Реферат научных статей по технике окрашивания гистохимических препаратом гематоксилином представлен здесь. В данном случае имеется виду отличная статья Применение гематоксилина в микроскопической технике
© 2008 г. Горбунова Т. К.
Электронный математический и медико-биологический журнал» . - Т. 7. - Вып. 1. - 2008.
www.lenreactiv.ru
Tags: Химическая лаборатория
Механизм окрашивания биологических тканей.
Гематоксилин представляет собой краситель, имеющий слабый отрицательный заряд. При переходе в продукты окисления, гематеин и оксигематеин, отрицательный заряд возрастает. При образовании лака под влиянием таких электролитов, как железные или калийные квасцы, происходит сильная положительная перезарядка красителя. Железные и квасцовые лаки, имеющие сильный положительный заряд, красят прогрессивно. Окраска фиксированных гистологических препаратов как основными, так и кислотными красителями представляет собой процесс адсорбции, тесно связанный с электрическим зарядом ткани [7].
По Унна (1928), всякая окраска начинается как физический процесс, при котором находящийся в растворе краситель проникает в более грубые и более тонкие тканевые поры, где распределяется и накапливается по физическим законам (капиллярность, поверхностное натяжение). Эта фаза продолжается в течение нескольких минут. Вторая фаза собственно окраски представляет собой чисто химический процесс. При этом химически различные структуры преодолевают противодействующее акту окраски стремление к растворению со стороны той жидкой среды, в которой был растворен краситель. На третьей стадии, во время дифференцировки, можно с помощью более сильного растворителя модифицировать и ограничить получившиеся вначале химические соединения. Готовый препарат представляет собой новый химический индивидуум, в котором определенные сродства отдельных структур элементов связаны химически [7].
Из новейших модификаций окраски гематоксилином заслуживает внимания способ окраски гематоксили п-х ромовыми квасцами по Гомори (1941): в 100 смг дистиллированной воды растворяют 1,5 г хромовых квасцов и 0,5 г гематоксилина, затем добавляют 0,1 смъ серной кислоты и 0,1 г двухромово-кислого калия; раствор готов к употреблению через 2 дня. Для получения контрастных и дифференцированных препаратов их после гематоксилиновых красителей докрашивают рядом кислых красителей. Для этого употребляют 0.1—0,5-процентные водные растворы эозина, кислого фуксина, оранжа G или светлого зеленого.
Гематоксилин – краситель растительного происхождения, который содержится в форме гликозида в соке кампешевого дерева (Haematoxylon campechianum), произрастающего в Индии и Америке. Родиной же этого дерева является Южная Мексика, область Кампече. Кампешевый экстракт, содержащий гематоксилин, изначально применялся для окраски тканей в текстильной промышленности. В качестве гистологического красителя гематоксилин стал применяться с середины XIX века. Гематоксилин, введенный в микротехнику Вальдейером в 1882 году, положил начало разработке ценнейших методов окраски. Первый рецепт квасцового гематоксилина был предложен Бемером в 1865 году. И в XX веке стал главным красителем, применяемым для окраски ядер клеток.
Химические свойства гематоксилина
Гематоксилин представляет собой бесцветные или слабо окрашенные кристаллы сладкого вкуса, приобретающие под действием света, а также на воздухе красновато-желтую окраску. Гематоксилин малорастворим в холодной воде, но растворим в воде горячей (особенно в присутствии буры), этиловом спирте, глицерине, плохо растворим в диэтиловом эфире. Со щелочами дает растворы пурпурного цвета, который быстро переходит в синевато-фиолетовый, а затем в коричневый. Разбавленные кислоты на гематоксилин не действуют. Обладает свойствами кислотно-основного индикатора. Брутто-формула гематоксилина С16Н14О6 CAS 517-28-2, а наиболее часто встречающиеся синонимы: Haematoxylin, Hematoxylin, Natural Black 1, C.I. 75290, гидроксибразилин, оксибразилин.
Применение
Сам по себе гематоксилин не представляет пигмента, но при окислении гематоксилина чрезвычайно легко образует пигмент гематеин, который в свою очередь дает различные продукты более глубокого окисления, неприменимые для окрашивания. Все рецепты приготовления гематоксилина для окрашивания препаратов имеют своей целью превращение гематоксилина в гематеин. Но ни гематоксилин, ни гематеин не способны давать окрашивание без протрав, с которыми они образуют солеобразные соединения – лаки. В качестве протрав используют соли алюминия, железа, меди, хрома, молибдена, ванадия. Самыми распространенными протравами являются соединения алюминия (в виде алюмоаммонийных или алюмокалиевых квасцов) или железа (хлорид железа или железоаммонийный квасцы). Другие протравы используются гораздо реже и включают хромовые квасцы и фосфорновольфрамовую кислоту.
 
Гематоксилин Гематеин
Растворы гематоксилина
Существуют многочисленные способы приготовления красящих растворов из гематоксилина, хотя суть всех этих методов заключается в одном – его окислении.
Методы с железным гематоксилином
Существуют два метода окрашивания железным гематоксилином - регрессивный и прогрессивный. Первый основан на избыточном окрашивании и последующей дифференцировке путем отмывания в соответствующей жидкости; при этом соли железа вводят в раствор красителя либо обрабатывают ими срезы перед окрашиванием. Жидкость, служащая для дифференцировки, после окончания процедуры должна быть тщательно отмыта. Если она не отмыта, то продолжает действовать после достижения желательной степени дифференцировки и может испортить окраску.
В прогрессивном методе используют кислые растворы или избыток солей железа, что позволяет избежать переокрашивания.
К методам окрашивания с железным гематоксилином обычно относят:
Железный гематоксилин Брусси.
Железный гематоксилин Вейгерта.
Железный гематоксилин по Ясвоину.
Железный гематоксилин по Рего.
Железный триоксигематеин по Ганзену.
Окраска хлористожелезным гематоксилином по Геквисту.
Методы с квасцовыми гематоксилинами
Комплексы гематоксилина с солями алюминия обычно готовят, используя двойной сульфат аммония и алюминия или алюмо-аммониевые квасцы. Такие комплексы обычно называются квасцовым гематоксилином. Иногда вместо аммониевых используются калиевые или натриевые квасцы, причем результаты окрашивания не изменяются. Так как красящим началом является гематеин, а соли алюминия в отличие от солей трехвалентного железа не являются окислителями, растворы квасцового гематоксилина перед использованием необходимо окислить или дать им “вызреть”. Гематеин медленно образуется при пропускании пузырьков воздуха через растворы гематоксилина (для получения однородных результатов может понадобиться 3-4 недели), при выдерживании растворов в открытых сосудах в течение нескольких недель; гематеин образуется также в твердом красителе, хранящемся в открытом сосуде во влажной атмосфере. Большинство химических окислителей, таких, как перекиси, иодаты, перманганаты, перхлораты, окись ртути и соли трехвалентного железа, окисляют гематоксилин сразу, хотя некоторые из них действуют при нагревании.
Избирательность окраски ядер квасцовым гематоксилином возрастает в присутствии избытка солей алюминия или еще в кислых растворах.
К методам окрашивания с квасцовыми гематоксилинами обычно относят:
Кислый гемалаун Майера.
Двойная окраска гемалаун-эозином.
Квасцовый гематоксилин но Эрлиху.
Окраска гематоксилином Делафильда.
Окраска квасцовым гематоксилином по Ганзену.
Квасцовый гематоксилин по Карацци.
Также широкое распространение получили следующие методы:
Методика окраски срезов с дифференцировкой
Методика окраски гематоксилин-эозином на предметном стекле.
Методика проведения окраски парафиновых срезов гематоксилин-эозином по методу Бемера.
Методика окраски гематоксилин-эозином
Более подробно о вышеперечисленных методах можно прочитать тут.
Неоднократно предпринимались попытки отыскать более дешевую и удобную замену гематоксилину для применения в микроскопической технике. Предлагали использовать такие природные красители, как сок черники, черной смородины, синтетические красители (антоциан ВВ, феноцианин ТС, галлеин, бразилин, ализариновый синий S, целестиновый синий). Однако ни один из данных заменителей в настоящее время не смог полностью заменить гематоксилин. Во многом поэтому, на сегодняшний день, гематоксилин незаменим в научных исследованиях и лабораторной диагностике.
ЛИТЕРАТУРА
1. Волкова О.В. и Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. – М.: Медицина, 1971.
2. Кисели Дьердь. Практическая микротехника и гистохимия. - Будапешт: Изд. академии наук Венгрии, 1962. - С.111–113.
3. Коржевский Д. Э. Применение гематоксилина в гистологической технике. – Морфология. – 2007. – Т. 132. - №6. - С. 77 – 81.
4. Лавдовский М. Д. Основания к изучению микроскопической анатомии человека и животных. - СПб, 1887, 1888.
5. Лили Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. – М.: Мир, 1969. - С. 102 – 108, 157 – 167.
6. Меркулов Г. А. Курс патогистологической техники. - Л.: Медицина, 1969. - С. 156 – 165, 171 – 172.
7. Ромейс Б. Микроскопическая техника. – М.: Издательство иностранной литературы, 1954. - С. 143 – 152, 156 – 164.
8. Роскин Г. И. и Левинсон Л. Б. Микроскопическая техника. – М.: Советская наука, 1957. - С. 189–195, 301 – 304.
9. Сапожников А. Г., Доросевич А. Е. Гистологическая и микроскопическая техника. – Смоленск: САУ, 2000. - С. 137 – 147.
10. Саркисов Д. С. и Перов Ю.Л. Микроскопическая техника (руководство для врачей и лаборантов).- М.: Медицина, 1996.
11. Соболев Л. В. Основы патолого–гистологической техники. – СПб. :В. Безобразовъ и Ко, 1910.
12. Фрайштат Д. М. Реактивы и препараты для микроскопии. Справоч-ник. – М.,1980.
13. Шорманов С. В.Применение электромагнитного поля в приготовлении квасцового гематоксилина. – Морфология.–1998.-№6. - С.73-74. |
