Глава 4 Создание модели для поиска нарушения механизмов антимикробной защиты микроорганизма, основанной на изучении взаимодействия нейтрофилов и бактерий выделенных у одного пациента
Для поиска индивидуальных причин нарушения механизмов врожденного иммунитета была создана модель in vitro, иммитирующая процесс фагоцитоза у исследуемых пациентов. Для чего из периферической крови выделялись нейтрофилы, для выделения бактериальных штаммов использовался различных материал в зависимости от локализации гнойного процесса (кровь, гнойное отделяемое, содержимое лакун миндалин, пунктат). Схематично модель для поиска нарушения механизмов фагоцитоза изображена на схеме 1.
 
Схема 1 - Модель для поиска нарушения механизмов фагоцитоза.
Глава 5 Оценка изменения эффективности фагоцитарных функций в динамике инфекционного заболевания в разные сроки инфекционного заболевания на фоне проводимой стандартной комплексной терапии
При сравнении фагоцитарных показателей больных разных групп выявлено, что эти параметры неспецифического иммунитета достоверно ниже (р<0,05) (таблицы 46-50). Показатели фагоцитоза имели положительную динамику и к периоду реконвалесценции в группах больных с одонтогенными флегмонами 2 клетчаточного пространства, пациентов с ягодичными абсцессами были близки к норме.
Таблица 46 - Фагоцитарная активность нейтрофилов больных с фолликулярной и лакунарной ангиной в динамике инфекционного заболевания (x±m).
Нейтрофилы
периферической крови
|
Число пациентов
|
% фагоцитировавших клеток
|
% выживиших бактерий после фагоцитоза
|
1*
|
2
|
5
|
7
|
1
|
2
|
5
|
7
|
Больные с фолликулярной ангиной
|
40
|
29,01
±1,0
|
29,51
±1,5
|
30,01
±2,0
|
36,02
±1,0
|
15,51
±1,0
|
13,51
±1,0
|
9,51
±1,0
|
7,52
±0,5
|
Больные с лакунарной ангиной
|
35
|
24,01
±1,5
|
29,01,2
±1,5
|
29,01
±2,0
|
34,02
±2,0
|
17,51
±0,7
|
15,51
±1,0
|
10,51
±1,0
|
8,5
±1,0
|
Здоровые доноры
|
30
|
38,0
±2,0
|
-
|
-
|
-
|
5,0
±1,5
|
-
|
-
|
-
|
*- дни пребывания в стационаре
1-p<0,01 – относительно показателей здоровых доноров
2- p<0,05 – относительно показателей предыдущего периода измерения (сутки).
В группах больных с более тяжелыми распространенными гнойными заболеваниями эффективность внутриклеточного киллинга достоверно ниже нормы (р<0,05) (таблицы 46-50). Так как радикалы, продуцируемые нейтрофилами являются одним из основных механизмов борьбы с патогенами, представляло интерес изучение эффективности фагоцитоза. Обнаружено, что, несмотря на высокий уровень продукции супероксида нейтрофилами и высокое содержание оксида азота в плазме крови больных в острый период болезни, количество фагоцитирующих клеток и эффективность внутриклеточного киллинга значительно снижены, особенно в группах больных с более глубокой распространенностью гнойно-воспалительного процесса (таблицы 46-50). При поиске причин функциональной недостаточности нейтрофилов было изучено распределение радикалов вне- и внутри клетки. Доля внутриклеточных активных форм кислорода оказалась снижена в нейтрофилах больных по сравнению со здоровыми (рисунок 4) (p<0,05).
Таблица 47 - Фагоцитарные показатели нейтрофилов периферической крови больных с одонтогенными околочелюстными флегмонами (x±m).
Нейтрофилы периферической крови
|
Число больных
|
% фагоцитирующих
клеток
|
% выживших бактерий после фагоцитоза
|
1*
|
2
|
5
|
7
|
14
|
1*
|
2
|
5
|
7
|
14
|
Флегмоны 1 клетчаточного пространства
|
32
|
30,5
±1,51
|
32,0
±1,21
|
35,0
±1,52
|
35,0
±3,0
|
37,0
±1,0
|
17,0
±1,51
|
13,0
±1,51,3
|
11,0
±1,01
|
8,5
±1,51
|
6,0
±1,0
|
Флегмоны 2 клетчаточных пространств
|
15
|
27,0
±1,01
|
27,5
±1,31
|
29,0
±1,51
|
29,5
±2,01
|
30,0
±1,01
|
20,0
±1,01
|
14,0
±1,01
|
13,0
±1,51
|
9,5
±1,01
|
8,0
±1,51
|
Флегмоны 3 и более клетчаточных пространств
|
9
|
21,0
±2,01
|
22,5
±2,01
|
24,0
±1,01
|
27,4
±1,51,4
|
28,0
±1,01
|
24,0
±3,01
|
22,0
±1,51
|
16,0
±1,01,3
|
13,5
±1,61
|
10,0
±1,51
|
Здоровые доноры
|
30
|
38,0
±2,5
|
-
|
-
|
-
|
-
|
5,0
±0,6
|
-
|
-
|
-
|
-
|
*- дни пребывания в стационаре
1-p<0,01, 2- p<0,05 – относительно показателей здоровых доноров
3- p<0,01, 4- p<0,05 – относительно показателей предыдущего периода измерения (сутки).
Таблица 48 - Фагоцитарная активность нейтрофилов больных с ягодичными абсцессами в динамике инфекционного процесса (x±m).
Нейтрофилы
периферической крови
|
Число пациентов
|
% фагоцитировавших клеток
|
% выживиших бактерий после фагоцитоза
|
1*
|
2
|
5
|
7
|
1
|
2
|
5
|
7
|
Больные с ягодичными абсцессами
|
16
|
33,0
±1,01
|
34,5
±1,5
|
36,0
±2,0
|
38,0
±1,0
|
13,51
±1,0
|
11,51
±1,0
|
6,0
±1,02
|
5,5
±0,5
|
Здоровые доноры
|
30
|
38,0
±2,0
|
-
|
-
|
-
|
5,0
±0,6
|
-
|
-
|
-
|
*- дни пребывания в стационаре, 1-p<0,01 – относительно показателей здоровых доноров
2- p<0,05 – относительно показателей предыдущего периода измерения (сутки).
Таблица 49 - Фагоцитарные показатели нейтрофилов периферической крови больных с гнойными маститами (x±m).
Нейтрофилы периферической крови
|
Число пациентов
|
% фагоцитирующих
клеток
|
% выживших бактерий после фагоцитоза
|
1*
|
2
|
5
|
7
|
14
|
1*
|
2
|
5
|
7
|
14
|
Больные с гнойными маститами
|
9
|
22,0
±2,01
|
23,5
±2,01
|
24,5
±1,01
|
27,4
±1,51
|
29,0
±1,01
|
29,0
±3,01
|
21,0
±1,51,3
|
17,0
±1,01,4
|
12,5
±1,61
|
12,0
±1,51
|
Здоровые доноры
|
30
|
38,0
±2,5
|
-
|
-
|
-
|
-
|
5,0
±0,6
|
-
|
-
|
-
|
-
|
*- дни пребывания в стационаре
1-p<0,01, 2- p<0,05 – относительно показателей здоровых доноров
3- p<0,01, 4- p<0,05 – относительно показателей предыдущего периода измерения (сутки).
При генерализованной инфекции процент выживших бактерий после фагоцитоза в обеих группах схож: каждый четвертый-пятый микроорганизм продолжает персистировать внутриклеточно, защищенный от сывороточных бактерицидных компонентов крови человека (таблица 50).
Несмотря на выявленную положительную динамику фагоцитарных параметров (% фагоцитирующих клеток и % бактерий, выживших после фагоцитоза), к 30 суткам нормализации измеряемых показателей не происходит (p<0.05) (таблица 50).
Полученные результаты позволяют предположить, что снижена эффективность именно внутриклеточных бактерицидных механизмов.
Известно, что процесс внутриклеточного уничтожения бактерий определяется кооперативным действием как лизосомальных ферментов, так и внутриклеточно генерируемых радикалов.
В нейтрофилах больных генерализованной стафилококковой инфекции (в обеих подгруппах) доля внутриклеточных активных форм кислорода оказалась значительно снижена (рисунок 6).
Таблица 50 - Фагоцитарные показатели нейтрофилов периферической крови больных с генерализованной стафилококовой инфекцией (Xm).
Нейтрофилы периферической крови
|
Число пациен-тов
|
% фагоцитирующих
клеток
|
% выживших бактерий после фагоцитоза
|
1*
|
2
|
7
|
14
|
30
|
1*
|
2
|
7
|
14
|
30
|
Больные с ССВО
|
15
|
27,5
±1,51
|
27,0
±0,21
|
28,0
±0,51,4
|
29,5
±2,01
|
30,0
±1,01
|
20,0
±1,51
|
16,0
±1,51,4
|
15,0
±1,01
|
12,5
±1,51
|
10,0
±1,01
|
Больные тяжелым сепсисом
|
10
|
19,0
±1,01
|
21,5
±1,31
|
24,0
±1,51
|
27,5
±2,01
|
29,0
±1,01
|
27,0
±1,01
|
22,0
±1,01,3
|
17,0
±1,51,3
|
14,5
±1,01
|
12,0
±1,51
|
Доноры
|
15
|
38,0
±1,5
|
-
|
-
|
-
|
-
|
5,0
±0,5
|
-
|
-
|
-
|
-
|
*- дни пребывания в стационаре
1-p<0,01, 2- p<0,05 – относительно показателей здоровых доноров
3- p<0,01, 4- p<0,05 – относительно показателей предыдущего периода измерения (сутки).
Таблица 51 - Показатели активности антиоксидантных ферментов у больных с фолликулярной и лакунарной ангиной в динамике инфекционного заболевания (x±m).
Группа
|
Число пациентов
|
Каталаза, ед\г мин
|
СОД, ед\г белка
|
1*
|
2
|
5
|
7
|
1
|
2
|
5
|
7
|
Больные с фолликулярной ангиной
|
40
|
3,7
±0,5
|
3,4
±0,3
|
3,5
±0,4
|
3,4
±0,2
|
1,3
±0,1
|
0,9
±0,2
|
1,0
±0,2
|
1,3
±0,1
|
Больные с лакунарной ангиной
|
35
|
4,31
±0,1
|
3,11,2
±0,1
|
3,72
±0,2
|
3,5
±0,4
|
1,51
±0,1
|
0,91,2
±0,1
|
1,0
±0,1
|
1,2
±0,1
|
Здоровые доноры
|
30
|
3,5
±0,3
|
-
|
-
|
-
|
1,2
±0,1
|
-
|
-
|
-
|
*- дни пребывания в стационаре,1-p<0,01 – относительно показателей здоровых доноров
2- p<0,05 – относительно показателей предыдущего периода измерения (сутки).
|
