Конденсированные бензимидазолы новый класс каппа-опиоидных агонистов
Скачать 0.74 Mb.
|
На правах рукописи ГРЕЧКО Олеся Юрьевна КОНДЕНСИРОВАННЫЕ БЕНЗИМИДАЗОЛЫ – НОВЫЙ КЛАСС КАППА-ОПИОИДНЫХ АГОНИСТОВ 14.03.06.- фармакология, клиническая фармакология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград, 2012 Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации. Научный консультант: Зав. кафедрой фармакологии ВолГМУ, Академик РАМН, Заслуженный деятель наук РФ, доктор медицинских наук, профессор СПАСОВ Александр Алексеевич Официальные оппоненты: Зав. кафедрой клинической фармакологии и доказательной медицины, зам. директора по научной работе Института им. Вальдмана ГОУ ВПО СПбГМУ им. И.П. Павлова, доктор медицинских наук, профессор ЗВАРТАУ Эдвин Эдуардович Зав. кафедрой фармакологии и клинической фармакологии Ростовского государственного медицинского университета доктор медицинских наук, профессор, МАКЛЯКОВ Юрий Степанович Зав. кафедрой фармакологии и биофармации ФУВ, Член-корр. РАМН, Заслуженный работник ВШ РФ, доктор медицинских наук, профессор ТЮРЕНКОВ Иван Николаевич Ведущая организация – НИИ Фармакологии им. В.В.Закусова РАМН, г. Москва Защита состоится «____»________________2012 г. в _____ ч. на заседании Диссертационного Совета Д 208.008.02 при ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации» Автореферат разослан «___» ____________ 2012 г. Ученый секретарь совета доктор медицинских наук, профессор А.Р.Бабаева ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Создание новых высокоэффективных опиоидных анальгетиков, лишенных серьезных побочных эффектов, характерных для типичных опиатов, остается одной из наиболее приоритетных и важных проблем современной фармакологии и медицины [Kivell B., 2010; Pasternak G.W., 2011]. Основными недостатками существующих морфиноподобных соединений являются респираторная депрессия, высокий наркогенный потенциал [Тюренков И.Н., Петров В.И., Звартау Э.Э., Игнатов Ю.Д.]. Для преодоления вышеуказанных проблем предложено несколько подходов, одним из которых является разработка опиоидных анальгетиков с более безопасным «рецепторным профилем», что позволит в значительной мере повысить эффективность и безопасность проводимой терапии [Игнатов Ю.Д., 2006; Воронина Т.А., 2010; Звартау Э.Э., 2011; Vanderah T., 2010; Lemos J., 2011]. С этой точки зрения каппа-селективные агонисты представляют перспективную группу веществ для создания новых конкурентно способных отечественных препаратов с оригинальным механизмом действия без риска развития респираторной депрессии и наркотической зависимости [Zvartau E., 2006; Спасов А.А., 2011]. Вместе с тем интерес к каппа-рецепторным лигандам выходит за рамки клинической проблемы боли [Ikeda Y., 2001; Harukuni I., 2006]. Каппа-селективные агонисты в течение ряда лет привлекают пристальное внимание фармакологов в качестве потенциальных церебропротекторных средств при ишемических, реперфузионных и травматических повреждениях мозга [Chen C.H., 2005; Петров В.И., 2007; Charron C., 2008]. Есть основания полагать, что стимуляция каппа-рецепторов может быть использована в недалеком будущем в качестве нового подхода к лечению эпилепсии [Loacker S., 2007; Pasternak G.W., 2011]. В настоящее время убедительно доказано, что каппа-опиоидная рецепторная система интегрирует эмоциональные компоненты беспокойства, тревоги, стресса и представляет интерес с точки зрения развития новой стратегии создания анксиолитиков нового типа [Серединин С.Б., 2011; Schwarzer C., 2011; Lemos J., 2011]. Изучение модуляции функциональной активности каппа-системы особенно важно, поскольку наряду с решением фундаментальных проблем способствует направленному синтезу препаратов, которые в перспективе смогут найти свое применение в анестезиологической и хирургической практике, травматологии, онкологии, неврологии. Известно, что большинство селективных каппа-опиоидных лигандов являются производными циклических азотсодержащих гетеросистем [Rusovici D.E. et al., 2004; Metcalf M.D., 2005 Prisinzano T.E., 2008; Carlezon W.J. et al., 2009] к которым относятся конденсированные бензимидазолы [Alamgir M., 2007]. Накоплен фактический материал, свидетельствующий о вовлечении каппа-опиоидных механизмов в реализацию нейротропных, периферических эффектов производных бензимидазола [Yamada Y., 2007; Yaeko T.O., 2011; Thomson Reuters Integrity, 2011]. В настоящее время идентифицированы ключевые фармакофорные элементы, контролирующие процесс лиганд-рецепторного взаимодействия с селективными каппа-агонистами, которые во многом схожи с таковыми конденсированных бензимидазолов [Pogozheva I.D. et al., 2008; Kane B.E., 2008]. Наряду с данными литературы, результаты предварительных исследований также свидетельствуют о каппа-опиоидной агонистической активности производных полициклических систем на основе бензимидазола [Гречко О.Ю., 2007]. Представленные факты послужили предпосылкой к поиску новых веществ с каппа-рецепторным профилем фармакологической активности среди данного класса химических соединений. Диссертационная работа выполнена в рамках Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники гражданского назначения» (№ государственной регистрации 01200116045). Тема утверждена на заседании Ученого Совета ВолгГМУ (протокол № 7 от 10 марта 2010 г.) и включена в план НИР. Целью исследования явился направленный поиск, изучение эффективности и механизма действия конденсированных безимидазолов, представителей нового класса каппа-опиоидных агонистов. Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:
Научная новизна исследования. Впервые доказано, что конденсированные бензимидазолы являются источником веществ с высокой каппа-опиоидной агонистической активностью и благоприятным профилем побочных эффектов. Впервые осуществлен целенаправленный поиск потенциальных лекарственных средств со свойствами селективных каппа-агонистов среди производных конденсированных бензимидазолов с учетом их влияния на р38MAPK, специфически ответственной за развитие каппа-опосредованной седации и дисфории. Проведен анализ зависимости между структурой, физико-химическими свойствами и функциональной активностью, в том числе с использованием компьютерных технологий, выявлены дескрипторы, определяющие значимые признаки высокого уровня каппа-рецепторной эффективности для класса новых замещенных конденсированных бензимидазолов. Впервые изучены анальгетические, нейропротекторные, противосудорожные, анксиолитические свойства наиболее перспективного аналога конденсированных бензимидазольных систем вещества под лабораторным шифром РУ-1203 с виртуально и экспериментально установленным каппа-рецепторным профилем фармакологической активности. Проведена комплексная доклиническая оценка фармакодинамики соединения РУ-1203, сочетающего в себе фармакологические свойства каппа-агониста и эффективного анальгетика, обладающего рядом преимуществ по сравнению с буторфанолом, не вызывающего респираторной депрессии, наркотической зависимости, аверсивных расстройств с перспективой создания на его основе каппа-селективного опиоидного анальгетика без аддиктивного потенциала. Научно-практическая значимость. Разработанная система направленного поиска и компьютерного прогноза высокоактивных соединений in silico и in vitro может явиться основой направленного конструирования in silico структурно новых каппа-опиоидных лигандов с потенциально высоким уровнем активности, сочетающих каппа-рецепторную селективность действия и свойства избирательных ингибиторов p38 MAPK. Результаты комплексной оценки значимых структурных и физико-химических признаков высокого уровня каппа-агонистической эффективности конденсированных бензимидазолов позволяют расширить представления о молекулярных фрагментах, ответственных за лиганд-рецепторное взаимодействие, и разработать рекомендации по направленному синтезу новых субстанций с заданным видом фармакологической активности. По результатам проведенных исследований получены два патента: Патент РФ № 2 413 512 (2011), Патент РФ № 2 412 187 (2011). Полученные данные об анальгетической эффективности, отсутствии специфических побочных эффектов, типичных для опиоидных соединений и известных каппа-агонистов, N9-замещенного имидазо[1,2-a]бензимидазола явились основанием для планирования его дальнейших расширенных доклинических химико-фармацевтичес-ких, фармакокинетических и токсикологических исследований. Реализация результатов исследования. Данные о каппа-агонистической активности соединений и результаты анализа влияния типа гетероциклической системы, заместителей и физико-химических параметров на уровень каппа-селективности конденсированных бензимидазолов используется при направленном синтезе новых веществ в НИИ Физической и Органической Химии Южного Федерального Университета (г. Ростов). В работе НИИ фармакологии ВолгГМУ, Волгоградского научного медицинского центра, кафедры фармакологии ВолгГМУ применяется комплексный подход для конструирования структур с высокой новизной и потенциально высоким уровнем каппа-агонистической активности, который включает методы 2D-, 3D-молекулярного моделирования, докинг в сайты связывания 3D-моделей биомишеней и экспериментальную проверку перспективных по данным прогноза веществ. Результаты работы включены в лекционные курсы на кафедрах фармакологии и биофармации ФУВ ВолгГМУ, кафедре фармацевтической химии ВолГМУ, на кафедрах фармакологии Саратовского, Ростовского медицинских университетов. Положения, выносимые на защиту.
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на III съезде Фармакологов России (Санкт-Петербург, 2007) на VII Всероссийской научной конференции «Химия и медицина, ОРХИМЕД-2009» (Уфа, 2009), на 56-й региональной научно-практической конференции «Инновационные достижения фундаментальных и прикладных медицинских исследований в развитии здравоохранения Волгоградской области» (Волгоград, 2010), на II Международном Конгресс-Партнеринге и Выставке по биотехнологии и биоэнергетике «ЕвразияБио-2010» (Москва, 2010) на XIV, XVII, XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007, 2010, 2011), на 5th International Conference “Biological Basis of Individual Sensitivity to Psychotropic Drugs” (Moscow, 2010), на III Всероссийском научно-практическом семинаре «Методологические аспекты экспериментальной и клинической фармакологии» (Волгоград, 2011) на 11th European College of Neuropsychopharmacology (ECNP) Regional Meeting (St. Petersburg, 2011). Публикации. По теме диссертации опубликовано 32 печатных работы, в том числе 14 статей в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, получено 2 патента на изобретения. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 296 страницах машинописного текста, иллюстрирована 44 таблицами, 26 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (глава I), экспериментальной части (главы II-IV), обсуждения результатов, выводов и приложения. Список литературы включает 468 отечественных и иностранных источников. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объектами исследования являлись конденсированные производные полициклических систем на основе бензимидазола, синтезированных в НИИ физической и органической химии Южного Федерального Университета (НИИ ФОХ ЮФУ, Ростов-на-Дону) ведущим н.с., к.х.н. Анисимовой В.А.1, которые представлены следующими классами химических соединений: 1Н-бензимидазолы; N9-замещенные имидазо[1,2-a]бенз-имидазолы; N1-замещенные имидазо[1,2-a]бензимидазолы; N9-замещенные 2,3-ди-гидроимидазо[1,2-a]бензимидазолы, N1-замещенные 2,3-дигидроимидазо[1,2-a]бенз-имидазолы; N1,N9-замещенные 2,3-дигидроимидазо[1,2-a]бензимидазолы; 2,3,4,10-тетрагидропиримидо[1,2 a]бензимидазолы; пиразоло[1,5-a]бензимидазолы. В экспериментах in vitro и in vivo использовались морфина гидрохлорид (ОАО «Московская фармацевтическая фабрика», Россия), буторфанола тартрат («ОАО «Московская фармацевтическая фабрика», Россия), U50,488 («SIGMA», США), норбиналторфимин (norBNI) («SIGMA», США), налоксон (ОАО «Московская фармацевтическая фабрика», Россия), формалин («Биомед», Россия), уксусная кислота («Реахимсервис», Россия), галоперидол («Gedeon Richter», Венгрия), апоморфина гидрохлорид («ICN Biomedical», США), 5-гидрокситриптофан (5-ГТФ) («Sigma», США), L-3,4-диоксифенилаланин (L-ДОФА) («Sigma», США), клофелин («Биомед», Россия), резерпин («Sigma», США), ареколин («Sigma», США), никотин («Sigma», США), пикротоксин («ICN Biomedical», США). Исследования проводились на 1890 нелинейных половозрелых белых мышах- самцах массой 20-25 г, 694 самцах нелинейных белых крыс массой 200-250 г, 35 самцах-кроликах массой 3-4 кг, содержащихся в условиях вивария (температура 22-24С, относительная влажность воздуха 40-50%) с естественным световым режимом на стандартной диете лабораторных животных в соответствии с ГОСТ Р 50258 92 [1993], с соблюдением правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ, регламентированных ГОСТ Р 51000.3 96 [1996] и ГОСТ Р 51000.4 96 [1996], а также правил и Международных рекомендаций «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» [The European Convention …, 2007]. Протокол экспериментальной части исследования согласован с Региональным этическим комитетом (Протокол №109-2010 от 29 января). Поиск соединений с каппа-опиоидной агонистической активностью среди производных конденсированных бензимидазолов проводился in vitro на тромбоцитах кролика в солевой среде (трис-HCl буфер, рН 7,4) с использованием техники малоуглового светорассеяния («Лайт-Скан», «Люмекс ЛТД», Россия) на модели активации тромбоцитов [Э.Ф. Дергачев, 1998]. Для наиболее перспективных веществ изучались концентрационные зависимости каппа-агонистического эффекта с определением величины ЕК50. Острая токсичность определялась на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-22 г при внутрибрюшинном введении. Величину токсикологического показателя ЛД50 рассчитывали по методу Личфилда-Вилкоксона. В качестве интегрального показателя условной широты терапевтического действия использовался условный терапевтический индекс соединений, который рассчитывался как отношение ЛД50 к EК50. Анализ зависимости между каппа-агонистической активностью и химической структурой производных бензимидазола проводился с применением методов теории распознавания образов [Горелик, 1984]. Для выявления QSAR-закономерностей использовались подструктурный анализ, частотная оценка влияния физико-химических параметров соединений. Кластеризация каппа-агонистической активности осуществлялась с применением двух методов: вероятностного гистограмм и геометрического расстояний [Мандель, 1988]. Показатели липофильности молекул вычислялись с использованием различных схем фрагментного приближения [Broto, 1984; Ghose, 1987; Viswanadhan, 1989]. Cтерические параметры оценивались по классической аддитивной схеме в различных модификациях [Иоффе, 1983; Ghose, 1987; Viswanadhan, 1989]. Вычисление электронных характеристик проводилось по методу AM1 [Dewar, 1985; Минкин, 1997] с предварительной оптимизацией конформации методом молекулярной механики MM2 [Буркерт, 1986; Кларк, 1990]2. Исследования специфической активности проводились в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [ред. – Р.У. Хабриев, 2005], где дано подробное описание используемых в работе методов. Болевая чувствительность животных оценивалась в батарее тестов in vivo c использованием стандартных моделей ноцицептивных реакций: отдергивания хвоста при действии сфокусированного теплового пучка (установка 602000-TF-AD-MR-01 фирмы TSE-system, Германия), горячей воды (54 ̊С) [D’Amor., 1941], горячей пластины [Kitchen I., 1985, Tjolsen A., 1991], «вокализации» [Carrol N., Lim P.K., 1960], Гаффнера [Haffner F., 1929; Bianchi C., 1957], Рандалл-Селитто [Randall L., Selitto J.J., 1957], формалиновой гипералгезии [Dubuisson , 1977, Abbot, 1995], уксусных корчей [Koster R., 1977]. Исследуемые вещества изучались в диапазоне доз 0,001-10,0 мг/кг при внутрибрюшинном введении. Для подтверждения специфичности опиоидного характера действия выполнялись тесты с налоксоном (10 мг/кг, п/к). Определялись показатели: анальгетической эффективности (кривая зависимости доза-эффект, ЕД50); условный терапевтический индекс; длительность анальгезии (кривая зависимости время-эффект) оценивалась по методу А.В. Древаль (1985) с определением показателей площади под кривой «время-эффект», рассчитанных по правилу трапеций. Для изучения цереброваскулярной активности использовалась модель глобальной ишемии головного мозга по Мирзоян Р.С. (2005). Регистрацию локального мозгового кровотока в теменной области коры головного мозга крыс проводили на ультразвуковом допплерографе ММ-Д-К (Санкт-Петербург, Россия) с применением рабочей компьютерной программы ММ-Д-К-Minimax Doppler v.1.5. Хроническая цереброваскулярная недостаточность моделировалась согласно Мирзоян Р.С., 2005 и оценивалась по методу Ахапкиной В.И., Ворониной Т.А., 2006 с применением международной шкалы NDS (Neurological Deficit Score) [Zhang Z., 2003]. Противосудорожное действие исследовалось в тестах максимального электрошока [White, 1992], антагонизма с коразолом [Swinyard, 1969], а также при моделировании хронической эпилепсии с использованием классической методики киндлинг прогрессии [Воронина Т.А., 2005; Loaker S., 2007]. Изучение анксиолитической активности проводилось на стандартных моделях анксиогенеза: в тестах «открытое поле» [Lister, 1987], «приподнятый крестообразный лабиринт» [Воронина Т.А., Серединин С.Б., 2005], конфликтной ситуации «наказуемого взятия воды» [Vogel, 1983]. Детальная оценка механизма действия осуществлялась in silico с использованием метода сходства к эталонам [Molecular Similarity ..., 1995]. В качестве препаратов-стандартов были выбраны каппа-селективный агонист U50,488, а также избирательные ингибиторы α p38 MAPK-киназы SB203580, SB216995, SB220025. Расчеты выполнялись с помощью программы HyperChem 7 (Evaluation Copy). Докинг веществ в сайты связывания каппа-опиоидного рецептора и каталитического домена α p38 MAPK-киназы (14) проводился с использованием программного пакета AutoDock Vina 1.1.1 [AutoDock Vina, 2010] в комплекте с дополнительными инструментами AutoDock Tools и PyMol [Trott O, 2010] на имеющемся в ВолгГМУ 24-х ядерном вычислительном кластере общей производительностью 190 Гфлопс. Каппа-рецепторный механизм действия оценивался в экспериментах in vitro в соответствии с методикой [Oka T., 1980; Hayes A., 1985], влияние веществ на мю-, дельта-рецепторы изучалось на модели [Coupar I.M., 1996]. Регистрация биологического ответа производилась с использованием комплекса аппаратуры для работы на изолированных органах и тканях лабораторных животных UGO BASILE (Италия). Для подтверждения каппа-опиоидного характера действия веществ выполнялись тесты с селективным каппа-антагонистом norBNI. Регистрация трансмембранных натриевых, кальциевых ионных токов нейронов прудовика осуществлялась с помощью метода внутриклеточного диализа и фиксации мембранного потенциала [Вислобоков А.И., Игнатов Ю.Д. и др., 2006]3. Оценка специфичности опиоидного механизма действия проводилась с использованием антагониста опиоидных рецепторов налоксона на моделях экспериментальной патологии in vivo в тестах «вокализации», «максимального электрошока», «наказуемого взятия воды» [Булаев В.М., Коробов Н.В., 2005]. Изучение нейрохимического профиля осуществлялось в соответствии с методиками, основанными на взаимодействии с основными нейромедиаторными системами мозга [Андреева Н.И., 2005]. Для оценки возможных морфиноподобных побочных эффектов регистрировалось число дыхательных движений в минуту у бодрствующих мышей [Булаев В.М., Коробов Н.В., 2005]. Налоксон-индуцированный синдром отмены изучался на моделях острой физической зависимости по методу Воронина Т.А., 2005, и зависимости при субхроническом введении веществ по методу Mamiya T., 2001. Антиноцицептивная толерантность оценивалась в тесте уксусных «корчей» [Булаев В.М., 2005]. С целью выявления/исключения каппа-опосредованных аверсивных реакций использовались методики условнорефлекторной реакции избегания места [Звартау Э.Э., 2005; Bruchas M.R., 2007], принудительного «неизбегаемого плавания» [Porsolt R.D., 1977; McLaughlin J.P., 2003]. Возможное развитие седации проводилось с оценкой локомоторной активности животных с использованием актометра (UGO BASILE, Италия), в тестах «открытое поле», «удержания на вращающемся стержне» [Воронина Т.А., 2005]. Нейротоксикологический профиль изучался с применением схемы многотестового наблюдения по Ирвину [Irwin S., 1964]. Статистическая обработка данных проводилась с помощью стандартных пакетов статистических программ Statistica 6,0 (StatSoft, Inc., США), Microsoft Office Excel 2003 (Microsoft, США) с использованием непараметрического метода сравнения независимых групп Манна-Уитни (U-test), точного критерия Фишера для альтернативных реакций, рангового однофакторного анализа Крускала-Уоллиса. Показатели ЭК50, ЭД50 рассчитывались методом наименьших квадратов. Уровень значимости p<0,05. |
Добавить документ в свой блог или на сайт
Похожие:
 | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Драться я не хотел. Второй день в новом классе. Новый район (мы только что получили квартиру), новая школа, новый класс | | Календарно-тематическое планирование по умк афанасьевой О. В., Михеевой... «Новый курс английского языка для российских школ. 8 класс», учитель: Красикова Н. С, 3 часа в неделю |
| Итогов успеваемости по предмету «испанский язык» Во 2-ой четверти... Новый лексический материал по теме «Моя школа, мой класс», «Новый год, Рождество, Короли-Волшебники» освоен полностью | | Календарно-тематическое планирование по умк афанасьевой О. В., Михеевой... «Новый курс английского языка для российских школ. 9 класс», учитель: Красикова Н. С |
| Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Под Новый год, под Новый год Мечта и быль встречаются. Под Новый год, под Новый год Чудеса случаются | | Я решила написать урок (по просьбам трудящихся) по созданию фигурной... Итак, начнем. Создаем документ нужного размера (Новый-Файл-Новый выставляем параметры и ок). Можно сразу добавить новый слой |
| Ответственность адвоката перед подзащитным за ненадлежащее исполнение обязанностей Вступил в силу не только новый упк рф, но и новый Федеральный закон от 31 мая 2002 г. N 63-фз «Об адвокатской деятельности и адвокатуре... | | Урок 5 Слои в Photoshop Скопируете фрагмент изображения, потом вставите его на рисунок и обнаружите, что вставился он не на тот же слой, а на новый. Или... |
| Новый рационализм новый научный дух Разработка нормативной документации, программа по элективным курсам и курсам по выбору учащихся, компьютерной базы | | Поколение геймеров компьютерных фанатов: новый тип людей или новый тип психопатологии? Этот вопрос еще требует изучения со стороны психологической науки |
| Российской Федерации Негосударственное образовательное учреждение... Вильде Т. Н., канд пед наук, зав кафедрой дизайна и изобразительных искусств ноу впо «Новый гуманитарный институт» Евстифеева М.... | | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Новый учебный базисный план: предмет биология, 6 класс – 34 часа. 1 час в неделю |
 | Анализ работы школьного методического объединения учителей начальных... В мбоу сош с. Новый Артаул учителей работают 6 учителей. Из них имеют высшее образование – Высшую квалификационную категорию имеют... | | Новый Закон «Об образовании» Новый Закон «Об образовании» запретит школьным учителям «натаскивать» своих учеников |
| Тема урока : Западная Европа: новый этап развития Показать, что Европа к 15-16вв вступила в новый период развития, связанный с возникновением мануфактурного производства, изменением... | | Аннотация к рабочей программе по Основам безопасности жизнедеятельности Рабочая программа составлена на основании «Программы для общеобразовательных учреждений. Новый образовательный стандарт. Обж 5-11... |
