Экспериментальное обоснование способа контрастирования структур стекловидного тела с использованием суспензии «витреоконтраст»
Скачать 268.72 Kb.
|
На правах рукописи БЕЛИКОВА СВЕТЛАНА ВАЛЕРЬЕВНА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ СПОСОБА КОНТРАСТИРОВАНИЯ СТРУКТУР СТЕКЛОВИДНОГО ТЕЛА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СУСПЕНЗИИ «ВИТРЕОКОНТРАСТ» 14.01.07 - глазные болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2012 Работа выполнена в ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздравсоцразвития России.
Защита состоится «17» сентября 2012 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д.208.014.01 при ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздравсоцразвития России по адресу: 127486, г. Москва, Бескудниковский бульвар, д. 59А. С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздравсоцразвития России. Автореферат разослан «_15_» августа 2012 г. Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук В.В. Агафонова Список сокращений ВПМ – внутренняя пограничная СТ – стекловидное тело мембрана ТА – триамцинолона ацетонид ГК – глюкокортикостероиды TС – трипановый синий ИЦЗ – индоцианин зеленый RPE - ретинальный пигментный ЗОСТ – задняя отслойка стекловидного эпителий тела КС – кортикальные слои ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы Разработка новых хирургических подходов и методов лечения витреоретинальной патологии невозможна без знания анатомии стекловидного тела (СТ) и его роли в нормальном функционировании глаза, развитии патологических процессов. Результаты исследований отечественных и зарубежных ученых не только расширили представления о строении и свойствах СТ, но и поставили под сомнение справедливость некоторых современных основополагающих концепций, характеризующих структуру и свойства СТ у человека (Селиванова И.Н., 1992; Бабич М.Е., 2005; Рева Г.В. с соавт., 2011; 1979; Sebag J.). Однако, анатомический субстрат витреальных изменений и причинно-следственные связи между состоянием СТ и патологией прилегающих структур изучены недостаточно. Одной из наиболее трудных задач для хирурга и одной из основных составляющих успеха хирургического лечения является безопасное удаление в ходе субтотальной витрэктомии прозрачного, кажущегося бесструктурным, стекловидного тела и структур витреоретинального интерфейса: внутренней пограничной мембраны (ВПМ), эпиретинальных мембран (Столяренко Г.Е. с соавт., 1988; Enaida H. et аl., 2003; Abdelkader E. et аl., 2008). Стремление витреоретинальных хирургов максимально повысить эффективность хирургического лечения привело к изучению и внедрению в практическую работу совершенно новой технологии интраоперационного контрастирования тончайших структур заднего отдела глаза – хромовитрэктомии (Peyman G.A. et al., 2000; Rodrigues E.B. et al., 2005; Mayer C.H., 2008; Farah M. et al., 2009). Данная методика обеспечивает лучшую визуализацию СТ и витреоретинального интерфейса во время операции, более тщательное удаление кортикальных слоев СТ, облегчает «пилинг» ВПМ и эпиретинальных мембран, снижая риск ятрогенного повреждения сетчатки. На сегодняшний день в витреоретинальной хирургии для интраоперационной визуализации структур СТ и витреоретинального интерфейса используют три основные красителя: индоцианин зеленый ((ИЦЗ) indocyanine green – ICG; Daiichi Sankyo, Tokyo, Japan), трипановый синий ((ТС) trypan blue – TB; Ophthalmos, Sa˜o Paulo, Brazil), триамцинолона ацетонид ((ТА) triamcinolone acetonide – TA; Bristol-Myers Squibb. USA). ИЦЗ был впервые использован для контрастирования ВПМ (Kwok A. et al., 2003). Точкой приложения для ТС являются эпиретинальные мембраны (Joondeph B., 2009). Для визуализации волокон СТ используют ТА (Peyman G.A. et al., 2000; Roe R. et al 2009). Следует отметить, что наиболее эффективно контрастирование СТ с помощью ТА, так как благодаря кристаллической структуре частицы вещества проникают между волокнами СТ, осаждаются на них, при этом прозрачная структура СТ становится видимой (Peyman G.A. et al., 2000). Результаты экспериментальных и клинических исследований красителей свидетельствуют об их токсическом воздействии на сетчатку. ИЦЗ способен вызывать атрофию пигментного эпителия сетчатки (retinal pigment epithelium – RPE) и повреждение фоторецепторов сетчатки (Weinberger A.W. et al., 2001; Hirata A. et al., 2003; Ikagawa H. et al., 2005; Sato Y. et al., 2006; Morales M-C. et al., 2010). ТС также оказывает цитотоксическое действие, вызывая апоптоз клеток RPE (Jin Y. et al., 2005; Kodjikian L. et l., 2005; Narayanan R. et al., 2005). Результаты экспериментальных и клинических исследований токсического действия TА противоречивы. По мнению ряда авторов, препарат оказывает цитотоксическое, катарактогенное действие, способен повышать внутриглазное давление, вызывать развитие эндофтальмита (Jones J.B. et al., 2003; Roth D.B. et al., 2003; Rezai K.A. et al., 2004). Следует отметить, что на сегодняшний день не существует красителя, способного прижизненно контрастировать интравитреальные структуры, описанные в работах отечественных и зарубежных авторов (Махачева З.А., 1994; Worst J., 1977). Поэтому существует необходимость в разработке специализированного контрастного вещества (контрастной композиции) для хромовитрэктомии. Кроме того, для повышения эффективности эндовитреальной хирургии, безусловно, необходимо совершенствование знаний об анатомо-топографических особенностях и взаимоотношениях СТ и сетчатки. Цель настоящего исследования – разработать способ контрастирования структур стекловидного тела с использованием суспензии сульфата бария. Задачи исследования: 1. Провести в эксперименте ex vivo сравнительный анализ способности к контрастированию структур стекловидного тела суспензий на основе сульфата бария и метилцеллюлозы с различной дисперсностью частиц. 2. Разработать способ препарирования стекловидного тела с использованием композиции «Витреоконтраст», позволяющий изучать и анализировать анатомо-топографические особенности строения каждой из интравитреальных структур, взаимоотношения стекловидного тела и сетчатки. 3. Провести сравнительное изучение контрастирования структур стекловидного тела композицией «Витреоконтраст» и препаратом «Кеналог-40». 4. Оценить безопасность применения композиции «Витреоконтраст» при интраокулярном введении в эксперименте in vivo. Научная новизна результатов исследования 1. Впервые разработана композиция для контрастирования структур стекловидного тела и витреоретинального интерфейса на основе сульфата бария, названная «Витреоконтраст», которая, за счет размера частиц 1-5 микрон и их удельного веса 4,4 г/см³, обуславливающих способность к высокой механической адгезии, позволяет изолированно контрастировать все интравитреальные структуры, без изменения степени их контрастирования с течением времени. 2. Предложенный способ препарирования трупных донорских глаз с сохранением взаиморасположения интравитреальных структур и использованием суспензии «Витреоконтраст» позволил выявить новый анатомический вариант расположения интравитреальных каналов, при котором оптико-цилиарный и лентико-макулярный каналы занимают центральное положение, проходят в едином кожухе и в верхней трети стекловидного тела разделяются, оканчиваясь в ретроцилиарном и ретролентальном пространствах соответственно. 3. Впервые обнаружено, что при возникновении дефекта кортикальных слоев стекловидного тела интравитреальные структуры без нарушения анатомической целостности меняют свое расположение, образуя грыжу стекловидоного тела. 4. В эксперименте in vivo доказано, что суспензия «Витреоконтраст» не оказывает токсического влияния на структуры глазного яблока при интраокулярном введении. Практическая значимость результатов работы 1. Доказано, что в ходе препаровки стекловидного тела с использованием ультрадисперсной суспензии «Витреоконтраст», при оставлении интактными переднего отрезка глаза и участка склеры в заднем полюсе диаметром 10 – 11 мм, сохраняется взаиморасположение и целостность структур стекловидного тела, благодаря чему становится возможным их изолированное контрастирование с последующим выделением и изучением на микроскопическом уровне. 2. Разработанная композиция «Витреоконтраст» в отличие от суспензии «Кеналог-40» обладает более высокой адгезией и позволяет изолированно контрастировать каналы, цистерны стекловидного тела и их анастомозы. Основные положения, выносимые на защиту 1. Созданная на основе сульфата бария композиция для контрастирования интравитреальных структур, названная «Витреоконтраст», позволяет изолированно контрастировать все оптически полупрозрачные структуры стекловидного тела и витреоретинального интерфейса. 2. Разработанный способ препарирования стекловидного тела с введением суспензии «Витреоконтраст» позволил выявить новые анатомо-топографические особенности его строения. 3. Отсутствие клинико-морфологических изменений со стороны оболочек и внутренних сред глаза подтверждает безопасность интраокулярного введения суспензии «Витреоконтраст» в условиях эксперимента in vivo. Апробация работы Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской научной конференции молодых ученых с участием иностранных специалистов «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2009), на VIII Научно-практической конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии-2010» (Москва, 2010), на научно-клинической конференции ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздравсоцразвития России (Москва, 2010), на IX Съезде офтальмологов России (Москва, 2010), на 10th EVRS Congress – Vascular Pathologies (Испания, Севилья, 2010), на IX научно-практической конференции с международным участием «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии-2011» (Москва, 2011), на 11th EURETINA Congress-2011 (Великобритания, Лондон, 2011), на Joint Congress of SOE/ААО 2011 (Швейцария, Женева, 2011), на IX Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Федоровские чтения-2011» (Москва, 2011), на Научно-практической конференции с международным участием «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии-2012» (Москва, 2012). Публикации По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, из них 3 - в журналах, рецензируемых ВАК РФ. Имеется один патент РФ на изобретение. Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 119 - ти страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, двух глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 47 - ью рисунками, содержит одну таблицу. Указатель литературы включает 211 авторов, из них 32 отечественных и 189 зарубежных. Суспензия для контрастирования структур стекловидного тела и витреоретинального интерфейса «Витреоконтраст» разработана ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздравсоцразвития России совместно с ООО «НЭП МГ». Исследование созданной суспензии проводилось при непосредственном участии к.м.н. Кислицыной Н.М., Новикова С.В. Морфологические исследования выполнены на базе лаборатории патологической анатомии и гистологии глаза в ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздравсоцразвития России (зав. лабораторией к.м.н. Шацких А.В.). Экспериментальные исследования на in vivo выполнены на базе Калужского филиала ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздравсоцразвития России (директор – к.м.н. Терещенко А.В.) при поддержке д.м.н., проф. Белого Ю.А. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ В основу диссертационной работы положен комплекс экспериментальных исследований ex vivo, in vivo. Материалом для исследования ex vivo послужили 54 трупных донорских глаза. Глазные яблоки доноров-трупов были получены из Глазного тканевого банка Центра фундаментальных и прикладных медико-биологических проблем ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздравсоцразвития России (заведующий – д.м.н. Борзенок С.А.). Возраст доноров составил от 24 до 62 лет. Время от момента смерти до энуклеации составило 8,10,7 часов, время от момента смерти до проведения эксперимента – 12,80,8 часов. Средняя величина передне-задней оси глаза составляла: 23,4±0,5 мм. В исследование in vivo были включены 16 кроликов (32 глаза) породы шиншилла, весом 2,0-2,5 кг в возрасте 6 месяцев. Исследование способности к контрастированию (степени контрастирования) неорганических соединений на основе сульфата бария с различной дисперсностью частиц и органических соединений с низкой плотностью Критериями оценки веществ, выбранных для разработки контрастной композиции, по способности к контрастированию СТ, явились степень адгезии, определяемая плотностью и размером частиц, биологическая инертность вещества, избирательность контрастирования структур заднего отрезка глаза. С учетом известного факта того, что для контрастирования интравитреальных структур лучше использовать красители, имеющие кристаллическую структуру (частицы основного вещества оседают на поверхности структур СТ, очерчивая их рельеф), при разработке композиции для контрастирования СТ и витреоретинального интерфейса были выбраны сульфат бария и производные целлюлозы. Были предложены и исследованы 3 композиции для контрастирования интравитреальных структур: - суспензия № 1: неорганическая соль сульфата бария белого цвета в изотоническом растворе с размером частиц в суспензии 10-15 микрон, осмолярностью 300-350 мОсм и плотностью 4,4 г/см3; - суспензия № 2: неорганическая соль сульфата бария в изотоническом растворе с размером частиц в суспензии 1-5 микрон, осмолярностью 300-350 мОсм и плотностью 4,4 г/см3; - суспензия № 3: 1% раствор гидроксиэтилметилцеллюлозы (ГЭМЦ) с молекулярной массой 70 кДа, осмолярностью 285±32 мОсм, размером частиц 10-15 микрон и плотностью 1,05 г/см³. Исследования выполнялись на 12 - ти глазах трупов доноров, которые были разделены на 3 группы по 4 глаза в каждой. В 1-й группе контрастирование СТ проводили с помощью суспензии № 1, во 2-й группе – суспензией № 2 и в 3-й группе – суспензией № 3. Исследование способности к контрастированию предложенных композиций проводили на макропрепаратах СТ. Экспериментальные исследования проводили под микроскопом OPMI – 6 CTR Zeiss (Германия) под увеличением от 6 до 32 крат. Препаровку нефиксированных глазных яблок осуществляли по предложенной оригинальной технологии. Первоначально ножницами производили разрез склеры в 4 мм от лимба по кругу, оставляя интактным передний отрезок глаза (роговицу, радужную оболочку, хрусталик). Затем разрезали склеру между прямыми мышцами, не доходя до проекции желтого пятна и места выхода диска зрительного нерва, формируя лепестки склеры. Сформированные лепестки отсекали, оставляя участок склеры в заднем полюсе глаза, включающий зону проекции макулярной области и зрительного нерва, диаметром от 10 до 11 мм. Далее при помощи лезвия и анатомического пинцета формировали лепестки сосудистой и сетчатой оболочки и также отсекали их. Отделяли отсепарованные оболочки от СТ. Далее производили контрастирование интравитреальных структур разработанными композициями. Применяли антеградный и ретроградный пути введения красителей. При антеградном доступе с помощью игл 27 G одноразового инсулинового шприца производили инъекцию контрастной композиции через область, соответствующую плоской части цилиарного тела в 4 мм от лимба в ретроцилиарные цистерны и средние слои СТ; при ретроградном доступе - через проекцию зрительного нерва (преоптическую цистерну). Интенсивность окрашивания структур СТ оценивали методом фотографирования через 15 и 30 минут. |
Добавить документ в свой блог или на сайт
Похожие:
 | Техническое задание. Частотный датчик уровня 2 Сравнительная характеристика... Сравнительная характеристика датчиков обоснование выбора рекомендованного способа измерения, его достоинства и недостатки, а также... |  | Клинико-экспериментальное обоснование применения карофила для профилактики... Работа выполнена на кафедре физиологии, фармакологии и ветеринарно-санитарной экспертизы фгоу впо «Белгородская государственная сельскохозяйственная... |
| Экспериментальное исследование энергетического баланса динамически... Уравнения 1 есть дифференциальные уравнения Навье1 – Стокса2 движения вязкой жидкости, являющиеся математическим описанием полей... | | Санкт-петербурга Обоснование выбора оптимального способа переработки, использования и обезвреживания твердых бытовых и близких к ним по компонентному... |
| Т. М. Скляр Высшая школа менеджмента В чем заключается обоснование использования этого метода с точки зрения экономической теории? Каковы возможности и ограничения данного... | | Экспериментальное обоснование применения временныхнесъемных зубных... Для общества вопрос о знании этих социальных институтов и умении направлять их развитие имеет первостепенное значение уже потому,... |
| Сныткин Владислав Анатольевич Обоснование применения пластиночных... Ена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический... | | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Урок литературы в 6 классе по фгос с использованием образовательных структур сингапурской системы образования |
| Урок английского языка с использованием икт в 3 классе по теме: «Parts of body» Урок английского языка с использованием мультимедийной презентации редакторе Microsoft Power Point “Parts of the body” (Части тела)... | | Урок английского языка с использованием икт в 3 классе по теме: «Parts of body» Урок английского языка с использованием мультимедийной презентации редакторе Microsoft Power Point “Parts of the body” (Части тела)... |
| «По страницам великой жизни. Лев Николаевич Толстой человек, мыслитель, писатель» Методическая разработка урока литературы для студентов 1 курса спо с использованием технологии коллективного способа обучения | | 141980, Московская область, Дубна, ул. Жолио Кюри,6 Основы технологии связывания (сращивания) протонированных пластин кремния с гидрофильными подложками при получении структур кремний... |
| Существуют системы отсчета, в которых тело находится в состоянии... Импульсом тела называется вектор равный произведению массы тела на его скорость: (Подробнее, ниже) | | Образовательная программа курсов повышения квалификации «Реализация... В этом направлении идет процесс развития образования: разработка различных вариантов его содержания; использование возможностей современной... |
| Массажи и процедуры для тела Индийская процедура, способствующая гармонии души и тела. Пилинг лечебными травами; массаж тела с применением теплого кунжутного... | | 1. Отвечают на вопросы, опираясь на таблицы, рисунки, микропрепараты Цели: систематизировать знания о покровах тела, начиная с простейших и включая покров тела млекопитающих; определить функции, которые... |
