Скачать 262.68 Kb.
|
РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования ТЮМЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ «УТВЕРЖДАЮ»: Проректор по учебной работе _______________________ /Ф.И.О./ __________ _____________ 2011г. СПОСОБЫ РАЗМНОЖЕНИЯ РАСТЕНИЙ IN VITRO Учебно-методический комплекс. Рабочая программа для студентов направления 020400.68 Биология (магистры) очной формы обучения профиля Биотехнология «ПОДГОТОВЛЕНО К ИЗДАНИЮ»: Автор работы __________________/Белозерова А.А./ «______»___________2011г. Рассмотрено на заседании кафедры ботаники, биотехнологии и ландшафтной архитектуры протокол № __ от «___» __________2011 г. Соответствует требованиям к содержанию, структуре и оформлению. «РЕКОМЕНДОВАНО К ЭЛЕКТРОННОМУ ИЗДАНИЮ»: Объем _________стр. Зав. кафедрой __________________/Боме Н.А./ «______»___________ 2011г. Рассмотрено на заседании УМК ИМЕНИТ, отделение Биология, протокол № __ от «___» ____________ 2011 г. Соответствует ФГОС ВПО и учебному плану образовательной программы. «СОГЛАСОВАНО»: Председатель УМК _____________/Фролова О.В./ «______»_____________2011г. «СОГЛАСОВАНО»: Зав. методическим отделом УМУ_____________/Федорова С.А./ «______»_____________2011г. РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯМИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИГосударственное образовательное учреждение высшего профессионального образования ТЮМЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Институт математики, естественных наук и информационных технологийКафедра ботаники, биотехнологии и ландшафтной архитектурыБелозерова А.А. СПОСОБЫ РАЗМНОЖЕНИЯ РАСТЕНИЙ IN VITRO Учебно-методический комплекс. Рабочая программа для студентов направления 020400.68 Биология (магистры) очной формы обучения профиля Биотехнология Тюменский государственный университет 2011 Белозерова А.А. Способы размножения растений in vitro.Учебно-методический комплекс. Рабочая программа для студентов направления 020400.68 Биология (магистры) очной формы обучения профиля Биотехнология. Тюмень, 2011, ___ стр. Рабочая программа составлена в соответствии с требованиями ФГОС ВПО с учетом рекомендаций и ПрООП ВПО по направлению и профилю подготовки. Рабочая программа дисциплины опубликована на сайте ТюмГУ: Белозерова А.А. Способы размножения растений in vitro.Учебно-методический комплекс. [электронный ресурс] / Режим доступа: http://www.umk3.utmn.ru., свободный. Рекомендовано к изданию кафедрой ботаники, биотехнологии и ландшафтной архитектуры. Утверждено проректором по учебной работе Тюменского государственного университета. ОТВЕТСТВЕННЫЙ РЕДАКТОР: заведующий кафедрой ботаники, биотехнологии и ландшафтной архитектуры Н.А. Боме, д.с.-х.н., профессор© Тюменский государственный университет, 2011. © Белозерова А.А., 2011.
Целью данной дисциплины является знакомство с современными методами размножения растений in vitro. Задачами дисциплины являются: - освоение методик приготовления питательных сред, способов стерилизации питательных сред, растительного материала; - знакомство с методиками клонального микроразмножения различных видов растений.
Курс «Способы размножения растений in vitro» входит в вариативную часть подготовки студентов-магистров направления Биология. Данная дисциплина читается на 2 курсе в 3 семестре. Данный курс базируется на знаниях, полученных студентами при изучении таких дисциплин как «Теоретические и прикладные аспекты биотехнологии растений», «Генетическая инженерия растений», «Основы биотехнологии лекарственных растений», «Биотехнология селекции растений». Знания, умения и навыки, полученные при изучении этой дисциплины, будут использованы при освоении курса «Современные технологии изучения и сохранения генетических ресурсов», при выполнении курсовых и дипломных работ.
Процесс изучения дисциплины направлен на формирование следующих компетенций: ПК-12 – применяет методические основы проектирования и выполнения полевых и лабораторных биологических и экологических исследований с использованием современной аппаратуры (в соответствии с целями магистерской программы), генерирует новые идеи и методические решения. В результате освоения дисциплины обучающийся должен: Знать: этапы клонального микроразмножения растений, факторы, влияющие на процесс микроразмножения растений в условиях in vitro, технологию приготовления питательных сред. Уметь: уметь подбирать оптимальные условия для клонального микроразмножения растений in vitro. Владеть: навыками получения растительных эксплантов, пассирования каллусных тканей, получения микропобегов и микроклубней; владеть техникой клонального микроразмножения растений.
Таблица3. Планирование самостоятельной работы студентов
Тема 1. Микроклональное размножение растений Преимущества данного метода перед традиционными способами размножения. Вклад работ Р. Готре, Ф. Уайта, Г. Мореля, К. Мартина, Р.Г. Бутенко и других ученых в развитие данного научного направления. Практическое значение метода микроклонального размножения. Получение безвирусного посадочного материала. Использование микроклонального размножения для поддержания линий растений с ЦМС (цитоплазматической мужской стерильностью). Микроразмножение гетерозисных генотипов. Клонирование ценных генотипов. Применение методики размножения in vitro для тестирования растений на устойчивость к заболеваниям, засухе, засолению и другим стрессовым факторам. Решение проблемы размножения растений с низкой жизнеспособностью семян. Получение полиплоидных форм растений в условиях in vitro. Соматический эмбриогенез. Особенности клонального микроразмножения травянистых и древесных растений. Тема 2. Потенциальные системы размножения растений in vitro Способы и методы микроклонального размножения in vitro. Метод активации развития уже существующих в растении меристем. Получение безвирусного посадочного материала сельскохозяйственных культур (сахарная свекла, хмель, табак, топинамбур, томаты, картофель, огурец и др.), для размножения культур промышленного цветоводства (гвоздика, хризантема, роза, гербера), тропических и субтропических растений (рододендрон, камелия, чай и др.), плодово-ягодных культур (яблоня, слива, вишня, груша, виноград, малина, смородина и др.), древесных растений (тополь, ива, ольха, береза, рябина, секвойя, туя и др.). Метод индукции возникновения адвентивных почек непосредственно тканями экспланта. Получение посадочного материала луковичных цветочных растений (нарциссы, лилии, гиацинт, гладиолусы, тюльпаны). Размножение представителей рода Brassica (капуста цветная, кочанная, брюссельская, листовая, брокколи), лука, чеснока, томатов, земляники и других растений. Метод индукции соматического эмбриогенеза. Получение эмбриоидов моркови, пшеницы, ячменя, люцерны, редиса, винограда, осины, дуба, ели и других растений. Стадии развития соматических зародышей (глобулярная, сердцевидная, торпедовидная). Этапы формирования эмбриоидов в культуре тканей. Метод дифференциации адвентивных почек в первичной и пересадочной каллусной ткани, его достоинства и недостатки. Микрочеренкование побега, сохраняющего апикальное доминирование. Тема 3. Этапы клонального микроразмножения Выбор растения-донора и изолирование эксплантов; собственно микроразмножение; укоренение размноженных побегов с последующей адаптацией их к почвенным условиям; перенос укорененных микроклонов в теплицу, выращивание растений-регенерантов и подготовка их к посадке в полевые условия. Особенности размножения отдельных культур. Тема 4. Факторы, влияющие на процесс микроразмножения растений в условиях in vitro Генетические и физиологические факторы. Генотип материнского растения, сортовая и родовая специфика исходного экспланта, физиологический возраст, сезонность изоляции, размер экспланта. Гормональные факторы. Гормональный баланс питательной среды. Влияние минеральных солей, витаминов, углеводов, биологически активных веществ негормональной природы, углеродного питания на эффективность клонального микроразмножения. Физические факторы. Консистенция питательной среды, кислотность, фотопериод, интенсивность освещения, спектральный состав света, температурный режим. Оптимизация условий клонального микроразмножения растений. Тема 5. Приготовление питательных сред и подбор оптимальных условий культивирования Компоненты питательных сред: макроэлементы, микроэлементы, источники железа, органические добавки (витамины), источники углерода (углеводы), органические добавки (регуляторы роста). Основные питательные среды (Мурасиге-Скуга, Шенка-Хильдебрандта, Гамборга, Уайта, Хеллера, Линсмайера-Скуга и др.). Технология приготовления маточных растворов для питательных сред. Стерилизация питательных сред. Подбор условий культивирования для конкретных видов растений (жидкие или твердые среды, состав питательных сред, гормоны, рН среды, продолжительность освещения и качество света, температура, влажность воздуха). Тема 6. Стерилизация растительного материала Знакомство с набором веществ, используемых в качестве стерилизующих агентов (этиловый спирт, сулема, диацид, гипохлориты кальция и натрия, хлорамины, хлорная известь, перекись водорода). Приготовление растворов стерилизаторов на примере гипохлорита натрия (коммерческий препарат «Доместос») и этилового спирта. Подбор оптимального режима стерилизации для конкретных частей и органов растений. Технология стерилизации растительного материала. Выращивание стерильных проростков. Тема 7. Техника введения в культуру и культивирования изолированных тканей, микроразмножения отдельных видов растений Типы эксплантов (кончики стеблей или корней, почки, зародыши, семядоли, молодые листья, черенки, соцветия, чешуя луковиц и др.). Методики получения каллусных культур. Метод получения каллусной ткани из сердцевины стебля табака, корнеплода моркови. Получение каллусной культуры из стерильных проростков редиса. Получение каллусной ткани из листьев асептических растений редиса, табака, томата. Методика получения каллусных культур из изолированных кончиков корешков фасоли, из меристем конуса нарастания ростков клубня картофеля, столонов земляники, из листьев и черешков моркови. Пассирование каллусной ткани. Регенерация растений in vitro на примере соматического эмбриогенеза в каллусной ткани. Микроклональное размножение полученных растений. На этом занятии студенты должны закрепить навыки выделения различных типов эксплантов, получение каллусных культур, растений-регенерантов, также они должны освоить технику клонального микроразмножения какого-либо вида растения (картофель, земляника, томат, табак, морковь, и т.п.).
Работа 1. Приготовление питательных сред. Материалы и оборудование: хим. реактивы, колбы или химические стаканы на 1 л, банки с притертыми пробками для хранения маточных растворов, мерные пипетки, весы, электроплитка. Работа 2. Методы стерилизации растительного материала, посуды, инструментов и питательных сред. Материалы и оборудование: семена, клубни и побеги растений, стаканы химические, колбы с дистиллированной водой, чашки Петри, предметные стекла, скальпели, пинцеты, иглы, марлевые мешочки, стерилизаторы, пробирки, чашки с питательными средами, фильтры Зейца или «Милипор» для холодной стерилизации, автоклав, сушильный шкаф, ламинар-бокс. Работа 3. Выращивание стерильных проростков. Материалы и оборудование: семена гороха, сои, диацид, 96%-ный спирт, стерильные химические стаканы, стерильная вода, стерильные чашки Петри, пробирки, пинцет, стерильные марлевые мешочки. Работа 4. Выделение и культивирование апикальных меристем картофеля. Материалы и оборудование: клубни картофеля, пробирки со стерильной питательной средой, бинокулярная лупа, скальпели, препаровальные иглы, лезвия. Работа 5. Микроразмножение картофеля черенкованием побегов. Материалы и оборудование: стерильные скальпели, пинцеты, чашки Петри, асептические растения картофеля, пробирки со стерильной питательной средой. Работа 6. Микроклональное размножение земляники. Материалы и оборудование: столоны земляники, пробирки со стерильной питательной средой, 96%-ный спирт, диацид, колба со стерильной водой. Работа 7. Получение каллусной ткани из взрослого растения. Материалы и оборудование: взрослые растения табака, химические стаканы с дистиллированной водой, колбы со стерильной питательной средой, вата, 96%-ный спирт, диацид, стаканы со стерильной водой, стерильные марлевые мешочки, стерильный пробкобур, стерильный скальпель, стерильная чашка Петри. Работа 8. Получение каллусной ткани из асептических проростков. Материалы и оборудование: стерильные проростки редиса, колбы или чашки Петри со стерильной питательной средой, стерильные чашки Петри, стерильные скальпели, стерильные пинцеты.
При подготовке к занятиям студенты прорабатывают основную и дополнительную литературу, лекции. Для закрепления изученного материала проводится опрос в начале занятия. Практические работы студенты проводят с использованием практикума по росту и устойчивости растений (автор Полевой В.В. и др., 2001), оформляют в тетрадях, указывая тему занятия, название работы, цель работы, ход выполнения, материалы и оборудование, заполняют необходимые таблицы, делают графики или рисунки, пишут выводы. Затем студенты обсуждают результаты своей работы в форме собеседования с преподавателем. При изучение разделов «Микроклональное размножение растений» и «Потенциальные системы размножения растений in vitro» студенты, используя основную и дополнительную литературу, готовят реферат по выбранной теме объемом 10-15 страниц, оформляя его в соответствии с общепринятыми правилами. Затем на основе реферата делают доклад на 5-7 минут, в котором в сжатой форме представляют изученный теоретический материал. Доклад сопровождается демонстрацией презентации. При изучении темы «Этапы клонального микроразмножения» студенты составляют схему, поясняющую данный процесс, пишут конспект. При изучении темы «Приготовление питательных сред и подбор оптимальных условий культивирования» студенты заполняют таблицу «Основные питательные среды», указывая в них название среды, ее компоненты, концентрацию используемых веществ. На занятиях по данной теме студенты самостоятельно готовят и стерилизуют питательные среды, подбирают оптимальные условия культивирования для какого-либо вида культурного растения (томат, табак, морковь, картофель и т.п.), ведут наблюдения за ходом эксперимента. При изучении темы «Стерилизация растительного материала» студенты самостоятельно отрабатывают методику получения стерильных проростков каких-либо культурных растений. На самостоятельное изучение студентам из темы «Техника введения в культуру и культивирования изолированных тканей, микроразмножения отдельных видов растений» выносятся такие вопросы, как «Метод получения каллусной ткани из сердцевины стебля табака, корнеплода моркови», «Получение каллусной культуры из стерильных проростков редиса», «Получение каллусной ткани из листьев асептических растений редиса, табака, томата», «Методика получения каллусных культур из изолированных кончиков корешков фасоли, из меристем конуса нарастания ростков клубня картофеля, столонов земляники, из листьев и черешков моркови». Используя основную и дополнительную литературу, студенты составляют конспект данных методик с последующим обсуждением их на занятиях и используют их на практических занятиях. В итоге студенты должны подготовить отчет о проделанной работе, с указанием цели и задач исследования, объекта исследования, использованных материалов и методов, полученных результатах проведенного эксперимента. Результаты должны быть обсуждены и по данным исследования сделаны выводы. На заключительном занятии планируется проведение коллоквиума, вопросы к нему приводятся ниже. Темы рефератов
Вопросы к коллоквиуму
Вопросы к зачету
На лекциях по данному курсу предполагается использование мультимедиа-технологий. При проведении практических занятий используется работа студентов в малых группах временного характера по два-три человека. Каждая из групп получает свое задание, обсуждают методику проведения эксперимента, выполняют работу и делают выводы по полученным результатам. Затем объясняют результаты своей работы всем остальным студентам. При обсуждении нового материала и закрепления уже известной информации по всем темам планируется использование метода эвристических вопросов, мозговой штурм, дискуссии. При изучении данного курса планируется проведение экскурсии в лабораторию меристемных культур ТГСХА.
9.1. Основная литература:
9.2. Дополнительная литература:
9.3. Программное обеспечение и Интернет – ресурсы: http://www.biotechnolog.ru/ http://bio-technology.nm.ru/micropropogation.htm http://www.ip-centr.kiev.ua/newcipip/control/ru/publish/article/exchange?art_id=106669 http://dimetris.com.ua/site/all/in_vitrohttp://www.lesnyk.ru/raz-2_12.htmlhttp://www.microklon.ru/page/-rekomendacii-po-uhodu.htmlhttp://www.biometrica.tomsk.ru/senpoli.htm http://www.in-vitro.pl/tprodukcja.php?jez=ros http://www.syrikova.ru/forum/viewtopic.php?f=35&t=324 http://www.ufabotgarden.ru/?part_id=496,549 http://www.lepestok.kharkov.ua/handle/s20100801.htm http://web-local.rudn.ru/web-local/prep/rj/index.php?id=2740&p=8608 http://botanicblog.ru/publication/36 http://nadiya-kazan.narod.ru/vegetativ.htm http://www.sadovod.net/content/cms_view_article.php?aid=18&start=0&sid=beb0e11f9adea62bcbd3025fd0385494 http://www.nbgnsc.com/index.php?option=com_content&view=article&id=25&Itemid=23http://www.entheoworld.ru/enteobotanika/kultura-in-vitro-v-domashnix-usloviyax.html http://alla-strepsils.narod.ru/referat/clon.html
|