Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России»

Скачать 1.02 Mb.

Название	Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России»
страница	6/12
Дата публикации	27.05.2015
Размер	1.02 Mb.
Тип	Отчет

100-bal.ru > Биология > Отчет

1 2 3 4 5 6 7 8 9 ... 12

Глава 4 Выявление корреляционных связей между выраженностью факторов персистенции бактериальных штаммов и выживаемостью микроорганизмов в процессе внутриклеточного киллинга

В дальнейшем оценивали эффективность внутриклеточного киллинга бактерий с различной каталазной активностью. Обнаружили, то существует корреляция между выживаемостью бактерий после фагоцитоза и их способностью разлагать перекись водорода (рисунок 4).

Спектрофотометрическая оценка каталазной активности лейкоцитов и стафилококков по отдельности и при смешивании (в соотношении 1:100) показала, что она практически не снижалась у стафилококков в процессе фагоцитоза (данные не приводятся).

При оценке эффективности внутриклеточного киллинга бактерий фагоцитами обнаружено, что штаммы, активно продуцирующие каталазу, в среднем в 40% случаев не уничтожаются в фагосомах, что приводит к персистенции инфекционного агента в организме.

Рисунок 4 – Зависимость высеваемости (после фагоцитоза) от каталазной актн: штамма Staphylococcus aureus.
Коэффициент корреляции между каталазной активностью штаммов и способностью их к колониеобразованию после фагоцитоза равен 0,9.

Глава 5 Исследование влияния цитокинов на эффективность внутриклеточного киллинга бактериальных штаммов с разной каталазной активностью

Из полученных данных мы заключили, что, возможно, именно высокий уровень каталазной активности стафилококков, выделенных из крови, определял отсутствие эффекта иммуноцитокинов при изучении внутриклеточного киллинга этих штаммов. В качестве объекта фагоцитоза выбрали штаммы с высокой (№ 242 - 5,1 ед/20млн бактерий) и нулевой (№556 – 0,0ед/20млн бактерий) каталазной активностью. Нейтрофилы предстимулировали рекомбинантными иммуноцитокинами ИЛ-1β (100мЕ/мл) и ИНФ-γ (150 мЕ/мл) и естественным комплексом цитокинов (ЕЦК) (10мкг/мл) в течение 3 часов и проводили оценку внутриклеточного киллинга каталазоактивного и каталазонеактивного штаммов.

Обнаружено, что иммуноцитокины не изменяют эффективность фагоцитоза в случае штамма 242, обладающего выраженной каталазной активностью и значительно увеличивают эффективность внутриклеточного киллинга штамма 556, не продуцирующего этот фермент (рисунки 5 и 6).

При оценке супероксид дисмутазной активности бактерий обнаружено, что изученные штаммы таковой не обладали (данные не приводятся).

Таким образом, повышенная устойчивость штаммов золотистого стафилококка, выделенных из крови, объясняется их высокой каталазной активностью.

Для прогноза тяжести течения инфекционного процесса и подбора эффективной терапии наряду с иммунными показателями больного важное прогностическое значение имеет антиоксидантный статус бактерий. Одним из наиболее оптимальных путей борьбы с каталазоактивными микроорганизмами является поиск препаратов, ингибирующих каталазу, так как действие иммуноцитокинов, увеличивающих долю внутриклеточных активных форм кислорода, не привело к выраженному положительному результату.

Рисунок 5 – Влияние иммуноцитокинов на эффективность внутриклеточного киллинга штамма Staphylococcus aureus №242 (каталазная активность 5.1+-0.2 ед./20млн бактерий) ИЛ-1 интерлейкин.

Рисунок 6 – Влияние иммуноцитокинов на эффективность внутриклеточного киллинга штамма Staphylococcus aureus №556 (каталазная активность 0.0 ед./20млн бактерий).

Глава 6 Подбор препаратов на натуральной основе с непрямым антибактериальным действием, снижающих персистентный потенциал бактерий (оценка люминолзависимой и люцигенинзависимой хемилюминесценции в модельных бесклеточных системах in vitro, влияние обработки препаратами на натуральной основе на эффективность внутриклеточногокиллинга)

Анализ полученных данных показал, что эффективность внутриклеточного киллинга стафилококков фагоцитами существенно зависит от активности бактериальной каталазы.

Препараты иммуноцитокинов приводят к увеличению генерации как внеклеточных, так и внутриклеточных радикалов.

Однако повышение продукции АФК оказывается эффективным средством борьбы с инфекционным агентом, только в случае каталазонеактивного штамма. Широко известно о выраженном антимикробном действии многих лекарственных препаратов, приготовленных на основе растительного сырья [28,29,30,31,32].
Таблица 10 - Влияние на активность бактериальной каталазы растительных экстрактов.

№	Растительный экстракт	Эффект препарата (% ингибирования)	% выживших бактерий после обработки препаратом (кл\мл)*
1	Чай из папайи	8,5±0,5	5х10⁵
2	Цветы папайи	7,0±1,0	5х10⁵
3	Листья папайи	9,0±0,5	5х10⁵
4	Сироп из папайи	6,0±0,5	5х10⁵
5	NONI powder	7,0±0,5	5х10⁵
6	Pure NONI Extract	11,0±1,0	10⁵
7	NONI (capsules)	15,0±0,5	10⁵
8	NONI puree	13,0±1,0	10⁵
9	NONI juice	14,5±0,5	10⁵
10	Bignay	21,0±1,0	5х10⁴
11	Ферментированная папайя	35,0±1,0	10⁴
12	Контроль	0	5х10⁶

* - в качестве объекта фагоцитоза был выбран штамм S.aureus 242 с каталазной активностью в 5,1±0,1ед\20млн.бактерий.

Рисунок 7 – Снижение исходной каталазной активности S. aureus штамм 242 (5.1 ед/20 млн. бактерий) после обработки фитопрепаратом на основе ферментированной папайи в разных концентрациях.

Рисунок 8 – Влияние обработки фитопрепаратом на основе ферментированной папайи различных штаммов S. aureus на высеваемость бактерий после фагоцитоза.

Предположив, что одним из механизмов антибактериального действия фитопрепаратов может являться угнетение антиоксидантных ферментов микрооорганизмов, мы посчитали целесообразным провести поиск препаратов, обладающих способностью снижать активность бактериальной каталазы. Суспензию S.aureus инкубировали с каждым препаратом (таблица 10) и оценивали каталазную активность в отмытых бактериальных клетках йодометрическим и хемилюминесцентным методами.

На следующем этапе работы провели регистрацию продукции АФК лейкоцитами при активации бактериальным штаммом с высокой каталазной активностью (№ 242 – 5.1ед/20млн бактерий), обработанным «фитопрепаратом». Это привело к повышению люминольной хемилюминесценции по сравнению с контролем на 38% (контроль - штамм необработанный препаратом). Интенсивность люцигениновой ХЛ не изменялась (данные не приведены).

Таким образом, эффект снижения люминольной ХЛ при активации лейкоцитов каталазоактивным штаммом, при обработке «фитопрепаратом на основе ферментированной папайи» проявлялся значительно меньше.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 ... 12

Похожие:

	Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы		Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы
	Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы		Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы
	Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы		Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы
	Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы		Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы
	Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы		Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы
	Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... В рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы		Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования
	Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... Санкт-петербургский государственный электротехнический университет «лэти» им. В. И. Ульянова (ленина)		Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования
	Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования		Отчет о научно-исследовательской работе в рамках федеральной целевой... «Разработка новых методов индивидуальной коррекции сводно-радикального статуса при бактериальных инфекциях»

Школьные материалы