Научная деятельность
Определены параметры эффективности первого года массового комбинированного скрининга хромосомных нарушений и врожденных пороков развития у плода в 1 триместре беременности. Рассчитаны чувствительность, специфичность внедренного алгоритма, процент ложно-положительных и ложноотрицательных результатов.
Рассчитаны показатели биохимического скрининга для популяции беременных женщин МО 1 триместра (11-13,6 недель): уровни медиан для сывороточных маркеров РАРР-А и свободной субъединицы β-ХГЧ, а также медианы МоМ при хромосомных аномалиях (синдромах Дауна, Эдвардса, Патау, Шерешевского-Тернера, триплоидиях).
Определены показания, преимущества и ограничения применения молекулярно-генетических и молекулярно-цитогенетических методов в пренатальном кариотипировании.
Разработаны новые тест-системы для исследования частых анеуплоидий методом КФ-ПЦР и для определения микроделеций в теломерных участках хромосом.
Параметры эффективности первого года массового комбинированного скрининга
По всем хромосомным аномалиям:
чувствительность – 88%
специфичность – 99%
ложноположительные результаты – 1%
По синдрому Дауна:
чувствительность – 78%
специфичность – 99%
ложноположительные результаты – 1%
Показатели биохимического скрининга для популяции беременных женщин Московской области в 1 триместре беременности (11-13,6 недель):
уровни медиан для сывороточных маркеров РАРР-А и свободной субъединицы β-ХГЧ.
Работа по правильному расчету риска ХА невозможна без использования собственных данных по уровню биохимических маркеров в крови в популяции обследуемых беременных. Был произведен расчет медиан значений РАРР-А и св. β-ХГЧ в популяции беременных женщин МО в 1 триместре (2011-2012 гг.). Они оказались, в среднем, на 29% и 22% выше, чем среднеевропейские, предоставленные производителями наборов для биохимического скрининга.
N
|
срок беременности
|
св субъед β-ХГЧ, МЕ/л
|
РАРР-А, МЕ/л
|
|
нед+дни
|
медиана
|
5%
|
95%
|
медиана
|
5%
|
95%
|
79
|
11+0
|
45,00
|
20,41
|
119,56
|
1,69
|
1,18
|
4,83
|
178
|
11+1
|
50,88
|
20,58
|
101,01
|
2,60
|
0,87
|
5,94
|
914
|
11+2
|
52,50
|
19,69
|
146,05
|
2,33
|
0,90
|
5,68
|
680
|
11+3
|
50,85
|
18,79
|
124,25
|
2,46
|
0,99
|
5,48
|
1086
|
11+4
|
47,90
|
17,23
|
126,00
|
2,62
|
1,04
|
6,30
|
1395
|
11+5
|
48,50
|
18,20
|
146,68
|
2,81
|
1,12
|
6,60
|
1715
|
11+6
|
45,97
|
18,17
|
128,12
|
2,94
|
1,16
|
7,24
|
1395
|
12+0
|
47,00
|
19,37
|
121,14
|
3,20
|
1,30
|
7,77
|
2267
|
12+1
|
45,20
|
17,31
|
119,68
|
3,39
|
1,29
|
8,06
|
2490
|
12+2
|
44,35
|
16,81
|
119,65
|
3,56
|
1,41
|
8,94
|
2613
|
12+3
|
42,50
|
17,35
|
113,36
|
3,74
|
1,42
|
9,07
|
2465
|
12+4
|
42,10
|
16,32
|
112,74
|
4,01
|
1,64
|
9,75
|
2674
|
12+5
|
40,38
|
16,96
|
106,50
|
4,23
|
1,67
|
10,11
|
2550
|
12+6
|
40,26
|
16,10
|
105,40
|
4,61
|
1,82
|
11,06
|
2350
|
13+0
|
38,40
|
15,00
|
108,50
|
4,98
|
1,92
|
12,24
|
2114
|
13+1
|
37,70
|
14,50
|
104,74
|
5,30
|
2,11
|
13,55
|
1733
|
13+2
|
35,60
|
14,14
|
97,16
|
5,66
|
2,31
|
13,35
|
1635
|
13+3
|
33,20
|
13,57
|
91,94
|
6,05
|
2,35
|
13,98
|
1324
|
13+4
|
34,75
|
14,02
|
96,37
|
6,24
|
2,44
|
14,54
|
1127
|
13+5
|
30,90
|
12,30
|
85,32
|
6,96
|
2,74
|
16,56
|
856
|
13+6
|
30,50
|
10,78
|
76,38
|
7,27
|
2,88
|
16,15
|
884
|
14+0
|
28,35
|
11,18
|
81,11
|
7,94
|
3,00
|
18,29
|
577
|
14+1
|
26,70
|
11,08
|
76,02
|
8,35
|
3,39
|
19,06
|
Рис.1. Сравнение медиан РАРР-А и св. β-ХГЧ в популяциях Европы и МО.  
Применение коммерческих программ для расчета индивидуального риска СД возможно только с обязательной постепенной заменой заложенных в программе базовых уровней сывороточных маркеров на собственные, полученные в лабораториях при исследовании популяции беременных женщин МО.
В ходе исследования была проведена 4-х кратная коррекция медиан в программе Astraia для последующего правильного расчета МоМ и значения риска (введение поправочного коэффициента). Медиана МоМ для РАРР-А составила 1,1, а медиана МоМ для св. β-ХГЧ 1,02 для всей популяции женщин с эуплоидными плодами ко второму полугодию 2012 г. Существенные сдвиги наблюдались в первое полугодие 2011 г. После корректировки медиан в программе «Астрайя» МоМ биохимических маркеров все более приближаются к единице. Они остаются все еще больше единицы вследствие накопления данных в начале работы. При дальнейшем накоплении данных и корректном проведении всех этапов скрининга МоМ должны все больше приближаться к единице
Рис.2 Замена заложенных в программе базовых уровней сывороточных маркеров на внутрилабораторные (популяция беременных женщин МО).
 РАРР-А lg MoM, 3000 образцов
 РАРР-А lg MoM, 36000 обр.
В ходе скрининга были рассчитаны средние уровни МоМ при наиболее часто встречающихся при скрининге ХА. Данные нашего исследования полностью совпадают с общемировыми данными. По этим показателям можно проводить оценку правильности проведения всего алгоритма скрининга.
Средние уровни МоМ у беременных женщин при хромосомных аномалиях у плода (2011-2012 гг.)
-
|
св. β-ХГЧ
|
РАРР-А
|
Без хромосомных аномалий
|
1,0
|
1,0
|
Синдром Дауна
|
1,9
|
0,6
|
Синдром Эдвардса
|
0,2
|
0,2
|
Синдром Патау
|
0,5
|
0,3
|
Синдром Шерешевского-Тернера
|
1,3
|
0,7
|
триплоидия
|
0,1
|
0,1
|
Оптимизация лабораторных методов инвазивной пренатальной диагностики хромосомой патологии.
В связи с введением программы массового скрининга ХА в лаборатории широко ведется работа по выявлению анеуплоидий по 5-ти хромосомам (21, 13, 18, X и Y) с применением разработанного в 2010 году метода количественной флуоресцентной полимеразной цепной реакции (КФ-ПЦР) – так называемого «быстрого метода», а также FISH исследований.
Сформированы показания для молекулярно-генетических методов в ПД:
Применение в качестве быстрого анализа:
для снятия тревоги ожидания анализа кариотипа;
для быстрого ответа в сроках 21-22 недели.
Применение в качестве дополнительного анализа:
при невозможности провести стандартное кариотипирование (отсутствие митозов, мало материала, некачественный материал, сложности в приготовлении препаратов);
для уточнения диагноза в сложных случаях и при мозаицизме
Определены преимущества и ограничения для применения метода КФ-ПЦР в пренатальном кариотипировании.
Основными преимуществами данного метода являются:
- скорость получения результатов;
- относительно невысокая стоимость, особенно при увеличении количества анализируемых образцов;
- возможность определить родительское происхождение случаев анеуплоидий.
Ограничения:
- возможная неинформативность применяемых STR-маркеров;
- трудности интерпретации результатов в случае мозаицизма или контаминации тканей плода материнским материалом;
- необходимость дополнительного исследования в случае обнаружения моносомии по хромосоме Х.
Доклады и выступления на международных конференциях:
Kalashnikova E.A., Andreeva E.N., Voskoboeva E.Yu., Odegova N.O., Tsvetkova T.G., Sudakova Е.V., Tokareva I.S., Kokarovtseva S.N., Serkova N.A., Lagkyeva F.K., Davydova O.N., Stepnova S.V., Zhuchenko L.A. Realization of the National project «Prenatal diagnosis of developmental failure of the child» in the Moscow State region. 11-й Конгресс по медицине плода, Кос, Греция, 24-28 июня 2012 г., постерный доклад.
Kalashnikova E.A., Kokarovtseva S.N., Serkova N.A. Biochemical screening as a part of combined screening for Down’s syndrome in the Moscow State region. 11-й Конгресс по медицине плода, Кос, Греция, 24-28 июня 2012 г., постерный доклад.
Voskoboeva E.Yu., Kalashnikova E.A., Tsvetkova T.G., Sudakova Е.V., Tokareva I.S., Davydova O.N., Kokarovtseva S.N. Prenatal diagnosis of aneuploidy by quantitative fluorescent PCR in Russia. 11-й Конгресс по медицине плода, Кос, Греция, 24-28 июня 2012 г., постерный доклад.
На Российских научных форумах:
Калашникова Е.А., Воскобоева Е.Ю. Новые аспекты пренатального кариотипирования при массовом скрининге хромосомных аномалий и врожденных пороков развития у плода в 1 триместре беременности. IX научная конференция «Генетика человека и патология: Актуальные проблемы современной цитогенетики», Томск 28 ноября 2011 г.
Калашникова Е.А. Возможности биохимического скрининга хромосомных аномалий плода с использованием программы Astraia. Санкт-Петербург, 17 мая 2012 г. V Всероссийская конференция с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт - основа профилактической медицины в век нанотехнологий», СПб 16-18 мая 2012 г.
Калашникова Е.А. Система контроля качества технологии массового пренатального скрининга 1 триместра беременности. «СОВРЕМЕННЫЕ ВЫСОКОРАЗРЕШАЮЩИЕ ТЕХНОЛОГИИ В МЕДИЦИНСКОЙ ГЕНЕТИКЕ: ТЕХНОЛОГИИ МАССОВОГО ОБСЛЕДОВАНИЯ» 6 – 7 декабря 2012 года, Москва
Голошубов П., Некрасова Е.С., Андреева Е.Н., Калашникова Е.А., Жученко Л.А. Методические рекомендации для пользователей программы «Астрайя». СОВРЕМЕННЫЕ ВЫСОКОРАЗРЕШАЮЩИЕ ТЕХНОЛОГИИ В МЕДИЦИНСКОЙ ГЕНЕТИКЕ: ТЕХНОЛОГИИ МАССОВОГО ОБСЛЕДОВАНИЯ» 6 – 7 декабря 2012 года, Москва
На региональных конференциях:
1-7. Жученко Л.А., Андреева Е.Н., Калашникова Е.А. Региональные конференции для руководителей окружных кабинетов пренатальной диагностики Московской области по аудиту алгоритмов массового неинвазивного пренатального скрининга беременных в сроках 11-13.6 недель беременности по формированию групп высокого риска хромосомных аномалий у плода. 18.02.2011, 05.03.2011, 01.04.2011, 06.10.2011 г., апрель, октябрь, декабрь 2012 г., МОНИИАГ).
Калашникова Е.А. Начало «пилотного» проекта по скринингу хромосомной патологии и МВПР у плода в I триместре беременности. г.Видное, 14.04.2011. целевой курс для акушеров-гинекологов и специалистов УЗД на кафедре генетики РМАПО.
Калашникова Е.А. Возможности лабораторных генетических методов исследования плодного материала, г. Балашиха, 28.04.2011. целевой курс для акушеров-гинекологов и специалистов УЗД на кафедре генетики РМАПО.
Калашникова Е.А. Биохимические маркеры и пренатальное кариотипирование при массовом скрининге хромосомных аномалий у плода в I триместре беременности в МО. Челябинск, 13 апреля 2012.
Печатные работы:
Никитина В. А., Воскобоева Е. Ю., Калашникова Е. А. Молекулярно-генетические методы пренатальной диагностики анеуплоидий. Российский Вестник акушера-гинеколога, 2009 г., Том 5., №5, С. 35-38.
Калашникова Е.А., Латыпов А.Ш., Андреева Е.Н., Цветкова Т.Г., Кокаровцева С.Н., Воскобоева Е.Ю. Диагностика контаминации плодного материала материнскими клетками и выявление трисомий в пренатальной диагностике методом количественной флуоресцентной ПЦР (КФ-ПЦР). Тез. докл. VI Съезда Российского общества медицинских генетиков, Ростов-на-Дону, 14-18 мая 2010 г., Мед. генетика 2010, Т. 8, № 5, приложение, С. 79.
Kalashnikova E.A., Voskoboeva E.Y., Kleina I.V., Andreeva E.N., Tsvetkova T.G., Klimenko I.S., Zhuchenko L.A., Latypov A.Sh. Prenatal diagnosis of a male fetus with de novo partial duplication of long arm of chromosome 7. Abstract for the 10th World Congress in Fetal Medicine, Malta, 26-30 June 2011, No 89, http://www.fetalmedicine.com
Voskoboeva E.Y., Kalashnikova E.A., Sudakova E.V., Lagkujeva F.K., Klimenko I.S., Andreeva E.N., Zhuchenko L.A., Odegova N.O. Prenatal diagnosis of a male fetus with maternal recombinant X chromosome. Abstract for the 10th World Congress in Fetal Medicine, Malta, 26-30 June 2011, No 90, http://www.fetalmedicine.com
Andreeva E.N., Odegova N.O., Zhuchenko L.A., Kalashnikova E.A. Fetal echocardiography at 11–14 weeks. Abstract for the 10th World Congress in Fetal Medicine, Malta, 26-30 June 2011, No 45, http://www.fetalmedicine.com
Andreeva E.N., Odegova N.O., Voskoboeva E.Y., Zhuchenko L.A., Kalashnikova E.A. Prenatal diagnosis of Meckel–Gruber syndrome (MGS). Abstract for the 10th World Congress in Fetal Medicine, Malta, 26-30 June 2011, No 47, http://www.fetalmedicine.com
Калашникова Е.А., Воскобоева Е.Ю., Клеина И.В., Андреева Е.Н., Цветкова Т.Г., Клименко И.С., Жученко Л.А., Латыпов А.Ш. Пренатальная диагностика хромосомной патологии у плода мужского пола с частичной дупликацией de novo длинного плеча 7 хромосомы. Тез. докл. IX научной конференции «Генетика человека и патология: Актуальные проблемы современной цитогенетики», Томск, 28-30 ноября 2011 г.. C. 79.
Воскобоева Е.Ю., Калашникова Е.А., Судакова Е.В., Лагкуева Ф.К., Клименко И.С., Андреева Е.Н., Жученко Л.А., Одегова Н.О. Пренатальная диагностика материнской рекомбинантной Х-хромосомы у плода мужского пола при скрининге нарушений развития ребенка в 1-м триместре беременности. Тез. докл. IX научной конференции «Генетика человека и патология: Актуальные проблемы современной цитогенетики», Томск, 28-30 ноября 2011 г.. C.73.
Калашникова Е.А., Жученко Л.А., Воскобоева Е.Ю., Андреева Е.Н., Одегова Н.О., Цветкова Т.Г., Судакова Е.В., Кокаровцева С.Н., Серкова Н.А., Лагкуева Ф.К., Токарева И.С., Давыдова О.Н., Степнова С.В.. Реализация мероприятий Национального проекта «Пренатальная (дородовая) диагностика нарушений развития ребенка» в Московской области. Тез. докл.V Всероссийской конференции с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт-основа профилактической медицины в век нанотехнологий», СПб 16-18 мая 2012 г., С. 46.
Воскобоева Е.Ю., Калашникова Е.А., Цветкова Т.Г., Судакова Е.В., Токарева И.С., Давыдова О.Н., Кокаровцева С.Н.. Пренатальная диагностика анеуплоидий с помощью количественной флуоресцентной ПЦР (КФ-ПЦР). Тез. докл.V Всероссийской конференции с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт-основа профилактической медицины в век нанотехнологий», СПб 16-18 мая 2012 г., С. 27.
Kalashnikova E.A., Andreeva E.N., Voskoboeva E.Yu., Odegova N.O., Tsvetkova T.G., Sudakova Е.V., Tokareva I.S., Kokarovtseva S.N., Serkova N.A., Lagkyeva F.K., Davydova O.N., Stepnova S.V., Zhuchenko L.A. Realization of the National project «Prenatal diagnosis of developmental failure of the child» in the Moscow State region. Abstract for the 11th World Congress in Fetal Medicine, Kos, 24-28 June 201, No 107, http://www.fetalmedicine.com/fmf/abstracts.pdf
Voskoboeva E.Yu., Kalashnikova E.A., Tsvetkova T.G., Sudakova Е.V., Tokareva I.S., Davydova O.N., Kokarovtseva S.N. Prenatal diagnosis of aneuploidy by quantitative fluorescent PCR in Russia. Abstract for the 11th World Congress in Fetal Medicine, Kos, 24-28 June 2012, No 106, http://www.fetalmedicine.com/fmf/abstracts.pdf
Kalashnikova E.A., Kokarovtseva S.N., Serkova N.A. Biochemical screening as a part of combined screening for Down’s syndrome in the Moscow State region. Abstract for the 11th World Congress in Fetal Medicine, Kos, 24-28 June 2012, No 108, http://www.fetalmedicine.com/fmf/abstracts.pdf
NO Odegova, EN Andreeva, FK Lagkueva, SV Stepnova, EA Kalashnikova, EU Voskoboeva, OA Efimushkina, SN Kokarovceva, NA Serkova, EV Sudakova, TG Cvetkova, IS Tokareva, LA Zhuchenko. Implementation of the national project “prenatal diagnostics of congenital fetal defects” in the Moscow region. Abstract for the 11th World Congress in Fetal Medicine, Kos, 24-28 June 2012, No 111. http://www.fetalmedicine.com/fmf/abstracts.pdf
Жученко Л.А., Андреева Е.Н., Калашникова Е.А. Методическое руководство пользователя программы “ASTRAIA”. В печати, 2013 г.
|
