Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах и улицах «Добрая дорога детства» 2
Скачать 2.79 Mb.
|
| ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА АНАЭРОБНЫХ ИНФЕКЦИЙ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ГНОЯ (ЗАКЛЮЧЕНИЕ). Цель: изучить методы микробиологической диагностики анаэробных инфекций. Ознакомиться с методами специфической терапии и профилактики анаэробных инфекций. Объединение микроорганизмов в группу анаэробов имеет лишь одну основу - анаэробный тип дыхания. Возбудители анаэробной инфекции делятся на две большие группы: образующие споры (клостридии) и необразующие споры (неклостридиальные анаэробы). Возбудители клостридиальной раневой инфекции являются: возбудители столбняка- Cl. tetani, ботулизма- Cl. botulini и группа возбудителей газовой анаэробной инфекции- Cl. perfringens, Cl. novyi, Cl. septicum, Cl. histolyticum, Cl. sordelli. К неклостридиальным, не образующим спор, анаэробам относятся: - Грамотрицательные палочки (бактероиды, фузобактерии). -Грамположительные палочки (пропионобактерии, бифидо и лактобактерии). - Грамотрицательные кокки (вейлонеллы). - Грамположительные кокки (пептококки, пептострептококки). Эти бактерии, в основном, являются нормальными обитателями организма человека и при определенных условиях могут вызывать гнойно - воспалительные заболевания. Возбудители газовой гангрены Газовая гангрена – полимикробная раневая инфекция, возбудителями которой являются клостридии – Cl. perfringens, Cl. novyi, Cl. septicum, Cl. histolyticum, Cl. sordelli. Чаще других возбудителем газовой гангрены является – Cl. perfringens. Представляют собой крупные, грамположительные палочки образующие споры. Все они подвижны, за исключением Cl. perfringens. Этот возбудитель отличается и тем, что в организме человека образует капсулу. Возбудители газовой гангрены обладают выраженной сахаро- и протеолитической активностью, в результате чего в ране образуются газообразные продукты. Отсюда происходит и название болезни. Основным фактором патогенности является экзотоксин. Образует также гиалуронидазу и другие ферменты патогенности. По антигенной специфичности выделяют 6 серологических вариантов. Газовая гангрена развивается при обширных ранениях больших массивов мышц, при огнестрельных ранениях, обширных ожогах и т. д. Газовая гангрена протекает без ярко выраженного воспаления и характеризуется прогрессирующим некрозом тканей, отеком, газообразованием в тканях и общей интоксикацией. Иммунитет носит антитоксический характер. Материалом для исследования является раневое отделяемое. При микроскопическом исследовании можно обнаружить крупные палочки, образующие капсулу. Но основным методом диагностики является бактериологическое исследование. Для обнаружения вида возбудителя (токсина) ставят биологическую пробу на морских свинках. Для терапии применяют поливалентную противогангренозную сыворотку, а после определения типа токсина для лечения применяют видоспецифическую сыворотку. Возбудитель столбняка относится к роду Clostridium, виду Cl. tetani. Представляют собой крупные грамположительные палочки, образуют споры, расположенные терминально. Перитрихи. Основным фактором патогенности является экзотоксин, который состоит из двух фракций: тетаноспазмина, тетанолизина. Ведущую роль в патогенезе заболевания играет тетаноспазмин. Возбудитель столбняка находится в почве, особенно, в унавоженной в виде спор, где они могут сохраняться десятилетиями. Возбудитель столбняка распространен повсеместно, но наибольшая распространенность в южных регионах с теплым влажным климатом и плодородными почвами. Заражение происходит через дефекты кожи и слизистых, при ранениях, ссадинах, ожогах, отморожениях. Столбняк – тяжелое заболевание, которое характеризуется клоническими и тоническими судорогами. У человека судороги начинаются с жевательных (тризм) и мимических мышц лица и охватывают всю скелетную мускулатуру. В этом случае больной в судорогах выгибается в виде моста, касаясь затылком и пятками (опистотонус). Микробиологическая диагностика столбняка проводится редко, так как при характерной клинической картине в этом нет необходимости. Бактериологическое исследование проводят при необходимости выделить возбудителя из перевязочного материала, кетгута. Для обнаружения столбнячного токсина ставят биологическую пробу на белых мышах. С этой целью материал растирают в стерильной ступке с песком, заливают изотоническим раствором хлорида натрия для экстрагирования токсина, фильтруют через бумажный фильтр. Часть фильтрата вводят внутримышечно белым мышам (опыт), контрольным мышам вводят другую часть фильтрата в смеси с антитоксической сывороткой. При наличии токсина в материале через 1-2 суток у опытных мышей появляется ригидность хвостовых мышц и мышц задних конечностей «хвост трубой». Затем опытные животные погибают. Для обнаружения токсина в крови ставится также РПГА с антительным эритроцитарным диагностикумом. Ботулизм – пищевое отравление, которое рассматривается не как инфекционное заболевание, а как интоксикация содержащимся в пищевом продукте готовым ядом анаэробных бацилл. C. botulinum (от лат. botulis- колбаса). Широкое распространение C. botulinum в природе, и чрезвычайная стойкость его спор обуславливают возможность их попадания в различные пищевые продукты. Благоприятные условия для прорастания спор и накопления токсины создаются в глубоких слоях пищевого продукта и в особенности в герметически закупоренных консервах. В связи с этим ботулизм наблюдается чаще всего при употреблении консервов, подвергших недостаточной обработке. В клинической картине заболевания преобладают тяжелые нервные явления связанные с поражением ядер черепно- мозговых нервов, а не диспептические явления, как при других пищевых отравлениях. Заболевание ботулизмом чаще заканчивается смертью. Лабораторному исследованию подвергаются:
Анализ ведется в двух направлениях: получение культуры микроба и обнаружения токсина. Выделение культуры производится по общей методике выделения культур анаэробов. Для обнаружения ботулотоксина в сыворотке крови больного ставят РПГА с эритроцитами, нагруженными моновалентными антитоксическими противоботулиническими сыворотками типов А, В, Е. В качестве контроля берут нормальную сыворотку крови. Обнаружение ботулотоксина в пищевых продуктах и определение токсигенности C. botulinum проводят в реакции нейтрализации токсина на белых мышах. Для определения серотипа токсина реакцию ставят с моновалентными сыворотками А, В, Е. При нейтрализации токсина гомологичной антитоксической сывороткой мыши остаются живыми. Самостоятельная работа студентов
Указания к самостоятельной работе
В мазке определяются крупные грамположительные палочки (сине- фиолетового цвета), лейкоциты. Обратить внимание на характер расположения спор.
Для определения типа токсина в 5 пробирок разливают по 2,4 мл исследуемого фильтрата и по 0,6 мл сыворотки. В первую пробирку типа А, во вторую- типа В, в третью- типа С, в четвертую- типа Е. В пятую пробирку – 0,6 мл физиологического раствора(контроль). Смесь после 30- минутного выдерживания при комнатной температуре вводят внутрибрюшинно по 1 мл двум мышам из каждой пробирки отдельными шприцами. Наблюдают 4 суток. При наличии токсина выживают мыши, получившие смесь токсина и гомологичной сыворотки, остальные мыши погибнут. Например, выжили мыши, которым вводили смесь из 1-й пробирки, остальные мыши погибли. Следовательно, в исследуемом материале обнаружен ботулинический токсин типа А. Таблица 16 Препараты для диагностики, лечения и профилактики анаэробных заболеваний
Вопросы для самоконтроля
Занятие 12 ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ДИФТЕРИИ И КОКЛЮША. Цель: 1. Изучить методы микробиологической диагностики дифтерии и коклюша. 2. Ознакомиться с методами специфической профилактики и терапии дифтерии, коклюша. Возбудители дифтерии Дифтерия - острое антропонозное инфекционное заболевание с преимущественным респираторным механизмом передачи, характеризующееся местным фибринозным воспалением слизистых оболочек (чаще зева и носа) и явлениями интоксикации. Возбудителем дифтерии является Corynebacterium diphtheriae. C. diptheriae - грамположительные палочки средней величины, которые в мазках располагаются под углом друг к другу, по полюсам располагаются зерна волютина. При окраске по Нейссеру палочки окрашиваются в светло- коричневый цвет, а зерна волютина в темно- синий, почти черный цвет. Спор, капсул не образуют, неподвижны. Факультативные анаэробы. Дифтерийные палочки требовательны к питательным средам. Элективными являются - среда Ру (свернутая лошадиная сыворотка), среда Клауберга, содержащая кровь и теллурит калия (или натрия). На этой среде биовары дифтерийной палочки дают разные колонии: биовар gravis - крупные, серые с неровными краями, с радиальной исчерченностью- R-колонии; биовар mitis - мелкие, черные, с ровными краями- S-колонии; биовар intermedius- похожие на колонии обоих типов. Биовары отличаются и по биохимическим свойствам. Corynebacterium diphteriae отличается от других представителей рода, ферментирует глюкозу, на среде с цистеином дает облаковидное почернение по ходу укола (проба Пизу); не ферментирует сахарозу и мочевину. К факторам вирулентности относятся: - pili, обеспечивающие адгезию; - ферменты патогенности - гиалуронидаза, нейраминидаза, протеаза; - ведущий фактор вирулентности - образование экзотоксина, обладающего гистотоксическим, гемолитическим и дермонекротическим действием. Токсигенность кодируется умеренным фагом- (tox геном), т.е. является результатом лизогенной конверсии Гистотоксин блокирует синтез белка в клетках макроорганизма, что приводит к некрозу пораженной ткани. Источником инфекции является только человек- больной и бактерионоситель. Передача заболевания происходит воздушно- капельным и контактно- бытовым путями. Заболевание носит бактериально-токсический характер. Возбудитель остается на месте входных ворот, а все проявления заболевания связаны с действием токсина. Дифтерия характеризуется образованием в месте локализации возбудителя плотной, спаянной с подлежащей тканью фибринозной пленки, развитием отека и некроза ткани. Для дифтерии характерна общая интоксикация, с избирательным поражением сердечно - сосудистой системы, почек и надпочечников, нервной системы. По локализации различают: дифтерия зева, носа, гортани (дифтерийный круп), наружных половых органов, кожи, ран, глаз, уха. Чаще встречаются дифтерия зева и носа. После перенесенного заболевания остается достаточно напряженный антитоксический иммунитет. Ведущим методом диагностики является бактериологическое исследование. Микробиологические исследования проводят с целью диагностики дифтерийной инфекции и выявления носительства. Материал для исследования - отделяемое или пленка из зева и носа, а при редких локализациях (дифтерии глаза, уха, раны, кожи, наружных половых органов)- из очага поражения. Забор материала производят стерильным тампоном и засевают на одну из элективных питательных сред. Средами для первичного посева служат кровяной теллуритовый агар или среда Клауберга, хинозольная среда Бучина. Для определения напряженности противодифтерийного антитоксического иммунитета, вместо раннее применявшейся пробы Шика, ставят РПГА с использованием эритроцитарного дифтерийного диагностикума (взвесь эритроцитов, на которых сорбирован дифтерийный анатоксин). Возбудитель коклюша Коклюш – детская антропонозная инфекция, характеризующийся приступами спазматического кашля. Возбудителем коклюша является Bordella pertussis – мелкие, грамотрицательные, овоидные палочки с закругленными концами неподвижны. Спор, капсул не образуют. Строгие аэробы. Очень требовательны к питательным средам. Для их культивирования используют сложные среды – среда Борде – Жангу (картофельно-глицериновый агар с добавлением крови), КУА – казеиново-угольный агар. На среде Борде – Жангу возбудитель коклюша через 3-4 дня дают рост в виде куполообразных колоний, напоминающие капельки ртути с зоной гемолиза вокруг. Факторы патогенности: - экзотоксин – специфический цитотоксин, который вызывает гибель мерцательного эпителия, дыхательных путей, обладает тропизмом к нервной и сосудистой системам; - эндотоксин, обладающий сенсибилизирующим и общетоксическим действием; - ферменты агрессии. Источником инфекции являются больные и бактерионосители. Основной путь передачи – воздушно-капельный. Болеют в основном дети. Заболевание характеризуется приступами спазматического кашля. Ведущим методом микробиологической диагностики коклюша является бактериологическое исследование. Материалом для исследования является слизь из носоглотки, которую забирают стерильным ватным тампоном, который вводят в носовой ход до задних хоан. Для взятия материала у детей используют также метод «кашлевых пластинок». Во время приступа кашля ко рту ребенка подносят открытую чашку с питательной средой на расстоянии 15-20 см и держат на период 6-8 кашлевых толчков, затем чашку закрывают и помещают в термостат. Серодиагностику чаще используют для ретроспективной диагностики заболевания (РА, РСК, ИФА, РПГА). Для специфической профилактики используют АКДС, в которой коклюшный компонент представлен убитой вакциной. Самостоятельная работа студентов:
Схема 9. Микробиологическая диагностика дифтерии  Указания к самостоятельной работе:
а) бактериоскопический метод. Микроскопическое изучение мазка, приготовленного из чистой культуры дифтерийной (ложнодифтерийной) палочки, окрашенного по Нейссеру, Граму. При микроскопии мазка следует обратить внимание на следующие морфологические признаки: - расположение палочек по отношению друг к другу; - наличие зерен волютина и их расположение; Для коринебактерий дифтерии характерно расположение палочек под углом друг к другу, в виде римской цифры V, кучки булавок, зерна волютина располагаются на концах палочек. Ложнодифтерийные палочки располагаются параллельно друг к другу, в виде “частокола”, у них отсутствуют зёрна волютина или содержат их по всей длине палочки. б) Бактериологический метод Для выявления дифтерийного бактерионосительства материал берут из зева и носа отдельными тампонами. Одним тампоном берут материал с миндалин, дужек мягкого нёба, другим- из носовых ходов. Посев производят на чашку Петри с кровяно- теллуритовым агаром, делят на две части: на одну половину производят посев материала из зева, на вторую половину- из носа. Чашки с посевом помещают в термостат при температуре 370 С на сутки. В случае подозрительных колоний их отсевают для накопления и биохимической идентификации. При биохимической идентификации обращают внимание на пробы с уреазой и цистиназой, для этого производят пересев чистой культуры на среды с цистином и мочевиной. Дифтерийная палочка дает положительную пробу на цистиназу: при посеве уколом на среду с цистином дает облаковидное почернение по ходу укола. Положительную пробу на уреазу дает ложнодифтерийная палочка. Проба на уреазу расценивается как положительная, если среда окрашивается в малиново- красный цвет. На средах Гисса биовар gravis расщепляет глюкозу и крахмал, биовар mitis- только глюкозу. А ложнодифтерийная палочка глюкозу и крахмал не ферментирует. При идентификации необходимо определение токсигенности. Токсигенность определяется методом диффузионной преципитации в агаре. На среду, разлитую в чашки, накладывают фильтровальные бумажки, смоченные 0,25 мл антитоксической противодифтерийной сыворотки. Посев культуры производят в виде бляшек диаметром 0,7- 0,8 см с обеих сторон бумажки на расстояние 0,5 см от нее. С одной стороны наносится не более 5 культур (5 бляшек) в ряд. Посев испытуемых культур чередуется с посевом контрольного (токсигенного) штамма. Реакция основана на том, что антиген (экзотоксин) и антитело (антитоксическая сыворотка) обладают свойством в агаре диффундировать на встречу друг другу. На месте их соединения образуется линия преципитации («усики») если выделенная культура токсигенна, то образующаяся у нее линия преципитации сливается с линией преципитации контрольного штамма. В последние годы для определения токсигенности применяют высокочувствительные методы- ИФА с моноклональными антителами, РНГА с антительным эритроцитарным дифтерийным диагностикумом.
а) Для микробиологической диагностики коклюша ведущим является бактериологический метод. Посев делают на среды Борде – Жангу и казеиново-угольный агар (КУА). Возбудитель коклюша растет медленно 3-5 суток. B.pertussis приходится дифференцировать от B.parapertussis (табл.). Таблица 17 Дифференциация бордетелл
Возбудитель высеивают у детей в 70-80% при взятии материала в течение первых 2-х недель. Чем позже взят материал, тем шансы обнаружить возбудителя уменьшаются. Метод «кашлевых пластинок» по эффективности значительно уступает взятию материала тампоном. б) Из серологических реакций для диагностики коклюша используют РА, РСК, РПГА, ИФМ и др. В настоящее время чаще используют ИФМ. Диагноз подтверждает нарастание титров в 4 раза и более при исследовании парных сывороток. Схема10.Микробиологическая диагностика коклюша  Таблица 18 Препараты для специфической профилактики и терапии дифтерии, коклюша
Вопросы для самоконтроля
Занятие 13 |
