Интраэпителиальные неоплазии и микроинвазивный рак шейки матки. Клинические и молекулярно-биологические особенности.
Скачать 355.67 Kb.
|
Результаты молекулярно-генетическических исследований. Типирование ВПЧ высокого онкогенного риска. Проведено типирование ВПЧ 16 и 18 типов во всех доступных фокусах CIN и РШМ каждой пациентки. Установлено присутствие ВПЧ 16 типа в 66,7% (31/45) CIN, ВПЧ 18 типа - в 15,6%(7/45) CIN. Кроме того, у 6,7% (3/45) больных CIN из разных фокусов неоплазии выделены два типа ВПЧ - и ВПЧ 16, и ВПЧ 18, что указывает на наличие поликлонального роста CIN, обусловленного смешанной инфекцией ВПЧ. ВПЧ 16 и 18 типов не обнаружены в 11% (5/45) CIN. В этих случаях наиболее вероятно присутствие других типов ВПЧ. Таблица 9. Частота выявления ВПЧ 16 и 18 типа в препаратах CIN
Результаты типирования ВПЧ 16 и 18 типов в препаратах РШМ отражены на рис.11 и в табл.10. В подавляющем большинстве случаев плоскоклеточного РШМ (74,7%) определен ВПЧ 16 типа.  Рис 11. Результаты типирования ВПЧ 16 и 18 типов в фокусах CIN и плоскоклеточного РШМ в зависимости от стадии. Отмечено более значительное присутствие ВПЧ 18 типа в плоскоклеточном РШМ по сравнению с литературными данными (Samoylova E.V et al., 1995). ВПЧ 18 типа чаще был обнаружен у больных РШМ IВ-IV стадии, чем у больных CIN I - CIN III (P=0,05) и РШМ IA стадии (P=0,3). Этот факт подтверждает более агрессивное течение и быстрое прогрессирование случаев цервикальной неоплазии с ВПЧ 18 типа (Arends M.J. et al.1993, Kwaśniewska A. et al. 2002). Во всех наблюдениях РШМ железистого строения определен ВПЧ 18 типа. Таблица 10. Результаты типирования ВПЧ 16 и ВПЧ 18 в РШМ.
Следует отметить, что смешанная инфекция ВПЧ 16 и 18 типов не обнаружена в CIN I, а в CIN II- CIN III частота смешанной инфекции нарастает с увеличением степени тяжести неоплазии (в CIN II - 4,3% , в CIN III - 16,7%). При этом у больных РШМ поликлональный рост цервикальных неоплазий, обусловленный различными типами ВПЧ, выявлен лишь у 2/50 (4%) больных РШМ IA стадии, что составило 2,6% наблюдений РШМ Определение потери гетерозиготности в ДНК CIN и РШМ. Цель фрагмента исследования состояла в том, чтобы определить могут ли генетические нарушения быть ранними маркерами опухолевой трансформации. Для решения этого вопроса проведено сравнение частоты потери гетерозиготности в ДНК больных CIN и РШМ. На основании предыдущих исследований (Киселев Ф.Л. и др. 2002) выбраны шесть локусов с высокой частотой аллельных делеций на хромосоме 6. Пять микросателлитов расположены на коротком плече (6р) хромосомы 6 и включают район генов HLA (D6S276, TNFa, D6S273, D6S291), в том числе микросателлит TNFa вблизи гена фактора некроза опухоли, а также прителомерный микросателлит D6S344. Кроме того, выбран локус гена рецептора эстрогена (ESR) на длинном плече хромосомы 6 (6q), который по данным литературы отличается высокой частотой потери гетерозиготности при РШМ (Chuaqui R. et al., 2001). Определено, что частота аллельных делеций по маркерам D6S276, TNFa, D6S273, D6S291 и ESR в ДНК фокусов РШМ IА стадии превышает частоту аллельных делеций в ДНК фокусов СIN I - CIN III, однако статистически достоверные различия выявлены лишь в частоте потери гетерозиготности по маркерам D6S276, TNFa и D6S291 (рис.12). Следует отметить, что на хромосоме 6 между маркерами D6S276 и TNFa располагаются гены основного комплекса гистосовместимости HLA I класса, определяющие иммунный ответ. Известно, что нарушения генов HLA I класса наблюдаются у большинства больных РШМ и, по-видимому, приводят к ускользанию ВПЧ-инфицированных клеток от иммунного ответа (Koopman I.A. et al., 2000).  Рис.12. Результаты анализа частоты потери гетерозиготности в препаратах ДНК больных CINI – CINIII и РШМ I стадии. Частота LOH по маркеру D6S344 в ДНК CIN превышала частоту LOH в РШМ I стадии, однако выявленные различия статистически не достоверны. Низкая частота LOH в локусе ESR в ДНК CIN (12% CIN I-CIN III) и РШМ (28,6%) позволяет предположить, что аллельные делеции в этом локусе не характерны для канцерогенеза шейки матки Таким образом, установлено, что частота аллельных делеции по маркерам D6S276, TNFa и D6S291 существенно увеличивается в процессе канцерогенеза шейки матки, поэтому аллельные делеции по данным маркерам могут рассматриваться как фактор неблагоприятного прогноза при CIN. Иммуногистохимические исследования препаратов CIN и РШМ. Изучение экспрессии Ki-67. Ki-67 – белок, присутствующий в ядрах клеток на всех стадиях жизненного цикла за исключением G0 и начальной стадии G1. После выхода клетки из митоза Ki-67 не выявляется, поэтому является оптимальным маркером пролиферации. В нормальном цервикальном эпителии экспрессия Ki-67 определялась в виде окраски ядер клеток базального слоя, либо ядер койлоцитов в случае продуктивной вирусной инфекции. В CIN выявлено повышение пролиферативной активности цервикального эпителия, начиная с ранних этапов канцерогенеза: выраженная экспрессия Кi-67 зафиксирована в 14,2% CIN I (рис.13). При этом отмечено линейное увеличение пролиферативной активности цервикального эпителия на этапах трансформации CIN I-CIN III, r=0,99.  Рис.13. Результаты исследования экспрессии Ki-67 в препаратах CIN и РШМ Показано, что в CIN III пролиферативная активность цервикального эпителия высока и сопоставима с пролиферативной активностью цервикального эпителия в РШМ IA и IB-IVстадий (выраженная экспрессия Ki-67 выявлена в 80% CIN III, 76,9% РШМ IAстадии и 85,7% наблюдений РШМ IB-IV стадии, P=0,46-0,6). Таким образом, результаты нашего исследования свидетельствуют о невозможности использования выраженной экспрессии Ki-67 для дифференциальной диагностики CIN III и плоскоклеточного РШМ. В то же время, выраженная экспрессия Кi-67 может быть отнесена к факторам неблагоприятного прогноза CIN. Мы не обнаружили достоверных различий в частоте выраженной, умеренной и слабой экспрессии Ki-67 в зависимости от присутствия ВПЧ 16, либо ВПЧ 18 типа (P=0,2-0,7), что согласуется с литературными данными (Nam E.J. et al., 2008). При этом, в случаях со смешанной инфекцией ВПЧ 16 и ВПЧ 18 в 80% наблюдений обнаружена выраженная экспрессия Ki-67. Исследование экспрессии сурвивина. Сурвивин - мультифункциональный белок, который подавляет апоптоз и регулирует клеточный цикл. Его суперэкспрессия коррелирует с неблагоприятным прогнозом при многих злокачественных новообразованиях. Экспрессия сурвивина не определяется в нормальном эпителии шейки матки. Однако уже на стадии СIN I наблюдается значительное число случаев с умеренной (окрашены ядра 30-70% клеток) или слабой (окрашены ядра менее 30% клеток) экспрессией сурвивина (рис.14).  Рис. 14. Результаты исследования экспрессии сурвивина в CIN и РШМ Частота случаев с экспрессией сурвивина линейно возрастает при нарастании тяжести CIN: CIN I-67%, CIN II-73,4%, CIN III-92,9%, r=1. В РШМ IA стадии экспрессия сурвивина определяется практически с той же частотой, что в группе CIN III (92,1% и 92,9% соответственно), однако чаще, чем в группе РШМ IB-IV стадии (76,9%). Важно отметить, что выраженная экспрессия сурвивина (окрашены ядра более 70% клеток) отсутствует в CIN I, но выявлена в CIN II-СIN III, РШМ IA и РШМ IB-IV в 15,4-28% наблюдений. Мы не обнаружили статистически достоверных различий ни в частоте случаев экспрессии сурвивина, ни в частоте случаев с выраженной, умеренной, слабой и негативной экспрессией сурвивина во всех исследуемых группах. Выраженная экспрессии сурвивина свидетельствует об ингибировании апоптоза в более, чем 70% клеток цервикального эпителия, что может способствовать прогрессированию неоплазии и является неблагоприятным прогностическим признаком. Отсутствие экспрессии сурвивина в 33% CIN I, в 26,7% CIN II и 7,1% CIN III, 7,7% РШМ IA, 23% РШМ IB-IV может говорить как о возможности сохранения апоптоза в данных наблюдениях (что способствует спонтанной регрессии CIN), так и о возможности ингибирования апоптоза посредством иных регуляторов. Нами не выявлено достоверных отличий в частоте случаев с различными вариантами экспрессии сурвивина в неоплазиях с ВПЧ 16 типа и 18 типа. Исследование экспрессии Е-кадхерина. Е-кадхерин – поверхностный мембранный гликопротеид, опосредующий взаимодействие между мембранами клеток эпителия. Кадхерины вовлечены также в процесс клеточной дифференцировки и регуляции миграции в ответ на повреждение. Изменения гена Е-кадхерина (мутации, делеции, метилирование) проявляются потерей экспрессии Е-кадхерина и приводят к нарушению межклеточных контактов, накоплению в-катенина в ядре. В результате стимулируется размножение клеток, увеличивается их способность к инвазии. В нашем исследовании наряду со снижением частоты выраженной экспрессии Е-кадхерина по мере нарастания тяжести цервикальной неоплазии (рис.15), r= -0,93, 0.05 Так, в CIN I обнаружены лишь случаи выраженной и умеренной экспрессии. Очень слабая экспрессия Е-кадхерина (мембранное окрашивание менее 25% клеток) выявлена в 9% CIN II, 46,7% CIN III, 30% случаев РШМ IА стадии и в 50% наблюдений РШМ IB-IV стадии. Отсутствие экспрессии Е-кадхерина выявлено в 13,3% CIN III, 15,4% РШМ IА стадии и в 30% РШМ IB-IV стадии (различия статистически не достоверны, Р=0,3-0,6). Не выявлено статистически достоверных различий в частоте случаев с выраженной и умеренной экспрессией Е-кадхерина (мембранное окрашивание более 50% клеток), а также случаев с очень слабой и негативной экспрессией Е-кадхерина (мембранное окрашивание менее 25% клеток) в группах CIN III/ РШМ IA/ РШМ IB-IV, а также в группах CIN I/CIN II. В то же время, в группах CIN II/CIN III выявлено статистически достоверное различие в частоте случаев с выраженной и умеренной экспрессией кадхерина (P=0,05), а также в частоте случаев с очень слабой и негативной экспрессией Е-кадхерина (P=0,01). По-видимому, это свидетельствует о наиболее существенных изменениях клеточного комплекса адгезии на этапе прогрессии CIN II-CIN III. Р  ис.15. Результаты исследования экспрессии Е-кадхерина в CIN и РШМ. Таким образом, в процессе цервикального канцерогенеза происходит поэтапная потеря активной мембранной экспрессии Е-кадхерина. Наиболее выраженные нарушения экспрессии Е-кадхерина выявлены на этапе прогрессии CIN II/CIN III. Очень слабая экспрессия Е-кадхерина и, особенно, отсутствие экспрессии Е-кадхерина могут быть отнесены к факторам неблагоприятного прогноза CIN. Анализ экспрессии Е-кадхерина в зависимости от присутствия ВПЧ 16 и 18 типа не выявил достоверных различий в частоте различных типов экспрессии Е-кадхерина в неоплазиях с ВПЧ 16+, ВПЧ 18+ и в группе, содержащей и ВПЧ 16, и ВПЧ 18 (P=0,2-0,8). Проведено сопоставление результатов анализа экспрессии исследуемых маркеров в каждом случае CIN и РШМ. Для этого выделены прогностически благоприятные варианты экспрессии маркеров (слабая экспрессия Ki-67, слабая и негативная экспрессия сурвивина, выраженная и умеренная экспрессия Е-кадхерина) и прогностически неблагоприятные варианты (выраженная экспрессия Ki-67, выраженная экспрессия сурвивина, очень слабая и негативная экспрессия Е-кадхерина). Частота встречаемости прогностически благоприятных и неблагоприятных вариантов экспрессии исследуемых маркеров отражена на рис.16.  Рис.16. Сопоставление частоты встречаемости прогностически благоприятных и неблагоприятных вариантов экспрессии маркеров Ki-67, сурвивина и Е-кадхерина в CIN и РШМ. При детальном анализе наблюдений CIN и РШМ мы не выявили корреляционной зависимости между прогностически благоприятными и прогностически неблагоприятными вариантами экспрессии маркеров Ki-67, сурвивина и Е-кадхерина (r=0,02-0,48, P>0,05). Отсутствие корреляции, по-видимому, связано с тем, что данные маркеры отражают различные аспекты канцерогенеза шейки матки. Полученные данные свидетельствуют о целесообразности комплексного использования исследованных маркеров для прогнозирования течения CIN. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 | Как предупредить рак шейки матки Но чаще всего про гинеколога вспоминают тогда, когда женщина забеременела, или когда появились резкие боли, выделения и другие болезненные... | | Клинические рекомендации колоректальный рак в работе врача общей практики 2014 Колоректальный рак — злокачественная опухоль из элементов эпителия толстой кишки |
| Особенности течения беременности и родоразрешения женщин, перенесших заболевания шейки матки Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования “Московская медицинская академия... | | Методические рекомендации для студентов к практическим занятиям по... Эндометриоз. Предопухолевые заболевания и опухоли шейки и тела матки. Болезни яичников, маточных труб и молочных желез. Эндометриоз... |
 | Обоснование лапароскопической подвздошной и парааортальной лимфаденэктомии,... Обоснование лапароскопической подвздошной и парааортальной лимфаденэктомии, транспозиции яичников у больных раком шейки матки ib... | | Вопросы для сертификационного экзамена по акушерству и гинекологии Предраковые заболевания шейки матки. Клиника. Диагностика. Лечение. Диспансеризация больных |
| Список Сц акушерство и гинекология 2012, ту кольпоскопия и патология шейки матки 2013, ту лазерные технологии в акушерстве 2013 | | Генитальные микоплазмы в структуре бактериальных инфекций влагалища... Работа выполнена в гоу впо первый Московский Государственный Медицинский Университет им. И. М. Сеченова |
| Заболевания шейки матки при беременности (современные аспекты диагностики и тактика ведения) ... | | Отчет о научно-исследовательской работе «Разработка методов оценки... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования |
| Отчет о научно-исследовательской работе «Разработка методов оценки... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования | | Эпигенетические изменения в опухолях шейки матки: гипер- и гипометилирование... ... |
| Т. Г. Заболотская лабораторная диагностика Молекулярно-биологические методы: выявление и идентификация вирусных нуклеиновых кислот | | Риск развития миомы матки снижается при увеличении числа родов и... Сведения о миоме матки встречается в древних источниках, даже при исследовании останков египетских мумий были выявлены случаи кальцифицированных... |
| Беременность и заболевания шейки матки: частота, осложнения гестации,... Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Орловский государственный... | | Вопросы к экзамену физика и научный метод познания Молекулярно – кинетическая теория. Основные положения молекулярно – кинетической теории. Основная задача молекулярно-кинетической... |
