Сценарий видеофильма
Скачать 280.5 Kb.
|
| Кариология в теории и на практике Сценарий видеофильма Корниенко О.С., Высоцкая Л.В. Аннотация Первая часть – вводная теоретическая, описывает особенности и предмет кариологии. Вторая часть иллюстрирует необходимые реактивы и инструменты на рабочем столе, манипуляции, связанные с приготовлением хромосомных препаратов, наиболее распространенные методики окрашивания хромосом, флуоресцентное микроскопическое оборудование, а также знакомит с автоматизированной компьютерной программой для анализа кариотипов Icaros (Zeiss, Германия). Третья часть включает современные данные о цитогенетике человека, молекулярных методов, с описанием хромосомных аномалий человека, приводящих к выраженным клиническим синдромам. Заглавный титр, заставка Digital radius: «Кариология в теории и на практике». Титр: «Авторы: Корниенко О.С., Высоцкая Л.В.». Титр: «Содержание». Титр: «Часть первая. Введение в Кариологию». Слайд. «Кариология — ...». Текст. Кариология это наука, которая изучает строение и функции клеточного ядра в целом и отдельных его структур, таких как хромосомы, ядрышко, ядерная оболочка и другие. Слайд «Кариотип». Текст. Кариология изучает также кариотипы, а это хромосомные наборы клеток. Слайд «Что такое кариотип». Текст. Кариотип — это совокупность признаков (число, размеры, форма, и другие) полного набора хромосом, присущая клеткам данного вида, данного организма, или линии, клона клеток. Слайд «Характеристики кариотипов». Текст. Известно, что различные клетки в организме могут содержать разное хромосомное количество. Причем, у каждого вида существует минимальный набор хромосом, состоящий из одной копии аутосомы и, как правило, одной половой хромосомы. Этот набор называется гаплоидным. Двойной набор, содержащий по две копии каждой хромосомы называется диплоидным, тройной — триплоидным, и так далее. В организме человека, например, яйцеклетки и сперматозоиды имеют гаплоидный набор хромосом, большинство соматических клеток диплоидны, а клетки печени — полиплоидны. При описании кариотипа всегда указывают точное количество хромосом. У всех организмов разное количество хромосом в клетках. У растений самое маленькое число 2n=4, а самое большое 2n=1440 у некоторых видов папаратников. У животных рекордсменом по минимальному количеству хромосом 2n=6 стал олененок мунжак, а по максимальному 2n=102 — один из грызунов. Далее, при описании кариотипа указывают относительный размер хромосом, в кариотипах встречаются длинные, средние и короткие хромосомы. Обязательно указывают форму хромосом, бывают одноплечие и двуплечие хромосомы. Если плечи равны по длине, то такую хромосому называют метацентриком. Если одни плечи чуть короче других — это субметацентрик. И хромосома, у которой короткие плечики слишком маленькие, чтобы их увидеть, называется одноплечей или акроцентриком. Слайд «Окраски хромосом». Текст. Детальное описание кариотипа включает в себя также данные об особенностях окраски хромосом. Рутинная окраска дает равномерное окрашивание хромосом по всей длине. Преимущество этого способа в том, что хромосомы имеют четкие очертания, мы можем легко посчитать их количество. Можем увидеть первичные перетяжки — это центромерные районы, и, таким образом, определить морфологию хромосом. Кроме того, видны вторичные перетяжки — а это районы ядрышковых организаторов. Недостаток рутинной окраски в том, что она не позволяет распознавать хромосомы разных пар, если они похожи по длине и морфологии. Это привело к поиску и открытию нескольких видов дифференциальных окрасок, которые отличаются от рутинной окраски тем, что они дают неравномерное окрашивание, выявляя уникальный рисунок каждой хромосомы. Слайд: «Дифференциальное окрашивание». Текст. На этом слайде схематично показано, как примерно выглядят хромосомы при дифферециальном окрашивании, когда одни районы выкрашиватся более ярко, другие, наоборот, бледнее. Итак, С-окраска. Она выявляет конститутивный гетерохроматин. Таким образом обязательно окрашиваются центромерные районы, и другие районы, содержащие плотные блоки гетерохроматина. AgNO3-окрашивание позволяет выявить районы ядрышковых организаторов. Сам хроматин при этом окрашен бледно-желтым цветом, а в районах ядрышковых организаторов наблюдаются черные точки, симметрично на сестринских хроматидах. G-окраска превращает хромосомы в полосатые носочки. Вы видите чередование светлых и темных полос на хроматине. R-окраска дает исчерченность хромосом, обратную G-окраски. Q-окраска — это окраска флуоресцентными красителями. Флуоресцентные красители связываются непосредственно с ДНК, и тяготеют к разным районам. Титр: «Часть вторая. Методики и оборудование». Слайд «Митоз». Текст. Для анализа кариотипов прежде всего используют метафазные митотические хромосомы. К началу метафазы хроматин сильно конденсируется и хромосомы становятся компактные, что позволяет их сосчитать и рассмотреть их морфологию. У животных самым лучшим источником метафазных хромосом являются клеточные культуры, которые получают из лимфоцитов крови, тканей эмбрионов или кожи взрослых животных. Фото «Ламинар». Текст. Работы с первичными клеточными культурами позволяет получать неограниченное количество делящихся клеток. Для этого при помощи различных веществ лейкоциты сначала стимулируют к делению, а потом синхронизируют деления во всех клетках. К сожалению, возможность культивирования есть не всегда. В этом случае цитогенетики используют ткани животного, обладающие высокой митотической активностью, например, костный мозг или семенники. Титр: «Рабочий стол студента на практике по кариологии». Фото: «Рабочий стол студента». Текст. Это рабочий стол студента. Здесь есть листы бумаги, на которых проводится препарирование мыши. Перчатки. Есть пинцет, чтобы держать бедренную косточку, ножницы. Шприц для вымывания костного мозга, препаровальные иголки для препарирования семенников. Также есть большая и маленькая чашки Петри, и пробирка, куда вымывается костный мозг и затем обрабатывается. На столе есть груша с трубкой, куда нужно вставить пастеровскую пипетку, и не забыть при этом засунуть кусочек ватки, чтобы не потерять клетки при суспензировании. На столе есть планшет для препаратов, маркер и простой карандаш для подписей. Фото: «Реактивы для работы 1». Текст. Это реактивы, которые используются в работе при приготовлении препаратов из костного мозга. Раствор колхицина, который вкалывается животному. Колхицин останавливает клеточное деление, и, таким образом, способствует накоплению клеток на стадии метафазы. Хлорид калия — это гипотонический раствор, в нем клетки набухают, что в дальнейшем улучшает разброс хромосом на препарате. Уксусно-кислый фиксатор — стандартный фиксатор, состоящий из смеси уксусной кислоты и этилового спирта. Фиксатор, проникая в клетку, стабилизирует структуру хромосом. Фото: «Реактивы для работы 2». Текст. Для приготовления препаратов из семенников мыши используются другие реактивы. Физиологический раствор необходим для получения суспензии живых клеток, которая потом раскапывается на предметные стекла. В гипотоническом растворе — цитрате натрия, клетки семенников набухают, что уменьшает число наложений хромосом друг на друга на препаратах. Уксусная кислота используется для получения суспензии из фиксированных клеток семенника. Титр: «Приготовление прапарата их костного мозга домовой мыши (Mus musculus)». Текст. Давайте подробно рассмотрим как сделать суховоздушный препарат из костной ткани домовой мыши. Слайд: «Манипуляции для приготовления препарата». Текст. Берем мышь возрастом 1-2 месяца, вводим ей внутрибрюшинно 0,04 % раствор колхицина. Колхицин препятствует сборке микротрубочек веретена деления, из-за чего метафазные хромосомы остаются на экваторе и не расходятся к полюсам. Через 1,5–2 часа мышь забивают методом цервикальной дислокации. Это наиболее быстрый и наименее болезненный способ, в результате которого шейные позвонки смещаются относительно друг друга, и происходит разрыв спинного мозга. Далее необходимо как можно скорее извлечь бедренные косточки, очистить их от прилегающей мышечной ткани и отрезать костные эпифизы, это расширенные концы кости. После этого необходимо набрать в медицинский шприц 1–1,5 мл теплого гипотонического раствора, и вымыть костный мозг из бедренной кости в центрифужную пробирку. Разбить ткань при помощи пипетки до получения суспензии. И инкубировать в термостате при 37°С в течение 10 мин. В гипотоническом растворе клетки набухают, и это способствует в дальнейшем лучшему разбросу хромосом на препаратах. После инкубации добавляем немного уксуснокислого фиксатора. Фиксатор состоит из смеси этанола и уксусной кислоты в соотношении три к одному. Очень осторожно перемешиваем или, другими словами, суспендируем! После этого центрифугируем. Видео. Показываем центрифугу. Текст. Берем пробирку с костным мозгом и пробирку с таким же объемом воды, ставим друг напротив друга и центрифугируем 5 минут. Слайд: «Манипуляции для приготовления препарата». Текст. Сливаем осторожно надосадочную жидкость в раковину и добавляем 1 мл холодного фиксатора, не перемешивая. И далее оставляем пробирку в холодильнике (+4°С) не меньше 30 мин. После этого центрифугируем суспензию 5 мин, и сливаем осторожно надосадочную жидкость. Осторожно имеется ввиду, без резких движений, чтобы случайно не вытряхнуть осадок из пробирки. И наконец добавляем 200–300 мкл фиксатора и суспендируем. Итак, мы получили суспензию из фиксированных клеток костного мозга. Для приготовления препаратов нам понадобятся чистые стекла, которые пролежали хромпике около часа. Чистота стекол необходима прежде всего для того, чтобы клетки прилипли к стеклу и в дальнейшем не отклеивались при окрашивании препаратов. Итак, мы берем влажное и холодное стекло, стряхиваем излишек воды, располагаем стекло матировкой наверх. Матировка — это шероховатость на краю стекла для нанесения надписи. С высоты примерно 15–20 см капаем одну две капли суспензии клеточной на стекло и помещаем стекло над водяной баней. Эти приемы улучшают распластывание хромосом на стекле. Через 1–2 минуты стекло снимаем, ставим вертикально для высушивания на воздухе. Обязательно подписываем стекла, храним их в холодильнике до этапа окрашивания. Титр: «Приготовление распластанного и суховоздушного препаратов из семенников мыши». Текст. Семенники — это богатый материал для цитогенетика, потому что в семеннике много разных клеток, делящихся как митозом, так и мейозом. Из семенников мы можем приготовить суховоздушные препараты для наблюдения хромосом на различных стадиях. А также можем получить распластанные препараты для анализа синаптонемных комплексов, которые дают много дополнительной и уточняющей информации о кариотипе. Слайд: «Манипуляции с семенниками». Текст. Итак, на этом слайде показаны пути приготовления препаратов из семенников. Для приготовления суховоздушного препарата мы берем семенник, обязательно надрезаем его капсулу, и помещаем в гипотонический раствор, чтобы клетки набухли. Через 15 минут семенник переносим в уксуснокислый фиксатор. Фиксируем как минимум 30 минут. После этого в капле фиксатора измельчаем семенник, добавляем 60% уксусную кислоту и с помощью пипетки готовим суспензию. Раскапываем суспензию на чистое сухое стекло, высушиваем и препарат готов для дальнейшего окрашивания. Чтобы получить распластанный препарат для изучения синаптонемных комплексов мыши, необходимо семенник измельчить в физиологическом растворе, и при помощи пипетки приготовить суспензию из живых клеток. На чистое стекло капнуть каплю сахарозы, и затем аккуратно наслоить на нее каплю суспензии. Далее препарат высушивается, фиксируется формалином, и только после этого окрашивается. Титр: «Препараты». Текст. Итак, мы сделали несколько видов препаратов из одного объекта. Это суховоздушные препараты из костного мозга и семенников, а также распластанные препараты из семенников. Далее мы будем окрашивать эти препараты разными способами. Слайд: «Подписи к прапаратам». Текст. Поскольку препаратов много, то хорошо и правильно их подписывать сразу после приготовления. Обязательно указывают название объекта. Есть общепринятое научное правило, указывать сокращенное видовое название, где первая буква — это первая буква названия рода, а две других — первые буквы названия вида. Например, домовая мышь — это Mus musculus, сокращенное название MMU. Homo sapiens — сокращенное название HSA. Так как в работе используются одинаковые красители, то по внешнему виду готового препарата невозможно судить об окраске. Поэтому обязательно указывают название окраски. Чтобы точно идентифицировать авторство препарата, неплохо было бы указать свое имя. И случаях, когда приходится переделывать препараты или делать их в большом количестве необходимо подписывать еще дату приготовления. Титр: «Способы окраски». Текст. В этой таблице представлены особенности рутинной и дифференциальных окрасок. Процесс окрашивания можно разделить на два этапа, это предобработка и собственно окрашивание красителем. Используя один и тот же краситель, но избегая предобработки или изменяя ее условия, можно получать совершенно разные результаты. Рутинная окраска не требует предобработки, используется краситель Гимза, который связывается непосредственно с ДНК. Рутинная окраска хорошо выявляет первичные перетяжки или центромерные районы, а также вторичные перетяжки или районы ядрышковых организаторов. Для получения С-окраски препараты необходимо инкубировать в горячей щелочи и солевом растворе, окрашивать красителем Гимза. Районы конститутивного гетерохроматина ярко окрашиваются, эухроматин остается бледно окрашенным. Таким способом обязательно окрашивается прицентромерный гетерохроматин, а также другие блоки, если они есть, например, интерстициальный гетерохроматин и теломерный гетерохроматин. G-окраска получается при инкубации несколько минут в депротеинизирующем растворе, и затем в красителе Гимза. Хромосомы выглядят как полосатые носочки. Темные районы называются G-позитивными полосами или G-позитинвыми бэндами, а светлые районы — G-негативными полосами, или G-негативными бэндами. Эти районы обладают противоположными свойствами. G-позитивные бэнды характеризуются поздней репликацией, ранней конденсацией ДНК в клеточном цикле, и обогащены АТ-парами оснований. G-негативным бэндам присущи обратные свойства, в них чаще встречаются GC-пары, в этих районах активно идет транскрипция, и ранняя репликация. В качестве предобработки используют протеолитические ферменты, чаще трипсин, который удаляет белки, связанные с хроматином. Краситель Гимза. Для получения R-окраски достаточно провести предобработку в солевом растворе при высокой температуре. Краситель тот же — Гимза. В результате достигаем исчерченность хромосом, обратную G-окраски. AgNO3-окрашивание не требует предобработки, краситель — нитрат серебра. Эта окраска выявляет районы ядрышковых организаторов. Сам хроматин окрашен бледно-желтым цветом, а в районах ядрышковых организаторов наблюдаются черные точки, симметрично на сестринских хроматидах. Это места, где атомы серебра восстанавливаются засчет белков нуклеолинов. Нуклеолины частично остаются на метафазных хромосомах после стадии профазы, когда ядрышки еще активно функционировали в клетке. Еще нитратом серебра выкрашиваются синаптонемные комплексы, это белковые структуры, которые образуются в мейозе между гомологичными хромосомами. Q-окраска — это окраска флуоресцентными красителями, часто без предобработки. Флуоресцентные красители связываются непосредственно с ДНК, и тяготеют к разным районам. Например, синий краситель DAPI больше связывается с гетерохроматином, и поэтому ярче выкрашивает центромерные районы. А зеленый краситель хромомицин, наоборот, тяготеет к эухроматину, из-за чего центромерные районы остаются неокрашенными. Титр: «Окрашенные хромосомные препараты из костного мозга и семенников домовой мыши |
Добавить документ в свой блог или на сайт
Похожие:
 | Сценарий Перспективы модернизации Конституции РФ (права человека... Сценарий Конституционализм как феномен правовой культуры современного общества | | Программа внеурочной деятельности обучающихся по информатике «Творческая... Программа кружка «Творческая мастерская «Создание видеофильма» разработана для организации внеурочной деятельности обучающихся 5,... |
| Сценарий на Последний звонок Когда уйдем со школьного двора 140 Сценарий... Сценарий на Последний звонок Сценарий Последнего звонка в театральной школе 155 | | Объяснительная записка Сценарий на Последний звонок Сценарий Последнего звонка в театральной школе 155 |
 | Учебный план 1-2х классов Сценарий на Последний звонок Сценарий Последнего звонка в театральной школе 155 | | Согласовно принято утверждаю Сценарий на Последний звонок Сценарий Последнего звонка в театральной школе 155 |
| Содержание образовательной программы I часть I пояснительная записка Сценарий на Последний звонок Сценарий Последнего звонка в театральной школе 155 | | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Сценарий Последнего звонка в театральной школе Сценарий на Последний звонок 124 |
| Урока по английскому языку по теме: «Виды Лондона» Просмотр отрывка видеофильма «Лондон». Учащиеся должны догадаться, о какой достопримечательности идет речь и кратко рассказать | | Сценарий внеклассного мероприятия по основам детской дорожной безопасности для учащихся 1 класса ... |
| Курс учебно-летной подготовки планерных авиационно-спортивных организаций... Сценарий на Последний звонок Сценарий Последнего звонка в театральной школе 155 | | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Час фильма о судьбах России и её народа (вечерний просмотр видеофильма «Тихий Дон») |
| Внеклассное мероприятие в начальной школе по пдд сценарий внеклассного... Сценарий конкурсной программы для младших школьников на знание правил дорожного движения | | Сценарий внеклассного мероприятия с применением икт тема «Будьте здоровы!» Номинация: Сценарий внеклассного мероприятия «Здоровые дети в здоровой семье» |
| Сценарий урока по обществознанию на тему: «Голосует молодежь!» Областной конкурс на лучший сценарий мероприятия «Голосует молодежь!» в рамках Дня молодого избирателя в 2012 году | | План профилактической работы по пожарной безопасности обучающихся на 2012-2013 учебный год Показ видеофильма «Новый год. Пусть елка новогодняя только радость принесет» (1-4 классы) |
