группу составляли крысы, у которых на фоне моделированного распространенного перитонита, фотосенсибилизатор не был введен. В 8 контрольную группу вошли интактные крысы без моделирования перитонита, у которых определялось накопление фотосенсибилизатора в здоровых тканях. Изучение накопления «Фотодитазина» в брюшине проводили с помощью многоканального оптического волоконного спектроанализатора (ЛЭСА-01-Биоспек, Россия), с определением интенсивности флуоресценции по 12 точкам. Оценивали соотношение интенсивности флюоресценции лазерной линии (интенсивность излучения, диффузно отраженного от тканей). Таким образом, была проведена работа по изучению накопления фотосенсибилизатора «Фотодитазина» в интактной брюшине ,в париетальной брюшине при наличии острого калового перитонита. Оценены результаты ФДТ. Во время операции (лапаротомии) макроскопический вид брюшины у крыс 7 контрольной группы и всех основных групп соответствовал картине острого гнойного распространенного перитонита, выражавшейся в наличии в брюшной полости воспалительного экссудата, отложении фибрина на париетальной и висцеральной брюшине, вздутии петель кишечника и выраженном инъецировании сосудов париетальной брюшины. После проводилась флуоресцентная спектрография и санация брюшной полости стерильным физиологическим раствором до удаления фибрина из брюшной полости. После завершения санации промывную жидкость эвакуировали из брюшной полости электроотсосом, проводилось облучение брюшины методом ФДТ, исключающим термическое повреждение тканей. Через 5 мин выполнялась повторная флуоресцентная спектрография. Брюшную стенку зашивали через все слои, животное маркировали и помещали в стандартные условия вивария. Второй этап исследования включает в себя изучение эффективности лечения острого распространенного перитонита на 65 крысах, которые входили в основную и контрольную группу. Основная группа состояла из 43 крыс с санацией брюшной полости произведенной методом ФДТ. В контрольную группу входило 22 крысы санацию брюшины которым проводили наиболее распространенными в клинической практике способом – с промыванием брюшной полости 0,02% раствором хлоргексидина до «чистых» вод. В послеоперационный период животным обеих групп проводили антибактериальную терапию: внутримышечные инъекции гентамицина из расчета 2 мг/кг массы. Эффективность применения ФДТ при лечении острого распространенного перитонита оценивали по общему состоянию животных, клиническим проявлениям процесса и количеству летальных случаев обеих групп. Оценивали динамику изменения клинических и биохимических показателей крови животных. Проводили микробиологические исследования воспалительного экссудата из брюшной полости и морфологические исследования париетальной брюшины Третьим этапом выполненной работы было изучение антибактериальных свойств ФДТ при перитоните, при котором актуальное значение имеет определение числа КОЕ микроорганизмов в послеоперационном период. Данный фрагмент исследований был осуществлен на 60 крысах. Для более удобного подсчета микроорганизмов в экссудате, перитонит моделировали внутрибрюшинным введением монокультуры E. Coli (Штамп 25922) в концентрации 108-109 микробных тел в 1 мл суспензии из расcчета 0,01 мл заражающей дозы на 1 г массы животного. Для оценки результатов животных выводили из эксперимента передозировкой анестетика (тиопентал-натрия) на 1, 3, 5 и 7 сутки после оперативного вмешательства. Основная группа состояла из 36 крыс с санацией брюшной полости методом ФДТ, контрольная группа из 24 крыс с санацией брюшной полости 0,02% раствором хлоргексидина. При изучении накопления фотосенсибилизатора «Фотодитазина» в обследованных нами группах животных были получены различные результаты. В контрольной группе (интактные крысы) зарегистрированные результаты демонстрируют колебания флуоресценции в пределах 0-10±5 Ед.ф., что отражает отсутствие признаков накопления фотосенсибилизатора в брюшине здоровых крыс. Результаты флуоресцентно-спектрального исследования, полученные у крыс контрольной группы с экспериментальным каловым перитонитом, которым фотосенсибилизатор в организм не вводили, данные флуоресценции в пределах 400 ±50 Ед.ф., отражают истинный спектр флуоресценции бактерий. Анализ полученных нами спектров флуоресценции по данным шести основным группам свидетельствует о равномерном накоплении фотодитазина в клетках воспаленной брюшины. При этом, максимальный пик накопления приходится на временной интервал 120 мин (3000±155. Ед.ф.) и 150 мин (3200±150 Ед.ф.) при умеренным снижении спектра в последующие часы. Таким образом, результаты спектрографии свидетельствуют о том, что оптимально эффективный момент для оперативного лечения и лазерного воздействия на брюшину при остром распространенном перитоните у экспериментальных животных развивается через 2-2,5 ч, после введения фотосенсибилизатора. После определения времени максимального накопления фотосенсибилизатора, мы производили облучение брюшины крысы лазерным излучением длиной волны 660±0,03 нм, в непрерывном режиме с выходной мощностью 2 Вт (плотностью энергии 20 до 25 Дж/см2). Повторную флуоресцентную спектрографию проводили через 5 мин после облучения. По результатам исследования, можно утверждать, что интенсивность флуоресценции в воспаленной париетальной брюшине составляет 3200±150 Ед.ф., а лазерное облучения брюшины приводит к снижению этого показателя более чем в 4 раза, до уровней 750±70 Ед.ф. Таким образом, в результате проведенных исследований методом флуоресцентной спектроскопии нами было выявлено, что после внутривенного введения крысам «Фотодитазина» в дозе 0.8 мг/кг, время, требуемое для максимального накопления фотосенсибилизатора в брюшине является промежуток в 2-2,5 часа. После проведения лазерного воздействия, интенсивность флуоресценции снижается на 76.6 %, что свидетельствует о эффективности проведения ФДТ и снижения концентрации препаратов в тканях при экспериментальном разлитом перитоните. При оценки эффективности применения фотодинамической терапии в лечении распространенного перитонита в сравнение с традиционными методами лечения отмечаются следующие клинико-морфологические изменения. Через сутки после операции в основной группе у крыс сохранялись признаки пареза желудочно-кишечного тракта, воспаление париетальной и висцеральной брюшины. В брюшной полости имелся мутный экссудат с желтоватым окрашиванием, без запаха. Объем его составил до 1 мл у 4-ти из 6 животных, а у остальных – 2-3 мл. Ни в одном случае не было обнаружено признаков термического повреждения брюшины. На третьи сутки после оперативного вмешательства, пареза мы не наблюдали, при этом мы отмечали сохранение равномерной слабовыраженной гиперемии брюшины с появлением обычного блеска последней. Объем экссудата (прозрачного вида) составил 0,5 мл у двух из шести животных, у остальных четырех животных менее 0,5 мл. Спаек между петлями кишки и брюшины как и признаков термического поражения брюшины не наблюдали. Через пять суток после операции парез разрешался, исчезала гиперемия брюшины. Последняя приобретала гладкий, блестящий вид. В брюшной полости имелись единичные рыхлые спайки, выпота отмечено не было. Аналогичную картину мы наблюдали и на седьмые сутки после проведения санации методом ФДТ, которая макроскопически не отличалась от картины брюшины у здоровых животных. В контрольной группе у животных с санацией брюшной полости 0,02 % раствором хлоргексидина, изменения в брюшной полости были существенны, прежде всего, по объему и характеру экссудата. Динамики в объеме экссудата не было отмечено, он составлял 1-3 мл на протяжении всех семи суток послеоперационного периода и лишь к исходу седьмых суток экссудат становился прозрачным. У животных основной группы функция кишечника восстанавливалась к началу вторых послеоперационных суток , а через 3-4 суток после мер оперативной санации поведение животных не отличалось от здоровых животных. В контрольной группе крысы оставались менее активными, слабо реагировали на внешние раздражители, тянулись в основном к поильнику. Функция кишечника у них восстанавливалась на 4-5 сутки после операции, но даже в эти сроки крысы были вялыми и малоподвижными. Летальность в основной группе составила 9,5% (4 крысы) достоверностью (р˂0,05), из которых две скончались в течение первых 24 часов, и две в последующие 48 ч вследствие продолжающегося перитонита и нарастающей интоксикации. В контрольной группе летальность составила 27,3% (6 крыс) в течение первых 24 часов при явлениях продолжающегося перитонита. Данный результат доказывает более тяжелое течение перитонита в послеоперационном периоде в сравнение с традиционным методом санации. При проведении лабораторных исследований были получены следующие результаты. Прежде всего, было отмечено, что при проведении санации брюшной полости методом ФДТ достоверно более выраженными были признаки купирования синдрома эндогенной интоксикации в сравнении с контрольной группой животных, где санацию производили 0,02% раствором хлоргексидина. Так, уровень лейкоцитов у крыс основной группы был ниже, чем у крыс контрольной группы к концу первых суток на 17,1% с достоверностью (р˂0,05). На пятые сутки послеоперационного периода разница содержания лейкоцитов в периферической крови у крыс основной группы была в пределах нормы, а разница между показателями основной и контрольной групп возросла до 21,48% с достоверностью (р˂0,05). Использование ФДТ позволило быстро купировать воспалительные явления, перевести раневой процесс из альтеративно-экссудативной фазы в репаративную, что нашло отражение и в динамике показателей ЛИИ. В первые сутки после проведения оперативного вмешательства в основной группе наметилась тенденция к снижению показателей ЛИИ на 30,91% в сравнение с предоперационным значением, и на 13,87% относительно контрольной группы с достоверностью (р˂0,05). К седьмым суткам показатель ЛИИ был в пределах физиологических величин, а в контрольной обмечалось двукратное превышение контрольных показателей с достоверностью (р˂0,05). Биохимические показатели крови у обеих групп подопытных животных при развитии острого разлитого перитонита демонстрировали факт снижения содержания общего белка сохраняющегося на протяжении всего периода исследований. В первые сутки наблюдения у подопытных крыс основной и контрольной групп существенного различия в уровне содержания белка плазмы крови не было. Однако, наиболее выраженную тенденцию к повышению данного показателя мы обнаружили у крыс основной группы к седьмым суткам, когда его уровень повысился на 11,75%, по сравнению с контрольной группой с достоверность (р˂0,05). Содержание мочевины до момента оперативной санации превышало норму на 78,5 %, к концу первых суток после операции, в основной группе мы фиксировали тенденцию к снижению показателя. В контрольной группе содержание мочевины на первые сутки после санации увеличилась на 21,64% в сравнение с основной группой. В последующем концентрация мочевины в контрольной группе превышала данные по основной группе к третьим суткам на 17,37 %, к пятым суткам на 7,83 %. В основной группе аналогичные показатели были равны, соответственно, 14,63 % (р˂0,05) и 4,78 %. К концу седьмых суток уровень этого показателя у крыс соответствовал норме как в контрольной, так и в основной группе с достоверностью (р˂0,05). Показатели креатинина в плазме крови до санации брюшной полости превышали норму на 54,23 %. К концу первых суток мы отмечали тенденцию к снижению уровня креатинина у крыс обоих групп, причем в контрольной группе эта тенденция была более выражена на 9,8 % по сравнению с данными основной группы. К третьим и пятым суткам наблюдения, наоборот, более выраженная тенденция к снижению уровня креатинина была отмечена у крыс в основной группе по сравнению с контрольной группой. В основной группе показатели содержание креатинина плазмы уже к пятым суткам были в пределах нормы. Показатель АсАТ на начало опыта превышал норму в 2,1 раза. К концу первых суток было отмечено, что в контрольной группе имелось превышение активности данного фермента по сравнению с основной группой на 34,12 %. К пятым суткам превышение фермента в контрольной группе превышала норму на 19,63%, с достоверностью (р˂0,05). В обеих группах активность данного фермента нормализовалась лишь к седьмым суткам послеоперационного периода. Превышение АлАТ на начало опыта составляла 83,9 %. На протяжении всего периода наблюдения мы отметили более выраженное снижение активности данного фермента у крыс основной группы, по сравнению с контрольной группой. К концу первых суток после санации активность АлАТ в контрольной группе была повышена на 54,4 %, на пятые сутки - на 11,83 %, В основной группе данный показатель превышал норму в исследуемые интервалы времени, соответственно, на 24,05; 3,12%, с достоверностью (р˂0,05). К седьмым суткам концентрация АлАТ у крыс в обеих группах возвращались к норме. До проведения санации при гистологическом исследовании имеет место картина фибринозно-гнойного перитонита с выраженной нейтрофильной инфильтрацией, отеком и полнокровием стромы. После проведения ФДТ наблюдалось значительное уменьшение интенсивности экссудативного воспаления, активация клеточных элементов системы мононуклеарных фагоцитов с сохранением венозного полнокровия. Через пять суток после ФДТ интенсивность дисциркуляторных изменений в виде венозного полнокровия и отека стромы значительно снижается, отсутствует нейтрофильная инфильтрция, а активность клеточных элементов макрофагального ряда сохраняется, на седьмые сутки признаков воспаления не отмечается, брюшина соотвествует здоровой. При традиционном методе санации на седьмые сутки сохраняются признаки воспаления с тенденцией к уменьшению интенсивности нейтрофильной инфильтрации, отека и полнокровия стромы. Таким образом, изучение динамики клинико-морфологических изменений у животных с распространенным перитонитом позволяет заявить, что использование метода ФДТ для санации брюшной полости способствует активному купированию воспалительного процесса и острой полиорганной недостаточности. При исследовании антибактериальных свойств фотодинамической терапии отмечались следующие данные: на первые сутки после санации брюшины методом ФДТ, у выведенных из эксперимента животных число микробных тел значительно снижалось и составляло 102 в 1 мл экссудата; через трое суток после оперативного пособия в брюшной полости отмечалось незначительное содержание патогенной флоры. В контрольной группе животных с острым распространенным перитонитом, у которых санацию брюшины проводили 0,02 % раствором хлоргексидина, концентрация микробных тел кишечной палочки в 1 мл экссудата составила: через 24 часа после операции -104; через 72 часа - 103; через 5 суток – 102 микробных тел в 1 мл экссудата. К седьмым послеоперационным суткам брюшная полость становилась стерильной. Полученные результаты доказывают высокую стерилизующую способность метода ФДТ при остром экспериментальном перитоните вызванный монокультурой кишечной палочки. Данные экспериментальных исследований по изучению эффективности применения ФДТ при остром экспериментальном перитоните свидетельствуют о том, что максимальное время, требуемое для накопления «Фотодитазина» в воспаленной брюшине составляет 2-2,5 часа. По результатом спектрографии после лазерного воздействия интенсивность флуоресценции снижается на 76,6 %, что свидетельствует об активно протекающей фотодинамической реакции и снижении концентрации препарата в париетальной брюшине при остром распространенном перитоните. Анализ лабораторных, клинико-морфологических, бактериологических исследований проведенных на крысах после санации брюшной полости методом фотодинамической терапии на всех этапах исследования был результативным: о чем свидетельствует факт активного купирования воспалительного процесса в брюшной полости; синдрома полиорганной недостаточности; уменьшение обсемененности брюшной полости патогенной флорой, что доказывает снижении летальности в основной группе экспериментальных животных с 27,3 % до 9,5 %. Новый разработанный и примененный нами способ интраоперационной санации брюшной полости при экспериментальном распространенном перитоните, представил с нашей точки зрения убедительные доказательства преимуществ лазерной «стерилизации» методом ФДТ. При комбинированном подходе к решению проблемы лечения перитонита, обеспечиваются условия оптимизирующие результаты лечения экспериментальных животных в случае привлечения нефармакологических способов потенцирования. ВЫВОДЫ 1. Время необходимое для максимального накопления «Фотодитазина» в брюшине составляет 2-2,5 часа после внутривенного введения препарата. После проведения лазерного воздействия, интенсивность флюоресценции снижается на 76,6%, что свидетельствует об активно протекающей фотодинамической реакции. 2.Проведенные исследования свидетельствует о высокой стерилизующей способности фотодинамической терапии для санации брюшины при остром экспериментальном перитоните, вызванном монокультурой кишечной палочки, по сравнению с традиционным методом лечения. Снижает число микробных тел к первые сутки до 102 в 1 мл экссудата, а через трое суток после операции - микрофлоры в брюшной полости не выявлено. 3.Санация брюшины при остром экспериментальном перитоните с использованием ФДТ позволяет в три раза быстрее отчистить брюшную полость от патогенной флоры, уменьшить эндогенную интоксикацию, и снизить летальность экспериментальных животных с 27,3 % до 9,5 % по сравнению с традиционным методом санации. 4.Результаты проведенных исследований свидетельствуют о высокой эффективности метода фотодинамической терапии для санации брюшины, который способствует сокращению острой фазы воспалительного процесса в брюшной полости, снижению бактериальной обсемененности брюшины, быстрому купированию пареза желудочно-кишечного тракта и почечно-печеночной недостаточности у животных с экспериментальным каловым перитонитом. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Результаты экспериментальных исследований по изучению эффективности применения метода ФДТ при остром экспериментальном перитоните свидетельствуют о высокой эффективности ФДТ при санации брюшной полости. Высокая эффективность, простота способа, его доступность, надежность, исключение термического повреждения брюшины дают основание к дальнейшему изучению ФДТ для лечения больных с острым распространенным перитонитом. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ Абдуллаев А.Х. Оценка функциональной активности надпочечников и некоторых сторон метаболизма при перитонитах (клинико-экспериментальное исследование) // Автореф. дис. канд. мед. наук, Ташкент. - 1984. -20 с. Азимшоев А.М. Лазерная фотодинамическая терапия гнойных ран с фотосенсибилизаторами хлоринового ряда / /Автореф. дис. на соискание уч. степени канд. мед. наук-Москва .2008.- 23 с. Алиев И.М. Применение низкоинтенсивного ИК-лазерного излучения в комплексном лечении больных с гнойной инфекцией брюшной полости: (Эксперим.-клинич. исслед.) //Автореф. дис. д-ра мед. наук. -М., 1995. - 34 с. Алимов P.P., Изотова О.Г. , Каримов Х.К. и др. Парез кишечника при панкреатогенном перитоните // Скорая медицинская помощь. 2006. - № 2. - С.60-61. Апарцин К.А., Лишманов Ю.Б., Галеев Ю.М., и др. Бактериальная транслокация при релапаротомии в условиях распространенного перитонита // Бюллетень СО РАМН, № 2 (136), Иркутск. 2009. -С.95-99. Афендулов С.А., Бегежанов Б.А. Ошибки в лечении травматического перитонита // Первый Московский международный конгресс хирургов. М. 2003. -С.103-104. Ахтамов Ж.А., Карабаев Х.К., Хайдаров Г.А., и др. Эффективность лапаростомии. при лечении разлитого перитонита // Сборник трудов международного конгресса «Новые технологии в хирургии» (5-7 октября 2005 г., Ростов-на-Дону). -С.47. Аширметов А.Х. Особенности действия и токсичности лекарственных веществ, метаболизирующихся в печени при экспериментальном перитоните // Дис. канд. мед. наук. Ташкент. - 1983. -17 с. Ашрафов Р.А. Гистологические и гистохимические изменения тканей органов брюшной полости при перитоните (экспериментальное исследование). Москва, 2001. - С.47. Ашурметов Р.И., Хорошаев В.А., Касымов А.Х., и др. Моделирование разлитого перитонита // Хирургия. 1992.-№ 4.-С.77-86. Багдасаров В.В., Чернооков А.И., Багдасарова Е.А., и др. Влияние интраабдоминальной гипертензии на выбор хирургической тактики при распространенном перитоните // Инфекции в хирургии .2010.-№4.-С.47-52. Баклыкова Н.М. Нейро-гуморальные механизмы торможения моторной деятельности тонкой кишки и их значение при илеусе и перитоните. // Дис. докт. мед. наук. Ленинград. - 1965.- 22 с. Банин И.Н. Применение гетеротермических режимов санации брюшной полости в комплексе лечения острого перитонита // Дис. канд. мед. наук; Воронеж, гос. мед. акад. Воронеж, 2003. -141 с. Барабеджанов Б.Д., Гешаев О.Р. Новые подходы к лечению послеоперационного перитонита // Вестник хирургии. 2002. № 4.-С.25-28. Баранов A.B. Экспериментальное обоснование ультразвуковой послеоперационной санации брюшной полости в лечении острого перитонита // Вестн. эксперим. и клинич. Хирургии 2009. -Т.2; №3.-С. 242-247. Белобородов В.А., Борисов Р.Н.  Современные принципы и перспективы хирургии тяжелых форм перитонита // Сиб. Медицин, обозрение: ежеквартальный медицинский журнал. 2008. - №3.-С. 3-7. Белобородое В.Б. Актуальные аспекты антимикробной терапии хирургических инфекций // Инфекции в хирургии. 2003. - №1.-С. 28-30. Берген И.Г. Ультразвуковая санация брюшной полости с применением озонированного физиологического раствора в лечении разлитого перитонита. сборник "Наука о человек" // материалы Х конгресса молодых ученых и специалистов .Под ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск: СибГМУ. 2009.-С.166. Бондарев Р.В., Бондарев В.И. Сравнительные результаты лечения больных острым разлитым перитонитом при использовании методов хирургической детоксикации // Украшський Журнал Х1рурп1. -№2. -2008.- С.73-77. Бородин М.А., Красильников Д.М., Зайнуллин И.В. Малоинвазивные вмешательства под ультразвуковым наведением у больных с заболеваниями органов брюшной полости и забрюшинного пространства // Эндоскоп, хир. 2006. -№2.-С.2-11. Брискин Б.С., Савченко З.И., Хачатрян H.H. Иммунологические аспекты прогнозирования эффективности антибиотикотерапии у больных перитонитом // Антибиотики и химиотерапия. 2000. Т. 45, № 2.-С.12-21. Брискин Б.С., Хачатрян H.H., Савченко З.И., и др. Лечение тяжёлых форм распространённого перитонита // Хирургия.- 2003.- № 8.-С.56-59. Булынин В.И. «Способ санации брюшной полости при перитоните» RU 2098019 C1 -12.10.1997. Булынин В.И., Глухов A.A. Лечение перитонита с применением озона и гидропрессивных технологий // Хирургия. 1999.- №7.-С.9-12. Бушмакина М.П., Пигалёв И.А. Экспериментальные данные по вопросу о механизме прямых поражений продолговатого мозга при разлитом перитоните // Архив биологических наук. 1928.- № 3.-С.305-312. Буянов В.М., Родоман Г.В., Белоус Г.Г. Экспериментальная модель острого гнойного перитонита // Хирургия. 1997.– № 1.–С.72–73. Волгин В.Н., Старандко Е.Ф., Изучение фармакокинетики фотодитазина при базально-клеточном раке кожи // Лазер. мед. 2011.- Т.15.-Вып. 1.-С.33-37. Гейниц А.В., Сорокатый А.Е., Ягудаев Д.М., и др. Фотодинамическая терапия. История создания метода и ее механизмы // Науч.-практ. журнал лазерная медицина.-2007-Том 11/Выпуск 3.-С.42-46. Гельфанд Б.Р., Гологорский В.А., Бурневич С.З., и др. Антибактериальная терапия хирургической абдоминальной инфекции и абдоминального сепсиса // Consilium medicum.- 2000.- Том 2.- №9.-С.374-379. Гирш А.О. Эндотоксикоз у больных сахарным диабетом 2 типа с разлитым гнойным перитонитом: (вопр. патогенеза, диагностики и лечения): Автореф. дис. д-ра мед.наук1. Омск,- 2006. -38 с. Глухов A.A. Лечение перитонита, с применением гидропрессивных технологий и озона. Воронеж: Воронеж, гос. ун-т,-1999.-С.148. Глухов А.А. Влияние температурного режима санации брюшной полости на течение синдрома постсанационной интоксикации при остром распространенном перитоните // Вестн. хирургии им. Грекова. – 2006. – Т. -С.165. Глухов А.А. и др. «Способ комбинированной санации брюшной полости» RU 2198663 С1 - 20.02.2003 Глухов А.А., Андреев А.А. Лечение острого распространенного перитонита, осложненного сепсисом с применением внутрикишечных технологий и озонотерапии // Научно-медицинский вестник Центрального Черноземья 2007. № 29. -С.74-81. Глухов A.A., Суханов В.Г., Остроушко А.П., и др. Применение видеолапароскопической гидропрессивной санации брюшной полости при остром перитоните // Вестн. эксперим. и клинич. хирургии. 2009. - Т. 2, №3. - С.199-206. Головин Д.И. О метаболизме эпителиев // Дис. докт. мед. наук. Ленинград. – 1953. -122 с. Гологорский В.А., Гельфанд Б.Р., Багдатьев В.Е., Топазова Е.Н. Синдром полиорганной недостаточности у больных с перитонитом // Хирургия.-1988.- № 2.-С.73-76. Гостищев В.К. Распространённый гнойный перитонит: комплексный подход к лечению // Врач. 2001. № 6.-С.32-33. Гостищев В.К., Афанасьев А.Н., Станоевич У.С. Антибактериальная терапия при распространенном гнойном перитоните // Материалы Первого съезда хирургов Южного Федерального округа, Ростов-на-Дону, 2007.-С.41. Гостищев В.К., Сажин В.П., Авдовенко А.Л. Перитонит //М.: “Геотар-мед”, 2002.– 238 с. Григорьев Е.Г., Коган А.С. Хирургия тяжелых гнойных процессов // – Новосибирск: Наука, 2000.– 314 с. Гридчик И.Е., Закиров Д.Б., Пар В.И. К прогнозу течения абдоминального-сепсиса // Вестник интенсивной терапии. 2004.№1 .-С.32-36. Губский В.И. Взаимосвязь внутриклеточных окислительно-восстановительных процессов и водного баланса органов при экспериментальномперитоните у крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1985. - № 6.-С.652-654. Данилов И.В. К вопросу о цитологическом составе экссудата при различных условиях эксперимента // Труды Казанского медицинского института. Казань. - 1940. - № 1.-С.71-82. Дербенев В.А., Морозенков И.А., Якубов Э.Ш., и др. Фотодинамическая терапия осложненных форм рожи // Росс. Био-тер. жур.- 2007.- Т.6.-№1.-С.14. Деринг В.Ф., Юдицкий Н.Н., Карачев В.Н. и др. «Тактика лечения разлитого перитонита» // Сборник научно-практических работ, посвященный 120-летию Красноярского военного госпиталя. – Красноярск, 2005 г.-С.63-66. Дерябин И.И., Лизонец М.Н. Перитонеальный диализ. М., Медицина. 1991.-С.168. Дехнич А.В., Козлов Р.С., Голуб А.В. Антибактериальная терапия осложненных интраабдоминальных инфекций: от чего зависит успех? Клиническая- микробиология и антимикробная химиотерапия. 2011.-№-2.-С.158-162. Евдокимов В.В. Нарушения микролимфоциркуляции при разлитом перитоните и их коррекция // Автореф: дисс. . канд. мед. наук. -М. 1981.-19 с. Евтушенко В.А., Льготина Е.В., Ашмаров В.В., и др. Решение проблемы тяжелых кожных заболеваний с помошью фотодинамической терапии. Инновации РАН - 2009: Материалы ежегодной научно-практической конференции // Томск, 18-20 ноября 2009 г.-С.526-529. Евтушенко В.А., Чойнзонов Е.Ц., Ашмаров В.В., и др. Фотодинамическая терапия рака с отечественным сенсибилизатором “Фотодитазин”. Инновации РАН - 2009: Материалы ежегодной научно-практической конференции // Томск, 18-20 ноября 2009 г.-С.480-485. Ерюхин И.А., Багненко С.Ф., Григорьев Е.Г. и др. Абдоминальная хирургическая инфекция: современное состояние и ближайшее будущее в решении актуальной клинической проблемы. Инфекции в хирургии. 2007 г. Т.5 №1,-С.6-12. Ерюхин И.А., Дударёв А.Л., Урманчева А.А. Об эффективности лучевой терапии при местном и разлитом перитонитах в эксперименте // Вестник хирургии. 1981. - № 11.-С.45-48. Ерюхин И.А., Шляпников С.А., Ефимова И.С. Перитонит шабдоминальный сепсис // Инфекции в хирургии. 2004.№2 (1) .-С.2-8. Зубков О.Б. Влияние протеаз и их ингибиторов на продолжительность жизни животных с экспериментальным перитонитом.// Вестник хирургии, 1981.-№12.-С.23-25. Ивачев A.C., Беренштейн М.М., Беребицкий С.С. Варианты интраоперационной санации брюшной полости у больных разлитым перитонитом // 11-е Захарьинские чтения: Науч.-практ. конф: Тез. докл. Пенза, 1995.-С.29-30. Измайлов С.Г., Рябков М.Г., Щукин А.Ю. Лечение распространенного перитонита аппаратным способом этапных санаций брюшной полости // Анналы хирургии 2010.-№ 2.-С.37-41. Илюкевич Г.В., Светлицкая О.И., Попечень О.Н. Нарушения кислородного статуса и возможность их коррекции у больных с острым распространенным перитонитом // Медицина. 2006. - №-2.-С.72-74. Каль-Калиф Я. Я. О лейкоцитарном индексе интоксикации // Врачебное дело – 1941. - №1.– С.31– 36. Каншин Н.Н. Лечение гнойного перитонита // Вестник хирургии. -1980. №9.-С.108-113. Капинус В.Н., Романко Ю.С., Каплан М.А., и др. Эффективность флюоресцентной диагностики и фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором “Фотодитазин” у больных раком кожи.// Росс. Био-тер. жур.- Материалы IV Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты», Москва, 16-18 марта 2005 г.-С.24-26. Карабаев Х.К., Хайдаров Б.К.,  Тагаев K.P., и др. Эффективность ранней релапаротомии. // Новые технологии в хирургии: Сборник трудов Международного хирургического конгресса, 5-7 октября 2005г., Ростов-на Дону. Ростов-на-Дону. 2005.-С.124. Каримов С.Х., Мирошниченко А.Г., Кацадзе М.А., и др. Объективизация диагностики и контроля лечения пареза желудочно-кишечного тракта при разлитом перитоните // Вестн. хирургии: 2008: №2 .-С.34-38. Карстен Э.Г., Журомская В.А. Применение ультразвука малой интенсивности в лечении экспериментального перитонита // Экспериментальные и клинические состояния. Алма-Ата. - 1981. -С.100-101. Кемеров C.B. Двухэтапная пролонгированная санация и декомпрессия брюшной полости в лечении распространенного гнойного терминального перитонита // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2005. №-2.-С.-64-67. Козлов В.И. Комплексная оценка эффективности фотосенсибилизаторов для лазерной терапии // Физ. журн. 1992 Т 2.№1-2.-С.54-55. Козлов В. И. Лазерные технологии в хирургии и онкологии // Междунар. мед. журн. 1998 №11-12. -C.927-932. Корабаев У.М. Фотодинамическая терапия гнойных, длительно незаживающих ран и трофических язв // Автореф. дисс. на соискание уч. степени док. мед. наук-М. 2000- 33с. Корабаев У.М., Толстых М.П., Гейниц А.В., и др. Фотохимическая терапия гнойных ран и трофических язв // Андижан-2005.-С.127. Корабельников А.И., Аксёнова C.B. Озон в лечении разлитого гнойного перитонита // Н.Новгород. Изд-во Новгород, гос. ун-та. 1997.-С.108. Косовских А.А., Кан С.А., Чурляев Ю.А., и др.Коррекция нарушений микроциркуляции при распространенном гнойном перитоните // Хирургия ж-л им. Н.И.Пирогова.-6.-2012.-С.41-44.

Похожие:

	Флуоресцентная диагностика и фотодинамическая терапия остроконечных кондилом вульвы ...		Совершенствование методов диагностики и эндодонтического лечения... Методические рекомендации предназначены для медицинских работников, оказывающих первичную медико-санитарную помощь: врачей стоматологического...
	Селявко Юрий Александрович "Современная антибактериальная профилактика...		Разработка полимерного низкочастотного виброизолятора с квазинулевой жесткостью Проведено аналитическое исследование разрабатываемого виброизолятора, его изготовление и экспериментальное исследование. Частота...
	Иммуномодулирующая терапия в комплексном лечении неконтролируемой бронхиальной астмы у детей Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ульяновский государственный...		Содержание Тюленёва А. Н., Осипенко М. А., Няшин Ю. И. экспериментальное и теоретическое исследование процесса иммобилизации микроорганизмов...
	Синергетическая модель концепта «жизнь»: экспериментальное исследование Работа выполнена на кафедре английского языка Тверского государственного университета		Исследовательская работа Автор работы Экспериментальное исследование, направленное на определение оптимального конструктора веб-сайта в школьных условиях
	Экспериментальное исследование тонкодисперсного распыла перегретой воды Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Объединенном институте высоких температур Российской академии...		Методические указания для работы с программой «Открытая Физика 1» Цель работы Экспериментальное исследование интерференции световых волн от двух источников (щелей)
	Экспериментальное исследование генерации и устойчивости тепловых концентрированных вихрей Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Объединенном институте высоких температур Российской академии...		Учебно-тематические планы лекционных занятий по дисциплине «Математика»... Экспериментальное исследование интерференции световых волн от двух источников (щелей)
	Патентам и товарным знакам (19) Трянин а. П. Электропунктурная терапия в комплексном лечении хронического простатита. Гомеопатическая медицина и акупунктура. 1997,...		Клинико-экспериментальное исследование 14. 00. 35 – детская хирургия... «Средняя общеобразовательная школа №19 с углубленным изучением отдельных предметов»
	Экспериментальное исследование теплопроводности, удельного электрического... Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Объединенный институт высоких температур ран		Клиническое значение исследования ренальной гемодинамики в диагностике... Показатели внутриглазного давления новорождённого ребёнка, обусловленные морфологическими особенностями дренажной системы глаза в...