Исследование in vivo Влияние различных доз препарата «ga-40» на накопление антитело образующих клеток (аок)

СОДЕРЖАНИЕ Список сокращений 4 I. Исследование иммунотропной активности GA-40 5-24 1. Исследование in vivo 1.1. Влияние различных доз препарата «GA-40» на накопление антитело образующих клеток (АОК) и массу и клеточностьезенки у мышей 5 1.2. Влияние различных доз препарата «GA-40» на реакцию ги­пер­чувс­твительности замедленного типа (ГЗТ) у мышей 6 1.3. Влияние различных доз препарата «GA-40» на фагоцитарную и бак­те­ри­цидную активность клеток перитонеального экссудата мышей 7 2. Исследование in vitro 2.1 Оценка люминолзависимой и люцигенинзависимой хемил­юми­нес­ценции нейтрофилов человека под влиянием препарата «GA-40» 10 2.2 Влияние различных доз препарата «GA-40» на цитотоксическую ак­тивность NK-клеток периферической крови человека 12 2.3 Влияние различных доз препарата «GA-40» на пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови человека 14 2.4 Влияние различных доз препарата «GA-40» на продукцию ци­то­ки­нов мононуклеарными клетками периферической крови человека 17 Обсуждение результатов 21 Выводы 23 II. Оценка иммунотоксическго действия «GA-40» 25-37 1. Определение массы и клеточности органов иммунной системы 25 2. Определение фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов 26 3. Определение активности нейтрофилов в тесте хемилюминесценции 26 Влияние «GA-40» на гуморальный иммунитет 28 Влияние «GA-40» на клеточный иммунитет 29 Выводы 31 III Оценка аллергизирующих свойств «СА-40» 38-43 1. Изучение аллергизирующих свойств «GA-40» 38 2. Оценка анафилактической активности «GA-40» 39 3. Влияние «GA-40» на конканавалин А-индуцированную реакцию воспаления 40 4. Реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). 41 5. Заключение 42 IV. Изучение мутагенной активности «GA-40» 43-52 V. Изучение репродуктивной токсичности препарата СА-40 53-72 VI. Исследование клеточных и молекулярных механизмов действия пре­па­ра­та GA-40 73-88 VII Определение общетоксического действия GA-40 в хроническом эксперименте 89-115 VIII. Заключение 116-117 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ FACS - fluorescence activated cells sorter (проточный цитофлуориметр) АОК - антителообразующие клетки ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа ДМСО - диметилсульфоксид ИМ - индекс модуляции ИФН-гамма - интерферон гамма ЛПС - липополисахарид МНК - мононуклеарные клетки ПКС - полная культуральная среда ФГА - фитогемаглютинин ФИТЦ - флюоресцеина изотиоцианат ФНО-альфа - фактор некроза опухолей-альфа ФСБ - фосфатно-солевой буфер ХЛ - хемилюминисценция ЭБ - эритроциты барана ЯСК - ядросодержащие клетки «Исследование иммунотропной активности препарата GА-40». 1. Исследование vivo Исследование проведено на мышах-гибридах (CBAхC57B1/6)F1 с массой тела 22,3+0,4 грамма. 1.1 Влияние различных доз препарата «GA-40» на накопление анти­телообразующих клеток (АОК) и массу и клеточность селезенки у мышей Материалы и методы Препарат разводили водой для инъекций (растворитель) и в объеме 200 мкл, в дозах 0,04, 0,4 и 4 мкг (что соответствует 2, 20 и 200 мкг/кг) вводили мышам подкожно за 3 часа до иммунизации их эритроцитами барана в дозе 5x106 в/бр в объеме 500 мкл. Контрольным животным вместо препарата вводили воду для инъекций и также иммунизировали их ЭБ. Формировали, таким образом, 4 группы по 10 мышей. На 4 сутки методом локального гемолиза в геле агарозы определяли количество антителообразующих клеток в селезенках. Оценивали также массу селезенок и подсчитывали количество ядросодержащих клеток (ЯСК) в них. Результаты выражали в виде числа АОК на селезенку, на 1 миллион ЯСК селезенки и виде индекса модуляции (ИМ) иммунного ответа по сравнению с контрольной группой. Результаты Установлено, что введение препарата GA-40 мышам не приводит к изменению показателей массы и клеточности селезенки по сравнению с контрольными животными (табл.1). Таблица 1. Показатели массы тела, селезенки, количества ядросодержащих клеток у иммунизированных мышей, получавших GA-40 (M±sd). Обработка животных Масса тела (г) Масса селезенки (г) Ядросодержащие клетки, млн/селезенку Препарат Антиген Вода для инъекций + ЭБ 23,4±0,45 0,768±0,02 221±9,9 GA-40, мкг/мл 0,04 + ЭБ 23,6± 0,58 0,828±0,03 221±7,6 0,4 + ЭБ 23,6±0,39 0,809±0,02 241+6,1 4 + ЭБ 22,6±0,40 0,786+0,02 223±6,8 В дозах 0,4 и 4 мкг на мышь введение препарата приводит к выраженной стимуляции гуморального иммунного ответа. Количество АОК увеличивается более чем в два раза. Даже в минимальной дозе (0,04 мкг/мышь) препарат вызвал достоверное, полуторократное увеличение числа АОК (табл.2). Максимальный эффект наблюдался при использовании дозы 0,4 мкг/мышь. Результаты пересчета АОК на количества ядросодержащих клеток в селезенке свидетельствуют, что полученный иммуностимулирующий эффект реализуется не за счет увеличения числа ЯСК в селезенках, а за счет увеличения в них количества активных антителопродуцентов. Таблица 2. Влияние препарата GA-40 на накопление антителообразующих клеток у мышей. Обработка животных Количество антителообразующих клеток на селезенку, (М±sd) Количество антителообразующих клеток на млн ядросодержащих клеток селезенки, (М±sd) Препарат Антиген абсолютное Индекс модуляции абсолютное Вода для инъекций + ЭБ 583±118 1,00 ±0,18 2,6 + 0,48 GA-40, м кг/мл 0,04 + ЭБ 920 ±126 1,47 ±0,24* 3,8 ± 0,62* 0,4 + ЭБ 1510± 199 2,43 ± 0,37* 5,8 ±0,88* 4 + ЭБ 1136+130 2,04 ± 0,22* 5,3 ± 0,58* * - достоверные отличия по сравнению с контрольной группой, р<0,05. 1.2 Влияние различных доз препарата «GА-40» на реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) у мышей Материалы и методы Препарат вводили в объеме 200 мкл, в дозах 0,04, 0,4 и 4 мкг на мышь. Животным контрольной группы вводили вместо препарата 200 мкл растворителя (вода для инъекций). Мышей иммунизировали подкожно (в холку) эритроцитами барана (ЭБ) в дозе 2x108 через 3 часа после подкожного введения препарата. На 5 сутки в левую («опытную») лапку мышей опытных и контрольной группы проводили разрешающую инъекцию антигена (ЭБ) в дозе 1x108 в объеме 50 мкл. В другую лапку («контрольная») в том же объеме вводили физиологический раствор. Разрешающей инъекции были подвергнуты также не иммунизированные, но получавшие растворитель мыши (отрицательный контроль реакции). Через 24 часа регистрировали ответ путем определения массы «опытной» и «контрольной» лап. Индекс реакции выражали в процентах прироста массы лапки, в которую вводили ЭБ, по отношению к массе «контрольной» лапки. Результаты Полученные результаты свидетельствуют, что GA-40 не влияет на выраженность ГЗТ к эритроцитам барана (табл.3). Таблица 3. Влияние препарата «GA-40» на реакцию гиперчувствительности замедленного типа к эритроцитам барана у мышей. Обработка животных Масса тела (г) Масса опытной лапы (мг) Масса контрольной лапы (мг) Индекс реакции Препарат Антиген - Физ. раствор 24,3+0,43 127,6+2,49 135,7+2,84 6,38±1,36 Вода для инъекций (Контроль) +ЭБ 22,6+0,70 123,4+2,80 154,8+1,46 25,38±2,23 GA-40, мкг/мышь 0,04 +ЭБ 25,1+1,32 124,0±4,47 151,9±5,36 22,7+1,98 0,4 +ЭБ 23,2+0,49 124,0+2,52 153,4±3,69 23,79±2,38 4 +ЭБ 23,8+0,50 125,6+2,98 159,7+4,28 27,16±1,75

Похожие:

	Диссертации: “Анализ разнообразия антитело-образующих клеток в иммунном ответе на овальбумин” Высшее образование: биолог, специальность “Микробиология” 1989, Биологический факультет мгу им. М. В. Ломоносова, Москва		Перечень научно-исследовательских, опытно-конструкторских и технологических... Изучение закономерностей дифференцировки стволовых и прогениторных клеток из различных источников в условиях in vitro и in vivo и...
	Перечень электронных образовательных ресурсов, разработанных учителем... Увеличительные приборы. Строение светового микроскопа и правила работы с ним. Лабораторная работа «Приготовление препарата клеток...		Отчет о результатах клинического исследования, проведеного по ограниченной... «Открытое исследование по изучению эффективности и переносимости препарата лома люкс псориаз, раствор для внутреннего применения...
	«Влияние различных веществ на рост и развитие растений» Целью исследования является накопление и обработка данных о влиянии солей тяжёлых металлов на рост и развитие растений, а так же...		Жцк g1-рост, синтез (2n2c), s-репликация ДНК (2n4c), G2-накопление... Методы иссл. In vivo (вживл камер), in vitro (культуры тканей, культивир гиб-ридизация), прижизн окрашив, гист препараты (срез, пленка,...
	Влияние микрогравитации на межклеточное взаимодействие иммунокомпетентных...		Влияние антиоксидантного витаминного препарата на нарушения обмена... Работа выполнена на кафедре биологической химии гбоу впо «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения...
	Исследовательская работа по физике на тему: Звук. Влияние звука на... Целью семинара является обсуждение и проработка лучших мировых практик и современных моделей реализации проектного подхода в инженерном...		Реферат по теме: «Вселенная: происхождение и исследование» Вселенную до конца изучить невозможно. Во Вселенной насчитывается миллиарды галактик, образующих сгущения, слои и цепочки, разделённые...
	Биологические науки влияние условий культивирования и фазы роста... Геологическая съемка, поиски и разведка месторождений твердых полезных ископаемых		Тематическое планирование уроков музыки по курсу «Музыкальная культура Тверского края» 8 класс Знание: 1- влияние различных предпосылок на формирование особенностей и культурных тра диций народов Верхневолжья с VII –iх в.: (Образование...
	Способ криосохранения клеток морских беспозвоночных Дмсо. Способ позволяет повысить степень сохранности клеток морских беспозвоночных без нарушения их функциональной активности после...		Реферат по проекту «Исследование языковой компетенции и «языкового самоощущения» «Исследование языковой компетенции и «языкового самоощущения» различных слоев российского общества»рук. Л. А. Вербицкая
	Современные подходы в лечении диабета 2 типа Основным преимуществом инкретинов перед устаревшими стимуляторами инсулиновой секреции является их положительное влияние на численность...		Исследование цветовой гаммы исследование естественного освещения... Исследование процентного соотношения кабинетов с люминесцентными и электрическими лампами