Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах и улицах «Добрая дорога детства» 2
Скачать 2.79 Mb.
|
| ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СТРЕПТОКОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ГНОЯ (2 ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ). Цель: Изучить методы микробиологической диагностики стрептококковых инфекций. Ознакомиться с методами специфической профилактики и терапии стрептококковых инфекций. Стрептококки Род Streptococcus, семейство Streptococcaceae включает 21 вид. Клетки стрептококков имеют шаровидную или овальную форму, диаметром 0,6-1 мкм. Располагаются в виде цепочек разной длины или попарно. Грамположительны. Хемоорганотрофы. Требовательны к питательным средам. Стрептококки культивируются на питательных средах с добавлением глюкозы, сыворотки или крови. На поверхности плотных сред образуют мелкие, диаметром до 1 мм, бесцветные колонии, в жидких - дают придонный, пристеночный рост, оставляя среду прозрачной. По характеру роста на кровяном агаре различают стрептококки: бета-гемолитические - вокруг колоний образуется прозрачная зона гемолиза; альфа-гемолитические - вокруг колоний образуется неширокая, зеленоватая зона; негемолитические - среда не изменяется. Стрептококки обладают многими факторами патогенности: 1) адгезины 2) антихемотахсический фактор 3) М-белок. Из ферментов, определяющих патогенность стрептококков, наибольшее значение имеют гиалуронидаза и стрептокиназа (фибринолизин), которые способствуют распространению и генерализации процесса.
 Стрептококки серогруппы А образуют ряд токсинов: 1) О-стрептолизин, 2) S-стрептолизин, 3) лейкоцидин и др. Для скарлатинозного стрептококка характерно наличие эритрогенина-токсина, вызывающего покраснение кожи или сыпь. Наиболее значительная роль в инфекционных заболеваниях принадлежит гемолитическому стрептококку (группа А), так как он является возбудителем сепсиса, рожистого воспаления, ревматизма, различных гнойных процессов. Микробиологическое исследование при сепсисе Микробиологическое исследование крови является ведущим при лабораторной диагностике сепсиса. Кроме того, при септикопиэмиях исследуют материал из первичных и вторичных местных очагов и инфекции. Кровь берут в период подъема температуры до начала антибиотикотерапии из локтевой вены в количестве не менее 10 мл у взрослых и 5 мл у детей, так как микроорганизмы находятся в крови в сравнительно небольших количествах. Посевы делают у постели больного в колбы с 50-100 мл питательной среды. Сравнительно большие объемы питательной среды (в 10 превышающие количество крови) необходимы для устранения бактерицидного действия сывороточных белков. В случае транспортировки крови к ней добавляют антикоогулянты: цитрат или оксалат натрия, декстран сульфат, гепарин. Посевы производят на сахарный бульон и инкубируют их при 37 °C в течении 10 дней при ежедневном контроле. В случае отсутствия роста микроорганизмов дают отрицательный ответ. При наличии роста делают мазки, которые окрашивают по Граму. Выделенную чистую культуру микроорганизмов идентифицируют и определяют ее чувствительность к антибиотикам. При оценке результатов необходимо исходить из того, что сепсис является тяжелым общим инфекционным заболеванием, развивающимся в условиях резкого угнетения всех основных механизмов иммунитета. Возбудителями сепсиса являются различные патогенные и условно-патогенные микроорганизмы. Однократный посев крови при сепсисе не всегда приводит к выделению культуры. Более информативным является трехкратный посев крови с суточным интервалом. На фоне антибиотикотерапии кровь у больных для посева следует брать 5-6 раз. Самостоятельная работа
а) просмотреть чашки с посевами и отобрать подозрительные колонии; б) из отобранных колоний приготовить мазки, окрасить по Граму; в) материал из колоний пересеять на скошенный МПА. Произвести запись в протоколе. Микробиологическая диагностика Бактериоскопическое исследование. Мазки для первичной бактериоскопии готовят из патологического материала, окрашивают по Граму и микроскопируют. При положительном результате обнаруживают цепочки грамположительных кокков. Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 °C в течении 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры 1-3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам. По данному признаку все стрептококки делятся на серологические группы (A, B, C, D и т.д.). Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном C, выделенным из исследуемой культуры, и сыворотками (обычно 4 наиболее распространенные серогруппы – A, B, C, D). Большинство патогенных для человека β-гемолитических стрептококков относится к серологической группе A. По содержанию типоспецифических антигенов протеиновой природы β-гемолитические стрептококки подразделяются на серовары, из которых 47 относятся к группе А. Серовар стрептококков определяют в реакции агглютинации. Развернутое серологическое исследование и типирование стрептококков проводят главным образом для эпидемиологического обследования. Выделенную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков. При подозрении на сепсис делают посевы из крови больного. Серодиагностика. При отдельных нозологических формах стрептококковой инфекции устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК или реакции преципитации. Антитела к О-стрептолизину определяют главным образом для подтверждения диагноза ревматизма. Реакция основана на подавлении способности О-стрептолизина растворять эритроциты при наличии в крови больного соответствующих антител. Реакцию ставят со стандартным сухим О-стрептолизином. Таблица 13 Дифференциально-диагностические признаки стрептококков
Условные обозначения: ' разные серогруппы или без группового антигена R – устойчив S – чувствителен Таблица 14 Диагностические, профилактические и лечебные препараты при стрептококковых инфекциях
Вопросы для самоконтроля:
Занятие 10 ТЕМА: НЕЙССЕРИИ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЭПИДЕМИЧЕСКОГО МЕНИНГИТА И ГОНОРЕИ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ГНОЯ (3 ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ). Цель: Изучить методы микробиологической диагностики менингококковых и гонококковых инфекций. Бактериологическое исследование гноя (3-й день). Менингококки Возбудитель менингококковой инфекции (эпидемический цереброспинальный менингит, назофарингит, меннигококкемия) – Neisseria meningitidis относится к роду Neisseria, cемейству Neisseriaceae. Менингит могут вызывать и такие микробы, как стрептококк, стафилококк, условно патогенные энтеробактерии, микобактерии и др. Менингококк обнаруживается в носоглотке у здоровых людей – здоровое бактерионосительство. Менингококк – грамотрицательный диплококк, имеющий характерную форму, напоминающую боб или кофейное зерно. Соприкасающиеся края каждого из парных кокков вогнутые почти ровные, наружные края выпуклые. В культуре менингококки часто теряют типичную форму и представляют собой круглые или слегка овальные шары неодинаковой величины. Менингококк неподвижен, не имеет спор, образует микрокапсулу. Менингококк весьма нестоек во внешней среде, быстро погибает как в патологическом материале, так и в культуре даже при комнатной температуре. Об этом свойстве менингококка необходимо помнить при исследованиях с целью диагностики. Менингококки хемоорганотрофы, требовательны к условиям культивирования; аэробы, обладают цитохромоксидазой и каталазой. Для размножения на питательных средах менингококки нуждаются в добавлении сыворотки или крови. На поверхности сывороточного агара образуют нежные бесцветные колонии вязкой консистенции. Биохимическая активность менингококков выражена слабо: продуцируют ферменты, расщепляющие глюкозу и мальтозу с образованием кислоты. Менингококк не выделяет экзотоксины, но обладает эндотоксином. На основании различий капсульного антигена менингококки делятся на 8 серологических групп (А, В, С, D, X, V, Z, W-135). Белковые антигены наружной мембраны клеточной стенки различны у сероваров (их обозначают цифрами). Микробиологическая диагностика менингита Объектом исследования является спинномозговая жидкость (для установления диагноза менингита). Исследованию подвергается также слизь из носоглотки больных и здоровых лиц при обследовании на бактерионосительство, кровь при подозрении на сепсис, а также органы людей, умерших от менингококковой инфекции. При исследовании любого материала необходимо помнить о крайней лабильности менингококка и предусмотреть все условия для сохранения: производить исследование как можно быстрее, при доставке защищать материал от холода, в лаборатории хранить его в термостате до исследования. Спинномозговую жидкость получают при соблюдении асептических условий путем люмбальной пункции. Жидкость при менингите мутная, так как содержит гнойные клетки и выходит струей под большим давлением (в норме жидкость прозрачная и вытекает по каплям, медленно). Схема №7. Микробиологическое исследование при менингококковой инфекции и бактерионосительстве (по Борисову Л.Б., 2001 г.)
Бактериоскопическое Бактериологическое Серодиагностика исследование исследование 1 этап Мазок, окраска Посев на сыво- В реакции РПГА по Граму роточный пита- встречного сыворотками тельный агар иммуноэлектрофореза Люминесцентная преципитирующими микроскопия мазков, антименингококковыми обработанных сыворотками
флюоресцирующей иммунной сывороткой 2 этап Характер Посев на сывороточный колоний питательный агар (чистая культура) 3 этап Мазок, Определение окраска по Посев на Серотипи- чувствительности Граму «пестрый» рование к антибиотикам ряд культуры
Спинномозговую жидкость берут в количестве 2-5 мл и делят на две части: одну центрифугируют и исследуют осадок, к другой добавляют полужидкую питательную среду и выдерживают при 37оС для накопления бактерий. Из исследуемого материала готовят мазки и производят посевы. Бактериоскопическое исследование. Мазки из осадка спинномозговой жидкости окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии гноя в большинстве случаев обнаруживаются типичные, грамотрицательные диплококки, имеющие характерное расположение – внутри лейкоцитов, что позволяет сделать окончательное заключение о менингококковой инфекции. При микроскопии мазков из носоглотки бактерионосителей наряду с менингококком обнаруживаются грамположительные стафилококки и стрептококки, а также непатогенные нейсcерии - Branchamella и др. Дифференцировать их по морфологической картине мазка не представляется возможным. Для экспресс - диагностики и выявления менингококков в исследуемом материале используется также метод флюоресцирующих антител. Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают петлей на чашки с питательным агаром, содержащим кровь, сыворотку крови или асцитическую жидкость. Кроме того, используют данную среду с добавлением антибиотика ристомицина (150 ЕД/мл.), который задерживает размножение грамположительных кокков, содержащихся в исследуемом материале, и тем самым способствует выделению чистой культуры менингококка. Образование колоний менингококка на этих средах наблюдается через 48 часов после инкубации посевов при 370C. В отличие от других кокков, колонии менингококка величиной с булавочную головку, прозрачны имеют голубоватый оттенок и ровные края. Такие колонии пересевают в пробирку со скошенным агаром для получения чистой культуры. Идентификацию чистой культуры, дифференциацию от сапрофитных нейссерий, обитающих в носоглотке, проводят по ряду признаков. Так, менингококки растут только в присутствии нативного белка, в то время как другие нейссерии размножаются на простых средах и образуют пигмент, на средах Гисса с добавлением сыворотки крови менингококк ферментируют глюкозу и мальтозу до кислоты. Фаготипирование менингококка проводят для эпидемиологического анализа. Определение серовара производят в реакции агглютинации в пробирках. Серологическое исследование. Для экспресс – диагностики с целью обнаружения в спинномозговой жидкости специфического полисахаридного менингококкового антигена используется метод встречного иммуноэлектрофореза. В агаровых пластинках на стекле размером 9×12 см вырезают два параллельных ряда около 3 мм . В лунки одного ряда вносят исследуемую жидкость, в лунки другого ряда – преципитирующие менингококковые сыворотки разных серогрупп. Для реакции используется веронал – мединаловый буфер. Пластинки помещают в аппарат для иммуноэлектрофореза на 40- 45 минут при комнатной температуре и силе тока около 30 А. При положительном результате между лунками со спинномозговой жидкостью и соответствующей антисывороткой образуются 1-2 полосы преципитации. Для подтверждения диагноза и при серологическом обследовании больных используют также РПГА с парными сыворотками. Гонококки Гонококк - морфологически сходный с менингококком диплококк бобовидной формы, в культуре принимающий вид разрозненных полиморфных кокков. Неподвижен, не имеет спор, не образует капсул, по Граму красится отрицательно. В гнойном отделяемом типичное расположение гонококка внутри лейкоцитов (незавершенный фагоцитоз). Для гонококка характерна крайняя нестойкость при воздействии физических и химических агентов: он погибает уже при температуре 40-41˚; даже в гное гонококк гибнет уже через несколько часов. Губительно действуют на гонококк и нитрат серебра в концентрации 1 : 1000, 1% раствор фенола, 0,05 % раствор биглюконата хлоргексидина. Чувствительны микроорганизмы и к антибиотикам - пенициллину, тетрациклину, эритромицину. Однако высокая заболеваемость гонореей в последние годы и самолечение больных привели к широкому распространению гонококков, устойчивых к сульфаниламидам и антибиотикам. Гонококк чрезвычайно требователен к питательной среде; при выделении из организма растет только на средах с добавлением человеческого белка (асцитической жидкости, сыворотки, или крови). Растут лучше при содержании в атмосфере 3-10% СО2. На асцит агаре гонококки образуют прозрачные колонии с ровными краями и блестящей поверхностью. Биохимические свойства слабо выражены – из углеводов гонококки расщепляют только глюкозу, образуют каталазу и оксидазу. Протеолитической активностью не обладают. Лабораторная диагностика гонореи Neisseria gonorrhoeae является возбудителем гонореи – специфического уретрита, протекающего в острой или хронической форме. Гонококк вызывает также бленнорею – гнойное воспаление конъюнктивы глаз. При лабораторной диагностике используют главным образом бактериоскопический и бактериологический методы исследования (схема 8). Бактериоскопическое исследование. Материал для исследования должен быть максимально быстро доставлен в лабораторию во избежание аутолиза гонококков, которые очень чувствительны к изменению температуры и охлаждению. Из материала готовят мазки, окрашивают их по Граму, а также метиленовым синим. При положительном результате в мазках обнаруживают гонококки - грамотрицательные диплококки бобовидной формы, находящиеся внутри лейкоцитов. Положительный бактериоскопический диагноз ставится в основном при острой форме гонореи до применения антибиотиков. При хронической гонорее бактериоскопическое исследование часто дает отрицательный результат, так как в этих случаях гонококки могут иметь атипичную форму в виде шаров или, наоборот, очень мелких образований. Кроме того, в препарате обнаруживают разнообразную микрофлору, лейкоциты, эпителиальные и другие клеточные элементы. Бактериологическое исследование. Материал засевают на чашку Петри со специальными питательными средами – КДС, сывороточным агаром и др. Среда КДС содержит питательный агар с добавлением определенной концентрации казеина, дрожжевого экстракта и сыворотки крови. Посевы инкубируют при 370 в течении 24-72 часов. Гонококки образуют прозрачные колонии, напоминающие капли росы, в отличие от более мутных колоний стрептококков или пигментированных колоний стафилококков, которые также могут расти на этих срезах. Подозрительные колонии пересевают в пробирки на соответствующие среды для получения чистых культур, которые идентифицируют по сахаролитическим свойствам на средах «пестрого» ряда (полужидкий агар с сывороткой и углеводами). Гонококк ферментирует только глюкозу с образованием кислоты. Серодиагностика. В некоторых случаях ставят РСК Борде - Жангу. В качестве антигена используют взвесь убитых гонококков. Реакция Борде-Жангу имеет вспомогательное значение при диагностике гонореи. Она положительна при хронической и осложненной гонорее. Схема №8. Микробиологическое исследование при гонорее и бленнорее
Бактериоскопи- Бактериологические Серодиагностика ческие исследования исследования 1 этап Мазок, окраска по Посев на сыворо- РСК Ответ Граму и мети- точный питатель- Ответ леновым синим ный агар и КДС в чашки Петри 2 этап характер колоний, пересев на Мазок, окраска по сывороточный Граму питательный агар (чистая культура) 3 этап посев на определение «пестрый ряд» чувствительности к антибиотикам
Самостоятельная работа
Указания к самостоятельной работе
Таблица 15 Препараты для специфической профилактики и терапии менингококковых и гонококковых инфекций
Вопросы для самоконтроля:
Занятие 11 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
