Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах и улицах «Добрая дорога детства» 2
Скачать 2.79 Mb.
|
| ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЧУМЫ И ТУЛЯРЕМИИ Цель: 1. Изучить методы микробиологической диагностики чумы и туляремии. 2. Изучить препараты для диагностики, специфической профилактики и терапии чумы и туляремии. Чума - острое инфекционное природно-очаговое заболевание, относящееся к группе карантинных (конвенционных) инфекций, характеризующееся тяжелой интоксикацией, лихорадкой, поражением кожи, лимфатических узлов, сепсисом и высокой летальностью. Возбудитель чумы Yersinia pestis относится к роду Yersinia, включающий в себя 11 родов, из которых в патологии человека основное значение имеют 3 вида: возбудитель чумы Y. pestis и энтеропатогенные иерсинии, возбудитель псевдотуберкулеза Y. pseudotuberculosis и возбудитель кишечного иерсиниоза - Y.enterocolitica. Возбудитель чумы – J.pestis – овоидная грамотрицательная палочка, которая окрашивается биполярно. Спор не образуют, в организме могут образовать микрокапсулу. Неподвижны. Факультативные анаэробы. Вирулентные формы на плотных питательных средах формируют R колонии, в виде «кружевного платочка». На жидких средах чумная палочка дает пленку со спускающимися нитями – в виде «сталактитов». К основным факторам патогенности относятся: эндотоксин, «мышиный» экзотоксин, ферменты агрессии и защиты: фибринолизин, коагулаза, гиалуронидаза, гемолизин и др. Чума относится к природно-очаговым инфекциям. Резервуаром являются дикие грызуны, переносчики – блохи. Заражение человека происходит при укусе зараженными блохами, при контакте с павшими от чумы грызунами; возможно заражение при употреблении в пищу мяса больных верблюдов. Чума может передаваться и от человека к человеку. В зависимости от путей проникновения различают клинические формы: кожную, бубонную, первично-септическую и легочную. После перенесенного заболевания формируется стойкий иммунитет. Туляремия – острое или хроническое системное природно-очаговое заболевание человека и животных, которое характеризуется лихорадкой, интоксикацией и поражением лифатических узлов. Возбудителем туляремии является Francisella tularensis, открытый в местечке Туляре в 1911 г. Г.Мак-Коем и Х.Чепином. Возбудитель туляремии - Francisella tularensis – мелкая, грамотрицательная коккобактерия, не образует спор, факультативный анаэроб. Плохо растет на питательных средах. Francisella tularensis является внутриклеточным паразитом. Вирулентность связана его способностью размножаться в фагоцитах и подавлять их киллерную активность. Возбудитель образует эндотоксин, фермент агрессии – нейраминидазу. Природным резервуаром являются грызуны, водяные крысы, домовые мыши. Заражение человека происходит при прямом контакте с животными, их трупами. Заражение происходит также через пищевые продукты, инфицированные выделениями больных грызунов. Возможно трансмиссивное заражение через укусы кровососущих насекомых. Больной человек не является источником инфекции, т.е. является биологическим тупиком. Возбудитель может проникать в организм через слизистые оболочки верхних дыхательных путей, глаз, желудочно-кишечного тракта и даже через неповрежденную кожу. Это определяет разнообразие клинических форм: легочная, глазо-бубонная, абдоминальная, бубонная, язвенно-бубонная, генерализованная. Иммунитет носит двухфазный характер – первые недели, месяцы нестерильный, затем переходит в стерильный. Для микробиологической диагностики чумы используют бактериоскопический, бактериологический, биологический и серологический методы исследования, которые проводят в специальных лабораториях, работающих в соответствии с инструкциями о режиме работы противочумных учреждений. Материалами для исследования являются: пунктаты бубонов, мокрота, отделяемое карбункулов и язв, кровь, моча, рвотные массы, трупный материал. Взятие и доставка материала, как и работа с ним, производятся с соблюдением особых правил предосторожности (в противочумном костюме, с применением специальных средств и устройств, предотвращающих контакт с кожей, слизистыми оболочками, а также вдыхание образующихся аэрозолей). Самостоятельная работа
Указания к самостоятельной работе Микробиологическая диагностика чумы Бактериоскопический метод диагностики. Предварительный диагноз устанавливают на основании микроскопического исследования материала. При наличии в окрашенных мазках грамотрицательных биполярно окрашенных овоидных бактерий диагноз чумы весьма вероятен. Однако необходимо дальнейшее исследование для точного определения вида микроба. Точная диагностика требует выделения чистой культуры и постановки биологической пробы. Бактериологическое исследование: посевы исследуемого материала производят на агар добавлением стимуляторов роста (кровь, сульфит натрия). В термостате при 25-28º С уже через 10-12 часов могут обнаружиться колонии чумной палочки в виде характерных «кружевных платочков». Из типичных колоний делают пересев в пробирку с агаром и на чашку – газоном, куда после подсыхания наносят каплю чумного бактериофага. Определят полученную культуру по характеру роста, микроскопией мазков, реакцией агглютинации со специфической сывороткой, специфическим лизисом бактериофагом («стерильное пятно»). Биологический метод. Для заражения животных используют морских свинок и лишь при отсутствии их – крыс и мышей. Обязательным является заражение втиранием и подкожно. Внутрибрюшинное заражение ускоряет диагностику, но оно применимо только тогда, когда материал не загрязнен посторонней микрофлорой. О чумной инфекции свидетельствуют следующие патологоанатомические изменения: множественные кровоизлияния на слизистой и серозной оболочках, воспаление лимфатических узлов, наличие некротических очагов в селезенке, реже в печени. В мазках из внутренних органов, крови, экссудата обнаруживают большое количество грамотрицательных, биполярно окрашенных бактерий. Методы ускоренной диагностики чумы Метод ускоренного обнаружения возбудителя чумы с помощью бактериофага, внесенного в исследуемый материал
Серологическое исследование Серодиагностика проводится с целью ретроспективной диагностики, а также при эпизоотических обследованиях в природных очагах чумы. Проводят РНГА с эритроцитами, на которых адсорбирован капсульный антиген возбудителя чумы. Ставят также реакцию нейтрализации антигена, ИФА и непрямую модификацию РИФ. При исследовании сывороток больных или павших грызунов в РНГА результат считается положительным при титре 1:40 и выше. Вопросы для самоконтроля
Указания к самостоятельной работе Методы микробиологической диагностики туляремии Биологический метод Выделить культуры возбудителя от больного путем непосредственного посева материала на среды почти никогда не удается. Присутствие микроба в исследуемом материале обнаруживается только при заражении этим материалом лабораторных животных с последующим выделением культуры из их органов. Исследуемым материалом заражают морских свинок подкожно или внутрибрюшинно, они погибают в течение 10 дней. На вскрытии обнаруживается характерное воспаление и увеличение лимфатических узлов, некротические участки в виде беловато-серых узелков в органах (селезенка, печень, легкие). Производят посев из крови, лимфатических узлов и некротических участков на желточную среду, глюкозоцистиновый агар с кровью и антибиотиками, среду Мак-Коя. Полученную культуру идентифицируют: 1) бактериоскопией мазков; 2) посевом на яично-желточную среду или глюкозоцистиновый кровяной агар; 3) посевом на простой агар, на котором бактерии туляремии не растут; 4) реакцией агглютинации со специфической сывороткой; 5) заражением лабораторных животных с получением у них характерной патологоанатомической картины. Биологическим методом диагностики пользуются также для определения зараженности туляремией диких грызунов и объектов внешней среды: воды, пищевых продуктов и т.д. Серологический метод Серологический диагноз туляремии ставится реакцией агглютинации с сывороткой больного и туляремийным диагностикумом. Агглютинины появляются со 2-й недели заболевания и обнаруживаются много лет спустя после перенесенной болезни. Развернутая реакция агглютинации ставится в пробирках с разведениями исследуемой сыворотки от 1:25 до 1:800. Результат реакции получают после 2 часов стояния в термостате при 37º С и выдерживании 18-20 часов при комнатной температуре (мелкозернистая агглютинация). Положительным результатом считается ясная агглютинация (+++) в разведении сывороток 1:100 и выше. Для ориентировочной диагностики можно воспользоваться реакцией агглютинацией на предметном стекле с цельной и разведенной сывороткой. Кровянокапельная РА. Кровь из пальца в виде толстой капли наносят на предметное стекло и добавляют в нее равный объем дистиллированной воды, чтобы вызвать гемолиз. Рядом с кровью помещают каплю туляремийного диагностикума, обе капли смешивают стеклянной палочкой. У больных туляремией в серопозитивном периоде (при титре 1:100 и выше ) агглютинация происходит немедленно. Весьма чувствительным методом серологической диагностики туляремии является РНГА. Она может быть положительной уже в конце первой – начале второй недели заболевания. В качестве антигена используют туляремийный эритроцитарный диагностикум (бараньи эритроциты, «нагруженные» туляремийным антигеном). Для выявления антител к Francisella tularensis применяют также метод ИФА. Аллергологическое исследование Аллергические пробы применяют для ранней диагностики туляремии (с 5-го дня от начала заболевания). Используют два вида тулярина и соответственно два способа их введения- накожный и внутрикожный. Внутрикожный тулярин вводят в дозе 0,1 мл внутрь кожи ладонной части предплечья (предварительно обработанной спиртом). Результаты пробы учитывают в динамике через 24-48 часов путем осмотра и пальпации места введения препарата. Наличие выраженного инфильтрата и гиперемии диаметром 1,0 см и более расценивается как положительная реакция. У отдельных больных возможно образование пустулы и даже некроза кожи на месте введения препарата, лимфангоита, регионарного лимфаденита с повышением температуры тела до 37,5-38ºС в течении 24-48 часов. Накожную пробу ставят путем втирания стерильным оспопрививальным пером 1 капли накожного тулярина в скарифицированный участок кожи, предварительно обработанный спиртом. Учет проводят, как описано выше; положительной считается реакция при размерах участка гиперемии и инфильтрата 0,5 см и более. У вакцинированных или переболевших туляремией лиц в течение ряда лет аллергические пробы могут оставаться положительными (анамнестическая реакция). Таблица 23 Диагностические, профилактические и лечебные препараты при чуме и туляремии
Занятие 16 Итоговое занятие по темам №8-15 Цель: контроль знаний студентов по разработанным на кафедре тестовым заданиям 1,2 и 3 уровней. Тестовые задания, типовые и ситуационные задачи к разделу приведены в приложении Занятие 17 ТЕМА: СПИРОХЕТОЗЫ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СИФИЛИСА. Цель: изучить методы диагностики сифилиса. Спирохеты – тонкие, подвижные бактерии, которые имеют форму спирали с различным числом завитков и длиной 3-500мкм. Протоплазма их спирохетообразно обвита вокруг эластической осевой нити, за счет сокращения которой происходит движение спирохет. Различают поступательное, вращательное и маятникообразные движения спирохет. Обобщающее название заболеваний вызываемых спирохетами – спирохетозы. Спирохеты относятся к семейству Spirochetaceaе. Медицинское значение имеют представители родов Treponema, Borrelia и Leptospira. Трепонемы являются возбудителями сифилиса, фрамбезии. Боррелии вызывают эпидемический и эндемический возвратные тифы, а также болезнь Лайма. Лептоспиры вызывают лептоспирозы – зоонозные заболевания с преимущественным фекально-оральным механизмом передачи, с поражением печени, почек, ЦНС, с общей лихорадкой и интоксикацией. (Табл.24) Таблица 24 Возбудители спирохетозов
Сифилис - венерическая, антропонозная инфекционная болезнь, характеризующаяся первичным аффектом, высыпанием на коже и слизистых оболочках с последующим поражением различных органов и систем. Возбудитель сифилиса - Treponema pallidum (бледная спирохета) был открыт в 1905 году Ф.Шаудином и Э.Гофманом. Бледная трепонема имеет извитую форму с 8-14 равномерными завитками и длиной 6-12 мкм. Спор и капсул не образует. Трепонема по Романовскому-Гимзе окрашивается в слабо-розовый цвет. Бледная трепонема анаэроб. Плохо культивируется даже на специальных средах. Трепонемы очень требовательны к питательным средам и на обычных средах не растут. Выращивается на среде с кроличьей сывороткой и кусочком мозговой ткани, залитой вазелиновым маслом (среда Аристовского-Гельцера). Выросшие на средах трепонемы утрачивают характерную форму, а также иммуногенность и патогенность (трепонемы Рейтера). Тканевые трепонемы, обнаруживаемые в твердом шанкре человека, поддерживают в пассажах на кроликах, заражая их под кожу мошонки или в паренхиму яичка. Тканевые трепонемы (трепонемы Никольса) сохраняют патогенность. Возбудитель не устойчив к факторам окружающей среды. При нагревании до 600С быстро погибает. Под действием антибиотиков (пенициллина) образует L-формы. Сифилис антропонозное заболевание. Источником инфекции является только человек. Заражение сифилисом происходит половым путем, реже бытовым – через посуду и предметы общего пользования. Вследствие внутриутробного заражения плода возможен врожденный сифилис. Инкубационный период равен 3-4 неделям. В течении заболевания различают первичный, вторичный и третичный периоды болезни. Первичный период характеризуется появлением на месте внедрения возбудителя твердого шанкра – безболезненной язвы с плотными краями и основанием, мясо – красного цвета со скудным отделяемым, увеличиваются ближайшие к шанкру лимфоузлы, -первичный комплекс. Длится первичный сифилис 6-7 недель. Затем твердый шанкр заживает и через 2-3 недели от момента возникновения шанкра в крови появляются противосифилитические антитела – серопозитивный сифилис. Затем наступает вторичный период, который характеризуется появлением на коже и слизистых розеолезно-папулезных высыпаний, а также везикул и пустул, в которых также могут быть обнаружены трепонемы, хотя и реже чем в твердом шанкре. Через 3-4 года развивается третичный сифилис, при котором в подкожной клетчатке, внутренних органах, костях образуются гуммы. В гуммах бледные спирохеты не обнаруживаются. У некоторых лиц болезнь заканчивается развитием прогрессивного паралича и спинной сухотки в результате поражения ЦНС. Микробиологическая диагностика сифилиса включает как бактериоскопическое так и серологические исследования. Бактериоскопическое исследование проводят при первичном сифилисе (твердом шанкре) и заключается в микроскопии мазков из тканевой жидкости для обнаружения трепонем. Начиная с 4-5-й недели от момента возникновения твердого шанкра, когда начинается серопозитивный период сифилиса, берут кровь для постановки серологических реакций: РСК – реакции Вассермана, реакции микрокпреципитации, реакции Кана (флокуляционный тест), РПГА, РИФ, ИФА, РИТ и др. Серологические реакции для диагностики сифилиса делятся на отборочные (скрининговые) и подтверждающие. К отборочным тестам относятся реакция Вассермана, микропреципитации, флокуляционные тесты и РПГА с неспецифическим кардиолипиновым антигеном. Эти реакции применяются при массовых обследованиях населения. Эти реакции становятся отрицательными после проведенных курсов лечения и используются для оценки эффективности лечения. При постановке РИФ, РИТ, РПГА, ИФА в качестве антигена используется специфический трепонемный антиген - антиген из трепонем, выращенных в яичке кролика. Это высокочувствительные и высокоспецифичные тесты используются для подтверждения диагноза. Эти реакции остаются положительными и после проведенного лечения и поэтому не могут быть использованы для оценки эффективности лечения. Самостоятельная работа
Указания к самостоятельной работе 1. Бактериоскопическое исследование наиболее эффективно при первичном сифилисе. Исследуют материал из твердого шанкра. Препарат фиксируют в смеси Никифорова, окрашивают по Романовскому-Гимзе. Используют и темнопольную микроскопию неокрашенных препаратов. Во втором периоде заболевания исследуют материал из кожных высыпаний, но обнаружить в них материал удается редко.
Реакция Вассермана Для постановки реакции связывания комплемента при подозрении на сифилис необходимы следующие компоненты: 1. Исследуемая инактивированная сыворотка больного в разведении 1:5. 2. Неспецифический антиген - (кардиолипиновый антиген) 3. Комплемент - в качестве комплемента используют сыворотку морской свинки. Комплемент берут в рабочей дозе. 4. Гемолитическая система - это смесь гемолитической сыворотки и эритроцитов барана. Реакцию Вассермана ставят по общепринятой методике РСК (табл. 25). Таблица 25 Схема постановки реакции Вассермана
Инкубация при t 370 С - 40 минут
Инкубация при t 370 С - 40 минут
Отсутствие гемолиза в опытной пробирке свидетельствует о положительной реакции Вассермана. Наличие гемолиза в опытной пробирке соответственно трактуется как отрицательная реакция Вассермана. Учет результатов реакции производится по 4+ системе. ++++ - резко положительная реакция (полная задержка гемолиза); +++ - положительная реакция; ++ - слабо положительная реакция; + - сомнительная реакция; Полный гемолиз – отрицательная реакция. Вопросы для самоконтроля
Занятие 18 ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА РИККЕТСИОЗОВ И ХЛАМИДИОЗОВ. Цель: изучить методы микробиологической диагностики риккетсиозов и хламидиозов. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
