Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах и улицах «Добрая дорога детства» 2
Скачать 2.79 Mb.
|
| ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ (САЛЬМОНЕЛЛЕЗНЫХ ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ). Цель: Изучить методы микробиологической диагностики пищевых токсикоинфекций. Большинство микроорганизмов, вызывающих пищевые отравления людей, относятся к роду Salmonella семейства Enterobacteriaceaе. Название дано в честь американского ученого Сальмона. Сальмонеллы – это грамотрицательные палочки средней величины с закругленными концами, подвижные или неподвижные, спор не образуют, хемоорганотрофы, оксидаза-отрицательны, каталаза-положительны, биохимически менее активны, чем кишечная палочка. На средах Гисса и МТС-5У разлагают глюкозу, мальтозу, маннит до кислоты и газа или без газа, лактозу и сахарозу не разлагают. Сальмонеллы имеют сложную антигенную структуру. Они содержат О-антигены соматические, Н-антигены жгутиковые, некоторые имеют К-антигены. По антигенным свойствам все сальмонеллы представлены в таблице Кауфмана – Уайта, по которой они включены по О-антигену в группы, обозначаемые прописными буквами латинского алфавита (табл.7). Дифференциация сальмонелл внутри групп проводится по антигенной специфичности Н-антигенов, существующих в 2-х фазах. Первая фаза специфическая обозначается строчными буквами латинского алфавита, вторая неспецифическая фаза – арабскими цифрами. Таблица 7 Классификация сальмонелл по антигенной структуре (схема Кауфмана - Уайта)
Сальмонеллезы – это зоонозно-антропонозные инфекции. Заражение происходит при употреблении в пищу мяса свиней, крупного рогатого скота, кур, яиц, при контакте с инфицированными животными. В последние годы увеличилась частота госпитальных вспышек сальмонеллеза. К сальмонеллезам восприимчивы взрослые и дети. Сальмонеллы могут размножаться при 4-6ºС и длительно сохраняться в зараженных мясных изделиях. Механизм передачи – фекально-оральный. Патогенные сальмонеллы у людей вызывают гастроэнтериты, гастроэнтероколиты. Заболевания регистрируются повсеместно, в основном в теплый сезон года. Клинически выделяют гастроинтестинальные и генерализованные формы. Генерализованные формы делят на тифоподобные (с гастроэнтеритом, поражением ЦНС и сыпью) и септикопиемические (сепсис сальмонеллезной этиологии) варианты. При сальмонеллезе отмечается бактерионосительство острое, транзиторное, хроническое. Основными возбудителями сальмонеллезных гастроэнтеритов являются: S.typhimurium, S.derby, S.enteritidis, S.heldelberg, S.anatum и др. Помимо большой группы микробов из рода сальмонелл, вызывающих пищевые отравления у людей, есть и другие возбудители, также вызывающие отравления. К ним относятся: кишечная палочка - Escherichia coli, возбудители дизентерии из рода Shigella, возбудители паратифов А и В – Salmonella paratyphi A и Salmonella Schotmulleri В, протейная палочка - Proteus vulgaris, золотистый стафилококк - Staphylococcus aureus, возбудитель ботулизма - Clostridium botulinum и другие. Большое значение в возникновении и развитии сальмонеллезов имеет количество бактерий, поступивших в кишечник. При разрушении сальмонелл освобождается эндотоксин (ЛПС), нарушающий функцию нервной, сердечно-сосудистой и пищеварительной систем. Возбудители продуцируют энтеротоксин, нарушающий водно-солевой обмен, что приводит к диарее и обезвоживанию организма. Материалом исследования являются остатки пищи, вызвавшие отравление, суточные пробы готовых продуктов питания, рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, кровь, моча. Основным методом микробиологического исследования является бактериологический. Бактериологическое исследование проводится с целью: обследования больного для подтверждения или исключения диагноза «сальмонеллез»; выявления бактерионосительства; исследование пищевых продуктов, воды, объектов внешней среды для установления факторов передачи. Иммунитет непрочный. Основное лечение направлено на дезинтоксикацию и восстановление водно-солевого баланса. Специфическую иммунопрофилактику не проводят. Профилактика основана на проведении санитарно-гигиенических, ветеринарно-санитарных и противоэпидемических мероприятий. Для выделения микробов из рода сальмонелл применяют накопительные среды Киллиана и Мюллера. Самостоятельная работа
Указания к самостоятельной работе Первый этап. Материал исследования – мясной фарш. Производим посев на элективные питательные среды для разных возбудителей, которые могут вызвать отравление: на среду Киллиана или Мюллера, на кровяной агар, на среду Рапопорта, на скошенный МПА по методу Шукевича в конденсационную воду, на среду Китта-Тароцци. Посевы помещают в термостат на сутки при температуре 37°С. Второй этап. На средах Киллиана и Мюллера отмечается помутнение, на среде Рапопорта – помутнение, покраснение; на среде Эндо, Плоскирева, кровяном агаре – выросли бесцветные колонии; на среде Китта-Тароцци и на МПА при посеве по методу Шукевича роста нет. Поскольку среды Киллиана и Мюллера являются накопительными для сальмонелл, из них производят пересев на среду Ресселя для выделения чистой культуры. Посев помещают в термостат на сутки при температуре 37°С. Третий этап. На среде Ресселя лактоза не разлагается – скошенный агар не изменит окраску, глюкоза разлагается – среда синяя. С культурой на среде Ресселя: а) определяем чистоту культуры – делаем мазки красим по Граму (в мазках грамотрицательные палочки с закругленными концами средней величины); б) определяем подвижность в «висячей» и «раздавленной» капле; в) ставим реакцию агглютинации чистой культуры на стекле с групповыми и монорецепторными сыворотками по определению О- и Н-антигенов (по схеме Кауфмана-Уайта). г) чистую культуру сеем на среды Гисса или МТС-5У – для определения биохимических свойств и на МПБ – протеолитических свойств; д) определяем чувствительность к антибиотикам; е) патогенность культуры испытывается пероральным заражением белых мышей. Бактерионосительство выявляют при профилактическом обследовании работников пищевых блоков и в очаге инфекции. При этом исследуют испражнения, мочу, желчь. Серологический метод. Антитела в крови переболевших обнаруживаются в реакции агглютинации с соответствующими сальмонеллезными диагностикумами. Положительной считается реакция в титре сыворотки 1:400, ставится также РНГА с эритроцитарными сальмонеллезными диагностикумами. Таблица 8 Препараты для специфической профилактики и терапии сальмонеллезных инфекций
Вопросы для самоконтроля
Занятие 5 ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БАКТЕРИАЛЬНОЙ ДИЗЕНТЕРИИ. Цель: изучить этиологическую структуру бактериальной дизентерии, биологические свойства возбудителей. Изучить основные принципы диагностики и уметь провести идентификацию выделенной культуры. Бактериальная дизентерия – полиэтиологическое антропонозное заболевание, которое вызывается несколькими видами шигелл и с преимущественным поражением толстого кишечника. Общие свойства всех шигелл - отсутствие жгутиков, менее выраженная по сравнению с другими энтеробактериями ферментативная активность, наличие только О- антигена. По биохимической активности и антигенной структуре все шигеллы делятся на 4 группы: А, В, С, D. К каждой группе относятся различные серовары одного вида. Таблица 9 Международная классификация шигелл
Вирулентность шигелл определяется наличием факторов адгезии и колонизации, с помощью которых шигеллы проникают в эпителий толстого кишечника и размножаются в нем. В дальнейшем развивается гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) или инфекционная аллергия, что приводит к развитию язвенного колита. Токсигенность шигелл связана с образованием эндотоксина (ЛПС) и экзотоксинов 2х типов: энтеротоксина и цитотоксина. Цитотоксин продуцирует Shigella dysenteriae (Григорьева- Шига). Особенностью эпидемиологии дизентерии является исчезновение в 40х годах Shigella dysenteriae и затем возвращение ее в 60-80х годах. Лабораторная диагностика бактериальной дизентерии проводится тремя основными методами: бактериологическим, серологическим и аллергическим. Основной метод диагностики- бактериологический- производят посев испражнений на элективные и дифференциально- диагностические питательные среды (селенитовая среда обогащения, среды Плоскирева, Эндо и Левина). Следует отметить, что выделяемость антибиотикозависимых штаммов шигелл возрастает при посеве испражнений на среды, содержащие левомицетин и тетрациклин (25мкг/л). С целью серодиагностики ставят реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Аллергодиагностика- ставят внутрикожную пробу с дизентерином с 3 - 5 - го дня заболевания (проба Цуверкалова). Самостоятельная работа студентов
Схема 3. Микробиологическое исследование при дизентерии (по Борисову Л.Б., 2001) Испражнения Сыворотка крови Серодиагностика Реакция агглютинации (по типу реакции Видаля) с дизентирийными диагностикумами, РПГА с эритроцитарными диагностикумами Ответ Бактериологическое исследование Посев на дифференциальные среды (Плоскирева и др.) Характер и цвет колоний Мазок, окраска по Граму Реакция агглютинации на стекле со смесью дизентерийных сывороток Ответ Пересев бесцветных колоний на среду Ресселя или трехсахарную среду Мазок, окраска по Граму Регистрация изменений цвета среды Посев на «пестрый» ряд Реакция агглютинации на стекле со смесью дизентирийных сывороток, а затем с видовыми и типовыми сыворотками Заключение 1 этап 2 этап 3 этап Указания к самостоятельной работе Бактериологическое исследование 1-й день: Испражнения больного засевают на дифференциально- диагностические среды Плоскирева или Эндо. При наличии в исследуемых испражнениях гнойных или слизисто-кровянистых комочков, их выбирают бактериологической петлей, промывают в изотоническом растворе хлорида натрия и наносят на поверхность среды Плоскирева или Эндо, после чего растирают шпателем. Посевы инкубируют в термостате при t - 37ºС 24 часа. 2-й день: а) прозрачные бесцветные колонии пересевают на среду Ресселя для выделения чистой культуры; б) оставшуюся часть изолированной колонии используют для постановки ориентировочной реакции агглютинации на стекле со смесью дизентерийных сывороток и со смесью сывороток против сальмонелл (для исключения брюшного тифа и сальмонеллеза). 3-й день: а) через 24 часа на среде Ресселя – столбик агара посинеет. б) выделенную культуру пересевают на дифференциально- диагностические среды Гисса или МТС – 5У; в) определяют чувствительности выделенной культуры к антибиотикам диско- диффузионным методом и фаголизабельность. 4-й день: Окончательное заключение по результатам определения биохимических свойств, чувствительности к антибиотикам и фаголизабельности. Примечание: испражнения берут непосредственно у постели больного из-за неустойчивости шигелл во внешней среде. Вопросы для самоконтроля:
Занятие 6 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
