Информативность определения рнк вируса гепатита а при проведении эпиднадзора за инфекцией
Скачать 275.93 Kb.
|
В завершенном виде диссертационная работа доложена и обсуждена на научном межлабораторном семинаре ФГУН «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора и расширенном заседании проблемной комиссии по эпидемиологии, микробиологии и инфекционным болезням ГОУ ВПО «НижГМА Росздрава» (Н. Новгород, 2006).ПубликацииПо материалам диссертации опубликовано 11 работ.Объем и структура диссертацииДиссертационная работа общим объемом 161 страница состоит из введения, обзора литературы (две главы), материалов и методов исследования, собственных исследований (три главы), заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы. Работа иллюстрирована 29 рисунками и 5 таблицами. Список литературы включает 250 источников, в том числе 120 отечественных и 130 зарубежных авторов.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Изучение закономерностей эпидпроцесса ГА в г. Н. Новгороде проведено на основе официальных статистических данных районных и городского ЦГСЭН (у.ф. №2) за 38 лет (1968-2005 гг.). Оценка проявлений эпидпроцесса ГА на отдельных территориях города осуществлена с 1994 г. При анализе вспышки ГА в 2005 г. использованы материалы официальных донесений о вспышечной заболеваемости. С целью изучения частоты выявления РНК ВГА было обследовано 68 детей и взрослых с подтвержденным обнаружением в сыворотке крови анти-ВГА Ig M диагнозом гепатита А. Все больные перенесли желтушную форму инфекции. Во время пребывания в стационаре у них одновременно забирали 3 субстрата - фекалии, сыворотку крови и слюну. Для оценки длительности выявления РНК ВГА в различных субстратах было проведено динамическое наблюдение за 32 больными гепатитом А. При этом забор клинических материалов у них проводили двукратно: при поступлении (1-3 день желтушного периода) и выписке (в среднем на 25-ый день с момента появления желтухи) из стационара. В качестве контрольной группы обследовали 20 человек «здорового» населения (дети и взрослые соматического стационара без гастроэнтерологической патологии). В 5 очагах гепатита А, сформировавшихся в организованных детских коллективах, где было зарегистрировано от 1 до 7 случаев ГА, под наблюдением находилось 89 контактных, из которых 82 ребенка. Клинические материалы – фекалии и сыворотку крови – забирали однократно после выявления первых заболевших. Группа сравнения включала 11 детей из благополучного по ГА коллектива.Для прогнозирования эпидситуации по ГА в г. Н. Новгороде на анти-ВГА Ig G было обследовано 977 детей и 193 взрослых.В рамках вирусологического мониторинга водных объектов на присутствие ВГА в 2003-2004 гг. было исследовано 295 проб воды. Регулярно в плановом порядке воду отбирали до обработки – в точках водозабора рек Ока и Волга и после обработки – из резервуаров чистой воды 5-ти водопроводных станций города и распределительной сети одного из районов. Полученные результаты были сопоставлены в динамике с данными предыдущих лет, когда для детекции ВГА в воде использовали только ИФА (с 1995 г.). Во время вспышки гепатита А на территории г. Н. Новгорода нами тестированы 283 водных образца, в том числе 66 холодного и 196 горячего водоснабжения.В модельных опытах был использован культуральный вирус гепатита А штамм НАS-15, полученный нами в культуре клеток FRhK-4.Для концентрирования вируса из воды использовали основанные на сорбционном принципе методы: с помощью водопроницаемых пакетов с адсорбентом (ИПиВЭ им. акад. М.П. Чумакова, 2000); двухэтапный метод концентрирования ВГА из больших объемов воды (Нижегородский НИИЭМ им. акад. И.Н. Блохиной, 1991), а также мембранный способ на основе ультрафильтрационных мембран типа УПМ-СВА в сочетании с прибором ПНФ-142 (г. Владимир). Предварительную обработку клинических материалов к исследованию методом ОТ-ПЦР проводили согласно Методическим рекомендациям «Забор, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики». – М., 2004. Лабораторные исследования включали определение Аг ВГА и антител к нему методом ИФА с коммерческими тест-системами фирмы «Вектор-Бест» (г. Новосибирск), а также определение РНК вируса гепатита А методом ОТ-ПЦР с использованием отечественной коммерческой тест-системы «АмплиСенс HAV – 430» производства Центрального НИИ эпидемиологии (г. Москва). Исследование всех изучаемых субстратов проведено с применением внутреннего контрольного образца (ВКО) того же производства (экспериментальная серия). При изучении эпидемиологического значения находок РНК ВГА в некоторых субстратах нами был использован метод иммуноэлектронной микроскопии (ИЭМ). Объем проведенных лабораторных исследований представлен в табл. 1. Таблица 1 Объем исследований, проведенных при выполнении данной работы
* - при определении РНК ВГА у 3 больных отмечалось стойкое ингибирование всех субстратов Полученные в работе результаты подвергались статистической обработке по общепринятой методике с использованием вариационной статистики, вычислением средней ошибки (m), достоверности разности между двумя величинами (t и p по Стьюденту), критерия соответствия (Х2), коэффициента корреляции (r), выраженными в процентах или относительных показателях. Для оценки тенденции развития эпидемического процесса применен метод наименьших квадратов. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ При сравнительной оценке регистрируемой заболеваемости ГА по отдельным территориям г. Н. Новгорода выявлена контрастность ее распределения (рис. 1).  Рис. 1. Динамика заболеваемости ГА на территории заречной и нагорной части г. Н. Новгорода в 1971-2005 гг., о/оооо В заречной части города по сравнению с нагорной выявлены отличия в характеристике проявлений эпидпроцесса ГА, заключающиеся в превышении доли ГА в структуре ОВГ, уровня заболеваемости (73,1±2,7о/оооо против 43,9±3,4о/оооо, p<0,001), особенно выраженном в годы периодических подъемов, в нетипичном для города начале (в августе) и окончании сезонного подъема (в апреле), относительно высокой доле сезонной надбавки (49,0±0,5% и 32,0±0,5%, соответственно, p<0,001), в позднее наступившем процессе «повзросления» инфекции (в 1994 г. по сравнению с 1989 г.). Таким образом, заречная часть по отношению к нагорной части города является территорией повышенного риска инфицирования гепатитом А, что, возможно, связано с более активным действием водного фактора передачи. Несмотря на достоверные различия в уровне заболеваемости ГА в Автозаводском (53,0±3,9 о/оооо) и Приокском (34,1±5,8 о/оооо, p<0,05) районах Н. Новгорода, расположенных на противоположных берегах р. Ока и получающих питьевую воду от разных водоочистных станций города, а также в Сормовском районе (46,0±6,9 о/оооо), водоснабжение которого осуществляется из р. Волга, проявления эпидемического процесса инфекции имели сходные черты. К тому же, на всех территориях, как и по городу в целом, в отдельные годы были отмечены внесезонные подъемы заболеваемости в весенне-летние месяцы. При этом, как правило, вначале повышение показателей регистрировали среди взрослого населения, а затем в эпидпроцесс вовлеклись и дети. Исходя из данных ретроспективного анализа, следует предположение о том, что на территории г. Н. Новгорода действует общий фактор передачи ГА, в частности водный, формирующий основные закономерности эпидпроцесса данной инфекции. Вместе с тем, возможно, что в пределах заречной и нагорной части города действует комплекс иных природных и социальных факторов и условий, обусловливающий контрастное распределение заболеваемости ГА. Аргументировать суждение о значимости водного пути передачи представляется возможным на основе использования специфических методов детекции ВГА в водных объектах Н. Новгорода и определения их причинно-следственной связи с заболеваемостью ГА. На первом этапе работы при изучении информативности метода ОТ-ПЦР в эпиднадзоре за гепатитом А были проведены модельные опыты с использованием культурального ВГА штамм HAS-15. При титровании вирусной суспензии установлено, что чувствительность метода ОТ-ПЦР с тест-системой «АмплиСенс HAV-430» в 10 000 раз выше по сравнению с ИФА. По результатам апробации тест-системы на клинических субстратах и концентратах воды с применением ВКО было выявлено ингибирование ОТ-ПЦР, которое наблюдалось в 4,4±2,2% проб сывороток крови, 14,7±3,9% экстрактов фекалий и значительно чаще - в 95,5±3,1% образцов слюны и 81,8±3,5% концентратов речной воды. Об ингибировании реакции свидетельствовало отсутствие в дорожках геля на этапе электрофоретической детекции как специфической полосы, так и сигнала внутреннего контрольного образца. Для устранения ингибирования были использованы два подхода: первый - при исследовании экстрактов фекалий и сыворотки крови эффективным оказалось разбавление проб 1:2 – 1:10; второй – на основе тест-системы «АмплиСенс HAV-430» нами разработан способ предварительной обработки проб слюны и концентратов воды, который позволил устранить ингибирование в 94,7±2,6% образцов и, тем самым, повысить эффективность выявления возбудителя гепатита А. Таким образом, применение ВКО является необходимым условием при проведении ОТ-ПЦР для обнаружения РНК ВГА. Следующим направлением наших исследований явилась сравнительная оценка частоты обнаружения РНК ВГА и Аг ВГА в различных клинических субстратах больных желтушной формой ГА и контактных из очагов инфекции. Таблица 2 Частота обнаружения Аг ВГА и РНК ВГА в различных субстратах больных гепатитом А в начале желтушного периода заболевания
* - с учетом подтверждающего ИФА-теста В начале желтушного периода РНК ВГА методом ОТ-ПЦР была выявлена в фекалиях и сыворотке крови в 100% случаев, а в слюне – у каждого третьего больного (32,1±6,4%). Аг ВГА методом ИФА был выявлен только в фекалиях у 12,9±4,6% обследованных (табл. 2). В группе сравнения РНК ВГА не была обнаружена. При динамическом наблюдении за больными к моменту выписки из стационара (в среднем на 25-й день с момента появления желтухи) РНК ВГА в слюне уже не выявляли, при этом в фекалиях и сыворотке крови частота ее обнаружения была значительной и составляла 90,6±5,2% и 56,3±8,8%, соответственно (рис. 2). | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 | Оптимальные тест-системы для количественного определения и детекции мутаций вируса гепатита в ... | | Реферат Хроническое заболевание печени и гепатоцеллюлярная карцинома,... Иммунотерапия хронического гепатита в анти-hbv вакцинами: от настоящего к будущему |
| Урок 7 Тема: нуклеиновые кислоты Задачи: познакомить учащихся с особенностями строения молекул ДНК и рнк, выявить основные различия и общие элементы в строении ДНК... |  | Конкурсе кейсов по электроэнергетической и электротехнической тематикам... ... |
| Клинико-эпидемиологическая оценка эффективности вакцинации против... Работа выполнена в Государственном учреждении инфекционной клинической больнице №1 Комитета здравоохранения Москвы и в Государственном... | | Роль индикации отдельных специфических маркеров вируса гепатита в... Работа выполнена в фгун «Нижегородский нии эпидемиологии и микробиологии им академика И. Н. Блохиной» Роспотребнадзора и филиале... |
| Реферат Вирусы и вирусные вакцины «вирусы и вирусные вакцины», я ориентировалась на проблемы лечения вирусных заболеваний в современной медицине. При стремительном... | | Структура летальных исходов и патологическая анатомия у больных вич-инфекцией г. Москвы Цель работы состояла в определении частоты вторичных и оппортунистических заболеваний, явившихся причиной летального исхода у больных... |
| Циррозы печени. Осложнения циррозов печени В редких случаях возможна непосредственная эволюция острого вирусного гепатита, осложненного массивными печеночными некрозами, в... | | Что понимается под инфекцией? Кожная аллергическая проба становится положительной при инфекционном заболевании? |
| Реферат по курсу “ ” Тема: “Гепатит формы b и С.” А и В, стало очевидным существование еще нескольких вирусных гепатитов, которые стали называть гепатитами ни А, ни В. В 1989 г удалось... | | Рнк сигрэ – Конкурс рефератов первое информационное сообщение Российский национальный комитет Международного совета по большим электрическим системам высокого напряжения (Conseil International... |
| Положение о конкурсе рефератов по электроэнергетической и электротехнической... Оргкомитет выполняет установленные функции как непосредственно, так и через деятельность своих уполномоченных представителей – Координаторов... | | Примерная тематика рефератов по неотложным состояниям при инфекционных заболеваниях Инфекционно-токсический шок у больных гриппом, лептоспирозом, менингококковой инфекцией. Ранняя диагностика, неотложная терапия |
| Индивидуальные средства защиты при гриппе реферат составила Еремина Л. Л Имеющиеся на сегодняшний день сведения позволяют предположить, что основным путём передачи нового вируса а (Н1 N1) от человека к... | | Конкурсе рефератов по электроэнергетической и электротехнической тематикам ... |
