Оптимизация алгоритма пренатальной диагностики синдрома Дауна при использовании скрининговых маркеров I триместра беременности 03. 00. 15 генетика
Скачать 301.15 Kb.
|
Представлены сведения о предстоящей защите диссертации Мирошникова Ирина Варленовна «Оптимизация алгоритма пренатальной диагностики синдрома Дауна при использовании скрининговых маркеров I триместра беременности» 03.00.15 – генетика медицинские науки Д 001.016.01 ГУ Медико-генетический научный центр РАМН 115478, Москва, ул. Москворечье, 1, МГНЦ РАМН e-mail – mirosh@med-gen.ru предполагаемая дата защиты диссертации – 14.05.2007 На правах рукописи Мирошникова Ирина Варленовна Оптимизация алгоритма пренатальной диагностики синдрома Дауна при использовании скрининговых маркеров I триместра беременности 03.00.15 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2007 Работа выполнена в лаборатории пренатальной диагностики ГУ Медико-генетического научного центра РАМН Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Т.В. Золотухина Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор А.Н. Петрин кандидат медицинских наук О.Л. Мальмберг Ведущее учреждение: Кафедра общей и медицинской генетики ГОУ ВПО РГМУ Защита состоится «___»_____________2007г. в_______час. на заседании Диссертационного совета Д 001.016.01 при ГУ Медико-генетическом научном центре РАМН по адресу: 115478, Москва, ул. Москворечье, д.1 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Медико-генетического научного центра РАМН Автореферат разослан «____»__________2007г. Ученый секретарь Диссертационного совета доктор биологических наук, профессор Л.Ф. Курило Общая характеристика работы Актуальность проблемы Хромосомные синдромы имеют большой удельный вес в структуре врожденных наследственных заболеваний, и наиболее актуальной является профилактика синдрома Дауна (СД), как наиболее частой хромосомной патологии. Показания для инвазивной процедуры и цитогенетического исследования плода формируются с учетом как генетического, так и акушерского риска пациентки, сопровождающего инвазивное вмешательство. Риск инвазивной процедуры в любой срок беременности должен быть минимальным и не превышать риск генетического заболевания у плода. Современные подходы к оценке риска наличия у плода СД указывают на необходимость массового охвата беременных женщин неинвазивными скрининговыми обследованиями. Это позволяет сформировать среди них группы “высокого” риска и своевременно рекомендовать женщинам, попавшим в группу риска, пренатальную цитогенетическую диагностику. До недавнего времени в клинической практике обычно использовались два общепризнанных скрининговых метода во II триместре (16-21 неделя беременности): ультразвуковое исследование плода и определение уровней сывороточных маркеров (СМ) в крови матери – альфа-фетопротеина, хорионического гонадотропина, неконъюгированного эстриола и ингибина-А. Эти гормоны и белки имеют плодное происхождение, попадают в кровь матери через плаценту и, в основном, отражают состояние плода или плаценты. Было показано, что по мере развития беременности концентрации этих маркеров в крови матери изменяются. Каждый из них имеет определенные границы “понедельных” базовых уровней при нормально развивающейся беременности здоровым плодом. Вместе с тем было выяснено, что часто при беременности плодом с СД уровни этих СМ имеют специфические отклонения по сравнению с нормальными беременностями. Однако использование в биохимическом скрининге беременных всех известных в настоящее время СМ во II триместре позволяет выявить не более 65-70% случаев СД у плода [Benn P.,2005]. Выявляемость СД при ультразвуковой диагностике во II триместре также невысока, т.к. СД у плода редко сопровождается грубыми пороками развития. Несмотря на широкий перечень известных УЗ-маркеров, встречающихся у плода при СД, эффективность УЗ-диагностики данной патологии во II триместре беременности составляет 35-60% [Vintzileos A.,1997]. Выявление патологии у плода и прерывание беременности во II триместре беременности сопряжено с моральными и акушерскими проблемами. Поэтому скрининговое обследование беременных и пренатальная диагностика в I триместре имеет явные преимущества. Внедрение в клиническую практику современных автоматизированных подходов расчета риска при неинвазивной пренатальной профилактике СД позволяет оптимизировать и значительно повысить эффективность скрининга. Пилотные исследования, проведенные в России в последние годы, подтвердили высокую эффективность комбинированного ультразвукового и биохимического скрининга в I триместре беременности [Кащеева Т.К., Некрасова Е.С., 2004; Золотухина Т.В. с соавторами, 2004]. Но анализа результатов проведения скрининга I триместра беременности, формирующих стратегию обследования беременных в РФ, пока не представлено. Отсутствие отечественных компьютерных программ для обработки результатов скрининга и расчета индивидуального риска СД у плода, несомненно, затрудняет проведение такого анализа. Цель работы Целью настоящего исследования является оптимизация алгоритма массового обследования беременных на СД у плода; комплексная оценка эффективности ультразвуковых и биохимических маркеров I триместра беременности и включение блока расчета риска СД для I триместра беременности в оригинальную компьютерную программу “Прогноз”. Задачи исследования 1. Сформировать репрезентативные выборки беременных женщин со здоровым плодом и с плодом с СД, обследованных в I триместре, в I и во II триместрах беременности и беременных женщин после вспомогательных репродуктивных технологий – экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). 2. Определить “понедельные” базовые уровни биохимических маркеров сыворотки (ассоциированного с беременностью плазменного протеина – А (ПАПП-А), свободной β-субъединицы хорионического гонадотропина человека (β-ХГЧ) и ультразвукового маркера плода – толщины воротникового пространства (ТВП)) у женщин с нормально протекающей беременностью в сроке 10-13 недель 6 дней для перехода к безразмерным единицам МоМ. 3. Создать математический алгоритм расчета риска СД у плода в I триместре беременности на основе статистических закономерностей распределения всех исследованных маркеров и внести блок расчета риска в программу “Прогноз”. 4. Оценить значимость и достоверность диагностического прогноза при различных комбинациях маркеров I триместра беременности. 5. Сравнить эффективность неинвазивной пренатальной профилактики СД у плода при использовании коммерческой программы “LifeСycle” и программы “Прогноз” лаборатории пренатальной диагностики ГУ МГНЦ РАМН. 6. Оценить возможность участия в скрининговых программах I триместра женщин, беременность у которых наступила вследствие экстракорпорального оплодотворения. 7. Определить значимость последовательного скрининга беременных (совместных результатов скрининговых тестов, полученных в I и во II триместрах беременности) на СД у плода. 8. Сформулировать оптимальный алгоритм массового обследования беременных на СД с использованием маркеров I триместра беременности. Научная новизна и практическая значимость работы В процессе работы определены базовые уровни всех используемых маркеров (ПАПП-А, β-ХГЧ, ТВП), созданы математические основы расчета риска СД у плода в I триместре беременности, сформулированы уравнения, описывающие зависимости концентраций маркеров I триместра от сроков беременности, получены математические параметры распределения маркеров в I триместре беременности, использующиеся при расчете индивидуального риска СД. Проведено тестирование разработанной математической модели на обширной выборке женщин, прошедших обследование на наличие СД у плода в I триместре. Выполненная работа позволила ввести блок расчета индивидуального риска СД у плода в I триместре беременности в программу “Прогноз”. Проведена сравнительная оценка эффективности выявления хромосомной патологии при использовании различных комбинаций маркеров при неинвазивных скрининговых исследованиях в I триместре беременности. Оценена эффективность использования автоматизированного подхода в формировании группы “высокого” риска для направления женщин на инвазивную пренатальную диагностику. Изучена целесообразность использования последовательного скрининга (результатов скрининга в I и во II триместрах в комбинации) для повышения эффективности обследования. Определена возможность участия в скрининге на СД у плода в I триместре женщин, беременность у которых наступила вследствие применения ЭКО. В результате проведенной работы выработан оптимальный алгоритм массового обследования беременных на СД с использованием маркеров I триместра беременности. Выработанный алгоритм и созданная программа расчета риска СД у плода в I триместре беременности могут быть использованы региональными МГК для оптимизации скрининговых обследований беременных женщин. Положения, выносимые на защиту 1. Исследованные в работе сывороточные и ультразвуковой маркер являются значимыми для диагностики СД и другой хромосомной патологии у плода. Признаком СД у плода могут служить пониженные уровни ПАПП-А, повышенные уровни β-ХГЧ и увеличенная ТВП плода. 2. Разработан математический алгоритм расчета риска СД у плода в I триместре беременности, включающий: уравнения, описывающие зависимости концентраций СМ от сроков беременности, статистические закономерности распределения ПАПП-А, свободной β-ХГЧ, ТВП, пороговое значение риска . 3. Сформулирован оптимальный алгоритм массового неинвазивного пренатального скрининга на СД у плода при использовании маркеров I триместра беременности. Апробация работы Результаты исследования были представлены на V съезде Российского общества медицинских генетиков (Уфа, Май 2005 г) и на межлабораторном семинаре ГУ МГНЦ РАМН (февраль 2007 г). Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ. Структура и объем работы Работа состоит из введения, обзора литературы и глав, посвященных описанию материалов и методов исследования, изложению полученных результатов и их обсуждения, содержит заключение и выводы. Работа изложена на 117 листах машинописного текста; содержит 22 таблицы и 19 рисунков. Библиографический указатель включает 131 наименование, из них 35 отечественных и 96 зарубежных работ. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования Для иммунофлуоресцентного анализа уровней СМ использовались сыворотки женщин в I триместре беременности, в сроке с 9 недель до 13 недель 6 дней включительно. Всего было исследовано 2500 образцов сыворотки. Образцы сыворотки сопровождались анкетой, заполняемой перед взятием крови. В анкете содержались следующие данные пациентки: Ф.И.О.; дата взятия крови; дата рождения; данные УЗИ плода (копчико-теменной размер плода (КТР), ТВП, длина носовой кости плода (НК); вес беременной; акушерский анамнез; особенности течения данной беременности. Данные об исходах родов получали из уведомлений, предоставленных региональными МГК, принимавших участие в сборе материала для исследования, а также при телефонном опросе родителей или по почте. Концентрацию ПАПП-А и β-ХГЧ определяли методом лантанидного флуоресцентного иммунного анализа с разрешением по времени (тест-системы Дельфия, Wallac, PerkinElmer) по стандартному протоколу, предусмотренному производителями тест-систем. Ультразвуковое исследование проводилось сотрудниками МГНЦ, врачами Центра пренатальной диагностики клинического родильного дома № 27 г. Москвы, медицинского центра “Евромед” г. Москвы, врачами ультразвуковой диагностики в региональных МГК. Инвазивные процедуры (трансабдоминальная аспирация ворсин хориона или кордоцентез) выполнялись в 27 родильном доме г. Москвы. Цитогенетическое исследование плода проводилось в лаборатории пренатальной диагностики ГУ МГНЦ РАМН при исследовании “прямых” хромосомных препаратов из ворсин хориона или культур лимфоцитов пуповинной крови по методам, принятым в лаборатории [Золотухина Т.В. с соавторами, 1997]. Теоретическую основу алгоритма расчета индивидуального риска СД у плода составляла формула Байеса. При этом использовалась гауссова плотность, характеризующая совместное распределение значений ПАПП-А, свободной β-ХГЧ и ТВП в группе наблюдений с СД у плода и с нормальным исходом беременности. Оценка средних значений и доверительных интервалов для средних значений проводилась общепринятыми методами и стандартными алгоритмами биометрии с использованием Microsoft Exel 5.0 и других статистических программ. Критический уровень значимости (p) задавался величиной 0,05. Статистическую обработку данных проводили с помощью t-критерия Стьюдента. Для проверки на нормальность распределения использовали критерий Колмогорова-Смирнова. Результаты и обсуждения Создание базы данных и математической основы расчета риска СД в I триместре В целях создания математического алгоритма расчета риска СД у плода в I триместре была создана база данных, полученная при обследовании женщин в сроке с 10 недели до 13 недель 6 дней включительно. В базу данных вошли такие показатели как возраст, вес женщины, срок беременности, данные УЗИ плода (КТР и величина ТВП). Были сформированы две группы наблюдений. В контрольную группу вошли данные обследования 1000 беременных женщин. В опытную группу вошли 8 женщин, у которых пренатально был выявлен СД у плода. Поскольку концентрации СМ в первую очередь зависят от гестационного срока, их принято рассчитывать в безразмерных единицах МоМ, отражающих отношение полученной концентрации СМ к таковой при нормальной беременности. Оценка распределения концентраций СМ проводилась методом регрессионного анализа, позволяющим сформировать функциональные зависимости, характеризующие изменение концентраций ПАПП-А и свободной субъединицы β-ХГЧ от сроков беременности [Спиридонов И.Н., 2000]. Результаты расчета функции регрессии, описывающей понедельные базовые уровни СМ и ТВП, приведены на рисунке 1 и рисунке 2.  Рис.1. Изменение концентрации ПАПП-А в зависимости от срока беременности  Рис.2. Изменение концентрации свободной субъединицы β-ХГЧ в зависимости от срока беременности Уравнения, описывающие зависимость концентраций СМ от срока беременности, имели следующий вид: ПАПП-А [мМЕ/л] = 3728,93 – 5320,57t + 1259,01t2 – 107,85t3 + 3,27t4; Свободная β-ХГЧ [нг/мл] = 197,1817 – 12,7325t + 0,0983t2. Понедельные базовые уровни ПАПП-А и свободной субъединицы β-ХГЧ, рассчитанные в нашей работе, представлены в таблице 1. Таблица 1. Значения собственных понедельных базовых уровней СМ для тест-систем фирмы PerkinElmer
|
Добавить документ в свой блог или на сайт
Похожие:
 | Определены параметры эффективности первого года массового комбинированного... Итаны показатели биохимического скрининга для популяции беременных женщин мо 1 триместра (11-13,6 недель): уровни медиан для сывороточных... |  | Особенности диагностики и лечения синдрома диспепсии у детей при... Особенности диагностики и лечения синдрома диспепсии у детей при инфицировании CagA-позитивными штаммами Helicobacter pylori |
| План истории родов Фамилия, имя, отчество пациентки. Возраст Течение настоящей беременности (дата последней менструации, дата первого шевеления плода и срок беременности при этом, осложнения... | | Зачет по теме «Генетика человека» Основной причиной болезни Дауна (трисомия по 21-й паре хромосом) является нарушение процесса |
| Методы обследования беременных Ктг; основные инвазивные методы пренатальной диагностики: биопсия (аспирация) ворсин хориона (в сроке 9-12 нед.) | | Заболевания шейки матки при беременности (современные аспекты диагностики и тактика ведения) ... |
| Клинико-морфологические особенности первого триместра беременности... Программа секции «волейбол» адресована: детям – подросткам, обучающимся в 8-11ом классе моу «Большетарховская осш», проживающих в... | | Примерная программа наименование дисциплины «Ветеринарная генетика» Знания по ветеринарной генетике имеют важное значение при изучении патологической физиологии, клинической диагностики и других специальных... |
| Методическая разработка теоретического занятия бинарной лекции по... ПМ. 04 Медицинская помощь женщине, новорожденному, семье при патологическом течении беременности, родов, послеродового периода | | Характеристика сателлитных повторов видов aegilops L. Секции sitopsis... Работа выполнена в лаборатории молекулярной генетики злаков Института цитологии и генетики со ран, г. Новосибирск |
| Коррекция общего адаптационного синдрома у новорожденных телят с... Целью работы является определение адаптационно-метаболических изменений в организме новорожденных телят с функциональной диспепсией,... | | Vitro в присутствии факторов, секретируемых плацентой при физиологической... О душе. Но все, чтобы ни представлялось необходимым исследовать, мы будем обсуждать, насколько способны, с помощью ума и доказательства,... |
| Исследование ассоциации ряда генов-кандидатов с диабетической полинейропатией... Работа выполнена в лаборатории молекулярной диагностики и геномной дактилоскопии фгуп «Государственный научно-исследовательский институт... | | Васильев Алексей Владимирович прогнозирование и предупреждение синдрома... Прогнозирование и предупреждение синдрома внутрипеченочного холестаза при острых вирусных гепатитах у женщин |
| Сознайтесь, с чем у Вас ассоциируется словосочетание «синдром Дауна»? Этот вопрос зависит от числа хромосомных изменений у ребенка. Риск рождения второго ребенка с трисомией в 21-й хромосомной паре на... | | Оптимизация диагностики и тактики ведения женщин с хронической ановуляцией различного генеза Ведущее учреждение: гоу дпо «Казанская государственная медицинская академия Росздрава» |
